Mucina padrão reflete a origem do adenocarcinoma no esôfago de Barrett: um estudo clínico e laboratorial retrospectiva

Mucina padrão reflete a origem do adenocarcinoma no esôfago de Barrett: um estudo clínico e laboratorial retrospectiva da arte abstracta
Fundo
imunoexpressão mucina no adenocarcinoma no esôfago de Barrett (BE) pode indicar a via de carcinogênese. O objetivo deste estudo foi avaliar os espécimes ressecados de adenocarcinoma in BE para o padrão de mucinas e correlacionar com a classificação histológica.
Métodos
espécimes foram retrospectivamente coletados de treze pacientes submetidos à ressecção do esôfago devido ao adenocarcinoma in BE . As secções foram marcados para o grau de metaplasia intestinal. Os tecidos foram analisados ​​por imuno-histoquímica para os anticorpos MUC2 e MUC5AC.
Resultados
Onze pacientes eram homens. A idade média foi de 61 anos (variando de 40 a 75 anos de idade). O tamanho do tumor teve uma média de 4,7 ± 2,3 cm e a extensão da SER tinha uma média de 7,7 ± 1,5 cm. epitélio especializado com metaplasia intestinal estava presente em todas as mucosas adjacentes. A imuno-histoquímica para MUC2 mostraram imunorreactividade nas células caliciformes, enquanto MUC5AC foi amplamente expressa em células gástricas colunares, localizando ao epitélio da superfície e estendendo-se até um grau variável nas estruturas glandulares em BE. Os tumores foram classificados de acordo com as mucinas no tipo gástrico em 7/13 tipo (positiva MUC5AC) e intestinal em 4/13 (MUC2 positivo). Dois tumores não expressam proteínas MUC2 ou MUC5AC. O padrão de mucina predominantemente expresso no epitélio adjacente foi associada ao perfil de expressão de mucina na tumores, p = 0,047.
Conclusão
adenocarcinoma de esôfago de Barrett mostra ou padrão de tipo gástrico ou intestinal de mucina expressão. Os dois tipos de tumores desenvolvidos no esôfago de Barrett pode refletir o tipo de célula original envolvidos na transformação maligna.
Fundo
esôfago de Barrett (BE) é o termo de mesmo nome usado para descrever uma condição com potencial maligno onde o esôfago inferior torna-se alinhado com um epitélio colunar especializado como um resultado do refluxo gastroesofágico crónica. Hoje em dia, o esófago de Barrett representa a transição da mucosa escamosa normal epitélio colunar mais a identificação de metaplasia intestinal. Na forma macroscópica, SER é classificada como muito tempo, quando o epitélio colunar é mais do que 3 cm, e curta quando é inferior a 3 cm [1, 2].
BE é um complexo, mosaico de célula, glândula, e arquitectónico tipos, que mostram graus variáveis ​​de atrofia e de maturação para o epitélio intestinal e gástrica. mucosa de superfície, células caliciformes, absorventes, pescoço mucosas, glândulas mucosas e células neuroendócrinas são distribuídas aleatoriamente em relação à junção gastroesofágico [3, 4]
Apesar de existirem três tipos de epitélio -. ou seja, fúndica gástrica, cardíaco juncional e epitélio intestinal especializada, - é agora aceite que adenocarcinoma surge apenas a partir do tipo intestinal especializada de metaplasia [3, 5-12]. No entanto, muitos dos adenocarcinomas esofágicos em BE (ABE), exibem um padrão diferenciado e /ou indiferenciado pobre, distinto dos tumores do tipo intestinal frequentemente observados em pacientes com metaplasia intestinal.
Genes de mucina são expressos em todo o tracto gastrointestinal humano numa cada local específico [13]. No ser especializado, existe uma forte expressão de MUC2 nas células caliciformes (padrão mucina intestinal) e MUC5AC no epitélio colunar superficial (padrão mucina gástrica) [14]. Este é o mesmo padrão já descrito para a metaplasia intestinal incompleta do estômago, e é mais uma prova de que a BE e a metaplasia intestinal incompleta do estômago são o mesmo e representam condição diferenciação numa linhagem epitelial única [15, 16].
Seja é um marcador de lesão do tecido, possivelmente como uma consequência de lesões inflamatórias e regeneração. Assim, todas as células do estar sob danos poderiam originar um clone de expansão capaz de iniciar a cascata carcinogênese. O padrão de expressão de mucina produtos de genes em adenocarcinoma em BE ainda tem de ser conhecido.
Assim, estudamos um grupo homogêneo de pacientes com adenocarcinoma em BE. Procurou-se determinar se gástrica (MUC5AC) e /tipo intestinal (MUC2) ou marcadores, poderia ajudar a melhorar a nossa compreensão da carcinogênese em adenocarcinoma de Barrett.
Pacientes e métodos
Esta investigação foi aprovada pelo Comitê de Ética da Hospital das Clínicas de São Paulo Medical School. A partir de janeiro de 1990 a junho de 2002, um total de 297 pacientes com diagnóstico de ser confirmada através de biópsias endoscópicas, foram tratados no Serviço de Cirurgia de esôfago de Digestive Divisão Cirúrgica do Hospital das Clínicas da Universidade de São Paulo de Medicina. Destes, Adenocarcinoma foi diagnosticada em 17 pacientes, com uma prevalência de 5,7%. Nós retrospectivamente rever os prontuários desses pacientes quanto à presença de esôfago de Barrett, características clínicas e relatório da patologia. Foram excluídos os tumores gástricos com invasão de esôfago e neoplasias de esôfago com componentes invasivos para os cárdia gástrico. Carcinomas foram consideradas como decorrentes de esôfago de Barrett, se, no exame histológico, houve especializada proximal metaplasia colunar e /ou envolvendo o tumor.
Entre os 17 pacientes, três foram excluídos por não ressecável neoplasia avançada. Um sofreu ablação árgon plasmática do epitélio colunar, incluindo o tumor, que não foi identificado no estudo histopatológico do esófago ressecado. Os 13 pacientes restantes foram submetidos à ressecção do esôfago, e formam a base deste estudo.
Estudo histopatológico
Todos os espécimes patológicos são preparados de acordo com as diretrizes do Departamento de Patologia. O esôfago ressecado foi aberto longitudinalmente, fotografado, esticado em deslizamentos de plástico ou de superfície de papelão, BE e extensão do tumor foram medidos. As distâncias entre as margens distais do tumor e junção gastroesofágico (Dist Tu-JGE.); e foram realizadas margens proximais e de transição colunar-escamosas (Prox. Tu-Tepit) do tumor. Depois disso, os espécimes foram fixados com solução de formol.
Para o estudo histológico, amostras de tecidos foram recuperados a partir de secções embebidas em parafina arquivados de histologicamente conhecido esôfago de Barrett. Tumor e epitélio adjacente, foram coradas por hematoxilina-eosina (HE).
Histologia da área adjacente do tumor mostrou uma mucosa do tipo especializado caracterizado por um forro epitelial incluindo epitélio colunar mostrando uma borda em escova pouco desenvolvida, arquitectura das vilosidades, e células caliciformes. As células superficiais eram de tipo de superfície mucosa, com glândulas /cardíacas subjacentes antrais sob superfícies cobertas pelo cálice e as células de absorção. esôfago de Barrett pode ser classificada como epitélio especializado em todos os pacientes estudados, com áreas com predominância de um tipo de epitélio intestinal ou gástrica em cada paciente.
Os tumores foram classificados de acordo com o grau de diferenciação.
Avaliação imuno-histoquímica
secções de tumores, e correspondentes áreas adjacentes, desenvolvendo em pacientes com esôfago de Barrett foram examinados por imuno-histoquímica para MUC5AC (NCL - MUC-5AC, Novocastra, Newcastlle, Reino Unido) e MUC2 (NCL - MUC-2, Novocastra, Newcastlle, Reino Unido ).
Três a cinco não coradas 4 mm cortes histológicos em branco foram cortados de cada bloco designado e usado para MUCAC-5 e MUC-2 imunocoloração (usando aquecimento úmido). Resumidamente, a imunodetecção envolveu o uso de 4 uM tecidos embebidos em parafina e fixado em formalina de espessura, tratada com 4% e 2% de peroxidase de hidrogénio (H 2O 2) em metanol durante 35 minutos, para eliminar a actividade da peroxidase endógena. As secções foram lavadas em solução salina tamponada com fosfato (PBS) e incubou-se com soro de cavalo normal a 10% para bloquear a ligação não específica. Após a remoção do soro, foi aplicado o anticorpo monoclonal primário. Após lavagem adicional com PBS, as secções foram incubadas com imunoglobulina anti-ratinho biotinilada, durante 30 minutos. Depois de lavar duas vezes com PBS, as secções foram tratadas com Vectastain Elite complexo de peroxidase de rábano (Vector Laboratory, Burlingame, CA) durante 30 minutos. Após outra lavagem com PBS, as secções foram incubadas com diaminobenzidina 0,05% e 0,04% H 2O 2 durante 20 minutos. Após uma lavagem final com água destilada, as secções foram contrastadas com Harris Alum hematoxilina, desidratadas através de álcoois graduados ao xilol e lamínulas.
Todas as secções foram examinadas por três investigadores independentes (KY, Rei e UR) para o estudo histopatológico e cegamente para avaliação imuno-histoquímica pela terceira. As mucinas foram expressos como coloração citoplasmática. Os resultados foram expressos semiquantitativamente para cada grupo histológico como o número de secções marcado positivamente, o tipo de célula predominante marcado, e a pontuação média das células marcadas positivamente. Secções de controlo positivo de controle de tecidos retiradas do cólon e do estômago, com padrões de expressão do gene MUC previamente identificados foram incluídos com cada série de secções para imuno-histoquímica
secções de controlo negativo:. O anticorpo primário foi omitido como um controlo negativo para testar a especificidade de . os anticorpos utilizados para cada secção
a incubação com anticorpo primário (MUC2 foi diluído em 1: 100, e o MUC5, 1: 400)
análise estatística os resultados do
alterações imuno-histoquímicos foram comparados com o clínico-patológico recursos por meio do teste do qui-quadrado para os dados qualitativos, com dois valores <p cauda; . 0,05 consideradas significativas
Resultados
Onze pacientes eram homens (84,6%) e duas mulheres (15,4%), com proporção de 5,5: 1. A faixa etária de 40 a 75 anos de idade (média = 61 anos ± 9,9).
Resultado histopatológico
medições obtidas a partir de cada esôfago ressecados são apresentados na tabela 1. extensão epitélio colunar variou de 3,5 a 16,0 cm (média de 7,7 ± 3,3 cm). A extensão do tumor variou de 1,5 a 7,4 cm (média de 4,7 ± 2,3 cm). Todos adenocarcinoma desenvolvido em ter mais do que 3,0 cm. As distâncias entre as margens e gastroesofágico distal junção do tumor (. Dist Tu-JGE) variou de apenas no JGE (5 pacientes - 38,5%) para tumores 14 cm longe de JGE (média de 2,1 cm). As distâncias das margens proximais e de transição colunar-escamosas do tumor (Prox. Tu-Tepit) variou de tumores que atingiram a transição epitélio e tumor de 3,5 cm longe de Tepit (média de 1,30 cm). Oito tumores (61,5%) foram localizado a menos de 1,0 cm da transition.Table colunar-escamosas 1 Comprimentos de epitélio e adenocarcinoma.
Paciente

comprimento esôfago de Barrett (cm)
comprimento Adenocarcinoma (cm)
Dist. Tu-JGE (cm)
Prox. Tu-Tepit (cm)

1
16
3.6
14
0.4
2
10
8
0.5
1.5
3
4
3.0
1
0
4
7
6.5
0
0.5
5
8
5
0
3
6
6
7.4
2.2
0
7
3.5
3
0
0.5
8
5
4.5
0.3
0.5
9
10.7
2.2
5.5
2.5
10
8
7
0
1
11
6.5
1.5
1.5
3.5
12
9.5
7
2.5
0
13
6
2.5
0
3.5
Mean
(SD)
7.71
(3.33)
4.67
(2.28)
2.07
1.30
Min
3.5
1.5
0
0
Max
16
7.4
14
3.5
Distâncias de adenocarcinoma da junção gastroesofágico; distâncias de adenocarcinoma a transição escamosa-colunar.
Dist. Tu-JGE = Distância de tumores (adenocarcinoma) margem distal à junção gastroesofágico.
Prox. Tu-Tepit = distância do turmors (adenocarcinoma) margem proximal ao epitélio (colunar-escamosas) transição
classificações histopatológicas de adenocarcinomas e os seus epitélio colunar adjacentes são apresentados no Quadro 2. Quatro eram tumores bem diferenciados, dois moderada, cinco estavam mal e dois eram indiferenciada. O epitélio adjacente era especializada tipo colunar. Em cinco casos houve predominância de áreas tipo intestinal; cinco, com predomínio de áreas de tipo gástrico, e três com semelhante distribution.Table 2 Distribuição de 13 pacientes ABE de acordo com o tipo de epitélio adjacente e tumor
Características
paciente
tipo celular (gástrica ou intestinal) predomínio no epitélio colunar especializada

Adenocarcinoma
Grau de
IHC
IHC
tipo de diferenciação tumoral
MUC2
MUC5AC
de acordo com mucins
1
intestinal
well
+
-
Intestinal
2
intestinal
moderated
-
+
Gastric
3
similar
well
-
+
Gastric
4
intestinal
moderated
+
-
Intestinal
5
Gastric
poor
-
+
Gastric
6
Gastric
undifferentiated
-
-
-
7
Gastric
well
-
+
Gastric
8
Intestinal
poor
+
-
Intestinal
9
Gastric
poor
-
+
Gastric
10
similar
well
-
+
Gastric
11
similar
undifferentiated
-
-
-
12
Gastric
poor
-
+
Gastric
13
Intestinal
poor
+
-
Intestinal
IHC = imuno-histoquímica
resultados imunohistoquímicos
análise imuno-histoquímica de mucinas é apresentada na tabela 2. epitélio esôfago normal foi geralmente vistos nas seções, muitas vezes contínua com o epitélio BE. As mucinas não foram expressas no epitélio estratificado normal, esofágica. A metaplasia intestinal com células caliciformes foi geralmente encontrada na superfície da mucosa, e, em alguns casos, foi raramente detectada. MUC2 foi especificamente associada com células caliciformes em IM e foi geralmente encontrada na superfície das mucosas (Figura 1). Manchas de IM dentro BE foram caracterizados por expressão de MUC2 dentro das células caliciformes, que também é característico para epitélio intestinal normal e de IM no estômago. MUC5AC foi amplamente expressa no epitélio colunar BE, localizando ao epitélio da superfície e estendendo-se até um grau variável nas estruturas glandulares (Figura 2). Nenhuma coloração de MUC5AC foi detectada em células caliciformes. Figura imunoexpressão 1 MUC2 no epitélio adjacente ao adenocarcinoma. coloração imuno-histoquímica de MUC2 para epitélio células mostrando caliciformes como controle positivo (aumento original x 400)
Figura 2 MUC5AC imunoexpressão no epitélio adjacente ao adenocarcinoma. a coloração imuno-histoquímica de MUC5AC por epitélio colunar mostra as estruturas glandulares como controlo positivo (ampliação original x 400)
De acordo com o padrão de expressão de mucina, quatro tumores foram classificados como MUC2 positivo (Figura 3), indicando um tipo intestinal de diferenciação do tumor, enquanto sete eram tumores positivos MUC5AC (Figura 4), indicando um tipo gástrica de diferenciação do tumor. Dois tumores indiferenciados não tinha expressão de mucina e, portanto, não puderam ser classificados. Figura imunoexpressão 3 MUC2 no adenocarcinoma tipo intestinal decorrente no esôfago de Barrett. coloração imuno-histoquímica de MUC2 para adenocarcinoma (ampliação original × 400)
Figura 4 MUC5AC imunoexpressão no tipo indiferenciado adenocarcinoma (tipo gástrico) provenientes de esôfago de Barrett. coloração imuno-histoquímica de MUC5AC para adenocarcinoma (ampliação original × 400).
Figura 5, exemplificam uma lesão exofítica rodeado por epitélio uma extensa de Barrett. A microscopia revelou um tumor tipo bem diferenciado. A imuno-histoquímica demonstrou uma expressão MUC2 positivo compatível com um tipo de Adenocarcinoma intestinal. Figura 5 A protuding Adenocarcinoma proximal durante um longo Esôfago de Barrett. adenocarcinoma bem diferenciado provenientes de um comprimento de esôfago de Barrett 16 cm. A lesão está localizado a 14 cm de distância da junção gastroesofágica.
Figura 6, exemplificam uma lesão ulcerativa e depressivo cercado por epitélio uma extensa de Barrett. A microscopia revelou um tumor tipo indiferenciado. A imuno-histoquímica demonstrou expressão de MUC5AC denotando um tipo adenocarcinoma gástrico. A Figura 6 um adenocarcinoma proximal infiltrativa durante um longo Esôfago de Barrett. adenocarcinoma indiferenciado resultante em 10,7 cm de comprimento esófago de Barrett, distantes 5,5 cm da junção gastro-esofágico.
Tabela 3 mostra a relação entre o padrão mucina no epitélio predominância adjacente em relação ao tumor mucina expression.Table 3 Relação entre a mucina padrão predominância no adjacente epitélio em comparação com a expressão tumor mucina.

epitélio adjacente
tumor
intestinal
gástrico
intestinal 4
0
gástrica
1

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