fibroblasty s rakovinou spojené so pozitívnu koreláciu s metastatickým potenciálom ľudských karcinómov žalúdka

fibroblasty s rakovinou spojené sú pozitívne korelované s metastatickým potenciálom karcinómov žalúdka ľudských
abstraktné
pozadia
prognózu pacientov s karcinómom žalúdka, je ťažké predvídať, pretože vád stanovenie chirurgický-patologické rysy. Bolo zistené, že s rakovinou spojené fibroblasty (CAFS) hrá významnú úlohu pri podpore rastu nádoru, inváziu a metastázy. Čím vyvoláva hypotézu, že rozsah CAFS prevalencia môže pomôcť určiť prognózu pacientov s karcinómom žalúdka.
Metódy
Immunochemistry a v reálnom čase, PCR experimenty boli vykonané za účelom porovnania expresie proteínov, ktoré sú špecifické markery alebo CAFS vylučovaný CAFS v nádore a vzoriek normálnych tkanív. Rozsah CAFS "prevalencia bola odstupňovaná podľa imunochemické farbenie a korelácia bola ďalej analyzovaná medzi CAFS 'prevalencia a iné charakteristiky nádoru, ktoré môžu mať vplyv na prognózu pacientov s karcinómom žalúdka.
Výsledky
takmer 80 percent normálnej žalúdočnej tkanív boli negatívne alebo slabo pozitívne na farbenie CAFS, zatiaľ čo viac ako 60 percent žalúdočných rakovinových tkanív boli mierne alebo silné pozitívne pre CAFS farbenie. Výsledky v reálnom čase, PCR tiež ukázala výrazné zvýšenú expresiu FAP, SDF-1 a TGF-D1 v žalúdočných rakovinové tkanive v porovnaní s normálnou žalúdočné tkaniva. Ďalšia analýza ukázala, že prevalencia CAFS 'korelovala s veľkosťou nádoru, hĺbky nádoru, lymfatických uzlín, pečeňových metastáz alebo pobrušnice metastáz.
Závery
Reaktívne s rakovinou spojené fibroblasty (CAFS), boli často akumulované v tkanivách karcinómu žalúdka, a prevalencia CAFS bola korelované s veľkosťou tumoru, hĺbka nádorov a nádorových metastáz, teda dať nejaké podpery pre stanovenie prognózy pacientov s rakovinou žalúdka.
pozadí
žalúdočné rakovina je druhou najčastejšou príčinou karcinóm súvisiacich úmrtí na celom svete [1]. Značné geografické rozdiely existujú v incidencii karcinómu žalúdka a predstavuje najčastejšou rakovinou v Číne [2]. Stále viac a viac pacientov s rakovinou žalúdka boli diagnostikované v posledných rokoch sa zmenou stravy a životného štýlu, rovnako ako rozvíjanie diagnostických postupov. Aj keď chirurgická liečba sa ukázala byť efektívne pre niektoré skoré karcinómov žalúdka, vrátane celkového gastrektómii a dlhší radikálny gastrektómii, prognóza týchto pacientov je nízka vzhľadom k recidívy po operácii, vo forme lymfatického šírenia, prenosnými krvou metastáz, alebo peritoneálnej šírenia [3].
prognózu pacienta s rakovinou žalúdka bolo preukázané, že je ovplyvnený niekoľkými zavedených chirurgických-patologické rysy, ako je patologické fáze, umiestnenie nádoru a histologického typu a stupňa nádoru [ ,,,0],4]. Kým Aurello et al. [5] je uvedené, že počet uzlov nutných k záveru, N0 sa môžu líšiť v závislosti od hĺbky invázie nádoru (T), klasifikácia TNM vyžaduje získavanie a analýzu aspoň 15 lymfatických uzlín pre presné staging. Avšak vo väčšine prípadov, je počet uzlov členitý je menší a len 20-30% pacientov bola odporúčaná minimálna preparácii 15 uzlov. Je potrebné Kuchynský indikátory, ktoré môžu poskytnúť ďalšie informácie o prognóze pacientov s rakovinou žalúdka.
Cancer-spojený fibroblastov (CAF), jeden z dôležitých stromálnych buniek obsahujúcich pevné nádory, bolo zistené, že hrajú významnú úlohu pri podpore rastu nádoru a progresie [6]. Na rozdiel od pokojovej fibroblasty, CAFS mať aktivovaný fenotyp a môžu byť identifikované podľa ich expresiu fibroblastov špecifických proteínu 1 (FSP1), vimentin, desmin, a α-aktínu hladkého svalstva, [7]. CAFS komunikovať medzi sebou, ako aj s rakovinových buniek a zápalových a imunitných buniek priamo pri kontakte bunky a nepriamo prostredníctvom parakrinný /exokrinnú signalizácie, proteázy, a modulácie extracelulárnej matrix (ECM). Tento komplex komunikačná sieť je rozhodujúci pre vytvorenie vhodného mikroprostredie pre podporu tumorigenezi, angiogenézy, a metastáz [8, 9]. Navyše, v porovnaní s transformovaných nádorových buniek, CAFS sú geneticky homogénne [10] a bolo preukázané Gastavo et al, že reaktívne stróma môže pôsobiť ako prediktor recidívy u karcinómu prostaty [11], a tým predstavujú atraktívne prediktor a terapeutický cieľ pre pacientov s nádorom.
v tejto štúdii sme zhromaždili 100 prípadmi chirurgických vzoriek resekcii primárneho karcinómu žalúdka, rovnako ako normálne žalúdočné tkaniva (viac ako 5 cm ďaleko od nádorového tkaniva) od januára 2007 do júna 2007 v druhom Vojenskej lekárskej univerzitná nemocnica poistená Changhai (Shanghai, Čína). Imunochémia a RT-PCR experimenty boli vykonané za účelom porovnania expresie proteínov, ktoré sú špecifické markery CAFS alebo vylučovaný CAFS v nádore a vzoriek normálnych tkanív. Rozsah CAFS "prevalencia bola odstupňovaná podľa imunochemické farbenie a korelácia bola ďalej analyzovaná medzi CAFS 'prevalencia a iné charakteristiky nádoru, ktoré môžu mať vplyv na prognózu pacientov s karcinómom žalúdka.
Metódy
kohorta Zápis
Sto prípady pacientov s primárnou rakovinou žalúdka boli zaradené od januára 2007 do júna 2007 v Second Military Medical University pridružené Changhai nemocnici. Všetci pacienti poskytli písomný informovaný súhlas. Vstupné kritériá pre túto štúdiu sú: (a) žiadnu predoperačnej chemoterapie; (B) patologicky alebo cytologicky overený gastrického adenokarcinómu; (C) vo veku medzi 18-85 rokov; (D) Očakávaná životnosť > 3 mesiace; (E) WBC > 3,5 × 10 9 /l; PLT > 10 11 /l; Pf > 100 g /l; kreatinínu v sére nie viac ako 1,25 násobok normálnej hornej hranice; GPT a ALP nie viac ako 1,25 krát normálne hornej hranice; Celkový bilirubín nie viac ako 1,5 násobok normálnej hornej hranice; PT < 12s; a (f) žiadna závažné ochorenia CNS.
patologických analýzu
Všetky vzorky vrátane nádorových tkanív a normálne žalúdočné tkaniva, čo bolo viac ako 5 cm ďaleko od nádorového tkaniva boli fixované v 10% formalínu do 30 minút po chirurgickej resekcii. boli pripravené parafínové vloženej Sériové rezy (4 um). diferenciácie nádoru bol charakterizovaný podľa klasifikácie WHO (2000), pričom klasifikácia TNM bolo vykonané podľa pravidiel Medzinárodnej únie proti rakovine, piatom vydanie (1997).
immunochemistry
protilátka použitá v tomto postupe zahŕňa králičie anti-FSP1 polyklonálnej protilátky ( abca, 01:50), myší anti-α-SMA monoklonálne protilátky (Sigma, 1A4, 1: 200), potkania anti-prokolagénu I monoklonálna protilátka (Chemicon, Mab1912, 1: 500), biotín-konjugovaná potkania anti-myšou IgG polyklonálne protilátka (ebioscience, 13-4013, 1: 100), biotín-konjugovaná myšou anti-potkania IgG polyklonálna protilátka (ebioscience, 13-4813, 1: 100) a biotínom konjugovaná myšou anti-králičie IgG polyklonálnou protilátkou (BD PharMingen, C101-167, 1: 100). Analýza imunochemie bola vykonaná ako bolo opísané skôr [12]. Stručne povedané, parafínové rezy boli de-paraffinized v xylénu a sériu postupných krokových alkoholické roztoky. Rezy potom boli ošetrené s 0,3% peroxidu vodíka (H2O2) vo vode po dobu 10 minút, aby sa uhasiť akúkoľvek endogénnej peroxidázy v tkanive, a nešpecifická väzbové miesta boli blokované 0,5% hovädzieho sérového albumínu (BSA) po dobu 10 minút pri teplote miestnosti , Ďalej boli rezy inkubované počas 15 minút v prítomnosti primárnej protilátky, a potom bola sklíčka umytá vo fosfátom pufrovanom fyziologickom roztoku (PBS) obsahujúcim 0,1% Tween 20 (PBS /Tween) počas 15 minút pri zmene roztoku 3 krát predtým aplikácie sekundárnej biotinylizované protilátky. Sklíčka bola inkubovaná so sekundárnou protilátkou počas 15 minút pri teplote miestnosti pred tým, než sa po dobu 15 minút v PBS /Tween, ktorý bol 3-krát. Rezy boli potom inkubované po dobu 15 minút s chrenovou peroxidázou komplexom avidín-biotinylizované, a reakčná zmes sa zviditeľní sa pomocou 0,02% 3,3'-Diaminobenzidine Tetrahydrochloride ako chromogén v pufri Tris-HCl, pH 7,6, s obsahom 0,03% H2O2. Hematoxylin bol zvyknutý na kontrastnom jadier.
Histologické vyšetrenie
Ak chcete zhodnotiť úroveň FSP1, alfa-SMA a prokolagénu-I prejavu, percento pozitívnych-farbenie buniek boli odstupňované na škále od 0-3, pričom menej ako 5% pozitívneho farbenia bunky sú stupňa 0, 5 až 25% ako stupeň 1, 26-50% ako stupeň 2 a viac ako 50% ako stupeň 3. a intenzita farbenia tiež odstupňované na škále od 0- 2, s negatívnym slabé intenzite ako stupeň 0, slabá až strednej intenzity ako stupeň 1, a mierne až silné intenzity ako stupeň 2. Desať high-power poľa boli vybrané náhodne pre každý diapozitívov a analyzované dvoma patológmi nezávisle na sebe. Pre každú značku, skóre percenta a intenzity bol množili a skóre pre tieto tri markerov bola pridaná, keď sa tieto markery analyzované spoločne. A konečné skóre medzi 0-6 bola stanovená ako negatívna (-), skóre medzi 7-9 bola stanovená ako slabo pozitívna (+), skóre medzi 10-12 bola stanovená ako mierne pozitívny (++), a skóre vyššie ako 13 bola stanovená ako silný pozitívny (+++).
v reálnom čase-PCR
Celková RNA bola extrahovaná z nádorových alebo normálnych tkanivách TRIzolu Reagent (Invitrogen) a prvého vlákna cDNA sa syntetizuje za použitia RevertAid First Strand cDNA Synthesis Kit ( Fermentas, USA), ako bolo opísané skôr [13]. Realtime PCR bola vykonaná s použitím DNA LightCycler hlavné SYBR Green I kit (Roche Diagnostics, Mannheim, Nemecko) podľa inštrukcií výrobcu. Kópia cieľovej cDNA boli normalizované GAPDH výrazom. Priméry na FAP, SDF-1, TGF-β1 a GAPDH boli uvedené takto:

FAP F: 5'-TGGGAATATTACGCGTCTGTCTAC-3 '
FAP R: 5'-GATAAGCCGTGGTTCTGGTCA-3'
SDF-1 F: 5'-CCGTCAGCCTGAGCTACA-3 '
SDF-1 R: 5'-GAAGGGCACAGTTTGGAG-3'
TGF-β1 F: 5'-GCAACAATTCCTGGCGATAC-3 '
TGF-β1 R: 5'- AAGGCGAAAGCCCTCAAT-3 '
GAPDH F: 5'-ATCAAGTTGCGTGCTGTG-3'
GAPDH R: 5'-TGCGAAATGAAAGGAGTGT-3 '
Pri každej cieľovej cDNA, kópie normálnych tkanivových vzoriek sa v priemere, a kópia každej vzorky nádorového tkaniva sa delia v priemere, potom sa výsledky z týchto troch cieľovej cDNA sa pridá pre každú vzorku nádorového tkaniva. V prípade, že súčet je rovný alebo väčší ako 8, sa nádorové tkanivo je považovaný za pozitívny na CAFS.
Štatistická analýza
Údaje sú uvedené ako priemer a štandardnej odchýlky. Štatistické analýzy dát boli analyzované pomocou t testu dvojchvostý nezávislý študentský a × 2 analýze SPSS 12.0. Hladina štatistickej významnosti bola nastavená na P < 0,05.
Výsledky
Reaktívne tumor asociovaného fibroblasty boli prevládajúce v žalúdočných rakovinových tkanivách
Pre stanovenie rozsahu prevalencia CAFS "v karcinómu žalúdka tkanivách, boli pripravené a zafarbené na FSP1 parafínové vložené úseky vzoriek tkaniva, α- SMA a prokolagénu aj expresiu, ako je popísané vyššie. Okrem toho, v reálnom čase, PCR sa uskutočnila pre stanovenie úrovne expresie niekoľkých proteínov, ktoré boli vyjadrené alebo sekretovaných reaktívnymi CAFS, ako FAP, SDF-1 a TGF-D1.
Výsledky imunochemie farbenie ukázalo, že viac reaktívne fibroblasty boli prítomné v žalúdočných rakovinových tkanív, ako je obvyklé žalúdočných tkanivách. Dvadsaťštyri zo 100 normálnych vzoriek bolo negatívnych (-) pre reaktívnych fibroblastov farbenie a 55 normálnych vzoriek bolo slabo pozitívna (+). A počet normálnych jedincov, ktorí boli stredná (++) alebo silná pozitívny (+++) bolo 21 a 0, resp. Zatiaľ čo ak ide o nádorové tkanivá, boli 13, 26, 25 a 36 exemplárov, ktoré boli negatívne (-), slabo pozitívna (+), stredne pozitívne, (++) a silný pozitívny (+++) na farbenie fibroblastov, v danom poradí (obr 1a a obr 1b). A ak je nádorové vzorky označení ako negatívne alebo slabo pozitívne, boli považované za negatívne, a stredne alebo silne pozitívne, boli považované za pozitívny, existuje významný rozdiel medzi nádorom a normálneho tkaniva, pokiaľ ide o pozitívny rýchlosť CAFS (obr 1C). Obrázok 1 Analýza imunochemie na stupeň výskytu CAFS 'v nádore a normálne žalúdočnej tkanív. Parafínové rezy chirurgicky resekovaného nádoru a normálneho tkaniva od tých istých pacientov s rakovinou žalúdka (100 prípadov) boli zafarbené na FSP1, a-SMA a prokolagénu-1 expresie a CAFS prevalencia sa triedi podľa kladné rýchlosti a intenzity imunochemickej farbenie. Počet vzoriek nádoru alebo normálne tkanív považovaných za -, +, ++ +++ a porovnával (a). A rozdelenie týchto štyroch tried prevalencia CAFS 'v 100 nádoru alebo vzoriek normálneho tkaniva boli analyzované (b). Stupeň - a + bol považovaný za negatívny, zatiaľ čo stupeň ++ +++ a bol považovaný za pozitívny pre CAFS prevalenciu, potom bol porovnaný počet nádoru alebo vzoriek normálneho tkaniva, ktorá bola pozitívna alebo negatívna na prevalenciu CAFS "(c).
pre mRNA expresiu proteínov, výsledky ukázali, že hladina expresie všetkých nasledujúcich proteínov boli zvýšené v nádorových vzorkách v porovnaní so tieto v normálnych tkanivách. Pričom FAP ako príklad, expresia mRNA hladina FAP v nádorových vzorkách bol 4 krát vyššia ako v normálnych tkanivách (obr 2a). A tam bol tiež 3 krát zvýšenie mRNA úrovne expresie ohľadom SDF-1 (obr 2b) alebo TGF-D1 (obr 2c). Obrázok 2 Realtime-PCR analýza sekretovaných proteínov CAFS v nádorové a normálne žalúdočné tkaniva. Celková RNA bola extrakt a cDNA bola pripravená z chirurgicky resekovaného nádoru a normálneho tkaniva od tých istých pacientov s rakovinou žalúdka (100 prípadov). V reálnom čase, PCR bola vykonávaná pre porovnanie hladiny expresie FAP (a), SDF-1 (b) a TGF-β1 (c) v nádorových a normálnych tkanivách, prvé dva pruhy z elektroforetogramu reprezentovaný normálneho tkaniva a posledné dva pruhy zastúpené nádorového tkaniva. *: P < 0.01.
Z týchto výsledkov možno uzavrieť, že reaktívne CAFS boli prevládajúce v žalúdočných nádorových tkanivách a tajné vysokej úrovni proteínov, ktoré bolo preukázané, že sú nevyhnutné pre rast nádoru, inváziu a metastázy. Prevalencia
CAFS "bol tesne súvisiace s invazívnymi a metastatických vlastností žalúdočného nádoru
Ak chcete zistiť, či je stupeň CAFS "prevalencia môže byť slúžil ako prediktor pre prognózu pacientov s rakovinou žalúdka, korelačný analýza bola vykonaná medzi stupňom CAFS" prevalencia a ďalšie klinicko parametre karcinómov žalúdka. Nádorové vzorky označení ako negatívne alebo slabo pozitívne boli považované za negatívne a stredne alebo silne pozitívne, boli považované za pozitívne v týchto analýz. Pacient a nádorové charakteristiky boli popísané v tabuľke 1. Tiež môžeme nájsť v tabuľke 1, že neexistuje žiadna korelácia medzi výskytom CAFS 'a vek, pohlavie pacienta, alebo na miesto nádoru. Došlo k nárastu prevalencie CAFS vo chvíli, keď rozlišovanie nádor sa znížil z dobre diferencovaný (43,75%) na zle diferencovaný (64.00%), zatiaľ čo pozitívne tempo CAFS v nediferencovaných rakoviny žalúdka je iba 26,67%, oveľa menšie ako v dobre alebo zle diferencované žalúdočné rakoviny, a tak sme nemohli nájsť súvislosť medzi touto novou stratégiou "prevalencia a nádorové diferenciácie (p = 0,56). Kým pokiaľ ide o veľkosť nádoru, hĺbku nádoru (T) a lymfatických uzlín (N), sa ukázala štatisticky významnú koreláciu medzi prevahou CAFS a tieto charakteristiky nádoru, s vyššou pozitívny rýchlosťou CAFS vo väčších nádorov, viac invazívne nádory a nádory s viac lymfatických uzlín. Tiež môžeme zistiť, že pozitívne miera CAFS bola vysoká v žalúdočných rakovín s pečeňových metastáz (P < 0,01) alebo pobrušnice metastáz (P < 0,01) .Table 1 pacient a nádorové charakteristiky a ich vzťah s CAFS prevahou

N
pozitívny CAFS N (%)
hodnota P
Vek (rok)
2.77
≤60
47
22 (46,81) Hotel > 60
53
29 (54,72)
Sex
5.11
Muž
57
32 (56,14)
samica
43
19 (44,19)
umiestnenie nádoru
1.35b
proximálnom konci žalúdka (1/3)
13
9 (69,23)
žalúdočné telo (1/3)
19
9 (47,37)
vzdialený koniec žalúdka (1/3)
51
22 (43,14)
Viac ako tretina žalúdka zapojených
17
11 (64.71)
Tumor diferenciácie
0.56b
dobre diferencovaných
16
7 (43.75)
Stredne diferencovaný
44
24 (54.55)
zle diferencované
25
16 (64.00)
bližšie
15
4 (26.67 )
Tumor veľkosť
0.02
≤5 cm
62
16 (35,48) Hotel > 5 cm
38
29 (76,32)
Hĺbka nádoru (T)
0.03b
Tis
4
1 (25.00)
T1
13
5 (38,46)
T2
39
19 (48,72)
T3
26
15 (57,69)
T4
18
11 (61,11)
lymfatických uzlín (N) Hotel < 0,01
N0
46
16 (34,78)
N1-3
54
35 (64,81)
pečeňových metastáz Hotel < 0,01A
Áno
12
9
Nie
88
42
Peritoneum metastázy Hotel < 0,01A
Áno
9
7 (77,77)
Žiadne
91
44 (48,35)
TNM Stage Hotel < 0.01b
IA
15 Sims 3 (20)
IB
7
2 (28,57)
II
19
6 (31.58)
IIIA
23
11 (47.83)
IIIB
15
8 (53,33)
IV
21
14 (66,67)
: Fisher exaktného testu; b: Chi-kvadrát testy
Okrem toho, v situácii nádorových metastáz, bez ohľadu na lymfatických uzlín, vzdialených metastáz alebo orgánových metastáz, pozitívne percento CAFS je oveľa vyššia ako u pacientov bez metastáz (71,93% oproti 25,58% , P-0,01) (obrázok 3). Obrázok 3 Percento nádorových vzoriek, ktorá bola pozitívna alebo negatívna na výskyt CAFS "v skupine pacientov s alebo bez nádorových metastáz. Nádorové vzorky boli rozdelené do skupín podľa toho, či sú alebo nie sú pacienti s rakovinou žalúdka mal metastázy nádoru (bez ohľadu lymfatických uzlín, vzdialenej metastázy alebo orgánové metastázy). A percento vzoriek, ktoré bolo pozitívne (trieda - alebo + podľa imunochemické farbenie) alebo negatívne (trieda ++ alebo +++ podľa imunochemické farbenie) pre prevalenciu CAFS "bol analyzovaný (a). A imunochemické farbenie a-SMA bol uvedený v normálnej žalúdočnej tkaniva, rakovina žalúdka tkanivo bez metastáz a rakovinou žalúdka tkaniva s metastázami (b).
A tiež analyzoval vzájomný vzťah medzi úrovňou mRNA FAP, SDF-1 a TGF-β1 a žalúdka fázy rakoviny. Hladina týchto proteínov bola hodnotená ako je popísané v metódach a vzorky nádorového tkaniva boli určené ako pozitívne, ak skóre je rovná alebo väčšia ako 8. Bolo zistené, že pozitívne percento je oveľa vysoká vo veľkých nádorov (viac ako 5 cm, 32/38), než v malých nádorov (≤5 cm, 20/62) (p menšie ako 0,05). A pozitívne percento nádorových vzoriek TNM štádiu IA, IB, II, IIIA, IIIB a IV 33,3% (5/15), 42,9% (3/7), 52,6% (10/19), 60,9% (14 /23), 73,3% (11/15) a 76,2 (16/21), v danom poradí, čo ukazuje, že prevalencia CAFS úzko súvisí s fázou karcinómu žalúdka (p 0,01). Tieto výsledky silne naznačujú, že prevalencia CAFS by mohli pomôcť určiť žalúdočné fázy rakoviny a môže byť použitý ako marker pre prognózu pacientov s karcinómom žalúdka.
Diskusia
Nedávne štúdie v molekulárnej a bunkovej biológie ukazujú, že rast nádoru a metastázy nie sú určené rakovinových bunkách samotných, ale aj rôznymi stromálne bunky [14, 15]. Stroma aktívne poskytuje trvalú podporu buniek karcinómu počas rôznych patofyziologických procesov, ktoré modulujú progresiu nádoru. Fibroblasty sú dôležitou zložkou nádorového strómy, ktoré dostali zvýšenú pozornosť z dôvodu ich účasti na vývoj nádoru, vrátane rastu, invázie a metastáz, ako je rakovina prostaty [16, 17] alebo prsníka [18, 19]. Bolo tiež preukázané, v žalúdočnej rakovinových myší model, ktorý aktivované fibroblasty podporujú nádorové angiogenézy [20], a to je v súlade s výsledkami, ktoré okrem aktivovanej fibroblasty boli akumulované v ľudských nádorových tkanivách žalúdka.
Termín Fibroblast zahŕňa rad stromálnych bunky sa viacmenej podobného fenotypu. Väčšina nádorov začleniť zrejmý biologicky aktívne, fibroblastickou bunkový typ známy rozlične ako reaktívne fibroblasty, myofibroblasty, alebo jednoducho tumor asociovaných fibroblastov. Hladkého svalstva α-aktínu (α-SMA) je najčastejšou značka použitá na identifikáciu CAFS, zatiaľ čo jeho expresie môže byť tiež v bunkách hladkého svalstva a myoepiteliální buniek [21]. Takže ďalšie markery by mal byť použitý v kombinácii s a-SMA pre identifikáciu stratégií Komisie proti podvodom. Fibroblastov špecifické pre proteín 1 (FSP1, S100A4), člen rodiny Ca2 + viažuci S100 proteíny, konštitutívne exprimovaný v cytoplazme tkanivových fibroblastov, a jeho expresie je vysoko špecifická pre fibroblasty [22, 23]. Je všeobecne uznáva, kombinovať-SMA a FSP1 pre identifikáciu fibroblastov súvisiace s nádorom. A v našich pokusoch sme tiež použiť tretej marker, prokolagénu I, na identifikáciu reaktívne CAFS s výrobou zložky medzibunkovej hmoty.
Tiež detekovaná mRNA úrovne expresie ďalších proteínov, ktoré sú exprimované alebo sekretovaných CAFS. FAP je typ II povrchu transmembránový proteín bunkového patrí do rodiny dipeptidyl aminopeptidázou post-prolínu, s dipeptidyl peptidázy a endopeptidázového činnosti, vrátane kolagénolytickú aktivitou, ktorá je schopná degradovať želatíny a kolagénu typu I [24, 25]. FAP je exprimovaný selektívne CAFS a pericyty u viac ako 90% ľudských epiteliálnych rakovín skúmaného [26-30] a výskum bola zaznamenaná u zvieracieho modelu ukazuje terapeutický účinok inhibíciou FAP expresiu alebo enzymatickú aktivitu [31]. We zvolená tak, aby detekovať ďalšie proteín je SDF-1, ktorý je vylučovaný CAFS a stimuluje proliferáciu bunky nádoru, angiogenézy, invázie a metastáz pomocou receptora CXCR4 vyjadrené nádorovými bunkami [32-34]. Ďalšie sekrečné proteín, sme zistili, je TGF-β1, čo je silný induktor pre diferenciáciu myofibroblasty [35], a môže hrať úlohu v nádorovej invázii metastáz kaskády [36]. Výsledky tejto štúdie ukázali, že tieto proteíny sú up-regulované v žalúdočných rakovinové tkanive, čo naznačuje ich potenciálnu úlohu pri podpore žalúdočnej progresie rakoviny.
Žalúdočné rakovina je druhou najčastejšou príčinou úmrtí na rakovinu spojených s na svete. Prognóza u pacientov s karcinómom žalúdka, je ťažké stanoviť, pretože je často diagnostikovaný, keď došlo k žalúdočnej steny invázie a metastázy. Niekoľko skupín sa pokúsil nájsť nejaké biomarkery pre prognózu rakoviny žalúdka. Napríklad, expresia niekoľkých extracelulárnej matrixových metaloproteinázy (MMP-2, 7, 9), sa zistilo, že je zvýšená u karcinómu žalúdka tkanivách v porovnaní so zdravými žalúdočné tkaniva. A up-regulácie týchto MMP v karcinómu žalúdka bola spojená so zlou prognózou a zvýšenej kapacity invazívnej [37]. Ďalším príkladom je inzulínu podobný rastový faktor-1 receptora (IGF-1R), to bolo často vyjadrená v karcinómov žalúdka a bola spojená s veľkosťou nádoru, množstvo strómy, hĺbka steny invázie, lymfatických uzlín, fázach TNM a stave diferenciácie rakovina žalúdka [38]. A VEGF-C výraz v nádorových okrajoch bol tiež spájaný s metastáz v lymfatických uzlinách, lymfatickú inváziou ciev, zlá opakovanie prežitie bez, a zlú celkového prežitia, a môže slúžiť ako nezávislý prediktor u pacientov s karcinómom žalúdka [39]. Môžeme zistiť, že tieto prediktory sú buď proteíny vylučované CAFS alebo receptory exprimované nádorovými bunkami, ktoré sa viažu proteíny vylučované CAFS, tak tieto stopy môžu naznačovať, že prevalencia CAFS v žalúdočných rakovinových tkanív bude dôležitým ukazovateľom pacientov s rakovinou žalúdka. A naše výsledky potvrdili, že výskyt CAFS bola úzko spojená s metastatickým potenciálom rakoviny žalúdka a ďalšie práce by malo byť vykonané s cieľom potvrdiť súvislosť medzi výskytom a prežitia pacientov s karcinómom žalúdka CAFS.
Závery
našich zistení správa tu ukazujú, že reaktívne s rakovinou spojené fibroblasty (CAFS), boli často akumulované v karcinómu žalúdka tkanivách, a prevalencia CAFS korelovala s veľkosťou nádoru, hĺbky nádoru a nádorových metastáz, rovnako ako fázu celkovej TNM, čo naznačuje, že CAFS boli kritické pre rast nádoru, invázia a metastáz, teda dať nejaké podpery pre prognózu pacientov s rakovinou žalúdka
Skratky
CAFS :.
spojených s nádormi fibroblasty
FAP:
aktivácia fibroblastov proteín
SDF-1:
stromálneho-cell odvodený faktor 1
TGF-β1:
transformujúcej rastový faktor beta 1
ECM:
extracelulárnej matrix
WBC:
bielych krviniek

PLT:
počet krvných doštičiek
HB:
hemoglobín
GPT:
glutamová-pyruvát transamináza
ALP:
alkalickej fosfatázy
PT:
protrombínový čas

CNS:
centrálny nervy systém
α-SMA:
α-aktínu hladkého svalstva
FSP1:
fibroblastov špecifický proteín 1
GAPDH:
glycerylaldehyd fosfátdehydrogenázy
MMP:
matrix metaloproteinázy

VEGF :.
vaskulárny endoteliálny rastový faktor
deklarácia
poďakovanie
chceme poďakovať Prof. Li Gao v oddelení patológie Changhai nemocnice a Dr Ni Zhu v strednej Lab Changhai nemocnice za ich odborných technickú podporu pre experimenty. Táto práca bola podporená Národnej prírodnej Science Foundation Číny (30672046).
Autori ďalej len "pôvodné predložený súbory obrazov
Nižšie sú uvedené odkazy na autorov pôvodnej predložených súborov pre obrázky. "Pôvodný súbor pre Obrázok 1 13046_2010_313_MOESM2_ESM.pdf autorského 13046_2010_313_MOESM1_ESM.pdf autorov pôvodného súboru na obrázku 2 pôvodného súboru 13046_2010_313_MOESM3_ESM.pdf autorského na obrázku 3 protichodnými záujmami
Autori vyhlasujú, že nemajú žiadne protichodné záujmy.

• Vznik a charakterizácia metastáz modelu ľudského karcinómu žalúdka u nahých mice
• Detekcia Sentinel a non-sentinelových lymfatických uzlín mikrometastáz úplným sériového krájanie a imunohistochemické analýzou pre rakovinu žalúdka