Um romance técnica de terapia e de imagem viral oncolytic para câncer gástrico usando um vírus vaccinia geneticamente modificado carregando o symporter iodeto de sódio humana

Um romance técnica de terapia e de imagem viral oncolytic para câncer gástrico usando um vírus vaccinia geneticamente modificado carregando o symporter iodeto de sódio humana da arte abstracta
Fundo
cancros gástricos têm sobrevida global pobres apesar dos recentes avanços nos métodos de detecção precoce, a ressecção endoscópica as técnicas e os tratamentos de quimioterapia. A terapia viral Vaccinia teve potencial terapêutico promissor para vários tipos de câncer e tem um grande perfil de segurança. Investigou-se a eficácia terapêutica de um romance geneticamente manipulada vírus vaccinia portador do simportador iodeto de sódio gene humano (h
NIS), GLV-1 h153, em cancros gástricos e a sua utilidade potencial para a imagiologia com 99mTc pertecnetato e 124I tomografia por emissão de positrões (PET).
Métodos
GLV-1 h153 foi testado contra cinco linhas celulares de cancro gástrico humano usando citotoxicidade e ensaios de placas virais padrão. In vivo
, tumores do flanco subcutâneos foram gerados em ratinhos nus com células cancerosas gástricas humanas, MKN-74. Os tumores foram subsequentemente injectados com uma VGL-h153 ou PBS e foram seguidos durante o crescimento do tumor. 99m cintilografia pertecnetato e 124I microPET de imagem foram realizados.
Resultados
expressão GFP, um substituto para a infectividade viral, confirmou a infecção viral por 24 horas. A uma multiplicidade de infecção (MOI) de 1, 1-GLV h153 alcançado > 90% de citotoxicidade em MNK-74, OCUM-2MD3, e AGS ao longo de 9 dias, e > 70% de citotoxicidade em MNK- 45 e TMK-1. In vivo
, GLV-1 h153 foi eficaz no tratamento de xenoenxertos (p < 0,001) após 2 semanas de tratamento. tumores GLV-1 h153-infectadas foram prontamente fotografada pela 99m cintilografia pertecnetato e imaging 124I microPET 2 dias após o tratamento.
Conclusões
GLV-1 h153 é um vírus oncolytic eficaz expressando o h
proteína NIS que podem eficientemente regredir tumores gástricos e permitir criação de imagens de tecidos profundos. Estes dados encoraja sua investigação contínua em ambientes clínicos.
Palavras-chave
Oncolíticos terapia viral GLV-1 h153 gástrica câncer symporter iodeto de sódio Humano (h
NIS) Background
O câncer gástrico é um dos mais prevalente maligno tumores, especialmente na Ásia [1]. Embora os métodos de detecção precoce, o desenvolvimento de endoscópica ou ressecção cirúrgica e quimioterapias mais eficazes têm aumentado a sobrevida global em doentes com cancro gástrico, o prognóstico de pacientes com câncer gástrico avançado ainda é pobre [2-4]. A maioria dos tratamentos de quimioterapia convencionais têm demonstrado eficiência moderada. Uma possível explicação para a resistência do cancro gástrico à terapia convencional pode ser a sua não-susceptibilidade à apoptose [5]. No entanto, oncolytic vírus ter grandes efeitos terapêuticos contra as células cancerosas que expressam elevados níveis de ribonucleótido-redutase, enzimas de reparação do ADN, e são, portanto, resistentes à apoptose [6, 7]. Muitas dessas características que tornam as células cancerosas gástricas resistentes à quimioterapia, torná-los suscetíveis à terapia viral oncolytic. Assim, a terapia gênica usando vírus oncolytic oferece uma alternativa atraente para o tratamento de câncer gástrico [8].
Terapia viral oncolytic foi estudado ao longo do século passado e mostrado sucesso em testes pré-clínicos e clínicos como uma modalidade nova do tratamento do câncer [9 ]. vírus vacínia (VACV estirpes) são particularmente atractivas como agentes anti-tumor potenciais, como eles podem incorporar grandes quantidades de DNA estranho, sem reduzir a sua eficácia de replicação. Além disso, VACV tem mostrado um grande perfil de segurança em seres humanos [10-12]. Por último, em adição ao seu potencial terapêutico, VACV tem também sido usada como uma técnica de imagem não invasiva permitindo que os médicos para controlar a entrega do gene terapêutico no corpo [10, 13].
Nesta publicação, examinámos o potencial terapêutico de um romance VACV expressando o iodeto de symporter humana de sódio (h
NIS), GLV-1 h153, contra cânceres gástricos in vitro e in vivo

, e testou seu potencial como ferramenta de imagem.
Materiais e métodos As linhas celulares
células AGS câncer gástrico humano (uma linha celular de adenocarcinoma epitelial gástrica) foram obtidos de American Type Culture Collection (ATCC; Manassas, VA) e foram cultivadas em F-12 K Meio de Ham. células humanas OCUM-2MD3 foram uma oferta do Dr. Masakazu Yashiro (Osaka City University Medical School, Japão) e foram cultivadas em meio de Eagle modificado por Dulbecco (DMEM). MKN-74 e células TMK-1 foram fornecidos pelo Dr. T. Suzuki (Fukushima Medical College, Japão) e foram cultivadas no Roswell Park Memorial Institute (RPMI). MKN-45 foi obtido como um presente do Dr. Yutaka Yonemura (Universidade Kanazawa, Japão) e foi mantida em RPMI. de fibroblastos de rim de macaco verde africano (Cercopithecus aethiops
;-1 CV) de células utilizadas para ensaios de placas virais foram adquiridos a partir de ATCC (Manassas, VA) e cultivadas no Meio Essencial Mínimo (MEM). Todos os meios foram suplementados com 10% de FBS, 1% de penicilina e 1% de estreptomicina.
Vírus
GLV-1 h153 é, um vírus vacínia recombinante competente para replicação derivada a partir da sua estirpe parental, GLV-1 H68, através recombinação homóloga. Ele contém quatro cassetes inseridas que codificam Renilla Aequorea
proteína luciferase- proteína verde fluorescente (GFP-RUC) de fusão, um receptor de transferrina humana reversamente inserido (TRRF
), β-galactosidase, e iodeto de sódio simportador humana (h
NIS) para o F14.5
, J2R
(que codifica a timidina-quinase), e A56R
(codificando hemaglutinina) loci do viral genome.GLV-1 foi fornecida por h153 Genelux Corporation (R & D facilidade em San Diego, CA, EUA). Citotoxicidade
ensaio
4 × 10 4 culas por po de cada linha celular foram plaqueadas em placas de 12 poços e incubou-se em um de 5% de CO 2 humidificada incubadora a 37 ° C durante a noite. GLV-1 h153 foi adicionado a cada poço em diferentes multiplicidade de infecção (MOI) de 0,01, 0,1, e 1,0. citotoxicidade virai foi testada usando um lactato desidrogenase (LDH) de ensaio diária. As células foram lavadas uma vez com PBS, e depois lisadas com 1,35% de Triton X-100 (Sigma, St. Louis, MO). A libertação de LDH a seguir a lise intracelular foi subsequentemente medido com CytoTox 96® (Promega, Madison, WI) num espectrofotómetro (EL321e, Bio- Tek Instruments) a 490 nm. Os resultados são expressos como a percentagem de células sobreviventes, que foram calculados como a libertação de LDH das amostras infectadas em comparação com o controlo não infectado. Todas as condições foram testados em triplicado. Os sobrenadantes
ensaio de replicação
virais a partir de cada poço foram infectadas recolhidos diariamente e imediatamente congelado a -80 ° C. As diluições em série de todas as amostras de sobrenadante foram feitas para realizar ensaios de placas virais em células confluentes padrão CV-1. Todas as amostras foram medidos em triplicado.
In vivo
murino flanco terapia de tumores
Todos os experimentos com animais foram realizados sob protocolos aprovados e de acordo com as diretrizes éticas do Comité de Conservação e Uso Institucional Animal (IACUC) no Memorial Sloan Centro de Câncer -Kettering (MSKCC). MKN-74 xenoenxertos foram estabelecidos em 6 a 8 semanas de idade camundongos nu feminino (NCI: Hsd: atímicos nu-nu, Harlan) por injecção subcutânea de 5 × 10 6 MKN-74 células no flanco direito. O crescimento do tumor foi gravado duas vezes por semana usando um volume calibre e tumor digital foi calculada usando a equação, um
× b
2 × 0,5, em que um
e b Quais são o maior e menores diâmetros, respectivamente. Quando os tumores atingiram um diâmetro de aproximadamente 6-8 mm em 10 dias, os animais foram agrupados em grupos de controlo e de tratamento com tamanhos tumorais justas. Uma dose única de 2 × 10 6 unidades formadoras de placas (PFU) de uma VGL-h153 em 100 ul de PBS ou 100 ul de PBS como controlo foram injectados intratumoralmente para cada tumor designado. Os animais foram observados diariamente para detectar quaisquer sinais de toxicidade, e sacrificados quando os seus tumores atingiram um diâmetro de aproximadamente 15 mm.
Imagiologia fluorescente (Maestro)
In vivo
imagens GFP foram obtidos utilizando o sistema Cri Maestro (Cambridge Pesquisa e Instrumentação, Woburn, MA) usando os filtros apropriados (excitação = 445-490 nm, emissão = 515 nm filtro passa-tempo, configurações de aquisição = 500-720 em 10 nm). Depois de cada imagem foi obtida, foi espectralmente não misturados para remover a fluorescência de fundo. As imagens foram quantificados utilizando região de interesse (ROI) de software de análise que é fornecido com o sistema Maestro.
In vivo
emissão de fóton único imagens de tomografia computadorizada SPECT
Cinco MKN-74 xenoenxertos foram intratumoral injectado com 2 × 10 7 PFUs GLV-1 h153 e 5 com PBS como controle. Dois dias após a infecção, 200 uCi de 99mTc pertecnetato foi administrado através de injecção na veia da cauda. 99mTc pertecnetato imagens foram obtidas durante 10 minutos, 3 horas após a administração do radiofármaco. Imagiologia foi realizada utilizando o dual-detector câmara gama sub-sistema do pequeno animal SPECT-CT sistema X-SPECT (Gamma Medica, Northridge, CA). O sistema γ câmera X-SPECT foi calibrado pela imagem de um rato-size (30 mL) cilindro cheio com uma concentração medida (MBq /mL) de 99m usando uma janela de energia fotopico de 126-154 keV e baixo consumo de energia collimation de alta resolução. Os imagens 99mTc resultantes foram exportados para Interfile e depois importados para os ASIPro (Soluções Siemens pré-clínicos, Knoxville, TN) ambiente de software de processamento de imagem. Por análise do ROI, um factor de calibragem do sistema (em cpm /pixel por MBq /ml) foi derivada. imagens animais também foram exportados para Interfile e depois importada para ASIPro e parametrizada em termos de percentagem de dose injectada corrigida-deterioração por grama (% ID /g) com base no factor de calibragem que precede, a actividade administrada, o tempo após a administração de imagiologia, e a duração da imagem.
In vivo
PET imagiologia
Três MKN-74 xenoenxertos foram injetados intratumoral com 2 × 10 7 UFP GLV-1 h153 e dois com PBS. Dois dias após a injecção virai, 300 uCi de 124I foi administrada através de injecção na veia da cauda. Uma hora após a administração do radiofármaco, 3-dimensional de dados de lista do modo foram adquiridas usando uma janela de energia de 350-700 keV, e uma janela de temporização coincidência de 6 nanossegundos. Imagiologia foi realizada utilizando um Focus 120 microPET dedicado do scanner PET pequenos animais (Concorde Microsystems Inc, Knoxville, TN). Estes dados foram classificados em histogramas 2-dimensionais por Fourier rebinning. As taxas de contagem nas imagens reconstruídas foram convertidos em concentração de actividade (% ID /g) usando um factor de calibração do sistema (MBq /mL por cps /voxel) derivada a partir de imagens de um fantasma tamanho do rato preenchidos com uma solução aquosa uniforme de 18F. A análise das imagens foi realizada por meio de análise ASIPro
Estatística
diferenças significativas entre os grupos foram determinadas pelo teste t de Student
(Excel 2007; Microsoft, Redmond, WA, EUA).. Um valor de p < 0,05 foi considerado significativo.

Resultados Ensaio de citotoxicidade
Todas as cinco linhas celulares de cancro gástrico humano eram suscetíveis à onc�ise por GLV-1 h153 (Figura 1). As linhas celulares AGS MKN-74, OCUM-2MD3, e foram mais sensíveis à lise virai em comparação com células MKN-45 e TMK-1. Todas as linhas celulares apresentaram uma resposta dependente da dose, com uma maior e mais rápida morte de células a MOI mais elevados. Em MKN-74, OCUM-2MD3, e linhas celulares AGS, mais de 90% das células foram mortas por dia 9, a uma MOI de 1. A linha de células MKN-74 foi particularmente susceptíveis a oncólise virai, com maior do que 77% a morte de células por dia 9 ao menor MOI de 0,01. A Figura 1 Citotoxicidade de VGL-1 h153 5 contra linhas celulares de cancro gástrico humano in vitro. Todas as linhas celulares sustentada citotoxicidade significativa, a uma MOI de 1, três linhas de células eram sensíveis a uma MOI de 0,1, e duas linhas de células demonstraram uma sensibilidade excelentes para GLV-1 h153 mesmo ao mais baixo MOI de 0,01.
Replicação viral
ensaios de placas virais padrão demonstraram replicação virai eficiente de uma VGL-h153 em todas as linhas celulares de cancro gástrico a uma MOI de 1 (Figura 2). MKN-74 demonstrou a maior título viral com um título de pico de 1,06 × 10 6 PFUs por poço, um aumento de 26 vezes de dose inicial, por dia 7. A Figura 2 In vitro quantificação da replicação viral por GLV-1 h153 em linhas celulares de cancro gástrico humano. O vírus foi recolhido dos poços de células infectadas a uma MOI de 1. Os ensaios de placas virais demonstraram replicação virai eficiente em todas as linhas de células de 5, atingindo a maior proliferação virai (1,06 × 106 unidades formadoras de placas virais por dia 7) na linha celular , MKN-74, o que representa um aumento de 26 vezes da sua dose inicial.
In vivo
murino xenoenxertos terapia com GLV-1 h153
Para estabelecer os efeitos citolíticos de GLV-1 h153 in vivo
, ratos portadores de xenoenxertos de MKN-74 foram tratadas com uma única dose de injecção intratumoral de uma VGL-h153 ou PBS. Os tumores tratados demonstrou a regressão do tumor sustentada /contínua ao longo de um período de quatro semanas. Ao dia 28, o volume médio do tumor do grupo de tratamento foi de 221,6 mm 3 (Figura 3). Um animal demonstrou uma regressão completa do tumor. Em contraste, todos os tumores de controlo continuaram a crescer com um volume médio de 1073.2 mm 3 por dia 28 (t
-test, comparando o tratamento e grupo de controlo no dia 28, p < 0,001). Não houve alteração significativa no peso corporal em ambos os grupos, e não se observou qualquer morbidade ou mortalidade relacionada com GLV-1 h153 tratamento. A Figura 3 uma VGL-h153 suprime o crescimento do tumor MKN-74. 2 × 106 partículas virais de VGL-1 h153 ou PBS foram injectadas intratumoralmente em ratinhos nus portadores de tumores subcutâneos nos flancos de MKN-74. A inibição do crescimento do tumor devido ao tratamento com 1-GLV h153 iniciado por dia 15 (p < 0,001). Os volumes dos tumores apresentados representam volumes médios a partir de 5 ratinhos em cada grupo de tratamento.

in vitro e in vivo
expressão da GFP
expressão de GFP foi monitorizada por microscopia de fluorescência 1, 3, 5, 7, e 9 dias após a infecção virai, a uma MOI de 1,0. A maioria das células MKN-74 foram infectadas e expressaram a GFP no dia 7 (Figura 4A). In vivo,
sinal de GFP pode ser detectada apenas no xenoenxerto injectado com uma VGL-h153 (Figura 4B). Figura 4 verde expressão de proteína fluorescente (GFP) de MKN-74 in vitro e in vivo. células A. MKN-74 foram infectadas com GLV-1 h153 e mostrou forte fluorescência verde por dia 7, demonstrando infecção eficaz (ampliação de 100 ×). B. MKN-74 tumores do flanco foram tratados com 2 × 106 partículas virais de VGL-1 h153. fluorescência verde de tumor com o scanner Maestro indica infecção bem sucedida e localização específica do tumor de GLV-1 h153.
Funcionamento h
expressão NIS fotografada pela cintilografia com 99mTc-pertecnetato e 124I PET
Todos MKN-74 xenoenxertos injetados com uma VGL-h153 mostrou localizada acumulação de 99mTc radioactividade nos tumores do flanco enquanto nenhuma acumulação de radioactividade em tumores de controlo (Figura 5A). GLV-1-h153 infectados MKN-74 tumores também facilitou a captação de radioiodo 124I e permitido para a imagiologia por meio de PET (Figura 5B), enquanto que os tumores injectados com PBS não puderam ser visualizados. Figura 5 imagem Nuclear de GLV-1 h153-infectados MKN-74 xenotransplantes. A. 99mTc pertecnetato de varrimento foi realizada 48 horas após a infecção e 3 horas após a administração do radiofármaco. Os tumores tratados com GLV-1 h153 vírus são claramente visualizados (seta). O estômago e da tiróide são vistos devido à expressão natural de NIS, e da bexiga é visto de excreção do radiofármaco. B. axial, coronal e sagital de uma 124I PET imagem 48 horas após GLV-1 h153 injecção mostra sinal reforçada em GLV-1 h153-infectados MKN-74 tumores (seta).
Discussão
O câncer gástrico é a quarta neoplasia maligna mais comum ea segunda causa mais frequente de morte relacionada ao câncer em todo o mundo [1, 14]. Recorrência ou metástases à distância é uma das complicações mais comuns e muitas vezes a causa da morte [15]. Embora a quimioterapia é uma terapia adjuvante útil em comparação com a terapia cirúrgica sozinho, o seu potencial terapêutico é limitado [16]. A maioria dos cancros gástricos são resistentes aos regimes de quimioterapia actualmente disponíveis. Portanto, novos agentes terapêuticos são necessários para melhorar os resultados para pacientes com câncer gástrico que não respondem às terapias convencionais. terapia viral oncolítico é uma abordagem promissora para o tratamento do cancro que depende da capacidade do vírus para infectar, replicar dentro, e lisar uma célula hospedeira [17, 18]. Neste estudo, descrevemos os efeitos citotóxicos de GLV-1 h153, um romance VACV recombinante carregando o h
gene NIS, em células de câncer gástrico in vitro
. Demonstramos ainda que GLV-1 h153-infectados xenotransplantes câncer gástrico expressa funcionando h
proteína NIS que permitiu a imagem não invasivo do tumor e também a regressão do tumor eficiente in vivo
.
Uma variedade de vírus têm revelaram propriedades oncoliticas incluindo adenovírus, vírus do herpes simplex, vírus da doença de Newcastle, vírus da estomatite vesicular, e reovírus [17]. Entre uma variedade de agentes virais oncoliticas, vírus de vaccinia tem várias vantagens. VACV replica exclusivamente no citoplasma sem o uso de máquinas de síntese de ADN do hospedeiro, diminuindo assim o risco de integração do genoma virai no genoma do hospedeiro [10]. Uma grande quantidade de DNA estranho (até 25 kb) podem ser incorporados sem reduzir significativamente a eficiência da replicação viral [19]. Além disso, vaccinia tem sido comprovada para ter um bom perfil de segurança, uma vez que tem sido historicamente dada a milhões durante a vacinação contra a varíola. Isto também demonstra a replicação eficiente e um amplo leque de tropismos de células hospedeiras [10]. Vários estudos pré-clínicos demonstraram que a injecção sistémica de recombinante VACV em xenoenxertos resultaram em elevados títulos virais em apenas tumores, indicando colonização específica de tumores [11, 20, 21]. Há uma pequena preocupação de que os pacientes que receberam a vacinação contra a varíola no passado tem anticorpos neutralizantes contra o vírus. Isto poderia potencialmente resultar na eficácia do tratamento comprometida. No entanto, no sangue, do complemento desempenha um papel mais importante na inactivação VACV do que os anticorpos neutralizantes. Por conseguinte, prever que a presença de anticorpos neutralizadores em pacientes não deve dificultar tratamento VACV; No entanto, uma dose mais elevada de tratamento pode ser necessária. VACVs
geneticamente manipuladas têm mostrado eficácia no tratamento de uma ampla gama de cancros humanos [12]. GLV-1 H168 já mostrou ser um vector de diagnóstico e terapêutico eficaz em diversos modelos de tumores humanos, incluindo tumor de mama, mesotelioma, cancros pancreáticos, e carcinoma de células escamosas [11] A h
proteína NEI, que é uma membrana intrínseca glicoproteína com 13 domínios transmembranares putativos, transporta activamente ambos na + e eu - íons através da membrana celular [22]. Funcionamento h
proteína NIS são capazes de absorver vários rádio-nucleotídeos disponíveis comercialmente, incluindo 123I, 124I, 125I, 131I, 99m e 188Re [22, 23 ]. Neste estudo, a expressão de h
proteína NIS em infectadas MKN-74 xenoenxertos GLV-1-h153 mediada resultou num 99mTc e captação do radiofármaco 124I localizada. Os nossos resultados sugerem que a expressão do gene do NIS h
através vector viral pode ser usada como uma modalidade de imagem não invasiva para monitorar a progressão e tratamento de efeitos tumorais.
Uma injecção intra-tumoral única de uma VGL-h153 em MKN-74 exibiram xenoenxertos GFP intratumoral localizada e h
expressão NIS. Além disso, não houve evidência de disseminação virai a quaisquer outros órgãos com base em imagens de GFP, cintilografia 99mTc, e 124I PET, indicando infecção virai específico do tumor e a actividade. Também demonstramos que GLV-1 h153 é eficaz e segura no tratamento de tumores gástricos em um modelo de xenotransplante murino. A-1-h153 GLV grupo tratado foi continuamente seguidos até 35 dias e não houve novo crescimento do tumor (dados não mostrados entre os dias 28 e 35). O grupo controle tiveram que ser sacrificados de acordo com nosso protocolo de animais aprovado no dia 28. Expressando a h
gene NIS em um tecido de outra forma não-hNIS expressando é emocionante. Ele poderia fazer uso da imagem de iodo radioativo bem estabelecida e terapia em outros não-tireóide originou cancros. Vários estudos têm mostrado resultados promissores em uma variedade de tumores utilizando tratamento com iodo radioactivo através de expressão específico de tumor do gene NIS h
, incluindo carcinoma medular da tiróide [24], o cancro da próstata [25], o cancro do cólon [26], e da mama cancro [27]. h expressão
NIS específico do tumor utilizando um GLV-h153 pode maximizar a acumulação de radioiodo localizada e minimizar a absorção não específica em outros órgãos. Com base em nossos resultados promissores, seria de importância clínica significativa para avaliar o efeito da terapia de combinação de GLV-1 h153 e com iodo radioactivo.
Conclusão
Este estudo demonstra uma novela VACV oncolytic engenharia para expressar o h
NIS pode eficazmente infectar, replicar dentro, e causar a regressão do cancro gástrico num modelo de xenoenxerto de murino. expressão da GFP pode servir como um substituto de infectividade viral. In vivo
, GLV-1 h153 células infectadas podem ser facilmente visualizados com cintilografia 99m e imagem 124I PET. Estes dados fornecem apoio adicional para a futura investigação de GLV-1 h153 como agente de tratamento e uma ferramenta de imagem não-invasiva nos ambientes clínicos
abreviações
VACV:.
Vírus Vaccinia

hNIS:
iodeto de sódio symporter Humano
ATCC:
American Type Culture Collection
RUC-GFP:
Renilla luciferase
-Aequorea
proteína verde fluorescente
LDH:
lactato desidrogenase ()
IACUC:
O Comité de Cuidados e Uso Institucional animal
MSKCC:
Memorial Sloan-Kettering Cancer Center
PFUs:
unidades formadoras de placas
MOI:
multiplicidade de infecção
PET:
Positron tomografia de emissão de

ROI: região de interesse
TRRF:
reversa receptor de transferrina humano inserido
SPECT:.
tomografia computadorizada por emissão de fóton único
Declarações
Agradecimentos
serviços técnicos fornecidos pela Facilidade MSKCC pequeno-animal de imagem core, apoiado em parte pelo NIH pequeno -Animal Programa de Pesquisa em Imagem (SAIRP) Grant Sem R24 CA83084 e NIH Centro de Grant Nenhuma P30 CA08748, está reconhecido agradecimento.
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Não existem concorrentes interesses financeiros para Kyong-Hwa Jun Tae-Jin Song, Sepideh Gholami, Joyce Au, Dana Haddad, Carson Joshua, Chun-Hao Chen, Kelly Mojica, Pat Zanzonico e Yuman Fong. Nanhai G. Chen, Zhang Qian, e Aladar A. Szalay são filiados com Genelux Corporation.
Contribuições dos autores
SG assistida com a escrever-se do manuscrito. TS assistida in vivo no
experiências e contribuíram para o desenho do estudo. JA contribuíram para o ensaio de citotoxicidade. DH contribuiu para o desenvolvimento in vivo
PET e SPECT. JC contribuiu para imagens fluorescentes. CC contribuiu para a análise estatística dos dados. KM contribuíram para o ensaio de replicação virai. PZ contribuiu para o desenho do estudo e experimentos com imagens radioativos. NC e QZ contribuiu para a sequência viral e construção. AS e YF contribuiu para o desenho do estudo e conclusão do manuscrito. Todos os autores leram e aprovaram o manuscrito final.

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