Krebs assoziierten Fibroblasten werden positiv mit metastatischen Potential von menschlichen Magenkrebsarten korreliert

Krebs-assoziierte Fibroblasten positiv mit metastatischem Potential der menschlichen Magenkrebs korreliert
Zusammenfassung
Hintergrund
die Prognose von Patienten mit Magenkrebs ist schwierig, weil der Fehler zur Vorhersage der chirurgischen pathologischen Merkmale in Gründung. Krebs-assoziierte Fibroblasten (CAFs) gefunden wurden bei der Förderung von Tumorwachstum, Invasion und Metastasierung wichtige Rolle zu spielen. Somit stellt sich die Hypothese, dass das Ausmaß der CAFs Prävalenz helfen kann die Prognose von Magenkrebs-Patienten zu etablieren.
Methods
Immunochemistry und Echtzeit-PCR-Experimente wurden durchgeführt, um die Expression von Proteinen zu vergleichen, die spezifische Marker für CAFs oder durch CAFs im Tumor und normalen Gewebeproben abgesondert. Das Ausmaß der CAFs 'Prävalenz wurde nach immunochemischen Färbung abgestuft und Korrelation wurde weiter zwischen CAFs analysiert "Prävalenz und anderen Tumoreigenschaften, die die Prognose von Patienten mit Magenkrebs beeinflussen können.
Ergebnis einschränken Fast 80 Prozent der normalen Magen-Gewebe waren negativ oder schwach positiv für CAFs Färbung, während mehr als 60 Prozent der Magenkrebsgewebe für CAFs Färbung moderat oder stark positiv waren. Echtzeit-PCR-Ergebnisse zeigten auch signifikant erhöhte Expression von FAP, SDF-1 und TGF-β1 in Magenkrebsgewebe im Vergleich zu normalen Magengewebe. Weitere Analysen zeigten, dass CAFs 'Prävalenz mit Tumorgröße korreliert, Tiefe des Tumors, Lymphknotenmetastasen, Lebermetastasen oder Peritoneum Metastasierung.
Schlussfolgerungen
Reactive Krebs-Fibroblasten (CAFs) wurden in Magenkrebsgewebe häufig angesammelt hat, und die Prävalenz von CAFs mit Tumorgröße korreliert, Tiefe des Tumors und die Tumormetastasierung, geben somit einige Stützen für die Festlegung der Prognose der Patienten mit Magenkrebs.
Hintergrund
Magenkrebs ist die zweithäufigste Ursache von Krebs- Todesfälle weltweit [1]. Erhebliche geografischen Variationen gibt es in der Häufigkeit von Magenkrebs und stellt die am häufigsten auftretende Krebsart in China [2]. Immer mehr Patienten mit Magenkrebs in den letzten Jahren wurden mit wechselnden diagnostiziert Ernährung und Lebensweise sowie die Entwicklung von Diagnoseverfahren. Obwohl die chirurgische Behandlung ist seit einigen frühen Magenkrebs wirksam erwiesen, einschließlich Gastrektomie und erweiterte radikale Gastrektomie ist die Prognose dieser Patienten schlecht aufgrund des erneuten Auftretens nach der Operation, die in Form von lymphatische Ausbreitung, hämatogenen Metastasierung oder Peritonealdialyse Verbreitung [3]. die Prognose von Patienten mit Magenkrebs
wurde von mehreren etablierten chirurgischen pathologischen Merkmale, wie zum Beispiel die Krankheitsstadium, die Lage des Tumors und dem histologischen Typ und Grad des Tumors beeinflusst werden gezeigt [ ,,,0],4]. Während Aurello et al. [5] haben gezeigt, dass die Anzahl von Knoten erforderlich N0 nach für eine genaue staging der Tiefe der Tumorinvasion (T) erfordert die TNM-Klassifikation, die Wiedergewinnung und Analyse von mindestens 15 Lymphknoten können variieren zu schließen. Jedoch in den meisten Fällen ist die Anzahl der Knoten seziert kleiner und nur 20 bis 30% der Patienten haben die empfohlene minimale Dissektion von 15 Knoten. Accessorial Indikatoren, die weitere Informationen über die Prognose von Patienten mit Magenkrebs benötigt werden, zur Verfügung stellen kann.
-Krebs-Fibroblasten (CAF), eine der wichtigen Stromazellen mit festen Tumoren gefunden wurde, bei der Förderung von Tumorwachstum wichtige Rolle zu spielen und Progression [6]. Im Gegensatz zu ruhenden Fibroblasten, besitzen CAFs einen aktivierten Phänotyp und können durch ihre Expression von Fibroblasten-spezifischen Protein-1 (FSP1), Vimentin, Desmin und α-smooth-muscle actin [7] identifiziert werden. CAFs untereinander kommunizieren sowie mit Krebszellen und entzündlichen und Immunzellen direkt durch Zellkontakt und indirekt durch parakrinen /exokrinen Signalisierung, Proteasen und Modulation der extrazellulären Matrix (ECM). Diese komplexe Kommunikationsnetz ist unverzichtbar, um das geeignete Mikroumgebung bereitzustellen tumorigenesis zu unterstützen, Angiogenese und Metastasierung [8, 9]. Zusätzlich, im Vergleich zu transformierten Tumorzellen sind CAFs mehr genetisch homogenen [10], und es wurde von Gastavo et al reaktiven Stroma nachgewiesen als Prädiktor für Rezidiv bei Prostatakrebs handeln kann [11], wodurch eine attraktive Prädiktor und therapeutisches Ziel dar für Tumorpatienten. in dieser Studie
sammelten wir 100 Fälle von chirurgischen Resektion Proben von primären Magenkrebs sowie normale Magengewebe (mehr als 5 cm weit von Tumorgewebe) von Januar 2007 bis Juni 2007 in der Second Military Medical Universität verbundenen Changhai Krankenhaus (Shanghai, China). Immunochemistry und RT-PCR-Experimente wurden durchgeführt, um die Expression von Proteinen zu vergleichen, die durch CAFs im Tumor und normalen Gewebeproben von spezifischen Markern CAFs oder sezerniert werden. Das Ausmaß der CAFs 'Prävalenz wurde nach immunochemischen Färbung abgestuft und Korrelation wurde weiter zwischen CAFs analysiert "Prävalenz und anderen Tumoreigenschaften, die die Prognose von Patienten mit Magenkrebs beeinflussen können.
Methoden
Cohort Enrollment
Einhundert Fälle von primärem Patienten Magenkrebs wurden von Januar 2007 bis Juni 2007 in der Second Military Medical University verbundenen Changhai Krankenhaus eingeschrieben. Alle Patienten haben eine schriftliche Einverständniserklärung zur Verfügung gestellt. Aufnahmekriterien für diese Studie sind: (a) keine präoperative Chemotherapie-Behandlung; (B) pathologisch oder zytologisch Magen-Adenokarzinom validiert; (C) im Alter zwischen 18 bis 85 Jahren; (D) erwartete Lebensdauer > 3 Monate; (E) WBC > 3,5 x 10 9 /L; PLT > 10 11 /L; Hb > 100 g /L; Serum-Kreatinin nicht mehr als das 1,25-fache der normalen Obergrenze; GPT und ALP nicht mehr als das 1,25-fache der normalen Obergrenze; Gesamt-Bilirubin nicht mehr als das 1,5-fache der normalen Obergrenze; PT < 12s; und (f) keine schweren ZNS-Erkrankung.
Pathologische Analyse
Alle Proben einschließlich Tumorgewebe und normalem Magengewebe, die mehr als 5 cm weit war von Tumorgewebe in 10% Formalin innerhalb von 30 Minuten nach der chirurgischen Resektion fixiert waren. Paraffin eingebettete Serienschnitte (4 &mgr; m) hergestellt. Tumor-Differenzierung wurde nach WHO-Klassifikation gekennzeichnet (2000), während die TNM-Klassifikation erfolgte nach den International Union Against Cancer, fünfte Auflage (1997).
Immunochemie
Antikörper in diesem Verfahren verwendet wird, schließt Kaninchen-Anti-FSP1 polyklonalen Antikörper ( Abcam, 1:50), Maus-anti-α-SMA monoklonalen Antikörpers (Sigma, 1A4, 1: 200), Ratten-Anti-Prokollagen-I monoklonalen Antikörper (Chemicon, Mab1912, 1: 500), Biotin-konjugiertes Ratte-anti-Maus-IgG polyklonale Antikörper (eBioscience, 13 bis 4013, 1: 100), Biotin-konjugierten Maus-anti-Ratte-IgG polyklonalen Antikörper (eBioscience, 13 bis 4813, 1: 100) und Biotin-konjugierten Maus-anti-Kaninchen-IgG polyklonalen Antikörper (BD Pharmingen, C101-167, 1: 100). Immunochemistry Analyse wurde wie früher beschrieben durchgeführt [12]. Kurz gesagt, wurden Paraffinschnitte in Xylol, und eine Reihe von abgestuften Alkohollösungen de-paraffinized. Die Schnitte wurden dann mit 0,3% Wasserstoffperoxid (H2O2) in Wasser für 10 Minuten behandelt, um jegliches endogene Peroxidase-Aktivität in dem Gewebe zu quenchen, und die unspezifischen Bindungsstellen wurden mit 0,5% Rinderserumalbumin (BSA) für 10 Minuten bei Raumtemperatur blockiert . Als nächstes wurden die Schnitte für 15 Minuten in Gegenwart des primären Antikörpers inkubiert, und dann wurden die Objektträger in phosphatgepufferter Kochsalzlösung (PBS), enthaltend 0,1% Tween 20 (PBS /Tween) für 15 Minuten gewaschen, während die Lösung 3 mal ändern, bevor die Anwendung des sekundären biotinylierten Antikörper. Die Objektträger wurden mit dem sekundären Antikörper für 15 Minuten bei Raumtemperatur inkubiert, bevor sie in PBS /Tween für 15 Minuten gewaschen wird, die 3-mal geändert wurde. Die Schnitte wurden dann für 15 Minuten mit einem Avidin-biotinylierten Meerrettich-Peroxidase-Komplex inkubiert und die Reaktion sichtbar gemacht unter Verwendung von 0,02% 3,3'-Diaminobenzidintetrahydrochlorid als Chromogen in einer Tris-HCl-Puffer, pH 7,6, mit 0,03% H2O2. Hämatoxylin wurde verwendet, um die Kerne zu Gegenfärbung. Die histologische Analyse
Um das Niveau der FSP1, α-SMA und Prokollagen-I-Expression, der Prozentsatz der positiven färbende Zellen zu bewerten wurden auf einer Skala von 0-3 bewertet, mit weniger als 5% positiv färbende Zellen als Grad 0, 5-25% als Klasse 1, 26-50% als Klasse 2, und mehr als 50% als Klasse 3 und die Intensität der Färbung auch auf einer Skala von 0- abgestuft 2, mit negativ zu schwacher Intensität als Grad 0, schwache bis mäßige Intensität als Grad 1 und mäßige bis starke Intensität als Klasse 2. Zehn Hochleistungsfelder wurden zufällig für jede Dias ausgewählt und analysiert durch zwei Pathologen unabhängig. Für jeden Marker war die Punktzahl von Prozentsatz und Intensität multipliziert und die Werte für diese drei Marker wurde hinzugefügt, wenn diese Marker gemeinsam analysiert. Und das Endergebnis zwischen 0-6 als negativ bestimmt wurde (-), Score zwischen 7-9 als schwach positiv bestimmt (+), Score zwischen 10-12 wurde als moderat positiv bestimmt (++) und der Gäste höher als 13 RevertAid First Strand cDNA Synthesis Kit wurde als stark positiv bestimmt (+++).
Realtime-PCR
Gesamt-RNA aus Tumor oder normalen Geweben von Trizol-Reagenz (Invitrogen) extrahiert und Erststrang-cDNA wurde unter Verwendung von synthetisierten ( Fermentas, USA) wie zuvor beschrieben [13]. Echtzeit-PCR wurde durchgeführt unter Verwendung LightCycler DNA Master SYBR Green I Kit (Roche Diagnostics, Mannheim, Deutschland) gemäß den Anweisungen des Herstellers. Die Kopien der Ziel-cDNA wurden durch GAPDH Expression normalisiert. Primer für FAP, SDF-1, TGF-β1 und GAPDH aufgeführt waren wie folgt:

FAP F: 5'-TGGGAATATTACGCGTCTGTCTAC-3 '
FAP R: 5'-GATAAGCCGTGGTTCTGGTCA-3'
SDF-1 F: 5'-CCGTCAGCCTGAGCTACA-3 '
SDF-1 R: 5'-GAAGGGCACAGTTTGGAG-3'
TGF-β1 F: 5'-GCAACAATTCCTGGCGATAC-3 '
TGF-β1 R: 5' AAGGCGAAAGCCCTCAAT-3 '
GAPDH F: 5'-ATCAAGTTGCGTGCTGTG-3'
GAPDH R: 5'-TGCGAAATGAAAGGAGTGT-3 '
Für jedes Ziel-cDNA, die Kopien der normalen Gewebeproben gemittelt wird, und die Kopien jeder Probe Tumorgewebe wird durch den Mittelwert dividiert, dann die Ergebnisse dieser drei Ziel cDNA für jede Tumorgewebeprobe zugegeben. Wenn die Summe gleich oder größer als 8 ist, dann wird das Tumorgewebe in Betracht gezogen für CAFs positiv.
Statistical analysis
Die Daten sind als Mittelwerte und Standardabweichungen gezeigt. Statistische Analysen der Daten wurden mit der zweiseitigen unabhängigen Student-t-Test analysiert und χ 2 Analyse von SPSS 12.0. Das Niveau der statistischen Signifikanz wurde bei P <gesetzt; 0,05.
Ergebnisse
Reactive Tumor-assoziierte Fibroblasten in Magenkrebsgewebe weit verbreitet waren
das Ausmaß der CAFs 'Prävalenz bei Magenkrebs Gewebe zu bestimmen, wurden in Paraffin eingebettete Schnitte von Gewebeproben hergestellt und gefärbt für FSP1, α- SMA und Prokollagen-I-Expression wie oben beschrieben. Zusätzlich Echtzeit-PCR wurde die Expression von mehreren Proteinen durchgeführt, um zu bestimmen, welche mit reaktiven CAFs wie FAP, SDF-1 und TGF-β1 exprimiert oder sezerniert wurde.
Ergebnisse der Immunfärbung zeigte, dass mehr reaktive Fibroblasten Magenkrebsgewebe als normale Magen-Gewebe vorhanden waren. Zwanzig vier der 100 normalen Proben waren negativ (-) für reaktive Fibroblasten Färbung und 55 normalen Proben waren schwach positiv (+). Und die Zahl der normalen Proben, die moderat waren (++) oder stark positiv (+++) waren 21 bzw. 0. Während Krebsgewebe betrifft, gab es 13, 26, 25 und 36 Proben, die negativ waren (-), schwach positiv (+), moderat positiv (++) und stark positiv (+++) für Fibroblasten-Färbung, bzw. (1a und 1b). Und wenn Tumorproben benotet als negativ oder schwach positiv als negativ bewertet wurden, und moderate oder starke positive wurden als positiv betrachtet, gibt es einen signifikanten Unterschied zwischen Tumor und gesundem Gewebe war die positive Rate von CAFs (Bild 1c) über. Abbildung 1 Immunochemie Analyse der Grad der CAFs 'Prävalenz in Tumor und normalen Magen-Gewebe. Paraffinschnitte von chirurgisch entfernten Tumor und normalem Gewebe aus dem gleichen Patienten mit Magenkrebs (100 Fälle) wurden FSP1 gebeizt, α-SMA und Prokollagen-1-Expression und CAFs Prävalenz wurde abgestuft nach dem Positiv-Rate und Intensität der immunochemischen Färbung. Die Anzahl von Tumor- oder normalen Gewebeproben eingestuft als -, +, ++ und +++ verglichen (a). Und die Verteilung dieser vier Typen von CAFs 'Prävalenz in der 100 Tumor- oder normalen Gewebeproben wurden analysiert (b). Grade - und + wurde als negativ, während Grad ++ und +++ als positiv für CAFs Prävalenz angesehen wurde, dann ist die Zahl des Tumors oder der normalen Gewebeproben, die für CAFs 'Prävalenz positiv oder negativ war, verglichen (c).
Für mRNA Expression der Proteine ​​zeigten die Ergebnisse, dass das Expressionsniveau aller dieser Proteine ​​in Tumorproben im Vergleich zu diesen in normalen Geweben erhöht waren. Unter FAP als Beispiel war die mRNA-Expressionsniveau von FAP in Tumorproben 4 mal höher als in normalen Geweben (Fig 2a). Und es gab auch 3 mal Erhöhung der mRNA-Expressionsniveau in Bezug auf SDF-1 (2b) oder TGF-β1 (Abb 2c). Abbildung 2 Echtzeit-PCR-Analyse von sezernierten Proteinen durch CAFs in Tumor und normalem Magengewebe. Die Gesamt-RNA wurde Extrakt und cDNA wurde aus chirurgisch entfernten Tumor und gesundem Gewebe aus dem gleichen Magenkrebs-Patienten (100 Fälle), hergestellt. Echtzeit-PCR wurde durchgeführt, das Expressionsniveau von FAP (a), SDF-1 (b) und TGF-β1 (c) in Tumor- und normalen Geweben zu vergleichen, wobei die ersten beiden Spuren des Elektrophoretogramm dargestellt normalen Geweben und die letzten beiden Bahnen dargestellt Tumorgewebe. *: P < 0,01.
Aus diesen Ergebnissen können wir die reaktive CAFs weit verbreitet waren in Magentumorgewebe und geheime hohes Maß an Proteinen schließen kann, die gezeigt wurde, für das Tumorwachstum, Invasion und Metastasierung von wesentlicher Bedeutung.
CAFs Prävalenz "war eng im Zusammenhang mit
invasiven und metastatischen Eigenschaften von Magentumor, um festzustellen, ob der Grad der CAFs clinicopathological Prävalenz und andere "Prävalenz als Prädiktor für die Prognose von Patienten mit Magenkrebs bedient werden können, wurde eine Korrelationsanalyse zwischen dem Grad der CAFs durchgeführt ' Parameter von Magenkrebs. Tumorproben benotet als negativ oder schwach positiv wurden als negativ angesehen und moderate oder starke positive wurden als positiv in dieser Analyse betrachtet. Patient und Tumor-Eigenschaften sind in Tabelle 1 beschrieben wir auch in Tabelle 1, dass es keine Korrelation zwischen CAFs 'Prävalenz und Alter, Geschlecht des Patienten oder der Stelle des Tumors können. Es war Prävalenz eine Zunahme von CAFs ', wenn der Tumor Differenzierung von gut differenzierten (43,75%) verringerte sich auf schlecht differenzierten (64,00%), während die positive Rate von CAFs in undifferenzierten Magenkrebs nur 26,67% ist, viel geringer als die in gut oder schlecht differenzierten Magenkrebs, so konnten wir die Korrelation zwischen der CAFs "Prävalenz und Tumordifferenzierung (P = 0,56) nicht finden. Während Tumorgröße über, Tiefe des Tumors (T) und Lymphknotenmetastasen (N), zeigte statistisch signifikante Korrelation zwischen der Häufigkeit von CAFs und diese Tumoreigenschaften mit höheren positiven Rate von CAFs in größeren Tumoren, stärker invasive Tumoren und Tumoren mit Lymphknotenmetastasen. Auch können wir feststellen, dass die positive Rate von CAFs in Magenkrebs mit Lebermetastasen hoch war (P < 0,01) oder Peritoneum Metastasierung (P < 0,01) .Tabelle 1 Patient und Tumor-Eigenschaften und ihre Beziehung mit CAFs Prävalenz

N
Positiv für CAFs N (%)
P-Wert
Alter (Jahre)
2.77a
≤60
47
22 (46.81)
> 60
53
29 (54.72)
Sex
5.11a
Männlich
57
32 (56.14)
Weiblich
43
19 (44.19)
Lage des Tumors
1.35b
proximale Ende des Magens (1/3)
13
9 (69,23)
Magenkörper (1/3)
19
9 (47.37)
Fern Ende des Magens (1/3)
51
22 (43.14)
Mehr als 1/3 der
17
11 beteiligt Magen (64,71)
Tumordifferenzierung
0.56b
Well
16
differenziert 7 (43.75)
Moderate differenziert
44
24 (54.55)
schlecht differenziert
25
16 (64.00)
Undifferenzierte
15
4 (26,67 )
Tumorgröße
0,02A
≤5 cm
62
16 (35.48)
> 5 cm
38
29 (76,32)
Tiefe von Tumor (T)
0.03b
Tis
4 1 (25.00)
T1
13
5 (38.46)
T2
39
19 (48.72)
T3
26
15 (57.69)
18
T4
11 (61,11)
Lymphknotenmetastase (N)
< 0,01 a
N0
46
16 (34.78)
N1-3
54
35 (64,81)
Lebermetastasen
< 0,01 a
Ja
12
9
Kein
88
42
Peritoneum Metastasierung
< 0,01 A
Ja
9
7 (77.77)
Nein
91
44 (48.35)
TNM-Stadium
< 0.01b
IA
15
3 (20)
IB
7 of 2 (28.57)
II
19
6 (31.58)
IIIA
23
11 (47.83)
IIIB
15
8 (53.33)
IV
21
14 (66.67)
ein: Fisher-Exact-Test; b: Chi-Quadrat-Tests
Zusätzlich ist in der Situation von Tumormetastasen, unabhängig von Lymphknotenmetastasen, Fernmetastasen oder Organmetastasen, der positive Anteil für CAFs ist viel höher als in denen ohne Metastasen (71,93% gegenüber 25,58% , P < 0,01) (Abb 3). Abbildung 3 Der Prozentsatz an Tumorproben, die für CAFs 'Prävalenz in der Gruppe der Patienten mit oder ohne Tumormetastasierung positiv oder negativ war. Die Tumorproben wurden nach gruppiert, ob die Magenkrebs-Patienten hatten Tumormetastasierung (was auch immer Lymphknotenmetastasen, Fernmetastasen oder Organmetastasen). Und der Anteil der Proben, die positiv war (Grad - oder + nach immunochemischen Färbung) oder negativ (Grad ++ oder +++ nach immunochemischen Färbung) für CAFs 'Prävalenz wurde analysiert (a). Und die immunochemischen Färbung von α-SMA wurde in normalen Magen-Gewebe, Magenkrebs Gewebe ohne Metastasierung und Magenkrebsgewebe mit Metastasen (b) gezeigt.
Und wir analysiert auch die Korrelation zwischen der Ebene der mRNA von FAP, SDF-1 und TGF-β1 und der Magenkrebs Stadium. Das Niveau dieser Proteine ​​wurden in den Verfahren, wie sie beschrieben hat und die Tumorgewebeproben wurden positiv zu sein, bestimmt, ob die Punktzahl gleich oder größer als 8. Es wurde festgestellt, dass der positive Prozentsatz viel hoch in großen Tumoren ist (> 5 cm, 32/38) als bei kleinen Tumoren (≤5 cm, 20/62) (p < 0,05). Und der positive Anteil in Tumorproben mit TNM-Stadium IA, IB, II, III A, III B und IV sind 33,3% (5/15), 42,9% (3/7), 52,6% (10/19), 60,9% (14 /23), 73,3% (11/15) und 76,2 (16/21) verbunden sind, dass die Prävalenz von CAFs zeigt eng mit den Magenkrebs Stufen (p <korreliert; 0,01). Diese Ergebnisse legen nahe, dass stark CAFs 'Prävalenz könnte helfen, die Magenkrebs im Stadium zu etablieren und könnte als Marker für die Prognose von Patienten mit Magenkrebs verwendet werden.
Diskussion
Jüngste Studien in der Molekular- und Zellbiologie haben gezeigt, dass das Tumorwachstum gezeigt und Metastasierung sind nicht von Krebszellen allein, sondern auch durch eine Vielzahl von Stromazellen [14, 15] bestimmt. Das Stroma bietet aktiv kontinuierliche Unterstützung Karzinomzellen in den verschiedenen pathophysiologischen Prozesse, die Tumorprogression zu modulieren. Fibroblasten sind ein wichtiger Bestandteil der Tumor-Stroma, die wegen ihrer Beteiligung an der Tumorentwicklung erhöhte Aufmerksamkeit erhalten haben, einschließlich Wachstum, Invasion und Metastasierung, wie bei Prostatakrebs [16, 17] oder Brustkrebs [18, 19]. Es hat sich auch in einem Magenkrebs Mausmodell gezeigt, dass Fibroblasten fördern Tumor-Angiogenese [20] aktiviert wird, und es ist mit aus Ergebnissen konsistent, die Fibroblasten aktiviert wurden in menschlichen Magenkrebsgewebe angereichert.
Der Begriff Fibroblasten umfasst eine Reihe von Stromazellen Zellen mit weitgehend ähnlichen Phänotyp. Die meisten Tumoren enthalten eine offensichtliche biologisch aktive, fibroblastic Typ Zelle verschiedentlich als reaktive Fibroblasten, Myofibroblasten oder einfach Tumor-assoziierte Fibroblasten bekannt. Glatte Muskulatur α-Actin (α-SMA) ist die häufigste Marker verwendet CAFs zu identifizieren, während seine Expression kann auch in glatten Muskelzellen und Myoepithelzellen [21] zu finden. So werden andere Marker sollten in Kombination mit α-SMA verwendet werden CAFs zu identifizieren. Fibroblast-spezifische Protein-1 (FSP1, S100A4), ein Mitglied der Familie von Ca2 + -bindende S100-Proteine ​​konstitutiv in das Cytoplasma der Gewebe Fibroblasten exprimiert wird, und seine Expression ist hochspezifisch für Fibroblasten [22, 23]. Es ist allgemein ein-SMA und FSP1 zur Identifizierung von Tumor-assoziierten Fibroblasten zu kombinieren akzeptiert. Und in unserem Experiment verwendeten wir auch einen dritten Marker, Procollagen I, reaktive CAFs mit der Produktion von extrazellulären Matrixkomponenten zu identifizieren.
Wir haben festgestellt auch die mRNA Expression von anderen Proteinen, die oder durch CAFs abgesondert exprimiert wird. FAP ist eine auf die Post-Prolin Dipeptidylaminopeptidase Familie gehören Transzelloberflächenprotein Typ II, mit Dipeptidylpeptidase und Endopeptidase-Aktivität, einschließlich einer kollagenolytischer Aktivität fähig Gelatine und Art der Abbau-I-Kollagen [24, 25]. FAP selektiv durch CAFs und Perizyten in mehr als 90% der menschlichen epithelialen Tumoren untersucht exprimiert [26-30] und Forschung im Tiermodell zeigen eine therapeutische Wirkung durch Hemmung FAP Expression oder die enzymatische Aktivität [31] berichtet. Das nächste Protein erkennen wir ausgewählt ist SDF-1, die durch CAFs sezerniert wird und stimuliert die Proliferation von Tumorzellen, Angiogenese, Invasion und Metastasierung durch den CXCR4-Rezeptor durch Tumorzellen exprimiert [32-34]. Einem anderen sekretierten Protein wir festgestellt ist TGF-β1, das ein potenter Induktor für Myofibroblasten Differenzierung ist [35], und kann eine Rolle bei der Tumorinvasion-Metastase Kaskaden [36] spielen. Die Ergebnisse der vorliegenden Studie zeigten, dass diese Proteine ​​in Magenkrebsgewebe hochreguliert waren, was darauf hindeutet, ihre mögliche Rolle Magenkrebsprogression in der Förderung.
Magenkrebs die zweithäufigste Ursache von Krebs-assoziierten Sterblichkeit in der Welt. Die Prognose bei Patienten mit Magenkrebs ist schwer zu ermitteln, da es häufig diagnostiziert wird, wenn Magenwand Invasion und Metastasierung aufgetreten sind. Mehrere Gruppen versuchten einige Biomarker für die Prognose von Magenkrebs zu finden. Zum Beispiel kann die Expression von mehreren extrazellulären Matrix-Metalloproteinasen (MMP-2, 7, 9) wurde in Magenkrebsgewebe erhöht werden, im Vergleich zu gesunden Magengeweben gefunden. Und die Hochregulation dieser MMPs bei Magenkrebs ist mit einer schlechten Prognose verbunden und erhöht invasive Kapazität [37]. Ein weiteres Beispiel ist Insulin-ähnlichen Wachstumsfaktor-1-Rezeptor (IGF-1R), wurde es in Magenkarzinome häufig exprimiert und wurde mit der Tumorgröße zugeordnet ist, die Menge der Stroma, die Tiefe der Wand invasion, Lymphknotenmetastasen, TNM Stufen und Differenzierungsstatus von Magenkrebs [38]. Und VEGF-C-Expression auf Tumorgrenzen wurde auch mit Lymphknotenmetastasen, lymphatischen Gefäßinvasion, schlechte rezidivfreie Überleben und das Gesamtüberleben schlecht verbunden sind, und für Patienten mit Magenkarzinom als unabhängiger Prädiktor dienen könnte [39]. Wir können feststellen, dass diese Prädiktoren sind entweder Proteine ​​abgesondert von CAFs oder durch Tumorzellen exprimiert Rezeptoren, die die Proteine ​​abgesondert von CAFs binden, so können diese Hinweise deuten darauf hin, dass die Prävalenz von CAFs bei Magenkrebs Gewebe wird ein wichtiger Prädiktor für Magenkrebs-Patienten sein. Und unsere Ergebnisse bestätigten, dass die Prävalenz von CAFs eng mit dem metastatischen Potential von Magenkrebs in Verbindung gebracht wurde und die weitere Arbeit sollte die Korrelation zwischen CAFs "Prävalenz und das Überleben von Patienten mit Magenkrebs zu bestätigen durchgeführt werden.
Schlussfolgerungen
Unsere Ergebnisse Bericht hier zeigen, dass reaktive Krebs-Fibroblasten (CAFs) wurden in Magenkrebsgewebe häufig angesammelt, und die Prävalenz von CAFs wurde mit der Größe des Tumors, Tiefe des Tumors und die Tumormetastasierung sowie die Gesamt TNM-Stadium korreliert, was darauf hindeutet, dass CAFs kritisch waren für das Tumorwachstum, Invasion und Metastasierung, also einige Stützen für die Prognose der Patienten mit Magenkrebs geben
Abkürzungen
CAFs.
Tumor-assoziierte Fibroblasten
FAP:
Fibroblasten-Aktivierungsprotein
SDF-1:
Stroma-Zellen-derived factor 1
TGF-β1:
transforming growth factor beta 1
ECM:
extrazelluläre Matrix
WBC:
Anzahl weißer Blutkörperchen

PLT:
Thrombozytenzahl
Hb:
Hämoglobin
GPT:
Glutaminpyruvintransaminase
ALP:
alkalische Phosphatase
PT:
Prothrombinzeit

CNS:
zentrale Nervensystem
α-SMA:
α-smooth-Muskel-Aktin
FSP1:
Fibroblasten-spezifische Protein-1
GAPDH:
Glyceraldehydphosphatdehydrogenase
MMP:
Matrix-Metalloproteinase

VEGF.
vaskulären endothelialen Wachstumsfaktor
Erklärungen
Danksagung kaufen Wir möchten Prof. Li Gao in der Abteilung für danken Pathologie des Changhai Hospital und Dr. Ni Zhu im Zentrallabor von Changhai Krankenhaus für ihre kompetente technische Unterstützungen für die Experimente. Diese Arbeit wurde von der National Natural Science Foundation of China (30672046) unterstützt.
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Die Autoren erklären, dass sie keine Interessenkonflikte haben.

• Etablierung und Charakterisierung eines Metastasierung Modell des menschlichen Magenkrebs in Nackt mice
• Der Nachweis von Sentinel und Non-Sentinel-Lymphknoten-Mikrometastasen durch komplette Serienschnitt und immunhistochemischen Analyse für Magenkrebs