Eine neuartige onkolytischen Virustherapie und Bildgebungstechnik für Magenkrebs einen gentechnisch veränderten Vaccinia-Virus das menschliche Natriumiodid symporter

ein neuartiges onkolytischen Virus-Therapie und Bildgebungstechnik für Magenkrebs mit Durchführung eines gentechnisch veränderten Vaccinia-Virus mit dem menschlichen Natriumiodid Symporter
Zusammenfassung Tragen
Hintergrund
Magenkrebs haben eine schlechte Gesamtüberlebenszeit trotz der jüngsten Fortschritte in der Früherkennung Methoden, endoskopische Resektion Techniken und Chemotherapie-Behandlungen. Vaccinia-Virus-Therapie für verschiedene Krebsarten vielversprechende therapeutische Potenzial hatte und hat eine große Sicherheitsprofil. Wir untersuchten die therapeutische Wirksamkeit eines neuartigen gentechnisch Vacciniavirus das menschliche Natriumiodid Symporter Tragen (h
NIS) -Gen, GLV-1 H153, auf Magenkarzinome und ihre potentielle Verwendbarkeit für die Bildgebung mit 99m Tc-Pertechnetat-Szintigraphie und 124I Positronen-Emissions-Tomographie (PET).
Methoden
GLV-1 H153 gegen fünf menschlichen Linien Magenkrebszellen getestet wurde unter Verwendung von Zytotoxizität und Standard viralen Plaque-Assays. In vivo
wurden subkutane Flankentumoren in Nacktmäusen erzeugt, mit menschlichen Magenkrebszellen, MKN-74. Tumoren wurden anschließend entweder mit GLV-1 H153 oder PBS und anschließend für das Tumorwachstum injiziert. 99m Tc-Pertechnetat Szintigraphie und 124I microPET Bildgebung durchgeführt wurden.
Ergebnisse | GFP-Expression, ein Surrogat für die virale Infektiosität, bestätigte Virusinfektion von 24 Stunden. Bei einer Multiplizität der Infektion (MOI) von 1, 1 GLV-H153 erreicht > 90% Zytotoxizität in MNK-74, OCUM-2MD3 und AGS mehr als 9 Tagen und > 70% Zytotoxizität in MNK- 45 und TMK-1. In vivo
, GLV-1 H153 war wirksam bei der Behandlung von Xenotransplantaten (p < 0,001) nach 2 Wochen der Behandlung. GLV-1 H153-infizierten Tumoren wurden durch leicht abgebildet 99m Tc-Pertechnetat Szintigraphie und 124I microPET Bildgebung 2 Tage nach der Behandlung.
Schlussfolgerungen
GLV-1 H153 ist ein wirksames onkolytischen Virus Expression der h
NIS-Protein, das Magentumoren effizient regredieren und tiefen Gewebe-Bildgebung ermöglichen. Diese Daten ermutigt seine weitere Untersuchung im klinischen Umfeld.
Schlüsselwörter onkolytischen Virus-Therapie GLV-1 H153 Magenkrebs Menschliches Natriumiodid Symporter (h
NIS) hintergrund und Magenkrebs ist eine der am weitesten verbreiteten bösartigen Tumoren, insbesondere in Asien [1]. Obwohl die Früherkennung Methoden, die Entwicklung der endoskopischen oder chirurgischen Resektion und effektiver Chemotherapien die Gesamtüberlebenszeit bei Patienten mit Magenkrebs verbessert haben, ist die Prognose von Patienten mit fortgeschrittenem Magenkrebs immer noch arm [2-4]. Die meisten herkömmlichen Chemotherapie-Behandlungen haben moderate Effizienz unter Beweis gestellt. Eine mögliche Erklärung für den Widerstand von Magenkrebs zu herkömmlichen Therapie könnte seine nicht-Anfälligkeit gegenüber Apoptose ist [5]. onkolytischen Viren haben jedoch große therapeutische Wirkung gegen Krebszellen, die ein hohes Maß an Ribonukleotidreduktase exprimieren, DNA-Reparaturenzyme und sind somit resistent gegen Apoptose [6, 7]. Viele dieser Eigenschaften, die Magenkrebszellen resistent gegen eine Chemotherapie machen, machen sie anfällig für onkolytische Virus-Therapie. So Gentherapie onkolytischen Virus bietet im vergangenen Jahrhundert eine attraktive Alternative für die Behandlung von Magenkrebs [8].
Onkolytischen Virus-Therapie untersucht wurde und Erfolg in der präklinischen und klinischen Tests als neuartige Modalität der Krebsbehandlung unter Verwendung gezeigt [9 ]. Vaccinia-Virus (VACV) Stämme sind besonders attraktiv als potentielle Antitumormittel, wie sie ihre Replikation ohne Verringerung der Effizienz große Mengen an Fremd-DNA aufnehmen kann. Darüber hinaus hat VACV ein großes Sicherheitsprofil beim Menschen gezeigt [10-12]. Schließlich zusätzlich zu seinem therapeutischen Potential hat VACV auch als eine nicht-invasive Abbildungstechnik verwendet worden, so dass Kliniker therapeutischen Genabgabe in dem Körper [10, 13] zu verfolgen.
In dieser Veröffentlichung untersuchten wir die therapeutische Potenzial eines neuartigen VACV Expression des menschlichen Natriumiodid Symporter (h
NIS), GLV-1 H153, gegen Magenkrebs in vitro und in vivo

und getestet sein Potenzial als Imaging-Tool.
Materialien und Methoden
Zelllinien
menschliche Magenkrebs AGS-Zellen (eine Adenokarzinom des Magens epithelialen Zelllinie) wurden von der American Type Culture Collection (ATCC; Manassas, VA) und wurden in Ham F-12-K Medium. Menschliche OCUM-2MD3 Zellen waren ein Geschenk von Dr. Masakazu Yashiro (Osaka City University Medical School, Japan) und wurden in Dulbeccos modifiziertem Eagle-Medium (DMEM) gezüchtet. MKN-74 und TMK-1-Zellen wurden von Dr. T. Suzuki (Fukushima Medical College, Japan) zur Verfügung gestellt und wurden in Roswell Park Memorial Institute (RPMI) kultiviert. MKN-45 wurde als Geschenk von Dr. Yutaka Yonemura (Kanazawa University, Japan) erhalten und wurde in RPMI gehalten. Afrikanischen grünen Affen-Nieren-Fibroblasten (Cercopithecus aethiops
; CV-1-Zellen) für die virale Plaque-Assays verwendet wurden von ATCC (Manassas, VA) erworben und im Minimum Essential Medium (MEM) gezüchtet. Alle Medien wurden mit 10% FBS, 1% Penicillin und 1% Streptomycin.
Virus ergänzt
GLV-1 H153 ist ein Replikations-kompetente, rekombinante Vaccinia-Virus von seinem Elternstamm abgeleitet, GLV-1 H68, über homologe Rekombination. Es enthält vier Kassetten eingeführt Renilla Aequorea
Luciferase green fluorescent protein (RUC-GFP) Fusionsprotein kodiert, ein in umgekehrter Richtung eingefügt menschlichen Transferrin-Rezeptor (RTFR
), β-Galactosidase, und die menschliche Natriumiodid Symporter (h
NIS) in den F14.5
, J2R
(kodierend Thymidinkinase) und A56R
(Codierung Hämagglutinin) loci des viralen genome.GLV-1 H153 von Genelux Corporation (R &Verfügung gestellt wurde; D Anlage in San Diego, CA, USA).
Zytotoxizitätstest
4 x 10 4 Zellen pro Vertiefung von jeder Zelllinie in 12-Well-Platten plattiert und in einem 5% CO inkubiert 2 über Nacht bei 37 ° C befeuchteten Inkubator. GLV-1 H153 wurde bei variierenden Multiplizität der Infektion (MOI) von 0,01, 0,1 und 1,0 in jede Vertiefung gegeben. Viraler Cytotoxizität wurde unter Verwendung einer Lactat-Dehydrogenase (LDH) -Assay täglich getestet. Zellen wurden einmal mit PBS gewaschen und dann mit 1,35% Triton X-100 (Sigma, St. Louis, MO) lysiert. Die intrazellulären LDH-Freisetzung nach Lyse wurde anschließend mit CytoTox 96® (Promega, Madison, WI) auf einem Spektralphotometer (EL321e, Bio- Tek Instruments) bei 490 nm gemessen. Die Ergebnisse sind als Prozentsatz der überlebenden Zellen exprimiert wird, die als die LDH-Freisetzung von infizierten Proben im Vergleich zu nicht-infizierten Kontrolle berechnet. Alle Bedingungen wurden dreifach getestet.
Die virale Replikation Test
Überstände aus jeder Vertiefung infiziert wurden täglich gesammelt und sofort bei -80 ° C eingefroren. Serielle Verdünnungen aller Überstand-Proben wurden aus Standard viralen Plaque-Assays auf konfluente CV-1-Zellen durchzuführen. Alle Proben wurden in dreifacher Ausführung gemessen.
In vivo
murine Flanke Tumortherapie
Alle Tierversuche wurden im Rahmen von genehmigten Protokollen und entsprechend durchgeführt mit ethischen Richtlinien der Institutional Animal Care und Use Committee (IACUC) am Memorial Sloan -Kettering Cancer Center (MSKCC). MKN-74-Xenotransplantate wurden in 6- bis 8-Wochen alten weiblichen Nacktmäusen (NCI: Hsd: athymischen Nackt-nu, Harlan) wurde durch subkutane Injektion von 5 x 10 6 MKN-74-Zellen in die rechte Flanke. Das Tumorwachstum wurde aufgezeichnet zweimal pro Woche ein digitales Kaliber und das Tumorvolumen wurde unter Verwendung der folgenden Gleichung berechnet unter Verwendung eines
× b
2 × 0,5, in dem ein
und b Was sind die größten und dem kleinsten Durchmesser, respectively. Wenn die Tumoren einen Durchmesser von etwa 6-8 mm in 10 Tagen erreicht wird, wurden die Tiere in Kontroll- und Behandlungsgruppen mit ausgewogenen Tumorgrößen gruppiert. Eine Einzeldosis von 2 × 10 6 plaquebildenden Einheiten (PFU) der GLV-1 H153 in 100 ul PBS oder 100 ul PBS als Kontrolle wurden intratumoral zu jedem Bestimmungs Tumor injiziert. Die Tiere wurden täglich auf Anzeichen von Toxizität beobachtet und getötet, wenn ihre Tumoren mit einem Durchmesser von ca. 15 mm erreicht.
Fluorescent Imaging (Maestro)
In vivo
GFP Bilder wurden unter Verwendung des CRi Maestro-System erhalten (Cambridge Forschung und Instrumentierung, Woburn, MA) unter Verwendung der entsprechenden Filter (Anregung = 445-490 nm, Emission = 515 nm lang~~POS=TRUNC, Erfassung Einstellungen = 500-720 in 10 nm). Nach jedem Bild erhalten wurde, war es spektral ungemischten die Hintergrundfluoreszenz zu entfernen. Die Bilder wurden mit Region of Interest (ROI) Analyse-Software quantifiziert, die mit dem Maestro-System geliefert wird.
In vivo
Single-Photon-Emissions-Computertomographie SPECT-Bildgebung
Fünf MKN-74 Xenotransplantate intratumoral mit 2 x 10 injiziert wurden, 7 PFU GLV-1 H153 und 5 mit PBS als Kontrolle. Zwei Tage nach der Infektion wurden 200 &mgr; Ci 99mTc-Pertechnetat wurde über die Schwanzvene injiziert. 99mTc Pertechnetat Bilder wurden über 10 Minuten erhalten, 3 Stunden nach der Verabreichung Radiotracer. Imaging wurde mit der Dual-Detektor-Gammakamerauntersystem der X-SPECT Kleintier-SPECT-CT-System durchgeführt (Gamma Medica, Northridge, CA). Die X-SPECT γ-Kamerasystem wurde durch Abbilden eines Maus-size (30 ml) Zylinder gefüllt mit einer gemessenen Konzentration (MBq /ml) von kalibrierten 99mTc eine Photospitze Energiefenster von 126 bis 154 keV und Niedrigenergie hochauflösende Kollimation. Die sich daraus ergebenden 99mTc Bilder wurden auf Interfile exportiert und dann importiert in die ASIPro (Siemens Präklinische Solutions, Knoxville, TN) Bildverarbeitungs-Software-Umgebung. Durch die ROI-Analyse wurde ein Systemkalibrierungsfaktor (in cpm /Pixel pro MBq /ml) abgeleitet. Tierbilder wurden ebenfalls Interfile exportiert und dann in ASIPro importiert und parametrisiert in Bezug auf die Zerfallskorrigierten Prozentsatz der injizierten Dosis pro Gramm (% ID /g) auf der Basis der vorstehenden Kalibrierungsfaktor, der verabreichten Aktivität, die Zeit nach der Verabreichung von Bildgebungs, und die Bilddauer.
In vivo
PET-Bildgebung
Drei MKN-74-Xenotransplantaten injiziert wurden intratumoral mit 2 x 10 7 PFU GLV-1 H153 und zwei mit PBS. Zwei Tage nach der viralen Injektion von 300 &mgr; Ci 124I wurde über die Schwanzvene Injektion verabreicht. Eine Stunde nach der Verabreichung Radiotracer, 3-dimensionale list-Modus-Daten wurden mit einem Energiefenster von 350 bis 700 keV erworben, und ein Zufall Zeitfenster von 6 ns. Imaging wurde mit einem Fokus 120 microPET gewidmet Kleintier-PET-Scanner (Concorde Microsystems Inc, Knoxville, TN) durchgeführt. Diese Daten wurden in 2-dimensionalen Fourier-Histogramme durch Rebinning sortiert. Die Zählraten in den rekonstruierten Bildern zu Aktivitätskonzentration umgewandelt wurden (% ID /g) ein System Kalibrierungsfaktor (MBq /ml pro cps /Voxel), abgeleitet aus Abbildung einer Maus Größe Phantom mit einer einheitlichen wässrigen Lösung von gefüllt mit 18F. Die Bildanalyse wurde mit ASIPro ausgeführt
statistische Analyse
Signifikante Unterschiede zwischen den Gruppen wurden bestimmt unter Verwendung von Student t
Test (Excel 2007, Microsoft, Redmond, WA, USA).. Ein p-Wert < 0,05 wurde als signifikant betrachtet.
Ergebnisse | Zytotoxizitätstest für alle fünf menschlichen Magenkrebszelllinien waren anfällig durch GLV-1 H153 (Abbildung 1) zu Onkolyse. Der MKN-74, OCUM-2MD3 und AGS-Zelllinien waren empfindlicher gegenüber viralen Lyse im Vergleich zu MKN-45 und TMK-1-Zellen. Alle Zelllinien zeigten eine dosisabhängige Reaktion, mit mehr und schnellere Zellabtötung bei höheren MOIs. In MKN-74, OCUM-2MD3, und AGS-Zelllinien, mehr als 90% der Zellen wurden bis zum Tag 9 bei einer MOI von 1. Der MKN-74-Zelllinie besonders anfällig für virale Onkolyse, mit mehr als 77% war getötet Zellabtötung von Tag 9 auf dem niedrigsten MOI von 0,01. Figur 1 Zytotoxizität von GLV-1 H153 gegen 5 menschlichen Magenkrebszelllinien in vitro. Alle Zelllinien nachhaltig signifikante Zytotoxizität bei einer MOI von 1, waren drei Zelllinien empfindlich bei einer MOI von 0,1 und zwei Zelllinien zeigten eine vorzügliche Empfindlichkeit gegen GLV-1 H153 selbst bei der niedrigsten MOI von 0,01.
Die virale Replikation
Standard viralen Plaque-Assays demonstriert effiziente virale Replikation von GLV-1 H153 in allen Magenkrebszelllinien bei einer MOI von 1 (Abbildung 2). MKN-74 zeigte die höchste virale Titer mit einem Peak-Titer von 1,06 x 10 6 PFU pro Vertiefung, eine 26-fache Erhöhung von Initialdosis von Tag 7 Abbildung 2 In-vitro-Quantifizierung der viralen Replikation durch GLV-1 H153 in menschlichen Magenkrebszelllinien. Das Virus wurde aus den Vertiefungen von Zellen gesammelt bei einer MOI von 1. Viral Plaque-Assays zeigten eine effiziente virale Replikation in allen fünf Zelllinien, die höchste Virusvermehrung zu erreichen (1,06 × 106 viralen Plaque-bildenden Einheiten von Tag 7) in der Zelllinie MKN-74, die eine 26-fache Erhöhung von seiner anfänglichen Dosis darstellt.
in vivo
murine Xenotransplantaten Therapie mit GLV-1 H153
Um die zytolytische Wirkung von GLV-1 H153 in vivo
, tragenden Mäusen wurden MKN-74-Xenotransplantaten mit einer Einzeldosis von intratumoralen Injektion von GLV-1 H153 oder PBS behandelt. Die behandelten Tumoren zeigten nachhaltige /kontinuierliche Tumorregression über einen Zeitraum von vier Wochen. Am Tag 28 war die mittlere Tumorvolumen der Behandlungsgruppe 221,6 mm 3 (Abbildung 3). Ein Tier zeigte eine komplette Tumorregression. Im Gegensatz dazu weiterhin alle Steuer Tumoren mit einem mittleren Volumen von 1073,2 mm wachsen 3 bis zum Tag 28 (t
-test, Vergleichen Behandlungs- und Kontrollgruppe am Tag 28, p < 0,001). Es gab keine signifikante Veränderung des Körpergewichts in jeder Gruppe, und keine Morbidität oder Mortalität im Zusammenhang mit GLV-1 H153 Behandlung beobachtet wurde. Abbildung 3 GLV-1 H153 unterdrückt MKN-74 Tumorwachstum. 2 × 106 Viruspartikel von GLV-1 H153 oder PBS wurden intratumoral in Nacktmäusen, die subkutane Flanke Tumoren von MKN-74 injiziert. Hemmung des Tumorwachstums aufgrund der Behandlung mit GLV-1 H153 begann am Tag 15 (p < 0,001). Tumorvolumina gezeigt stellen Mittelvolumina von 5 Mäusen in jeder Behandlungsgruppe.
In vitro und in vivo

GFP-Expression
GFP-Expression wurde 1 durch Fluoreszenzmikroskopie überwacht, 3, 5, 7 und 9 Tage nach der viralen Infektion bei einer MOI von 1,0. Die meisten MKN-74-Zellen wurden infiziert und exprimiert GFP von Tag 7 (4A). In vivo kann
GFP-Signal nur an der mit GLV-1 H153 (4B) injiziert Xenotransplantat nachgewiesen werden. Figur 4 Green fluorescent protein (GFP) Expression von MKN-74 in vitro und in vivo. A. MKN-74-Zellen wurden mit GLV-1 H153 infiziert und zeigten eine starke grüne Fluoreszenz von Tag 7, demonstriert effektive Infektion (Vergrößerung 100 ×). B. MKN-74 Flanke Tumoren wurden mit 2 × 106 Viruspartikel von GLV-1 H153 behandelt. Grüne Fluoreszenz des Tumors mit dem Maestro-Scanner zeigt die erfolgreiche Infektion und tumorspezifische Lokalisation von GLV-1 H153.
H Funktionsweise
NIS abgebildet Ausdruck von 99m Tc-Pertechnetat Szintigraphie und 124I PET alle länder MKN-74-Xenotransplantaten injiziert mit GLV-1 H153 zeigte lokalisierte Ansammlung von 99m Tc Radioaktivität in den Flankentumoren, während keine Radioaktivität Kumulierung in Kontrolltumoren (5A). GLV-1-infizierten H153 MKN-74 Tumoren ebenfalls erleichtert 124I Radiojod-Aufnahme und für die Bildgebung durch PET (5B) erlaubt, während die PBS-injizierten Tumoren nicht sichtbar gemacht werden konnten. Abbildung 5 Nuclear Imaging von GLV-1 H153-infizierten MKN-74 Xenotransplantate. A. 99mTc-Pertechnetat Scannen wurde 48 Stunden nach der Infektion durchgeführt, und 3 Stunden nach der Verabreichung Radiotracer. Tumore behandelt mit GLV-1 H153 Virus sind klar sichtbar (Pfeil). Der Magen und der Schilddrüse sind aufgrund nativen Expression von NIS zu sehen ist, und die Blase aus der Ausscheidung der Radiotracer gesehen. B. Axial, koronalen und sagittalen Ansichten eines 124I PET-Bild 48 Stunden nach der GLV-1 H153 Injektion zeigt verstärktes Signal in GLV-1 H153-infizierten MKN-74-Tumoren (Pfeil).
Diskussion
Magenkrebs ist die vierthäufigste Krebserkrankung und die zweithäufigste Ursache von Krebs-Todesfälle weltweit [1, 14]. Rezidiv oder Fernmetastasen ist eine der häufigsten Komplikationen und oft die Todesursache [15]. Während der Chemotherapie eine nützliche adjuvante Therapie im Vergleich zur chirurgischen Therapie allein ist, wird ihr therapeutisches Potential beschränkt [16]. Die meisten sind Magenkrebs zu den derzeit verfügbaren Chemotherapien resistent. Daher werden neue therapeutische Mittel benötigt Ergebnisse für Magenkrebs-Patienten zu verbessern, die auf herkömmliche Therapien nicht ansprechen. Onkolytischen Virus-Therapie ist ein vielversprechender Ansatz in der Krebsbehandlung, die auf die Fähigkeit der Viren, hängt zu infizieren, darin replizieren und lysieren einer Wirtszelle [17, 18]. In dieser Studie beschrieben wir die zytotoxische Wirkung von GLV-1 H153, ein neues rekombinantes VACV die h
NIS-Gen, auf die Magenkrebszellen in vitro
trägt. Wir haben gezeigt, weiter, dass GLV-1 H153-infizierten Magenkrebs Xenotransplantate funktioniert h
NIS-Protein exprimiert, die für die nicht-invasive Bildgebung des Tumors und auch eine effiziente Tumorregression in vivo
erlaubt.
Eine Vielzahl von Viren gezeigt onkolytische Eigenschaften, einschließlich Adenovirus, Herpes simplex-Virus, Newcastle-Krankheit-Virus, vesikuläre Stomatitis-Virus und Reovirus [17]. Unter einer Vielzahl von onkolytischen viralen Mitteln, hat Vacciniavirus mehrere Vorteile. VACV repliziert ausschließlich im Zytoplasma ohne die DNA-Synthesemaschinerie des Wirts verwendet, wodurch das Risiko der Integration des viralen Genoms in das Wirtsgenom Absenken [10]. Eine große Menge von Fremd-DNA (bis zu 25 kb) können, ohne die virale Replikation eingebaut werden Effizienz verringert [19]. Darüber hinaus hat sich bewährt Vaccinia ein gutes Sicherheitsprofil zu haben, wie es historisch zu Millionen während der Pockenimpfung gegeben wurde. Es zeigt auch eine effiziente Replikation und ein breites Spektrum an Wirtszelle Tropismen [10]. Mehrere präklinische Studien haben gezeigt, dass eine systemische Injektion von rekombinantem VACV in Xenotransplantaten in hoher Virustiter in Tumoren nur in Folge gezeigt, was darauf hinweist tumorspezifische Kolonisation [11, 20, 21]. Es gibt eine kleine Sorge, dass Patienten, die Pockenimpfung in der Vergangenheit gegen das Virus neutralisierende Antikörper haben erhalten haben. Dies könnte in kompromittierten die Wirksamkeit der Behandlung möglicherweise dazu führen. Doch im Blut, Ergänzung spielt eine wichtigere Rolle als VACV neutralisierende Antikörper bei der Inaktivierung. Wir sagen voraus, daher, dass das Vorhandensein von neutralisierenden Antikörpern in Patienten, die nicht VACV Behandlung behindern sollten; jedoch könnte eine höhere Behandlungsdosis erforderlich.
Genetically engineered VACVs zeigten Wirksamkeit bei der Behandlung einer Vielzahl von menschlichen Krebserkrankungen [12]. GLV-1 H168 hat bereits gezeigt, dass eine effektive diagnostische und therapeutische Vektor in verschiedenen humanen Tumormodellen zu sein, einschließlich Brusttumor, Mesotheliom, Bauchspeicheldrüsenkrebs und Plattenepithelkarzinomen [11] h
NIS-Protein, das eine intrinsische Membran Glycoprotein mit 13 mutmaßlichen Transmembrandomänen, aktiv sowohl Na transportiert + und I - Ionen durch die Zellmembran [22]. Funktionierende h
NIS-Protein kann mehrere kommerziell erhältliche Radio Nukleotide, einschließlich 123I, 124I, 125I, 131I, 99m Tc und 188 Re [22, 23 Aufnahme ]. In dieser Studie GLV-1 H153-vermittelte Expression von h
NIS-Protein in infizierten MKN-74 Xenotransplantate führte zu einer lokalisierten 99m Tc und 124I Radiotracer-Aufnahme. Unsere Ergebnisse legen nahe, dass h
NIS-Genexpression mittels viraler Vektor kann als nicht-invasive Bildgebungsverfahren verwendet werden, Tumorprogression und Behandlungswirkungen zu überwachen.
Eine einzige intratumorale Injektion von GLV-1 H153 in MKN-74 Xenotransplantate ausgestellt lokalisierte intratumorale GFP und h
NIS-Expression. Außerdem gab es keine Anzeichen für die Ausbreitung des Virus auf andere Organe auf Basis von GFP-Bildgebung, 99mTc Szintigraphie und 124I PET, was darauf hinweist Tumor-spezifische Virusinfektion und Aktivität. Wir zeigten auch, dass GLV-1 H153 ist wirksam und sicher in Magentumoren in einem murinen Xenograftmodell behandeln. Das GLV-1 H153-behandelten Gruppe wurde anschließend kontinuierlich bis 35 Tage, und es gab kein Tumor Nachwachsen (Daten nicht zwischen Tag 28 und 35 gezeigt). Die Kontrollgruppe musste 28 in Übereinstimmung zu unserem genehmigten Tier Protokoll am Tag geopfert werden, um die h
NIS-Gens in einer ansonsten nicht-hNIS-exprimierenden Gewebe exprimiert, wird spannend. Es könnte möglicherweise entstanden Krebsarten Verwendung des etablierten Radiojod-Bildgebung und Therapie in anderen nicht-Schilddrüse machen. Mehrere Studien haben vielversprechende Ergebnisse in einer Vielzahl von Tumoren unter Verwendung von Radiojod-Behandlung über tumorspezifische Expression des NIS-Gens h
, gezeigt einschließlich medulläre Schilddrüsenkarzinom [24], Prostatakrebs [25], Kolonkrebs [26], und der Brust Krebs [27]. Tumorspezifische h
NIS-Expression unter Verwendung von GLV-1 H153 können lokalisierte Radiojod Akkumulations maximieren und nicht-spezifische Aufnahme in andere Organe zu minimieren. Auf der Grundlage unserer vielversprechenden Ergebnisse, würde es eine signifikante klinische Bedeutung sein, die Wirkung der Kombinationstherapie von GLV-1 H153 und Radiojod zu bewerten.
Fazit
Diese Studie zeigt einen neuartigen onkolytischen VACV entwickelt, um die h
auszudrücken NIS kann innerhalb, effektiv infizieren, replizieren und Regression von Magenkrebs in einem murinen Xenograftmodell verursachen. GFP-Expression als Surrogat der viralen Infektiosität dienen. In vivo
, GLV-1 H153 infizierten Zellen können leicht mit 99mTc Szintigraphie und 124I PET-Bildgebung abgebildet werden. Diese Daten bieten weitere Unterstützung für die künftige Untersuchung von GLV-1 H153 als Behandlungsmittel und einem nicht-invasive Bildgebungs Werkzeug in den klinischen Einstellungen
Abkürzungen
VACV.
Vaccinia-Virus

hNIS:
Menschen Natriumiodid Symporter
ATCC:
American Type Culture Collection
RUC-GFP:
Renilla
Luciferase-Aequorea und grün fluoreszierende Protein
LDH:
Laktat-Dehydrogenase ()
IACUC:
Die Institutional Animal Care und Use Committee
MSKCC:
Memorial Sloan-Kettering Cancer Center
PFU:
Plaque-bildenden Einheiten
MOI:
Multiplizität der Infektion
PET:
Positronen-Emissions-Tomographie

ROI:
Region von Interesse
RTFR:
Rückwärts eingefügt menschlichen Transferrin-Rezeptor
SPECT.
Einzel-Photonen-Emissions-Computertomographie
Erklärungen
Danksagung
Technische Dienstleistungen, die von der MSKCC Kleintier-Imaging Core Facility, unterstützt teilweise durch NIH Klein zur Verfügung gestellt -Animal Imaging Research Program (SAIRP) Zuschuss Kein R24 CA83084 und NIH-Center Grant No. P30 CA08748 sind dankbar anerkannt.
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keine konkurrierenden finanziellen Interessen bestehen für Kyong-Hwa Juni, Tae-Jin Song Sepideh Gholami, Joyce Au, Dana Haddad, Carson Joshua, Chun-Hao Chen, Kelly Mojica, Pat Zanzonico und Yuman Fong. Nanhai G. Chen, Qian Zhang und Aladar A. Szalay mit Genelux Gesellschaft assoziiert.
Beiträge der Autoren mit dem Schreib aus dem Manuskript
SG unterstützt. TS in den
Experimenten in vivo unterstützt und dem Studiendesign beigetragen. JA trug zur Zytotoxizitätstest. DH trug zur in vivo
PET und SPECT-Bildgebung. JC trug zur Fluoreszenz-Bildgebung. CC trugen zur statistischen Analyse der Daten. KM trugen zu dem viralen Replikationstest. PZ trugen zum Studiendesign und radioaktive Bildgebung Experimente. NC und QZ trugen zur Virussequenz und Konstrukt. AS und YF trugen zum Studiendesign und die Fertigstellung des Manuskripts. Alle Autoren gelesen und genehmigt haben das endgültige Manuskript.

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