Kombinerede funktioner baseret på MT1-MMP udtryk, CD11b + immunocytter tæthed og LNR forudsige kliniske resultater af mavekræft

Kombinerede funktioner baseret på MT1-MMP udtryk, CD11b + immunocytter tæthed og LNR forudsige kliniske resultater af mavekræft
Abstract
Baggrund
betragtning af kompleksiteten af ​​tumor mikromiljø, kunne ingen enkelt markør fra kræftceller tilstrækkeligt forudsige den kliniske resultater af gastrisk cancer (GC). Formålet med denne undersøgelse var at evaluere den prognostiske rolle kombinerede funktioner, herunder konventionel patologi, proteinase og immune data i GC.
Metoder
Foruden patologiske undersøgelser blev immunhistokemi anvendt til at vurdere membran-type 1 matrixmetalloproteinase ( MT1-MMP) ekspression og CD11b + immunocytter densitet i tre uafhængige GC væv mikroarrays indeholdende 184 GC væv. Separate og kombinerede funktioner blev evalueret for deres indvirkning på den samlede overlevelse (OS).
Resultater
Vi fandt, at de traditionelle faktorer, herunder tumorstørrelse, histologisk klasse, lymfeknude status, serosa invasion og TNM stadie var forbundet med OS (P
< 0,05 for alle). Endvidere blev fundet statistisk signifikante forskelle i OS blandt lymfeknude ratio (LNR) undergrupper (P
< 0,001), MT1-MMP undergrupper (P
= 0,015), og CD11b + immunocytter densitet undergrupper (P
= 0,031). Vigtigst, blev kombineret funktion (MT1-MMP positive, lav CD11 + immunocytter tæthed og høj LNR) findes ved multivariat analyse til at være en uafhængig prognostiske faktorer for OS efter udelukke andre forstyrrende faktorer (HR = 3,818 [95% CI: 2,223-6,557 ], P
< 0,001). Desuden denne kombinerede funktion havde bedre resultater i forudsige kliniske resultater efter operation længe før tilbagefald var indtruffet (Areal under kurven: 0,689 [95% CI: 0,609-0,768], P
< 0,001).
Konklusioner
Disse fund indikerer, at der kunne opnås bedre information på GC prognose fra kombinerede klinisk-patologiske faktorer, tumorceller og tumor mikromiljø.
Nøgleord
mavekræft prognose tumor mikromiljø Lymfeknude forholdet Baggrund
mavekræft (GC) er den fjerde mest almindelige kræftform og den tredje årsag til kræft død på verdensplan [1]. Der er gjort betydelige fremskridt i tidlig diagnosticering af kræft, men der har ikke været en tilsvarende fremgang i nøjagtigheden af ​​kliniske resultat forudsigelse [2]. Kun TNM klassifikationen af ​​Den Internationale Union Against Cancer (UICC) eller amerikanske fælles udvalg om kræft (AJCC) anvendes rutinemæssigt, hvilket er det vigtigste instrument til at guide behandling strategi for GC patienter [3]. Men GC'er har betydelig heterogenitet i deres biologiske adfærd, og tumorer i samme kliniske fase viser ofte forskelle i kliniske forløb og behandling svar [4]. Således identifikation af faktorer, der påvirker invasion og metastase, og etablering af biomarkører paneler til at forudsige maligne potentiale og for at identificere de forskellige risikogrupper er af afgørende betydning.
Trods mange års forskning og hundredvis af rapporter om tumormarkører i GC, antallet af klinisk nyttige markører er ynkeligt lille [5]. For nylig, en ny prognostisk værktøj af lymfeknude-forhold (LNR), defineret som antallet af MLN divideret med antallet af lymfeknuder udtaget, blev foreslået. Det kan forbedre prognosen nøjagtighed og reducere omstillingsfasen sammenlignet med UICC (2002, 6. udgave) mellemstation [6, 7]. LNR er blevet betragtet som en af ​​de bedste clinicopathologic variabler for forudsigelse af prognose af mavekræft efter kurativ kirurgi i retrospektive undersøgelser [8], som er den succes i optimering af traditionelle kliniske markører. Men opdagelsen af ​​andre såkaldte lovende markører i laboratoriet oversætter temmelig langsomt til klinisk anvendelighed. En årsag til dette er, at cancer udviklingen og progressionen bestemmes af co-evolution mellem tumorceller og tumormikromiljøet snarere end en enkelt mutation [9]. Sådan co-evolution er blevet rapporteret af mange undersøgelser, som alle viser, at interaktioner mellem tumorceller og tumor- stromale skabe en unik og dynamisk mikromiljø at påvirke tumorudvikling [10]. Derfor screening af nye molekylære faktorer fra komplekset tumormikromiljøet (cellulære og stromale komponenter) repræsenterer en anden vigtig tilgang til at identificere prognostiske faktorer.
MT1-MMP er kendt som en membran-typen matrixmetalloproteinase, og MT1-MMP-medieret ekstracellulær matrix (ECM) nedbrydning af tumorceller eller stromaceller er afgørende for cancer invasion gennem basalmembraner og stromale interstitiel matrix [11]. Selvom MT1-MMP har vist prognostisk betydning i flere humane kræftformer, såsom brystkræft, kræft i bugspytkirtlen og kolorektal cancer [12, 13], er lidt om den præcise betydning af MT1-MMP i GC patienter. Større bidragydere til tumor mikromiljø er inflammation og inflammatoriske mediatorer [9]. Det er blevet foreslået, at immunsystemets contexture kan påvirke det kliniske resultat af kræftpatienter, og immunforsvaret score ville være vigtigt prædiktor sammenlignelig med TNM klassifikationen [14]. CD11b udtrykkes af en specifik undergruppe af myeloide celler, herunder CD34 + progenitorer, monocytter, granulocytter, NK-celler og aktiverede T-celler, der tegner sig for den medfødte immunitet [15, 16]. Rolle tumor immunogenicitet og immunoterapi drøftes [17]. Udvidelse vores viden om den komplekse rolle af immunceller i GC i sidste ende kunne bane vejen for den længe ventede vellykket udvikling af lægemidler.
Baseret på denne forståelse, undersøgte vi prognostiske rolle cellulær proteinase markør MT1-MMP og mikromiljø immun markør CD11b + immunocytter i GC. Særlig opmærksomhed blev udbetalt til den prognostiske værdi af de kombinerede funktioner i MT1-MMP, CD11 + immunocytter tæthed og LNR.
Metoder
Patienter og opfølgning
Den registreringer af GC patienter, som gennemgik kirurgi med en helbredende hensigt ved Onkologisk afdeling, Zhongnan Hospital i Wuhan University (Wuhan, Kina) fra december 2002 til februar 2011 er revideret. Større demografiske og klinisk-patologiske karakteristika var til rådighed. Ingen patienter fik neoadjuverende kemoterapi før operation. TNM stadie blev bestemt ifølge den 7. udgave UICC /AJCC TNM-system [18]. Ved den seneste opfølgning den 31. maj 2012, den mediane opfølgning var 59,5 (spændvidde: 16.8-102.3) måneder. I alt 108 (58,7%) patienter døde. Samlet overlevelse (OS) blev defineret som intervallet fra datoen for kirurgi til GC-relaterede dødsfald. Enhver gentagelse i abdomino-bækken hulrum blev defineret som lokal-regional gentagelse; og fornyet via blodstrøm blev defineret som fjernmetastaser, såsom levermetastaser og lunge metastase. Skriftligt informeret samtykke blev opnået fra patienterne og forsøgsprotokollen blev godkendt af den etiske komité af Zhongnan Hospital i Wuhan University. Undersøgelsen blev foretaget i overensstemmelse med de etiske standarder af World Medical Association Helsinki-deklarationen
mavekræft prøver og væv microarrays
All hematoxylin og eosin. (HE) -stained slides blev undersøgt af uafhængige korrekturlæsere, som ikke var klar over de kliniske karakteristika eller kliniske resultater. Tre væv microarrays (TMAS) blev konstrueret. Kort fortalt blev to kerner taget fra hvert repræsentativt tumorvæv (1,5 mm i diameter for hver kerne). Derefter blev tre TMAS sektioner med 184 tumorvæv konstrueret (i samarbejde med Shanghai Biochip Company Ltd, Shanghai, Kina).
Immunohistokemi og evaluering af immunhistokemiske fund
De primære antistoffer til MT1-MMP (sc101451, Santa Cruz , USA, fortynding 1/100), CD11b + (ab52478, Abcam, UK, fortynding 1/100), det tilsvarende peberrodsperoxidase (HRP) konjugeret sekundært antistof (ab97265, ab97200, Abcam, UK, fortynding 1/300), og diaminobenzidin (DAKO, Danmark) blev opnået og valideret til mærkning.
Den immunhistokemiske protokoller blev beskrevet tidligere [19]. Kort sagt blev tre TMAS sektioner deparaffinised med xylen thenrehydrated gennem tre skift af alkohol. Endogen peroxidaseaktivitet blev blokeret af 0,3% hydrogenperoxid i 10 min. Antigen genfinding blev udført ved mikrobølgebehandling i 0,01 M Tris-EDTA-buffer (pH 9,0) i 20 min. Objektglas blev inkuberet i 1 time med de primære antistoffer for MT1-MMP (sc101451, Santa Cruz, USA, fortynding 1/100), CD11b + (ab52478, Abcam, UK, fortynding 1/100). Efter vask med Tris-bufret saltvand (TBS, pH 7,4), blev snit inkuberet med b den tilsvarende peberrodsperoxidase (HRP) konjugeret sekundært antistof (ab97265, ab97200, Abcam, UK, fortynding 1/300) i yderligere 50 min. Antigen-antistof-reaktionen blev visualiseret med 3,30-diaminobenzidin (DAKO, Danmark). Efter modfarvning med hæmatoxylin blev snit dehydreret gennem stigende alkoholer til xylen og monteret. Positiv farvning kontroller blev gennemført sideløbende med paraffinsnit af normalt humant tonsil. Negativ kontrol blev udført ved at udelade det primære antistof.
Glassene blev undersøgt under Olympus BX51 fluorescensmikroskop udstyret med et Olympus DP72 kamera (Olympus Optical Co., Ltd., Tokyo, Japan). Panorama af hver mærket kerne blev opnået baseret på 4 billeder under energibesparende forstørrelse (× 100) med høj opløsning af DP-BSW software (Olympus Optical Co., Ltd., Tokyo, Japan). Identiske indstillinger blev anvendt til hver fotografi, for at minimere den selektionsbias. Den MT1-MMP udtryk og CD11b + immunocytter tæthed blev digitalt evalueret af Image-Pro Plus v6.2 software (Media kybernetik Inc, Bethesda, MD). For at holde resultater pålidelige og sammenlignelige, blev en ensartet ramme for alle dias anvendes til læsning af hvert antistof farvning. Integreret optisk densitet (IOD) af alle de positive farvning af MT1-MMP i hvert billede blev målt, og dets forhold til det samlede areal af hvert billede blev beregnet som MT1-MMP-ekspression. CD11b + immunocytter densitet blev registreret som antallet af positive celler pr vævsoverflade enhed i kvadratmillimeter. Cut point for MT1-MMP tæthed blev udforsket af "det bedste cut-off tilgang ved log-rank test" [20]. Og den 25. percentil-værdien blev defineret som cut-off point for at bestemme MT1-MMP negative og positive udtryk undergrupper i denne undersøgelse. For CD11b + immunocytter tæthed, cut-off point for definitionen af ​​undergrupper (lav og høj CD11b + immunocytter tæthed) var medianværdien.
Statistisk analyse
Statistiske analyser blev udført med SPSS-software (version 18.0, SPSS Institute, Chicago, IL). The Pearson χ 2 test eller Fishers eksakte test blev anvendt til at sammenligne kvalitative variabler. Kaplan-Meier-analyse blev anvendt for overlevelse analyse og betydning blandt patienternes undergrupper blev beregnet ved log rank test. Cox regression model blev anvendt til at udføre multivariat analyse. Logistisk regression blev anvendt til at vurdere indflydelsen af ​​binære faktorer. Receiver Operating karakteristik (ROC) analyse blev anvendt til bestemmelse af den prædiktive værdi af parametrene. To sidet P
< 0,05 blev betragtet som statistisk signifikant.
Resultater
Større klinisk-patologiske funktioner og immunhistokemiske fund
Blandt de 184 sager, der indgår i denne undersøgelse var 132 (71,7%) mænd og 52 (28,3%) kvinder, der spænder i alder 25-85 år (gennemsnit ± SD: 57,9 ± 12,9 år). De vigtigste demografiske og klinisk-patologiske karakteristika blev præsenteret i tabel 1.Table 1 Patienters demografi og klinisk-patologiske karakteristika
Elementer
Value
Age (M ± SD, år)
57,9 ± 12,9
Køn
Mand (%)
132 (71,7)
Kvinde (%)
52 (28,3)
Tumor placering
Distal mave (%)
98 (53,3)
Non-distal mave (%)
86 (46,7)
Patologiske typer
Adenocarcinom
Histologisk klasse 1/2
55 (29,9)
Nå /Moderat differentieret adenocarcinom (%)
55 (29,9)
Histologisk grad 3/4
124 (67,4)
lav /Udifferentieret adenocarcinom (%)
102 (55,4)
mucinøs adenocarcinom /signet-ring cell carcinoma
22 (12,0)
Andre en (%)
5 (2,7)
serosa invasion
Nej (T0, T1, T2) (%)
27 (14,7)
Ja (T3, T4) (%)
157 (85,3)
lymfeknudemetastase
Nej (n0) (%)
53 (28,8)
Ja (N1, N2, N3) (%)
131 (71,2)
LNR, Median (Range)
0,33 (0-1)
fjernmetastaser
M0 (%)
177 (96,2)
M1 (%)
7 (3.8)
TNM stadier
tidligt (trin I, II) (%)
58 (31,5)
Advanced (Stages III, IV) (%)
126 (68,5)
Kirurgi
Subtotal resektion (%)
159 (86,4)
Non-Subtotal resektion (%)
25 ( 13.6)
kemoterapi
Nej (%)
35 (19,0)
Ja (%)
149 (81,0)
Gentagelse
Nej (%)
124 ( 67,4)
Ja (%)
60 (32,6)
Gentagelse placering b
Lokal-regional
37 (61,7)
Distant
23 (38,3)
Klinisk status ved slutningen af ​​opfølgningen
leve og uden tilbagefald
72 (39,1)
Død eller levende med recidiv
112 (60,9)
MT1-MMP udtryk
Negativ
46 (33,3)
Positiv
138 (66,7)
CD11 + immunocytter (celler /mm2)
Median (interval)
257 (4-2101)
en Andre inkluderet adenosquamøst carcinoma in 3 (1,62%) tilfælde, atypisk carcinoid i 1 (0,54%) tilfælde, og neuroendokrine karcinom i en (0,54%) case.b 60 tilbagevendende sager blev evalueret.
Immunhistokemi blev udført i alle GC TMA'er og resultatet af hver prøve blev opnået for billeder-baseret digital analyse (Figur 1A-1D). MT1-MMP-farvning var overvejende i cytoplasmaet eller på cellemembranen af ​​tumorceller. De fleste af stromacellerne var negative, men også blev observeret sporadisk positiv farvning på disse celler (fig 1E, 1G). CD11b + immunocytter hovedsagelig infiltreret i sammenføjningen af ​​cancer reden og stromale (figur 1F, 1 H). Niveauet af MT1-MMP densitet og CD11b + immunocytter densitet blev præsenteret i tabel 1. Den 25. percentil af MT1-MMP tæthed var 0.00186 og 138 (75,0%) patienter blev dokumenteret som MT1-MMP positive efter kriterier Ovennævnte klassifikationssystemer. Medianværdien af ​​CD11b + immunocytter var 257 celler pr vævet overflade enhed i kvadratmillimeter. Figur 1 Immunohistologiske fund i TMAs. (AD) Et repræsentativt eksempel på MT1-MMP (A), CD11b + immunocytter (C) farvning af en GC væv microarray, og den tilsvarende digitale billede analyseret med billedet software, med MT1-MMP (B) og CD11b + immunocytter (D ) repræsenteret med rødt. (E, G) MT1-MMP-farvning var overvejende i cytoplasmaet eller på cellemembranen af ​​tumorceller (blå pil), og de fleste af stromaceller havde negativ farvning, selvom sporadisk positiv farvning på disse celler også blev observeret (F, H). CD11b farvning viste, at CD11b + immunocytter hovedsageligt infiltreret ind i tidspunkt for kræft reden og stroma, især ved den invasive front (Røde og grønne pile).
Forholdet mellem MT1-MMP udtryk, CD11b + immunocytter tæthed og klinisk-patologiske funktioner
Der var 77 (55,8%) og 15 (32,6%) patienter med højt CD11 + immunocytter tæthed i MT1-MMP positive (n
= 138) og negative (n
= 46) undergrupper, henholdsvis (P
= 0,006). Sandsynligheden for MT1-MMP-ekspression blev reduceret betydeligt for lav CD11 + immunocytter densitet undergruppe (odds ratio (OR) = 0,383 [95% CI: 0,190-0,774], P
= 0,007, Logistisk regression). MT1-MMP-ekspression og CD11b + immunocytter densitet blev korreleret med de klinisk-patologiske træk, som opsummeret i tabel 2. MT1-MMP-ekspression korrelerede med lille tumorstørrelse (P
= 0,007), tumor ved den distale mave (P
= 0,027) og øget recidiv risiko (P
= 0,001), men ikke korreleret med alder, køn, histologisk klasse, serosa invasion, lymfeknude status, TNM stadie og steder af tumor tilbagefald (P
> 0,05 for alle). CD11b + immunocytter tæthed var korreleret med lymfeknude status (P
= 0,015), LNR (P
= 0,018) og TNM stadie (P
= 0,011), men ikke korreleret med alder, køn, tumorstørrelse , tumor placering, histologisk kvalitet, serosa invasion og tilbagefald risiko (P
> 0,05 for alle) .table 2 forholdet mellem MT1-MMP, CD11 + immunocytter tæthed og cinico-patologiske funktioner
Variabler

MT1-MMP udtryk
CD11b + immunocytter tæthed
Negativ (n
= 46)
Positiv (n = 138)

P
Low (n
= 92)
høj (n
= 92)
P
N Hotel (%)
N Hotel (%)
N Hotel (%)
N Hotel (%)

Alder (år)
< 60
26 (56,5)
20 (43,5)
0,669
43 (43,4)
56 (56,6)
0,055
≥60
73 (52,9)
65 (47,1)
49 (57,6)
36 (42,4)
Køn
Mand
33 (25,0 )
99 (75,0)
1,000
66 (50,0)
66 (50,0)
1,000
Female
13 (25,0)
39 (75,0)
26 (50,0)
26 (50,0)
Tumor størrelse (cm2) en
< 16
12 (16,4)
61 (83,6)
0,007
35 ( 47,9)
38 (52,1)
0,404
≥16
31 (35,2)
57 (64,8)
48 (54,5)
40 (45,5)
Location
distale
18 (18,4)
80 (81,6)
0,027
51 (52,0)
47 (48,0)
0,555
Ikke-distal
28 (32,6)
58 (67,4)
41 (47,7)
45 (52.3)
Histologisk kvalitet b
1/2
13 (23,6)
42 (76,4)
0,845
24 (43,6)
31 (56,4)
0,376
3/4
31 (25,0)
93 (75,0)
63 (50,8)
61 (49,2)
lymfeknudemetastase
Ja
31 (23,7)
100 (76,3)
0.511
73 (55,7)
58 (44,3)
0,015
Ingen
15 (28,3)
38 (71,7)
19 (35,8)
34 (64,2)
LNR c
≤0.33
27 (28,7 )
67 (71,3)
0,233
39 (41,5)
55 (58,5)
0.018
> 0,33
19 (21,1)
71 (78,9)
53 (58,9)
37 (41,1)
serosa invasion (T etape)
T1-2
4 (14,8)
23 (85,2)
0,186
10 (37,0)
17 (63,0)
0,145
T3-4
42 (26,8)
115 (73,2)
82 (52,2)
75 (47,8)
TNM mellemstationer
Tidlig (I, II)
13 (22,4)
45 (77,6)
0,583
21 (36,2)
37 (63,8)
0,011
Avanceret (III, IV)
33 (26,2)
93 (73,8)
71 (56,3)
55 (43,7)
Gentagelse
Ja
9 (15,0 )
51 (85,0)
0,029
30 (50,0)
30 (50,0)
1,000
Ingen
37 (29,8)
87 (70,2)
62 (50,0)
62 (50,0)
Gentagelse placering d
Lokal-regional
7 (18,9)
30 (81,1)
0.460
20 (54,1)
17 (45,9)
0,426
Distant
2 (8.7)
21 (91,3)
10 (43,5)
13 (56,5)
en analyse blev udført baseret på 161 patienter med fuldstændige data for tumorstørrelse (TS) .b Analyse blev udført baseret på 179 patienter med gastrisk adenocarcinoma.c medianen af ​​lymfeknude-forhold (LNR) var 0,33 (6 tilfælde), og GC tilfælde var forskellige i særskilte undergrupper . d 60 tilbagevendende sager blev inkluderet.
Survival analyse
For 184 tilfælde, den mediane OS var 26,8 (spændvidde 0.8-102.3) måneder, og 1-, 3- og 5-års overlevelsen var 79,3%, 50,5% og 37,4%, henholdsvis (figur 2A). Som forventet blev disse traditionelle faktorer forbundet med GC patienternes OS, såsom tumor størrelse, histologisk klasse, lymfeknude status, serosa invasion og TNM stadie (P
< 0,05 for alle). Desuden blev både høj CD11 + immunocytter densitet og MT1-MMP negativ ekspression korrelerede med bedre OS (P Drømmeholdet værdi var 0,031 og 0,015, henholdsvis.) (Figur 2B, 2C). Forskelsbehandlingen evne i OS blev øget i LNR undergrupper (P
< 0,001) i forhold til lymfeknuder status undergrupper (P
= 0,015) (figur 2D, 2E), og ROC-analyse viste, at med hensyn til at forudsige risiko for død, klassificeringen af ​​LNR (område under kurven: 0,659 [95% CI: 0,579-0,739], P
< 0,001) havde bedre ydeevne end positive lymfeknuder nummer (områder under kurven: 0,568 [95 % CI: 0,484-0,653], P
= 0,114). Alle resultater viste, at MT1-MMP positive, lav CD11 + immunocytter tæthed og høj LNR var risikomomenter dårlig prognose (figur 2, tabel 3). Figur 2 Kumulativ OS af GC patienter. (A) OS af 184 GC patienter. (B) Lav CD11 + immunocytter tæthed var relateret til dårlig OS. (C) Patienter i MT1-MMP positive gruppe var i højere risiko for død. (D, E) Både lymfeknuder status og LNR blev korreleret med dårlig OS, men LNR kunne bedre differentiere patient undergrupper. (F) Kombinerede funktioner kunne tyde OS af GC patienter mere præcist.
Tabel 3 Analyser af faktorer vedrørende OS
Variabler
N
N for død (%)

Median OS (Range)
5-års overlevelse (%)
Log-rank test χ2value
P
Alder (år)
< 60
99
52 (52,5)
30,1 (1,5-99,5)
45,1
3,584
0,058
≥60
85
56 (65,9)
24,8 (0,8 til 102,3)
28,6
Køn
Mand
132
74 (56,1)
30,3 (0,8 til 102,3)
40,0
2,114
0,146
Female
52
34 (65,4)
25,1 (1,3-94,8)
30,3
Tumor størrelse (cm2) en
< 16
73
35 (47,9)
41,6 (1,1-99,5)
52,9
7,882
0,005
≥16
88
57 (64,8)
24,2 (0,8 til 102,3)
29,2
Histologisk kvalitet b
1/2
55
88 (56,1)
30,1 (1,1 til 102,3)
54,2
13,412
< 0,001
3/4
124
20 (74,1)
16,8 (0,8-74,9)
30,1
lymfeknuder metastaser
Ja
131
83 (63,4)
24,8 (0,8 til 102,3)
52,9
5,895
0,015
Ingen
53
25 (47,2)
34,1 (6,1 -99,5)
30,5
serosa invasion (T etape)
T1-2
27
7 (25,9)
58,9 (20,2-99,5)
74,9
14,742
< 0,001
T3-4
157
101 (64,3)
24,8 (0,8 til 102,3)
30,8
TNM
Tidlig (I, II)
58
26 (44,8)
35,8 (6,1-99,5)
54,0
9,823
0,002
Avanceret
126
82 (65.1)
22,8 (0,8 til 102,3)
29,2
(III, IV)
Kirurgi
SR
159
89 (56,0)
30,0 (0,8 til 102,3)
39,8
5,902
0,015
TR /CR
25
19 (76,0)
18,0 (3,8-89,9)
21,8
Kemoterapi
Ja
149
87 (49,7)
33,5 (5,3-99,5)
35,9
0,016
0.900
Ingen
35
21 (60,0)
28,4 (0,8 til 102,3 )
40,0
LNR c
≤0.33
94
41 (43,6)
38,8 (1,1 til 102,3)
55,1
24,881
< 0,001
> 0,33
90
67 (74,4)
20,1 (0,8-99,1)
18,3
MT1-MMP
Negativ
46
18 (39,1)
35,7 (3,8-79,3)
54,0
5,869
0,015
Positiv
138
90 (65,2)
25,4 (0,8 til 102,3)
32,2
CD11 + immunocytter tæthed
Low
92
62 (67,4)
25,1 (0,8-99,1)
27,6
4,655
0,031
High
92
46 (50,0)
30,7 (1,3 til 102,3)
46,7
kombinerede funktioner (MT1-MMP tæthed, CD11 + immunocytter tæthed og LNR)
Gruppe I
73
26 (35,6)
38,7 (6,1-94,1)
61,4
28,173
< 0,001
Gruppe II
111
82 (73,9)
18,1 (0.8- 90,9)
21,1
en analyse blev udført baseret på 161 patienter med komplette data af tumorstørrelse. b Analyse blev udført baseret på 179 patienter med gastrisk adenocarcinom. c Medianen af ​​LNR var 0,33 (6 sager), og GC tilfælde var forskellige i forskellige subgroups.OS: samlet overlevelse; SR: subtotal resektion; TR: total resektion; CR: kombineret resektion; LNR:. Lymfeknude forholdet
Som vi ovenfor foreslåede, blev kombineret funktioner baseret på antallet af risikofaktorer udforsket for at forbedre forudsigelse af GC prognose (tabel 3). Således blev patienterne opdelt i to undergrupper efter antallet af risikotræk: gruppe I blev mindre end to risikofaktorer observeret; og gruppe II, to eller tre risikofaktorer blev observeret. Kombineret analyse viste, at OS af patienterne i gruppe II var signifikant kortere end patienter i gruppe I (P
< 0,001). (Figur 2F)
multivariatanalyse og ROC analyse Salg In univariat analyse, traditionelle clinico -pathological funktioner (såsom tumorstørrelse, T stadium, TNM stadie, operationsmetoder, og fornyet status), MT1-MMP-ekspression, CD11 + immunocytter densitet og LNR var forbundet med OS. Desuden dødsrisikoen i kombineret II steget markant (P
< 0,001).
Faktorer, der viser betydningen af ​​univariat analyse blev integreret i multivariat Cox proportionel risiko analyse. I denne undersøgelse blev LNR, MT1-MMP, CD11b og kombinerede funktioner stærkt korreleret. Derfor blev to separate multivariate modeller genereret at undgå multikollinearitet blandt disse variabler. LNR, MT1-MMP udtryk og CD11b + immunocytter tæthed var uafhængige prognostiske faktorer for OS efter udelukke andre forstyrrende faktorer (P
< 0,05 for alle) Desuden de kombinerede funktioner var uafhængig prognostisk faktor, også (HR = 3,818 [95 % CI: 2,223-6,557], P
< 0,001) (tabel 4) .table 4 Multivariate analyser af faktorer i forbindelse med OS
faktorer
OS
fotos HR
95% CI
P
Model 1
Tumor størrelse: < 16 cm2vs
≥16 cm2
1,821
1.168- 2,839
0,008
serosa invasion (T etape): T1-2
vs
T3-4
3,232
1,440-7,251
0,004
Lymoh noder metastase:
Nej vs
Ja
1,012
0,610-1,679
0,964
Surgery typer: SR vs
TR /CR
2.030
1,128-3,653
0,018
LNR: lav (≤0.33) vs High (> 0,33)
1,957
1,233-3,108
0,004
MT1-MMP: Negativ vs
Positiv
2,596
1,496-4,506
0,001
CD11 + immunocytter tæthed: høj vs
lav
1,838
1,183-2,855
0,007
Model 2
Tumor størrelse: < 16 cm2vs
≥16 cm2
1,734
1,120-2,686
0,014
serosa invasion (T etape):
T1-2 vs
T3-4
3,013
1,360-6,674
0,007
Lymoh noder metastase:
Nej vs
Ja
0,696
0,404 - 1,200
0,192
Surgery typer: SR vs
TR /CR
2,023
1,134-3,606
0,017
kombinerede funktioner: Gruppe I vs
Gruppe II
3,818
2,223-6,557
< 0,001
OS : samlet overlevelse; HR: hazard ratio; NA: ikke vedtaget; SR: subtotal resektion; TR: total resektion; CR: kombineret resektion; LNR:. Lymfeknude forholdet
ROC-analyse blev gennemført for yderligere at vurdere den prognostiske udførelsen af ​​de fire uafhængige faktorer i denne undersøgelse. Kombinerede funktioner ville være bedre til at forudsige de kliniske resultater af GC patienter sammenlignet med andre faktorer (areal under kurven: 0,689 [95% CI: 0,609-0,768], P
< 0,001) (Figur 3). Figur 3 ROC-analyse af den prædiktive værdi for død. Blandt de 4 uafhængige prognostiske faktorer, området under kurven for den nye kombinerede funktion var den største. Den kombinerede funktion kunne have bedre prognostisk resultater i GC patienter.
Diskussion
Vi har foreslået en kombineret analyse af integrerede tumor stroma funktioner som en nyttig strategi til at vurdere udviklingen af ​​kræft og patientoverlevelse i GC baseret på vores undersøgelser fokuserede på den co-evolution af tumorceller og tumormikromiljøet og [19, 21, 22]. Denne undersøgelse blev designet til at undersøge muligheden for denne kombinerede strategi. Desuden blev en forbedret automatisering metode til at analysere de digitaliserede billeder, der anvendes til at sikre både reproducerbarhed og gode resultater i denne undersøgelse. Som Fridman [23] foreslog, ville sådanne fremgangsmåder bane vejen for bedre at forstå den komplekse tumor mikromiljø, samt den rutinemæssige evaluering af parametre for kliniske behandling af kræftpatienter. Heri blev 184 GC sager medtaget for at evaluere de prognostiske værdier af optimerede konventionelle patologiske prognostiske faktorer, cellulære molekylære faktorer, immun faktorer og de kombinerede funktioner. Det er det afgørende skridt i retning af at etablere en brugbar prognostisk system, der integrerer både klinisk-patologiske, tumor og stromale funktioner i vores serie undersøgelser [19, 21, 22].
Af 184 sager, demografi og klinisk-patologiske lignende egenskaber dem rapporteret i andre store serier af GC befolkning [24]. Vores resultater viste, at ekspressionen af ​​MT1-MMP ofte var korreleret med øget tilbagefald risiko, men forskellen i tilbagefald placering var ikke statistisk signifikant. Disse resultater svarede til tidligere rapport [25]. MT1-MMP spiller vigtig rolle i nedværdigende type I og IV collagener at lette kræftceller spreder. Desuden kan MT1-MMP fremme angiogenese og mikrometastase via vaskulær vej [26].
Med hensyn til immunceller, arten, tæthed og placering er vigtige parametre til omfattende evaluere in situ
immunreaktion og den specifikke rolle i cancer progression. I denne undersøgelse blev CD11b + immunocytter meste placeret på den invasive front. Forskellen i CD11 + immunocytter densitet var statistisk signifikant mellem lymfeknuder metastase og ikke-metastais undergrupper. Desuden CD11 + immunocytter tæthed var højere i begyndelsen end avancerede GC patienter, svarende til rapporterne fra Sconocchia et al. og Ladoire et al. [27, 28]. Alle forfattere har læst og godkendt den endelige manuskript.

• Ekspression af p53, inducerbar nitrogenoxidsyntase og vaskulær endotel vækstfaktor i gastriske præcancerøse og cancerøse læsioner: korrelation med kliniske symptomer
• En stigning i integrin-linked kinase ikke-kanonisk bibringer NF-KB-medieret vækst fordele til gastriske cancerceller ved at aktivere ERK1 /2