Caratteristiche combinata basata sull'espressione MT1-MMP, CD11b + immunociti densità e LNR prevedere gli esiti clinici di cancro gastrico

Caratteristiche combinata basata sull'espressione MT1-MMP, CD11b + immunociti densità e LNR prevedere gli esiti clinici di cancro gastrico
Abstract
sfondo
Data la complessità del microambiente tumorale, nessun singolo marcatore dalle cellule tumorali potrebbe adeguatamente prevedere la clinica esiti di cancro gastrico (GC). L'obiettivo di questo studio è stato quello di valutare il ruolo prognostico di caratteristiche combinate tra cui patologia convenzionale, proteinasi ed i dati del sistema immunitario in GC.
Metodi
Oltre agli studi patologici, immunoistochimica è stato utilizzato per valutare la membrana di tipo 1 metalloproteinasi della matrice ( MT1-MMP) espressione e CD11b densità + immunociti in tre microarray di tessuti GC indipendenti contenenti 184 tessuti GC. separata e combinati sono stati valutati per il loro impatto sulla sopravvivenza globale (OS).
Risultati
Abbiamo scoperto che i fattori tradizionali, tra cui le dimensioni del tumore, il grado istologico, stato dei linfonodi, sierosa invasione e stadio TNM sono stati associati con OS (P
< 0.05 per tutti). Inoltre, le differenze statisticamente significative in OS sono stati trovati tra rapporto linfonodi (LNR) sottogruppi (P
< 0,001), sottogruppi MT1-MMP (P = 0,015
), e CD11b + immunociti sottogruppi densità (P
= 0,031). Ancora più importante, funzione combinata (MT1-MMP positivo, a bassa densità di CD11b + immunociti e alta LNR) è stato trovato da analisi multivariata di essere un fattori prognostici indipendenti per OS dopo aver escluso altri fattori di confondimento (HR = 3,818 [IC 95%: 2,223-6,557 ], P
< 0,001). Inoltre, questa funzione combinata aveva una migliore performance nel predire gli esiti clinici dopo l'intervento chirurgico molto prima recidiva era avvenuto (area sotto la curva: 0,689 [95% CI: 0,609-0,768], P
< 0,001).
Conclusioni
Questi risultati indicano che una migliore informazione su GC prognosi potrebbe essere ottenuto da fattori clinico-patologici combinati, le cellule tumorali e microambiente tumorale.
Parole
cancro gastrico la prognosi del tumore microambiente linfonodo rapporto Sfondo
cancro gastrico (GC) è il quarto cancro più comune e la terza causa di morte per cancro in tutto il mondo [1]. Notevoli progressi sono stati fatti nella diagnosi precoce del cancro, ma non vi è stato un progresso paragonabile per l'accuratezza della previsione esito clinico [2]. Solo la classificazione TNM della Unione Internazionale Contro il Cancro (UICC) o Joint Committee on Cancer (AJCC) viene utilizzato su una base di routine, che è lo strumento più importante per guidare strategia di trattamento per i pazienti CG [3]. Tuttavia, GC hanno una significativa eterogeneità nei loro comportamenti biologici, e tumori dello stesso stadio clinico spesso mostrano differenze di corso e trattamento clinico risposta [4]. Così, l'identificazione dei fattori che influenzano invasione e metastasi, e la creazione di biomarcatori pannelli per prevedere potenziale maligno e per identificare i diversi gruppi a rischio sono di fondamentale importanza.
Nonostante anni di ricerche e centinaia di rapporti sui marcatori tumorali nel GC, il numero clinicamente marcatori utili è pietosamente piccolo [5]. Recentemente, un nuovo strumento prognostico di rapporto linfonodi (LNR), definito come il numero di MLN diviso per il numero di linfonodi recuperati, è stato proposto. Si può migliorare la precisione la prognosi e ridurre la migrazione fase rispetto al UICC (2002, 6a edizione) sistema di stadiazione [6, 7]. LNR è stato considerato come uno dei migliori variabili clinicopatologiche per la previsione della prognosi di cancro gastrico dopo chirurgia curativa in studi retrospettivi [8], che è il successo nell'ottimizzazione dei marker clinici tradizionali. Tuttavia, la scoperta di altri marcatori cosiddetti promettenti in laboratorio traduce piuttosto lentamente applicabilità clinica. Una ragione di ciò è il fatto che lo sviluppo e progressione del cancro è determinato dalla co-evoluzione tra cellule tumorali e microambiente tumorale piuttosto che una singola mutazione [9]. Tale co-evoluzione è stata riportata da molti studi, i quali indicano che le interazioni tra cellule tumorali e stromali del tumore creano un microambiente unico e dinamico di influenzare la progressione del tumore [10]. Pertanto, lo screening di nuovi fattori molecolari dal microambiente tumorale complesso (componenti cellulari e stromali) rappresenta un altro approccio essenziale per identificare i fattori prognostici.
MT1-MMP è conosciuto come una membrana di tipo metalloproteinasi della matrice, e MT1-MMP-mediata matrice extracellulare (ECM) la degradazione da parte delle cellule tumorali o cellule stromali è essenziale per l'invasione del cancro attraverso membrane basali e stromali matrice interstiziale [11]. Anche se MT1-MMP ha dimostrato significato prognostico in diversi tumori umani, come il cancro al seno, cancro al pancreas e il cancro del colon [12, 13], poco si sa circa il significato preciso di MT1-MMP nei pazienti GC. I principali contributori al microambiente tumorale sono l'infiammazione e mediatori infiammatori [9]. E 'stato proposto che la contexture immunitario può influenzare il decorso clinico dei pazienti affetti da cancro, e il punteggio immunitario sarebbe importante predittore paragonabile a classificazione TNM [14]. CD11b è espressa da uno specifico sottogruppo di cellule mieloidi, tra cui CD34 + progenitori, monociti, granulociti, cellule NK e le cellule T attivate, la contabilità per l'immunità innata [15, 16]. Il ruolo di immunogenicità del tumore e le immunoterapie sono in fase di discussione [17]. Estendendo la nostra conoscenza del ruolo complesso di cellule del sistema immunitario in GC potrebbe infine aprire la strada per il tanto atteso successo dello sviluppo di terapie.
Sulla base di questa comprensione, abbiamo studiato il ruolo prognostico della marcatore proteinasi cellulare MT1-MMP e microambiente marcatore immunitario CD11b + immunociti in GC. Particolare attenzione è stata prestata al valore prognostico delle caratteristiche combinate di MT1-MMP, CD11b densità + immunociti e LNR.
Metodi
pazienti e il follow-up
Le registrazioni dei pazienti GC sottoposti a chirurgia con un curativo intento presso il Dipartimento di Oncologia, Ospedale Zhongnan dell'Università di Wuhan (Wuhan, Cina) tra il dicembre 2002 e febbraio 2011 sono stati recensione. Le principali caratteristiche demografiche e clinico-patologici erano disponibili. Nessun pazienti hanno ricevuto chemioterapia neoadiuvante prima della chirurgia. TNM fase è stata determinata in base alla 7a edizione del sistema UICC /AJCC TNM [18]. Con la più recente follow-up il 31 maggio 2012, il follow-up mediano è stato 59,5 (range: 16.8-102.3) mesi. Un totale di 108 (58,7%) pazienti è morto. La sopravvivenza globale (OS) è stato definito come l'intervallo a partire dalla data di intervento chirurgico per la morte GC-related. Ogni ricorrenza in cavità addomino-pelvica è stata definita come recidiva loco-regionale; e recidiva tramite il flusso di sangue è stato definito come metastasi a distanza, come ad esempio metastasi epatiche e metastasi polmonari. Consenso informato scritto è stato ottenuto dai pazienti e il protocollo di studio è stato approvato dal comitato etico di Zhongnan Hospital dell'Università di Wuhan. Lo studio è stato intrapreso secondo gli standard etici della Dichiarazione dell'Associazione Medica Mondiale di Helsinki.
Campioni di cancro gastrico e microarray di tessuti in tutte le nazioni ematossilina e eosina (HE) -stained vetrini sono stati esaminati da revisori indipendenti che non erano a conoscenza di le caratteristiche cliniche o gli esiti clinici. sono stati costruiti tre microarray tissutali (TMA). In breve, due core sono state prese da ciascun tessuto tumorale rappresentante (1,5 mm di diametro per ogni core). Poi, sono stati costruiti tre sezioni TMAs con 184 tessuti tumorali (in collaborazione con Shanghai Biochip Company Ltd., Shanghai, Cina).
Immunoistochimica e la valutazione dei risultati immunoistochimici
Gli anticorpi primari per MT1-MMP (sc101451, Santa Cruz , Stati Uniti d'America, la diluizione 1/100), CD11b + (ab52478, Abcam, Regno Unito, la diluizione 1/100), il corrispondente perossidasi di rafano (HRP) anticorpo secondario coniugato (ab97265, ab97200, Abcam, Regno Unito, la diluizione 1/300), e diaminobenzidina (DAKO, Danimarca) sono stati ottenuti e validato per l'etichettatura.
I protocolli di immunoistochimica sono stati descritti in precedenza [19]. In breve, tre sezioni TMAs stati deparaffinised con xilene thenrehydrated attraverso tre cambi di alcol. perossidasi endogena è stata bloccata da perossido di idrogeno 0,3% per 10 min. Antigen recupero è stata eseguita mediante trattamento a microonde in 0,01 M Tris-EDTA (pH 9,0) per 20 min. I vetrini sono state incubate per 1 ora con gli anticorpi primari per MT1-MMP (sc101451, Santa Cruz, Stati Uniti d'America, la diluizione 1/100), CD11b + (ab52478, Abcam, Regno Unito, la diluizione 1/100). Dopo il lavaggio con soluzione salina Tris tamponata (TBS, pH 7,4), le sezioni sono state incubate con b il corrispondente perossidasi di rafano (HRP) anticorpo secondario coniugato (ab97265, ab97200, Abcam, Regno Unito, la diluizione 1/300) per un ulteriore 50 min. reazione antigene-anticorpo è stato visualizzato con 3,30-diaminobenzidina (DAKO, Danimarca). Dopo controcolorazione con ematossilina, le sezioni sono stati disidratati attraverso ascendente degli alcol a xilene e montare. controlli colorazione positiva sono stati eseguiti in parallelo con sezioni di paraffina di normale tonsilla umana. controllo negativo è stato eseguito omettendo l'anticorpo primario.
I vetrini sono stati esaminati sotto Olympus BX51 microscopio a fluorescenza dotato di una fotocamera Olympus DP72 (Olympus Optical Co., Ltd., Tokyo, Giappone). Panorama di ogni core marcato è stato ottenuto sulla base di 4 fotografie sotto ingrandimento a bassa potenza (× 100) con alta risoluzione da un software DP-BSW (Olympus Optical Co., Ltd., Tokyo, Giappone). impostazioni identici sono stati usati per ogni fotografia, in modo da minimizzare l'errore di selezione. L'espressione MT1-MMP e CD11b densità + immunociti sono stati valutati in modo digitale da Image-Pro Plus V6.2 del software (Media Cybernetics Inc, Bethesda, MD). Per mantenere risultati affidabili e comparabili, un'impostazione uniforme per tutte le diapositive stato applicato per la lettura di ogni colorazione anticorpale. densità ottica integrata (IOD) di tutta la colorazione positiva di MT1-MMP in ogni fotografia è stata misurata, e il suo rapporto alla superficie totale di ogni fotografia è stata calcolata come espressione MT1-MMP. CD11b densità + immunociti è stato registrato come il numero di cellule positive per unità di superficie del tessuto in millimetri quadrati. punti di taglio per densità MT1-MMP è stato esplorato da "il miglior approccio cut-off con log-rank test" [20]. E il valore di 25 ° percentile è stato definito come il punto di cut-off per determinare i sottogruppi di espressione negativa e positiva MT1-MMP in questo studio. Per la densità di CD11b + immunociti, il punto di cut-off per la definizione di sottogruppi (a bassa ed alta CD11b + immunociti densità) è il valore mediano.
Analisi statistica
Le analisi statistiche sono state effettuate con il software SPSS (versione 18.0, SPSS Institute, Chicago, IL). Il χ 2 test di Pearson o il test esatto di Fisher è stato utilizzato per confrontare variabili qualitative. L'analisi di Kaplan-Meier è stato utilizzato per l'analisi di sopravvivenza e il significato tra i sottogruppi dei pazienti è stato calcolato dai log rank test. Il modello di regressione di Cox è stato utilizzato per eseguire l'analisi multivariata. La regressione logistica è stata utilizzata per valutare l'influenza dei fattori binari. Curva ROC (ROC) analisi è stata utilizzata per determinare il valore predittivo dei parametri. Due lati P
< 0.05 è stato considerato statisticamente significativo.
Risultati
principali caratteristiche clinico-patologiche e reperti immunoistochimici Con gli 184 casi inclusi in questo studio sono stati 132 (71,7%) maschi e 52 (28,3%) di sesso femminile, che vanno a età 25-85 anni (media ± DS: 57,9 ± 12,9 anni). Le principali caratteristiche demografiche e clinico-patologici sono stati presentati in demografia Tabella 1.Table 1 dei pazienti e le caratteristiche clinico-patologici
Articoli
Valore
Age (M ± SD, anni)
57,9 ± 12,9
genere
Male (%)
132 (71,7)
femminile (%)
52 (28,3)
Tumore posizione
stomaco distale (%)
98 (53,3)
non distale dello stomaco (%)
86 (46,7)
patologici tipi
Adenocarcinoma
istologica di grado 1/2
55 (29,9)
Bene /adenocarcinoma moderatamente differenziato (%)
55 (29,9)
grado istologico 3/4
124 (67,4)
basso /adenocarcinoma indifferenziato (%)
102 (55,4)
carcinoma a cellule adenocarcinoma /ad anello con castone mucinoso
22 (12.0)
altri un (%)
5 (2,7)
sierosa invasione
No (T0, T1, T2) (%)
27 (14,7)
Sì (T3, T4) (%)
157 (85,3)
metastasi linfonodali
No (N0) (%)
53 (28,8)
Sì (N1, N2, N3) (%)
131 (71,2)
LNR, mediana (range)
0,33 (0-1)
metastasi a distanza
M0 (%)
177 (96,2)
M1 (%)
7 (3.8)
TNM fasi
prime (fasi I, II) (%)
58 (31,5)
avanzata (Tappe III, IV) (%)
126 (68,5)
Chirurgia
subtotale resezione (%)
159 (86,4)
non Totale parziale resezione (%)
25 ( 13.6)
chemioterapia
No (%)
35 (19,0)
Si (%)
149 (81,0)
Ricorrenza
No (%)
124 ( 67.4)
Si (%)
60 (32,6)
Ricorrenza posizione B
locale-regionale
37 (61,7)
Distant
23 (38,3)
clinica stato al termine del follow-up
diretta e senza recidiva
72 (39,1)
vivo o morto con recidiva
112 (60,9)
espressione MT1-MMP
negativo
46 (33,3)
positivo
138 (66,7)
CD11b + immunociti (cellule /mm2)
mediana (range)
257 (4-2101) impara una Altri inclusi adenosquamoso carcinoma in 3 casi (1,62%), carcinoide atipico a 1 (0,54%) caso, e neuroendocrino carcinoma in 1 (0,54%) case.b 60 casi ricorrenti sono stati valutati.
immunoistochimica è stata eseguita in tutti i GC TMA e il risultato di ogni campione è stato ottenuto per l'analisi di immagini digitali basate (Figura 1A-1D). MT1-MMP colorazione principalmente nel citoplasma o sulla membrana cellulare delle cellule tumorali. La maggior parte delle cellule stromali erano negativi, anche se colorazione positiva sporadici su queste cellule è stata osservata anche (Figura 1E, 1G). CD11b + immunociti principalmente infiltrato nella giuntura del nido cancro e stromale (Figura 1F, 1H). Il livello di densità di MT1-MMP e CD11b densità + immunociti sono stati presentati nella tabella 1. Il 25 ° percentile della densità MT1-MMP era 0.00186 e 138 (75,0%) pazienti sono stati documentati come MT1-MMP positiva secondo i criteri di classificazione di cui sopra. Il valore mediano di CD11b + immunociti erano 257 cellule per unità di superficie del tessuto in millimetro quadrato. Figura 1 risultati immunoistologiche in TMA. (AD) Esempio rappresentativo di MT1-MMP (A), CD11b + immunociti (C) di colorazione di un tessuto microarray GC, e la corrispondente immagine digitale analizzati con il software di immagine, con MT1-MMP (B) e CD11b + immunociti (D ) rappresentata in rosso. (E, G) MT1-MMP colorazione è principalmente nel citoplasma o sulla membrana cellulare delle cellule tumorali (Freccia blu), e la maggior parte delle cellule stromali avuto colorazione negativa, anche se sporadica colorazione positiva su queste cellule è stata osservata anche (F, H). CD11b colorazione ha mostrato che CD11b + immunociti infiltrati principalmente nella giuntura del nido cancro e stroma, soprattutto nella parte anteriore invasiva (Frecce rosse e verdi).
Relazione tra espressione MT1-MMP, CD11b densità + immunociti e le caratteristiche clinico-patologiche
ci sono stati 77 (55,8%) e 15 (32,6%) pazienti con alta CD11b + immunociti densità MT1-MMP positivi (n = 138
) e negativo (n = 46)
sottogruppi, rispettivamente (p
= 0.006). La probabilità di espressione MT1-MMP è diminuito in modo significativo per la bassa sottogruppo CD11b + immunociti densità (odds ratio (OR) = 0,383 [IC 95%: 0,190-0,774], P = 0.007
, regressione logistica). L'espressione MT1-MMP e CD11b densità + immunociti sono stati correlati con le caratteristiche clinico-patologiche, come riassunto nella tabella 2. espressione MT1-MMP è stato correlato con la dimensione piccolo tumore (P = 0,007
), tumore alla stomaco distale (p
= 0,027) e un aumento del rischio di recidiva (p = 0,001
), ma non è correlata con l'età, il sesso, il grado istologico, sierosa invasione, stato dei linfonodi, stadio TNM e siti di recidiva del tumore (P
> 0.05 per tutti). CD11b + immunociti densità è stata correlata con lo stato dei linfonodi (P = 0,015
), LNR (P
= 0,018) e lo stadio TNM (P = 0,011
), ma non è correlata con l'età, il sesso, le dimensioni del tumore , localizzazione del tumore, grado istologico, invasione sierosa e il rischio di recidiva (P
> 0.05 per tutti) .table 2 Il rapporto tra MT1-MMP, CD11b + immunociti densità e cinico-patologiche caratteristiche
Variabili

espressione MT1-MMP
CD11b + immunociti densità
negativo (n = 46
)
positiva (n = 138)

P
basso (n = 92
)
alto (n = 92
)
P
n
(%)
N
(%)
N
(%)
N
(%)

Età (anni)
< 60
26 (56,5)
20 (43,5)
0,669
43 (43,4)
56 (56,6)
0,055
≥60
73 (52,9)
65 (47,1)
49 (57,6)
36 (42,4)
genere
Maschio
33 (25.0 )
99 (75,0)
1.000
66 (50.0)
66 (50.0)
1.000
femminile
13 (25,0)
39 (75,0)
26 (50.0)
26 (50.0)
Le dimensioni del tumore (cm2)
a < 16
12 (16,4)
61 (83,6)
0.007
35 ( 47,9)
38 (52,1)
0,404
≥16
31 (35,2)
57 (64,8)
48 (54,5)
40 (45,5)
Località
distale
18 (18,4)
80 (81,6)
0.027
51 (52,0)
47 (48.0)
0,555
non distale
28 (32,6)
58 (67,4)
41 (47,7)
45 (52,3)
istologico grado B
1/2
13 (23,6)
42 (76,4)
0.845
24 (43,6)
31 (56,4)
0,376
3/4
31 (25,0)
93 (75,0)
63 (50,8)
61 (49,2)
metastasi linfonodali
Si
31 (23,7)
100 (76,3)
0,511
73 (55,7)
58 (44,3)
0.015
No
15 (28,3)
38 (71,7)
19 (35,8)
34 (64,2)
LNR c
≤0.33
27 (28.7 )
67 (71,3)
0.233
39 (41,5)
55 (58,5)
0.018
> 0,33
19 (21.1)
71 (78,9)
53 (58,9)
37 (41.1)
sierosa invasione (T stadio)
T1-2
4 (14,8)
23 (85,2)
0,186
10 (37.0)
17 (63,0)
0,145
T3-4
42 (26,8)
115 (73,2)
82 (52,2)
75 (47,8)
stadiazione TNM
anticipata (I, II)
13 (22,4)
45 (77,6)
0,583
21 (36,2)
37 (63,8)
0.011
Avanzate (III, IV)
33 (26,2)
93 (73,8)
71 (56,3)
55 (43,7)
Ricorrenza
Si
9 (15.0 )
51 (85,0)
0,029
30 (50.0)
30 (50.0)
1.000
No
37 (29,8)
87 (70,2)
62 (50.0)
62 (50.0)
Ricorrenza posizione d
locale-regionale
7 (18,9)
30 (81,1)
0.460
20 (54,1)
17 (45,9)
0.426
Distant Pagina 2 (8.7)
21 (91,3)
10 (43.5)
13 (56,5)
un analisi si è basata eseguita su 161 pazienti con dati completi di dimensioni del tumore (TS) .b L'analisi è stata effettuata sulla base di 179 pazienti con adenocarcinoma.c gastrica La mediana del rapporto di linfonodi (LNR) è stato 0,33 (6 casi), e casi GC erano diversi in sottogruppi distinti . d 60 casi ricorrenti sono stati inclusi.
sopravvivenza analisi
Per 184 casi, il sistema operativo mediana è stata di 26.8 (range 0.8-102.3) mesi, e il tasso di sopravvivenza a 1, 3 e 5 anni era 79,3%, 50,5% e 37,4%, rispettivamente (Figura 2A). Come previsto, i fattori tradizionali sono stati associati con l'OS dei pazienti CG, come ad esempio la dimensione del tumore, il grado istologico, stato dei linfonodi, sierosa invasione e lo stadio TNM (P
< 0.05 per tutti). Inoltre, sia ad alta densità di CD11b + immunociti e MT1-MMP espressione negativa sono stati correlati con una migliore OS (P valore
era rispettivamente di 0,031 e 0,015,.) (Figura 2B, 2C). La capacità di discriminazione in OS è stata aumentata in sottogruppi LNR (P
< 0,001), rispetto ai linfonodi sottogruppi di stato (P = 0,015
) (Figura 2D, 2E), e l'analisi ROC ha mostrato che, in termini di previsione rischio di morte, la classificazione per LNR (area sotto la curva: 0.659 [IC 95%: 0,579-0,739], P
< 0,001) ha avuto prestazioni migliori rispetto linfa positiva nodi numero (aree sotto la curva: 0,568 [95 % CI: 0,484-0,653], P = 0,114
). Tutti i risultati hanno indicato che MT1-MMP positivo, basso CD11b + immunociti densità e alta LNR sono stati i fattori di rischio legati alla cattiva prognosi (Figura 2, tabella 3). Figura 2 OS cumulativa dei pazienti GC. (A) del sistema operativo di 184 pazienti GC. (B) Bassa CD11b + immunociti densità era legato alla scarsa OS. (C) I pazienti in MT1-MMP gruppo positivi erano a più alto rischio di morte. (D, E) Sia linfonodi stato e LNR sono stati correlati con scarsa OS, ma LNR potrebbe meglio differenziare i sottogruppi di pazienti. (F) caratteristiche combinate potrebbero indicare OS dei pazienti CG in modo più accurato.
Tabella 3 Analisi dei fattori per quanto riguarda OS
variabili
N
N della morte (%)

mediana OS (Range)
5 anni tasso di sopravvivenza (%)
log-rank test χ2value
P
Età (anni)
< 60
99
52 (52,5)
30,1 (1,5-99,5)
45,1
3.584
0,058
≥60
85
56 (65,9) 24,8
(,8-102,3)
28,6
genere
Maschio
132
74 (56,1) 30,3
(,8-102,3)
40,0
2.114
0,146
femminile
52
34 (65,4)
25,1 (1,3-94,8)
30,3
Le dimensioni del tumore (cm2)
a < 16
73
35 (47,9)
41,6 (1,1-99,5)
52,9
7,882 0,005

≥16
88
57 (64,8)
24.2 (,8-102,3)
29,2
istologica grado b
1/2
55
88 (56,1) 30,1
(1,1-102,3)
54,2
13,412
< 0,001
3/4
124
20 (74,1)
16,8 (0,8-74,9)
30,1
linfonodi metastasi
Sì
131
83 (63,4) 24,8
(,8-102,3)
52,9
5,895 0,015

No
53
25 (47,2) 34,1
(6.1 -99,5)
30,5
sierosa invasione (stadio T)
T1-2
27
7 (25,9)
58,9 (20,2-99,5)
74,9
14,742
< 0,001
T3-4
157
101 (64,3) 24,8
(,8-102,3)
30,8
TNM
anticipata (I, II)
58
26 (44,8)
35,8 (6,1-99,5)
54,0
9,823 0,002

avanzata
126
82 (65,1) 22,8
(,8-102,3)
29,2
(III, IV)
Chirurgia
SR
159
89 (56,0) 30,0
(,8-102,3)
39,8
5.902
0.015
TR /CR
25
19 (76,0)
18,0 (3,8-89,9)
21,8
chemioterapia
Sì
149
87 (49,7)
33,5 (5,3-99,5)
35,9
0.016
0.900
No
35
21 (60,0) 28,4
(,8-102,3 )
40,0
LNR c
≤0.33
94
41 (43,6) 38,8
(1,1-102,3)
55,1
24,881
< 0,001
> 0,33
90
67 (74,4)
20,1 (0,8-99,1)
18,3
MT1-MMP
negativo 46
18 (39,1)
35,7 (3,8-79,3)
54,0
5,869 0,015

positivo
138
90 (65,2) 25,4
(,8-102,3)
32.2
CD11b + immunociti densità
basso
92
62 (67,4)
25,1 (0,8-99,1)
27,6
4.655
0,031
alta
92
46 (50,0) 30,7
(1,3-102,3)
46,7
caratteristiche combinate (densità MT1-MMP, CD11b densità + immunociti e LNR)
Gruppo I
73
26 (35.6)
38,7 (6,1-94,1)
61,4
28,173
< 0,001
Gruppo II
111
82 (73,9)
18.1 (0,8- 90.9)
21.1
una analisi è stata condotta sulla base di 161 pazienti con dati completi di dimensioni del tumore. b L'analisi è stata effettuata sulla base di 179 pazienti con adenocarcinoma gastrico. C La mediana della LNR era 0,33 (6 casi), e casi GC erano diverse in subgroups.OS distinte: la sopravvivenza globale; SR: la resezione subtotale; TR: la resezione totale; CR: La resezione combinata; LNR:. Rapporto linfonodo
Come abbiamo proposto in precedenza, sono state esplorate caratteristiche combinate in base al numero di fattori di rischio per migliorare la previsione di GC prognosi (Tabella 3). Pertanto, i pazienti sono stati divisi in due sottogruppi in base al numero di caratteristiche di rischio: gruppo I, sono stati osservati meno di due fattori di rischio; e sono stati osservati gruppo II, due o tre fattori di rischio. L'analisi combinata ha mostrato che il sistema operativo dei pazienti nel gruppo II era significativamente più breve rispetto ai pazienti nel gruppo I (P
< 0,001). (Figura 2F)
analisi multivariata e ROC analisi
All'analisi univariata, clinico tradizionale caratteristiche -pathological (come ad esempio le dimensioni del tumore, stadio T, stadio TNM, i metodi di chirurgia, e lo stato di recidiva), espressione MT1-MMP, CD11b densità + immunociti e LNR sono stati associati con OS. Inoltre, il rischio di morte nel gruppo combinato II aumentato significativamente (P
< 0,001).
Fattori che mostrano significato con l'analisi univariata sono stati integrati in multivariata analisi di Cox. In questo studio, LNR, MT1-MMP, CD11b e caratteristiche combinate sono stati altamente correlati. Pertanto, due modelli multivariati separati sono stati generati per evitare la multicollinearità tra queste variabili. LNR, MT1-MMP espressione e CD11b densità + immunociti sono stati fattori prognostici indipendenti per OS dopo aver escluso altri fattori di confondimento (P
< 0.05 per tutti) Inoltre, le caratteristiche combinate erano fattore prognostico indipendente, troppo (HR = 3,818 [95 % CI: 2,223-6,557], P
< 0,001) (Tabella 4) .table 4 analisi multivariata dei fattori associati con OS
fattori
OS
HR
95% CI
P
Modello dimensioni 1
tumore: < 16 cm2vs
≥16 cm2
1.821
1.168- 2.839
0.008
sierosa invasione (T stadio):
T1-2 vs
T3-4
3.232
1,440-7,251
0.004
Lymoh nodi metastasi:
No vs
Sì
1.012
0,610-1,679
0,964
tipi di chirurgia: SR vs
TR /CR
2.030
1,128-3,653
0,018
LNR: basso (≤0.33) vs alto (> 0,33)
1.957
1,233-3,108
0.004
MT1-MMP: negativo vs
positivo
2.596
1,496-4,506
0.001
CD11b + immunociti densità: alta vs
basso
1.838
1,183-2,855
0.007
Modello dimensioni 2
tumore: < 16 cm2vs
≥16 cm2
1.734
1,120-2,686
0.014
sierosa invasione (T stadio):
T1-2 vs
T3-4
3.013
1,360-6,674
0.007
Lymoh nodi metastasi:
No vs
Sì
0,696
0,404 - 1,200 0,192

tipi di chirurgia: SR vs
TR /CR
2.023
1,134-3,606
0.017
caratteristiche combinate: Gruppo I contro
gruppo II
3,818
2,223-6,557
< 0,001
OS : sopravvivenza globale; HR: hazard ratio; NA: non adottati; SR: la resezione subtotale; TR: la resezione totale; CR: La resezione combinata; LNR:. Rapporto linfonodo
analisi ROC è stato realizzato per valutare ulteriormente le prestazioni prognostica dei quattro fattori indipendenti in questo studio. caratteristiche combinate sarebbe meglio per prevedere gli esiti clinici dei pazienti GC rispetto ad altri fattori (area sotto la curva: 0,689 [95% CI: 0,609-0,768], P
< 0,001) (Figura 3). Figura 3 analisi ROC del valore predittivo per la morte. Tra i 4 fattori prognostici indipendenti, l'area sotto la curva della nuova funzione combinata era il più grande. La funzione combinata potrebbe avere prestazioni migliori prognostico nei pazienti con CG.
Discussione
Abbiamo proposto un'analisi combinata di funzionalità integrate stromali del tumore come una strategia utile per valutare la progressione del cancro e la sopravvivenza del paziente in GC sulla base dei nostri studi si sono concentrati sul co-evoluzione delle cellule tumorali e microambiente tumorale e [19, 21, 22]. Questo studio è stato progettato per esplorare la fattibilità di questa strategia combinata. Inoltre, un metodo di automazione migliorata per analizzare le immagini digitalizzate stato usato per garantire sia la riproducibilità e buone prestazioni in questo studio. Come Fridman [23] ha suggerito, tali metodi potrebbero aprire la strada per comprendere meglio il complesso microambiente tumorale, così come per la valutazione di routine dei parametri per la gestione clinica dei pazienti affetti da cancro. Qui, 184 casi GC sono stati inclusi per valutare i valori prognostici di fattori ottimizzati convenzionali patologici prognostici, fattori molecolari cellulari, fattori immunitari e le caratteristiche combinate. Questo è il passo essenziale verso la creazione di un sistema prognostico praticabile l'integrazione di entrambi, tumori stromali e le caratteristiche clinico-patologiche nei nostri studi serie [19, 21, 22].
Di 184 casi, i dati demografici e le caratteristiche clinico-patologici sono simili a quelle riportate in altre grandi serie della popolazione GC [24]. I nostri risultati hanno dimostrato che l'espressione di MT1-MMP è stata spesso correlata ad un aumentato rischio di ricorrenza, ma la differenza di posizione ricaduta non era statisticamente significativa. Questi risultati sono stati simili a precedente relazione [25]. MT1-MMP gioca un ruolo importante nella degradazione tipo I e IV collagene per facilitare le cellule tumorali diffusione. Inoltre, MT1-MMP può promuovere l'angiogenesi e micrometastasi per via vascolare [26].
Riguardo alle cellule immunitarie, la natura, la densità e la posizione sono parametri importanti per valutare in modo completo la reazione in situ
immunitaria e la specifica ruolo nella progressione del cancro. In questo studio, CD11b + immunociti sono stati per lo più situati nella parte anteriore invasiva. La differenza di densità CD11b + immunociti era statisticamente significativa tra linfonodi metastasi e sottogruppi non-metastais. Inoltre, il CD11b + immunociti densità era più alto nei primi mesi rispetto ai pazienti CG avanzati, simili alle relazioni Sconocchia et al. e Ladoire et al. [27, 28]. Tutti gli autori hanno letto e approvato il manoscritto finale.

• L'espressione di p53, ossido nitrico sintasi inducibile e fattore di crescita vascolare endoteliale in lesioni precancerose e cancerose gastrici: correlazione con features
• Un aumento della chinasi integrina-linked conferisce non canonicamente vantaggi della crescita di NF-kB-mediate a cellule di cancro gastrico attivando ERK1 /2