Kombinirani značajke temeljene na MT1-MMP ekspresije, CD 11 + imunocitima gustoće i lnr predvidjeti klinički ishod raka želuca

Kombinirani značajke temeljene na MT1-MMP ekspresije, CD 11 + imunocitima gustoće i lnr predvidjeti klinički ishod raka želuca
apstraktne pregled pozadine
S obzirom na složenost tumora mikro okoliš, niti jedan marker iz stanica raka na odgovarajući način mogao predvidjeti kliničke ishodi karcinoma želuca (GC). Cilj ovog istraživanja bio je ocijeniti prognostičku ulogu u kombinaciji značajki, uključujući konvencionalne patologije, proteinaze i imunološkog podataka u GC.
Metode
Osim patoloških studija, imunohistokemijski je korišten za procjenu membranski tip 1 matrične metaloproteinaze ( MT1-MMP) izraz i CD 11 + imunocitima gustoća u tri nezavisne microarrays GC tkiva koje sadrže 184 GC tkiva. Odvojeni i kombinirane karakteristike su ispitani na njihov utjecaj na ukupno preživljenje (OS). Pregled Rezultati
Otkrili smo da tradicionalni čimbenici, uključujući veličine tumora, histološki stupanj, stanje limfnih čvorova, serosa invazije i TNM pozornici bili su povezani s operativnim sustavom (P pregled i 0,05 za sve). Osim toga, pronađeni su statistički značajne razlike u OS među ratio limfni čvor (lnr) podskupine (P izvoznici < 0,001), MT1-MMP-skupine (P pregled = 0,015), i CD 11 + imunocitima podskupine gustoće (P
= 0.031). Ono što je najvažnije, u kombinaciji značajka (MT1-MMP pozitivna, niska CD 11 + imunocitima gustoće i visoke lnr) je pronašao multivarijatne analize biti nezavisna prognostički čimbenici za OS nakon isključivanja drugih čimbenici (HR = 3,818 [95% CI: 2,223-6,557 ] P pregled < 0,001). Osim toga, to u kombinaciji značajka imali bolje performanse u predviđanju kliničkih ishoda nakon operacije dugo prije nego što je došlo do recidiva (područje ispod krivulje: 0.689 [95% CI: 0,609-0,768], P izvoznici < 0,001). Pregled Zaključci pregled Ovi rezultati ukazuju na to da bolje informacije o GC prognoze mogu se dobiti od kombiniranih kliničko-patoloških faktora, tumorskih stanica i mikro tumora.
ključne riječi
rak želuca prognozi tumora mikro okolinu limfnog čvora omjer Pozadina
raka želuca (GC) je četvrti najčešći oblik raka i treći uzrok smrti od raka u svijetu [1]. Znatan je napredak postignut u ranoj dijagnostici karcinoma, ali nije bio usporediv napredak u točnosti predviđanja kliničkog ishoda [2]. Samo TNM klasifikacija Međunarodne unije protiv raka (UICC) ili American Zajedničko povjerenstvo za rak (AJCC) koristi se na temelju rutinu, koja je najvažniji instrument za usmjeravanje strategije liječenja za GC pacijenata [3]. Međutim, GCS imaju značajnu heterogenost u svojim biološkim ponašanjem i tumori istog fazi kliničkog ispitivanja često pokazuju razlike u odgovoru klinički tijek i liječenje [4]. Dakle, identifikacija faktora koji utječu na invaziju i metastaziranje, te uspostavu biomarkera panela predvidjeti maligni potencijal i identificirati različite rizične skupine su od najveće važnosti. Pregled Unatoč godinama istraživanja i stotine izvještaja o tumorskih biljega u GC, broj klinički korisni biljezi žalosno mali [5]. Nedavno je novi prognostički alat omjer limfnog čvora (lnr), definira se kao broj MLN podijeljen s brojem limfnih čvorova pozvanih, predloženo. To može poboljšati točnost prognoze i smanjiti migraciju pozornici u usporedbi s UICC (2002, 6. izdanje) staging sustava [6, 7]. Lnr se smatra kao jedan od najboljih kliničko varijabli za predviđanje prognozi raka želuca nakon ljekovito operacije u retrospektivnim studijama [8], što je uspjeh u optimizaciju tradicionalnih kliničkih markera. Međutim, otkriće drugih tzv obećavaju markera u laboratoriju prevodi prilično sporo u kliničku primjenu. Jedan od razloga za to je činjenica da razvoja i napredovanja raka određen je ko-evoluciju između tumorskih stanica i tumorskog mikrookoliš nego jednom mutacijom [9]. Takva suradnja evolucija je prijavljen od strane brojnih studija, od kojih svi upućuju na to da interakcije između stanica tumora i tumora strome stvoriti jedinstvenu i dinamičnu mikroklima utjecati na progresiju tumora [10]. Stoga, praćenje novih molekularne faktora od kompleksne tumora mikrookolišu (stanični i stromalne komponente) predstavlja jednu bitnu pristup za identificiranje prognostički faktori. Pregled MT1-MMP je poznata kao matrične metaloproteinaze membrane tipa i MT1-MMP posredovanih izvanstanični matriks (ECM) razgradnja tumorske stanice ili stanice strome je bitno za invaziju raka kroz podrumske membrana i strome intersticijske matrice [11]. Iako MT1-MMP pokazala prognostički značaj u nekoliko oblika raka kod ljudi, kao što su rak dojke, rak gušterače i rak debelog crijeva [12, 13], malo se zna o precizno značenje MT1-MMP u GC pacijenata. Glavni doprinos mikro tumora su upala i upalnih medijatora [9]. Predloženo je da se imunološki sastav može utjecati na klinički ishod pacijenata oboljelih od raka, a imunološki rezultat će biti važan prediktor usporediv TNM klasifikaciji [14]. CD 11 je izraženo određenom podskupu mijeloidne stanice, uključujući CD34 + matičnih stanica, monocita, granulociti, NK stanica i aktiviranih T stanica, čini se prirođenog imuniteta [15, 16]. Uloga tumora imunogeničnosti i imunoterapije se raspravlja [17]. Produljenje naše znanje o složenoj ulozi imunoloških stanica u GC konačnici mogla otvoriti put za dugo očekivani uspješan razvoj lijekova.
Temelju tog razumijevanja, istražili smo prognostičku ulogu marker staničnih proteinaza MT1-MMP i mikro okolinu imunološki marker CD 11 + imunocitima u GC. Posebna pažnja posvećena je prognostičku vrijednost u kombinaciji obilježja MT1-MMP, CD 11 + imunocitima gustoće i lnr.
Metode pregled bolesnika i praćenje
evidenciju GC pacijenata koji su se podvrgnuli operaciji s ljekovito namjera na Odjelu za onkologiju, Zhongnan bolnice Sveučilišta Wuhan (Wuhan, Kina) između prosinca 2002. i veljače 2011. godine pregledao je. Glavni demografski i kliničko-patoloških obilježja bili dostupni. Nema pacijenti dobili neoadjuvant kemoterapiju prije operacije. TNM stadij se određuje prema 7. izdanje UICC /AJCC TNM sustava [18]. Do najnovijeg nastavka 31. svibnja 2012. godine, medijan praćenja bio je 59,5 (raspon: 16.8-102.3) mjeseci. umro je ukupno 108 (58,7%) bolesnika. Ukupno preživljenje (OS) definirana je kao interval od dana operacije na GC-u vezi smrti. Svako ponavljanje u abdomino-prsni šupljine je definirano kao lokalne područne recidiva; i ponavljanje putem krvotoka je definirana kao udaljenim metastazama, kao što su metastaze jetre i pluća metastaza. Pismeni informirani pristanak koji je dobiven od pacijenata i studije protokol je odobren od strane etičkog povjerenstva Zhongnan bolnice Sveučilišta Wuhan. Istraživanje je provedeno u skladu s etičkim standardima Deklaracije Svjetske Medical Association Helsinkija.
Želučane uzoraka raka i tkiva Microarrays
All hematoksilinom i eozinom (HE) -stained Rezovi su ispitani od strane neovisnih recenzenata koji nisu bili svjesni klinička obilježja ili kliničkih ishoda. izgrađena su tri mikročipovima tkiva (Microarrays Korištenje). Ukratko, dvije jezgre su uzeti iz svake reprezentativnog tumorskom tkivu (1,5 mm u promjeru, za svake jezgre). Zatim su izgrađene tri Microarrays Korištenje sekcije sa 184 tumorskim tkivima (u suradnji sa Shanghai biočip Company Ltd, Šangaj, Kina). Pregled Imunohistokem i vrednovanje imunihistokemijski nalaza pregled Primarna antitijela za MT1-MMP (sc101451, Santa Cruz , SAD, razrjeđivanje 1/100), CD 11 + (ab52478, Abcam, Velika Britanija, razrjeđivanje 1/100), odgovarajući peroksidaze hrena (HRP) konjugiranih sekundarnih antitijela (ab97265, ab97200, Abcam, Velika Britanija, razrjeđivanje 1/300) i diaminobenzidinu (Dako, Danska) dobiveni su i potvrđeni za označavanje.
imunohistokemijski protokoli su ranije [19] što je opisano. Ukratko, tri Microarrays Korištenje sekcije su deparaffinised s ksilena thenrehydrated kroz tri promjene alkohola. Aktivnost endogene peroksidaze je blokirana 0,3% vodikovog peroksida tijekom 10 min. Antigen dohvat je provedena djelovanjem mikrovalovima u 0,01 M Tris-EDTA puferu (pH 9.0) kroz 20 minuta. Slajdovi su inkubirani 1 sat sa primarnim protutijelima za MT1-MMP (sc101451, Santa Cruz, SAD, razrjeđivanje 1/100), CD 11 + (ab52478, Abcam, Velikoj Britaniji, razrjeđivanje 1/100). Nakon ispiranja s Tris-puferiranom fiziološkom otopinom (TBS, pH 7,4), sekcije su inkubirane s b odgovarajućeg peroksidaze hrena (HRP) konjugiranih sekundarnih antitijela (ab97265, ab97200, Abcam, UK, razrjeđenja 1/300) za daljnjih 50 min. Reakcija antigen protutijelo vizualizira s 3,30-diaminobenzidin (DAKO, Denmark). Nakon counterstaining hematoksilin, sekcije su dehidrirana kroz uzlaznih alkohola u ksilen i montiran. Pozitivne kontrole bojanja su izvedeni paralelno s parafinskim rezovima normalne ljudske tonzile. Negativna kontrola je izvršena propuštanjem primarnog protutijela.
Rezovi su ispitani pod Olympus BX51 fluorescentnom mikroskopu koji je opremljen s Olympus DP72 kamere (Olympus Optical Co., Ltd., Tokyo, Japan). Panorama svakog označenog jezgre dobiven je na temelju 4 fotografija pod male snage uvećanja (x 100) s visokom rezolucijom od strane DP-BSW softvera (Olympus Optical Co., Ltd., Tokyo, Japan). Identični postavke korištene su za svaku fotografiju, kako bi se smanjila pristranost odabira. MT1-MMP ekspresije i CD 11 + imunocitima gustoće su digitalno ocjenjuje Image-Pro Plus v6.2 softver (Media Kibernetika Inc, Bethesda, MD). Da bi rezultati pouzdani i usporedivi, jedinstveni ambijent za sve slajdove primijenjen je za čitanje svakog bojenja antitijela. Integrirani optička gustoća (IOD) o svim pozitivnim bojanjem MT1-MMP u svakoj fotografiji je izmjerena, a njegov odnos s ukupnom površinom od svake fotografije je izračunata kao MT1-MMP ekspresije. CD 11 + imunocitima gustoća zabilježena kao broj pozitivnih stanica po jedinici površine tkiva u kvadratnim milimetrima. Cut bodova za MT1-MMP gustoće istraživali su "najbolji cut-off pristup do log-rank test" [20]. I 25. percentil vrijednost definirana je kao cut-off točku kako bi se utvrdilo na MT1-MMP negativni i pozitivni izraz podgrupa u ovoj studiji. Za CD 11 + imunocitima gustoće, cut-off point za definiciju podskupine (niske i visoke CD 11 + imunocitima gustoće) je vrijednost medijana. Pregled, Statistička analiza pregled, Statistička analiza je izvedena s SPSS softvera (verzija 18.0, SPSS institut, Chicago, IL). Pearson χ 2 test ili Fisherov egzaktni test korišten je za uspoređivanje kvalitativne varijable. Kaplan-Meier analiza korištena je za analizu preživljenja i značaj među podgrupama pacijenata je izračunata log rank test. Regresijski model Cox je korištena za obavljanje multivarijatne analize. Logistička regresija korištena za procjenu utjecaja binarnih čimbenika. Prijemnik karakteristična krivulja (ROC) analiza korištena je za određivanje prediktivnu vrijednost parametara. Dvostrani P izvoznici < 0,05 smatrala se statistički značajna.

• Ekspresija p53, dušik-oksid sintazu i faktora rasta vaskularnog endotela u želučanom predkancerozni i kancerozni lezija: korelaciji s kliničkim features
• Povećanje integrina vezanog kinaze ne-kanonski prenosi sa NF-kB posredovane prednosti rasta na želučane stanicama raka aktiviranjem ERK1 /2