Romaani onkolyyttinen viruslääkkeitä ja kuvantamismenetelmä mahasyövän käyttäen geneettisesti vacciniavirus kuljettaa ihmisen natriumjodidin symporter

Romaani onkolyyttisten viruslääkkeitä ja kuvantamismenetelmä mahasyövän käyttäen geneettisesti vacciniavirus kuljettaa ihmisen natriumjodidin symporter
Abstract
Taustaa
mahasyövistä huono eloonjäämiseen huolimatta viimeaikaisista edistysaskeleista varhaisen toteamisen menetelmiin, endoskooppinen resektio tekniikoita, ja kemoterapia. Vaccinia virus hoito on ollut lupaavia terapeuttisia mahdollisuuksia erilaisten syöpien ja on suuri turvallisuusprofiili. Olemme tutkineet terapeuttinen teho uudenlainen geenitekniikalla vacciniavirus kuljettaa ihmisen natriumjodidia symporter (h
NIS) geeni, GLV-1 h153, mahalaukun syöpiin ja sen mahdollisuuksia apuohjelma kuvantamisen 99m Perteknetaatin gammakuvaus ja 124I positroniemissiotomografia (PET). Tool menetelmät
GLV-1 h153 testattiin viiden ihmisen mahasyövän solulinjoissa käyttäen sytotoksisuuden ja tavallinen virusplakkimuodos- määrityksissä. In vivo
, ihonalainen kylki kasvaimia tuotettiin nude-hiirissä ihmisen mahalaukun syöpäsoluja, MKN-74. Kasvaimet jälkeen injektoitiin joko GLV-1 h153 tai PBS ja seurattiin kasvaimen kasvua. 99m Perteknetaatin gammakuvaus ja 124I microPET kuvantaminen tehtiin.
Tulokset
GFP: n ilmentymisen, korvike virusinfektiivisyydelle, vahvistettu virusinfektio 24 tuntia. Tällä infektiokertoimella (MOI) 1, GLV-1 h153 saavutettu > 90% sytotoksisuuden MNK-74, OCUM-2MD3, ja AGS yli 9 päivää, ja > 70% sytotoksisuuden MNK- 45 ja TMK-1. In vivo
, GLV-1 h153 on tehokas hoidettaessa ksenografteissa (p < 0,001) sen jälkeen, kun 2 viikkoa hoidon. GLV-1 h153-tartunnan kasvaimia helposti kuvantaa 99m Perteknetaatin gammakuvaus ja 124I microPET kuvantaminen 2 päivää sen jälkeen hoidon.
Johtopäätökset
GLV-1 h153 on tehokas onkolyyttisten virus ilmaisemiseen h
NIS proteiini, joka voi tehokkaasti taantua mahalaukun kasvaimet ja mahdollistaa syvälle kudokseen kuvantaminen. Nämä tiedot kannustaa jatkuvasti tutkimuksen kliinisissä.
Avainsanat
Onkolyyttiset viruslääkkeitä GLV-1 h153 Mahasyöpää Human natriumjodidia symporter (h
NIS) Tausta
Mahalaukun syöpä on yksi yleisin pahanlaatuinen kasvaimia, erityisesti Aasiassa [1]. Vaikka varhainen havaitseminen menetelmiä, kehittäminen endoskoopeille tai kirurgiset resektio, ja tehokkaampia chemotherapies ovat parantaneet selviytymistä potilailla, joilla on mahalaukun syövän, ennuste potilaita, joilla on edennyt mahasyöpä on edelleen heikko [2-4]. Useimmat perinteiset kemoterapia ovat osoittaneet kohtalaista tehokkuutta. Yksi mahdollinen selitys vastus mahasyövän tavanomaiseen hoitoon, saattaa olla ei-alttius apoptoosiin [5]. Kuitenkin onkolyyttisten viruksilla on suuri terapeuttinen vaikutus syöpäsoluja vastaan, jotka ilmentävät korkeita ribonukleotidireduktaasin, DNA-korjaus- entsyymejä, ja ne ovat näin ollen vastustuskykyisiä apoptoosin [6, 7]. Monet näistä ominaisuuksista, jotka tekevät mahasyövän solujen resistenttejä kemoterapiaa, jotta ne alttiita onkolyyttistä viruslääkkeitä. Siten geeniterapia käyttäen onkolyyttisten virus tarjoaa houkuttelevan vaihtoehdon hoitoon mahasyövän [8].
Onkolyyttiset viruslääkkeitä on tutkittu viime vuosisadalla ja osoittaneet menestystä prekliinisen ja kliinisen testauksen uusina syövän hoitomuoto [9 ]. Vacciniaviruksen (VACV) kannat ovat erityisen houkuttelevia potentiaalisina antituumoriaineina, koska ne voivat sisällyttää suuria määriä vieraan DNA heikentämättä niiden replikointi tehokkuutta. Lisäksi VACV on osoittanut suurta turvallisuusprofiili ihmisellä [10-12]. Lopuksi lisäksi sen terapeuttista potentiaalia, VACV on myös käytetty noninvasive kuvantamismenetelmä avulla kliinikot seurata terapeuttisen geenin toimitus kehossa [10, 13].
Tässä julkaisussa tutkimme terapeuttista potentiaalia uutta VACV ilmentää ihmisen natriumjodidia symporter (h
NIS), GLV-1 h153, vastaan ​​mahasyövistä in vitro
ja in vivo
, ja testataan sen mahdollisuudet kuin kuvantamisen väline.
Materiaalit ja menetelmät
Solulinjat
Ihmisen mahalaukun syövän AGS-soluja (mahan adenokarsinooman epiteelisolulinja) saatiin American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA), ja niitä viljeltiin Hamin F-12-K Medium. Ihmisen OCUM-2MD3 solut olivat lahja tri Masakazu Yashiro (Osaka City University Medical School, Japani) ja kasvatettiin Dulbeccon modifioitu Eaglen väliaine (DMEM). MKN-74 ja TMK-1-solut saatiin Dr. T. Suzuki (Fukushima Medical College, Japani) ja viljeltiin Roswell Park Memorial Institute (RPMI). MKN-45 saatiin lahjana tri Yutaka Yonemura (Kanazawa University, Japani) ja pidettiin RPMI. Afrikkalainen vihreä apinan munuaisen fibroblastien (Cercopithecus aethiops
, CV-1) käytetyt solut viruksen plakkikokeet hankittiin ATCC (Manassas, VA) ja viljellään Minimum Essential Medium (MEM). Kaikki alustat täydennettiin 10% FBS: ää, 1% penisilliiniä ja 1% streptomysiiniä.
Virus
GLV-1 h153 on replikaatiokompetentin, rekombinantti vaccinia-virus on peräisin sen emokannan, GLV-1 H68 kautta homologista rekombinaatiota. Se sisältää neljä asetettu kasetit koodaavat Renillaa Aequorea
luciferase- vihreän fluoresoivan proteiinin (RUC-GFP) fuusioproteiinia, käänteisesti asetettu ihmisen transferriinireseptori (rTfr
), β-galaktosidaasi, ja ihmisen natriumjodidia symporter (h
NIS) osaksi F14.5
, J2R
(koodaa tymidiinikinaasia), ja A56R
(koodaus hemagglutiniini) lokusten viruksen genome.GLV-1 h153 saatiin Genelux Corporation (R &D laitos San Diego, CA, USA).
Sytotoksisuusmääritvs
4 × 10 4 solua kuoppaa kustakin solulinjasta maljattiin 12-kuoppalevyille ja inkuboitiin 5% CO 2 kostutetussa inkubaattorissa 37 ° C: ssa yön yli. GLV-1 h153 lisättiin kuhunkin kuoppaan vaihtelevina infektion monikerralla (MÕIS) 0,01, 0,1 ja 1,0. Viral sytotoksisuus testattiin käyttäen laktaattidehydrogenaasin (LDH) määritys päivittäin. Solut pestiin kerran PBS-liuoksella, ja sitten lyysattiin 1,35% Triton X-100 (Sigma, St. Louis, MO). Solunsisäinen LDH: n vapautuminen seuraava hajoaminen jälkeen mitattiin CytoTox 96® (Promega, Madison, WI) spektrofotometrillä (EL321e, Bio- Tek Instruments) 490 nm. Tulokset ilmaistaan ​​prosentteina eloonjääneiden solujen, jotka laskettiin LDH: n vapautuminen sairastuneiden näytteiden verrattuna infektoimattomiin valvontaa. Kaikki ehdot testattiin kolmena rinnakkaisena.
Virusreplikaatio määritys
Supernatantit kustakin tartunnan ja kerättiin päivittäin ja ne pakastettiin välittömästi -80 ° C: ssa. Laimennussarjoja kaikkien supernatantin näytteistä tehtiin standardiohjaintehtäviä virusplakkimuodos- määrityksiä konfluentteja CV-1-soluissa. Kaikki näytteet mitattiin kolmena rinnakkaisena.
In vivo
hiiren kylkeen tuumoriterapian
Kaikki eläinkokeet suoritettiin alle hyväksyttyjen käytäntöjen mukaisesti ja eettisten ohjeiden institutionaalisten Animal Care ja Käytä komitea (IACUC) Memorial Sloan -Kettering Cancer Center (MSKCC). MKN-74 -ksenografteja perustettiin 6- 8-viikkoisen naaras-nude-hiirten (NCI: Hsd: Kateenkorvattomia Nude-nu, Harlan) mukaan ihonalaisesti ruiskuttamalla 5 x 10 6 MKN-74 solujen oikeaan kylkeen. Kasvaimen kasvu oli kaksi kertaa viikossa käyttämällä digitaalista kaliiperi ja kasvaimen tilavuus laskettiin käyttäen yhtälöä, joka on
x b
2 x 0,5, jossa
ja b
ovat suurimmat ja pienin halkaisijat vastaavasti. Kun kasvaimet olivat saavuttaneet halkaisija on noin 6-8 mm 10 päivää, eläimet ryhmiteltiin ohjaus ja hoitoryhmien oikeudenmukaisen kasvaimen kokoa. Kerta-annos 2 x 10 6 plakkia muodostavaa yksikköä (PFU) ja GLV-1 h153 100 ul PBS: ää tai 100 ui PBS: ää kontrollina injektoitiin kasvaimen kullekin nimetylle kasvain. Eläimiä tarkkailtiin päivittäin merkkejä toksisuudesta, ja uhrasivat kun niiden kasvaimet saavuttivat jonka halkaisija on noin 15 mm.
Fluoresoiva kuvantaminen (Maestro) B In vivo
GFP kuvat saatiin käyttämällä CRi Maestro-järjestelmän (Cambridge tutkimus ja instrumentointi, Woburn, MA) käyttäen sopivaa suodattimia (viritys = 445-490 nm, emissio = 515 nm pitkän pass suodatin, hankinta asetukset = 500-720 10 nm). Sen jälkeen kun jokainen kuva on saatu, se oli spektrisesti unmixed poistaa taustan fluoresenssi. Kuvat kvantitoitiin käyttäen kohdealueen (ROI) analyysi ohjelmisto, joka toimitetaan Maestro järjestelmään.
In vivo
yksittäisen fotonin emission tietokonetomografiaa SPECT kuvausta
Viisi MKN-74 -ksenografteja kasvaimen injektoitiin 2 x 10 7 PFU GLV-1 h153 ja 5 PBS verrokkeina. Kaksi päivää infektion jälkeen 200 uCi 99m perteknetaattina annettiin kautta häntälaskimoinjektio. 99m perteknetaattina kuvat otettiin 10 minuutin aikana, 3 tunnin kuluttua radiomerkkiaineen annon. Kuvaus suoritettiin käyttäen dual-ilmaisin Gammakameran alijärjestelmään X-SPECT pienten eläinten SPECT-TT-järjestelmä (Gamma Medica, Northridge, CA). X-SPECT γ-kamerajärjestelmän kalibroitiin kuvantamisen hiiri-size (30 ml) täytetyn sylinterin mitattu pitoisuus (MBq /ml) 99m käyttäen photopeak energiaa ikkuna 126-154 keV ja vähän energiaa korkean resoluution kollimaatio. Tuloksena 99m kuvat vietiin Interfile ja sitten tuodaan ASIPro (Siemens Prekliiniset Solutions, Knoxville, TN) kuvankäsittelyohjelmisto ympäristössä. Vuoteen ROI-analyysi, järjestelmän kalibrointikerroin (cpm /pikseli per MBq /ml) on peräisin. Eläinten kuvat oli niin ikään viety Interfile ja sitten tuodaan ASIPro ja parametroitu kannalta hajoaminen korjatun prosenttiosuus injektoidusta annoksesta grammaa kohti (% ID /g), joka perustuu edellä esitetyn kalibrointikertoimen, annoksesta, aika annon jälkeen kuvantamisen, ja kuva kesto.
In vivo
PET kuvantamisen
Three MKN-74 ksenograftit injektoitiin kasvaimen 2 x 10 7 PFU GLV-1 h153 ja kaksi PBS: llä. Kaksi päivää sen jälkeen, kun virus injektion, 300 uCi 124I annettiin kautta häntälaskimoinjektio. Tunnin kuluttua radiomerkkiaineen annon, 3-ulotteinen lista-mode data hankittiin käyttämällä energiaa ikkuna 350-700 keV, ja sattuma ajoitus ikkuna 6 nanosekuntia. Kuvaus suoritettiin käyttäen Focus 120 microPET omistettu pieni eläin PET-kamera (Concorde Microsystems Inc., Knoxville, TN). Nämä tiedot lajiteltiin 2-ulotteinen histogrammien Fourier rebinning. Laskenta hinnat rekonstruoitu kuvat muutettiin aktiivisuuspitoisuuden (% ID /g) käyttäen järjestelmää kalibrointikerroin (MBq /ml per cps /vokselifantomeita) johdettu kuvantaminen hiiren koko phantom täynnä yhtenäinen vesiliuosta 18F. Kuva-analyysi suoritettiin käyttäen ASIPro.
Tilastollinen analyysi
merkittäviä eroja ryhmien välillä määritettiin käyttämällä Studentin t-
testiä (Excel 2007, Microsoft, Redmond, WA, USA). P-arvo < 0,05 katsottiin merkitseväksi.
Tulokset
Sytotoksisuusmääritvs
Kaikki viisi ihmisen mahasyövän solulinjat olivat herkkiä oncolysis by GLV-1 h153 (kuvio 1). MKN-74, OCUM-2MD3, ja AGS solulinjat olivat herkempiä virusperäisen hajoamiseen verrattuna MKN-45 ja TMK-1-soluissa. Kaikki solulinjat osoittivat annos-riippuvainen vaste, jossa on enemmän ja nopeammin solukuolemaan suurempi MÕIS. In MKN-74, OCUM-2MD3, ja AGS solulinjat, yli 90% soluista kuoli päivänä 9 MOI 1. MKN-74-solulinja oli erityisen alttiita virusonkolyysiä, jossa on yli 77% solukuolema päivällä 9 alimmalla MOI 0,01. Kuvio 1 sytotoksisuus GLV-1 h153 vastaan ​​5 ihmisen mahasyövän solulinjoissa in vitro. Kaikkia solulinjoja yllä merkittävää sytotoksisuutta MOI 1, kolme solulinjat olivat herkkiä MOI 0,1, ja kaksi solulinjaa osoitti hieno herkkyys GLV-1 h153 jopa alimman MOI 0,01.
Virusreplikaatio
Standard virusplakkimuodos- analyysit osoittivat, tehokasta virusreplikaatiota GLV-1 h153 kaikissa mahasyövän solulinjoissa MOI 1 (kuvio 2). MKN-74 osoitti korkeimman virustiitteri kanssa huippu tiitteri 1,06 x 10 6 PFU per hyvin, 26-kertainen lisäys alkuperäisestä annoksesta, päivällä 7. Kuva 2 In vitro kvantifiointiin virusreplikaation GLV-1 h153 ihmisen mahasyövän solulinjoissa. Virus kerättiin kaivoista solujen infektoitiin MOI-arvolla 1 Viral plakkikokeet osoitettu tehokkaasti viruksen replikaatiota kaikki 5 solulinjoissa, saavuttaa korkein viruksen leviämisen (1,06 x 106 virus- plakkia muodostavaa yksikköä päivässä 7) solulinjassa , MKN-74, joka edustaa 26-kertainen kasvu sen alkuperäisestä annoksesta.
vivo
hiiren ksenografteja hoidon GLV-1 h153
Jotta voitaisiin sytolyyttisen vaikutuksia GLV-1 h153 in vivo
, hiirillä, joilla on MKN-74-ksenografteissa hoidettiin kerta-annoksen kasvaimeen injektion GLV-1 h153 tai PBS: ää. Käsitellyt kasvaimia osoitti jatkuvaa /jatkuva kasvainregressio neljän viikon ajan. Päivällä 28, keskimääräinen tuumorin tilavuus hoidon ryhmässä oli 221,6 mm 3 (kuvio 3). Yksi eläin osoitti täydellistä kasvaimen regressio. Sen sijaan kaikki valvonnan kasvaimet jatkoivat kasvuaan ja keskiarvo tilavuus 1073,2 mm 3 päivällä 28 (t
-testi vertaamalla hoitoa ja kontrolliryhmä päivänä 28, p < 0,001). Ei ollut merkittävää muutosta kehon painon kummassakaan ryhmässä, eikä sairastuvuutta tai kuolleisuutta liittyvät GLV-1 h153 hoidon havaittiin. Kuvio 3 GLV-1 h153 estää MKN-74 kasvaimen kasvua. 2 x 106 virushiukkasta GLV-1 h153 tai PBS: ää injektoitiin kasvaimen nude-hiirillä, joilla on ihonalainen kylki kasvaimia MKN-74. Tuumorin kasvun eston vuoksi hoidon GLV-1 h153 aloitettiin päivänä 15 (p < 0,001). Tuumoritilavuudet esitetään edustavat keskimääräistä tilavuutta 5 hiirtä kussakin hoitoryhmässä.
In vitro
ja in vivo
GFP: n ilmentymisen
GFP: n ilmentymistä seurattiin fluoresenssimikroskopialla 1, 3, 5, 7, ja 9 päivää sen jälkeen, kun virusinfektio MOI-arvolla 1,0. Useimmat MKN-74-solut infektoitiin ja ilmaisivat GFP 7. päivään mennessä (kuvio 4A). In vivo,
GFP-signaali voidaan havaita ainoastaan ​​ksenografti injektoitiin GLV-1 h153 (kuvio 4B). Kuvio 4 vihreän fluoresoivan proteiinin (GFP) ilmentymä MKN-74 in vitro ja in vivo. A. MKN-74-solut infektoitiin GLV-1 h153 ja osoitti vahvaa vihreän fluoresenssin päivällä 7, joka osoittaa tehokas infektio (suurennus 100 x). B. MKN-74 kyljen kasvaimia käsiteltiin 2 x 106 virushiukkasta GLV-1 h153. Vihreä fluoresenssi kasvaimen kanssa Maestro skanneri osoittaa onnistuneen infektio ja kasvainspesifisiä paikantaminen GLV-1 h153.
Toiminta h
NIS ilmaisun kuvantaa 99m-perteknetaattia gammakuvaus ja 124I PET
Kaikki MKN-74 ksenografteja pistetään jossa GLV-1 h153 osoitti lokalisoitu kertyminen 99m radioaktiivisuus kylkeen kasvaimissa taas ei lainkaan radioaktiivisuutta kasautumista hallita kasvaimia (kuvio 5A). GLV-1 h153-tartunnan MKN-74 kasvaimia helpottaa myös 124I radiojodin otto ja mahdollisti kuvantamiseen PET (kuvio 5B), kun taas PBS-ruiskutetaan kasvaimia ei voitu visualisoida. Kuva 5 Nuclear kuvantaminen GLV-1 h153-tartunnan MKN-74 ksenografteissa. A. 99mTc perteknetaatti- skannaus suoritettiin 48 tuntia infektion jälkeen ja 3 tunnin kuluttua radiomerkkiaineen annon. Kasvaimet käsiteltiin GLV-1 h153 virus ovat selvästi visualisoitu (nuoli). Vatsa ja kilpirauhasen nähdään johtuu natiivin ilmentymisen NIS, ja virtsarakon nähdään erittymisen merkkiaine. B. Aksiaalinen, koronan ja sagittaalinen näkymät olevan 124I PET kuva 48 tunnin kuluttua GLV-1 h153 injektio esittää parannettu signaali GLV-1 h153-tartunnan MKN-74 kasvaimet (nuoli).
Keskustelu
Mahalaukun syöpä on neljänneksi yleisin maligniteetti ja toiseksi yleisin syy syövän liittyvän kuoleman maailmanlaajuisesti [1, 14]. Uusiutumisesta tai etäpesäkkeiden on yksi yleisimmistä komplikaatioita ja usein kuolinsyy [15]. Vaikka kemoterapia on käyttökelpoinen liitännäishoitona verrattuna kirurginen hoito yksinään, sen terapeuttista potentiaalia rajoittaa [16]. Useimmat syöpien ovat vastustuskykyisiä tällä hetkellä saatavilla solunsalpaajahoitojen. Näin ollen uusia terapeuttisia aineita tarvitaan tulosten parantamiseksi mahasyövän potilaille, jotka eivät reagoi tavanomaisiin hoitoihin. Onkolyyttiset viruslääkkeitä on lupaava lähestymistapa syövän hoito, joka riippuu kyvystä virusten tartuttaa, jäljitellä sisällä, ja hajottamaan isäntäsolun [17, 18]. Tässä tutkimuksessa olemme kuvattu sytotoksisia vaikutuksia GLV-1 h153, uusi yhdistelmä-DNA-VACV kuljettaa h
NIS-geeni, mahalaukun syövän soluissa in vitro
. Olemme lisäksi osoittaneet, että GLV-1 h153-tartunnan mahasyövän ksenograftien ilmaisi toimiva h
NIS proteiinia, joka salli noninvasiivinen kuvantaminen kasvain ja myös tehokas kasvaimen taantumiseen in vivo
.
Erilaisia ​​viruksia on esitetty onkolyyttinen ominaisuuksia kuten adenovirus, herpes simplex-virus, Newcastlen taudin virus, vesicular stomatitis virus, ja reovirusta [17]. Joukossa erilaisia ​​onkolyyttisten virustekijät, vacciniavirus on useita etuja. VACV yksinomaan replikoituu sytoplasmassa ilman isännän DNA-synteesin koneita, mikä alentaa riskiä integrointi virusgenomin isännän genomiin [10]. Suuri määrä vieraan DNA: n (jopa 25 kb) voidaan sisällyttää, alentamatta merkittävästi viruksen replikaation tehokkuutta [19]. Lisäksi vaccinia on todettu olevan hyvä turvallisuusprofiili kuin se on historiallisesti annettu miljoonille aikana isorokko rokotus. Se osoittaa myös tehokas lisääntymään ja laajan isäntäsolun tropismeja [10]. Useissa prekliinisissä tutkimuksissa on osoitettu, että systeemisen injektion rekombinantti VACV osaksi ksenograftien johti korkean virustiittereitä kasvaimia vain, mikä osoittaa, kasvainspesifisen kolonisaation [11, 20, 21]. On pieni huoli siitä, että potilaat, jotka ovat saaneet isorokkorokotuksen aiemmin on neutraloiva vasta-virusta vastaan. Tämä saattaa johtaa vaarantunut hoidon tehokkuutta. Kuitenkin veressä, täydennys on merkittävämpi rooli inaktivoivan VACV kuin neutraloivat vasta-aineet. Siksi ennustaa, että neutraloivia vasta-aineita potilailla ei saisi estää VACV hoitoa; kuitenkin suurempi hoitoannos voidaan tarvita.
Geneettisesti muokattu VACVs ovat osoittaneet tehoa hoidettaessa monenlaisia ​​ihmisen syövissä [12]. GLV-1 h168 on jo osoitettu olevan tehokkaita diagnostisia ja terapeuttisia vektori useissa ihmisen kasvainten mallit, mukaan lukien rinta- kasvaimen, mesoteliooma, haiman syövät, ja okasolusyöpä [11] h
NIS-proteiini, joka on olennainen membraani glykoproteiinin kanssa 13 putatiivisiksi verkkotunnuksia, aktiivisesti kuljettaa sekä Na + ja I - ionien solukalvon [22]. Toimivat h
NIS proteiini voi ottoa useita kaupallisesti saatavilla radio-nukleotidit, kuten 123I, 124I, 125l, 131I, 99m ja 188Re [22, 23 ]. Tässä tutkimuksessa GLV-1 h153-välitteisen ilmentymisen h
NIS proteiinin tartunnan MKN-74 ksenograftien johti lokalisoitu 99m ja 124I radiomerkkiaineen ottoa. Tuloksemme viittaavat siihen, että h
NIS-geenin ilmentymisen kautta virusvektorin voidaan käyttää ei-invasiivisen kuvantamisen seurata kasvaimen etenemisen ja hoidon vaikutuksia.
Yksi kasvaimeen injektio GLV-1 h153 in MKN-74-ksenografteissa näytteillä lokalisoitu kasvaimensisäistä GFP ja h
NIS ilme. Lisäksi ei ollut mitään todisteita virusten leviämisen muihin elimiin perustuu GFP kuvantaminen, 99m gammakuvaus, ja 124I PET, mikä osoittaa kasvainspesifiset virusinfektio ja toimintaa. Olemme myös osoittaneet, että GLV-1 h153 on tehokas ja turvallinen hoidettaessa mahalaukun kasvainten hiiren ksenograftimallissa. GLV-1 h153-käsiteltyä ryhmää seurataan jatkuvasti päivään 35 ja ei ollut kasvaimen uusiutumista (tietoja ei esitetty välillä päivänä 28 ja 35). Vertailuryhmä oli teurastettava mukaisesti meidän hyväksytty eläinten protokollan päivänä 28. ilmaiseminen h
NIS-geeni muuten kuin HNIs ilmentävä kudos on jännittävä. Se voisi mahdollisesti hyödyntää vakiintuneita radiojodikartoituksen ja hoidon muiden kilpirauhasen peräisin syöpiä. Useat tutkimukset ovat osoittaneet lupaavia tuloksia erilaisten kasvainten käyttäen radiojodin hoidon kautta kasvain-spesifisen ilmentymisen h
NIS-geeni, mukaan lukien medullaarinen kilpirauhassyöpä [24], eturauhassyöpä [25], paksusuolen syöpä [26], ja rintojen syöpä [27]. Kasvainspesifisen h
NIS ilmaisu käyttäen GLV-1 h153 voi maksimoida paikallinen radiojodin kertymistä ja minimoida epäspesifinen muissa elimissä. Perustuu lupaavia tuloksia, olisi merkittävää kliinistä merkitystä vaikutuksen arvioimiseksi yhdistelmähoidon GLV-1 h153 ja radiojodin.
Päätelmä
Tämä tutkimus osoittaa uuden onkolyyttinen VACV muokattu ilmentämään h
NIS voidaan tehokkaasti tartuttaa, jäljitellä sisällä, ja aiheuttaa regressio mahalaukun syövän hiiren ksenograftimallissa. GFP: n ilmentymisen voi toimia korvikkeena virusinfektiivisyydestä. In vivo
, GLV-1 h153 tartunnan saaneiden solujen voidaan helposti kuvausaikaisilla 99m gammakuvaus ja 124I PET kuvantaminen. Nämä tiedot tarjoavat lisätukea tulevaisuudessa tutkinnassa GLV-1 h153 kuin kohtelu ainetta ja ei-invasiiviset työkalu kliinisissä.
Lyhenteet
VACV:
vacciniavirus


HNIs:
Human natriumjodidia symporter
ATCC:
American Type Culture Collection
RUC-GFP:
Renilla
lusiferaasia Aequorea
vihreää fluoresoivaa proteiinia
LDH:
Laktaattidehydrogenaasi ()
IACUC:
Institutional Animal Care ja käyttö komitea
MSKCC:
Memorial Sloan-Kettering Cancer Center
PFU:
plakkia muodostavaa yksikköä
MOI:
tartutusmonikerran
PET:
Positroniemissiotomografia

ROI:
alue kiinnostava
rTfr:
Käänteinen asetettu ihmisen transferriini-reseptori
SPECT:
yksifotoniemissioto- tomografia.
julistukset
Kiitokset
Tekniset tarjoamien MSKCC Small-Animal Imaging Core Facility, tukee osittain NIH Small -Animal Imaging Research Program (SAIRP) apuraha Ei R24 CA83084 ja NIH keskus Grant nro P30 CA08748, ovat kiitettävällä.
kirjoittajien alkuperäinen toimitti asiakirjat kuville
Alla linkkejä kirjoittajien alkuperäiset toimitti asiakirjat kuville . 13046_2013_740_MOESM1_ESM.tiff Kirjoittajien alkuperäinen tiedosto kuvio 1 13046_2013_740_MOESM2_ESM.tiff Kirjoittajien alkuperäinen tiedosto kuvio 2 13046_2013_740_MOESM3_ESM.tiff Kirjoittajien alkuperäinen tiedosto kuvio 3 13046_2013_740_MOESM4_ESM.tiff Kirjoittajien alkuperäinen tiedosto kuvio 4 13046_2013_740_MOESM5_ESM.tiff Kirjoittajien alkuperäisen tiedoston luku 5 kilpailevat edut
Ei kilpailevia taloudellisia etuja olemassa Kyong-Hwa Jun, Tae-Jin Song, Sepideh Gholami, Joyce Au, Dana Haddad, Carson Joshua, Chun-Hao Chen, Kelly Mojica, Pat Zanzonico, ja Yuman Fong. Nanhai G. Chen, Qian Zhang, ja Aladar A. Szalay sidoksissa Genelux Corporation.
Tekijät osuudet
SG avusti kirjoittaa ylös käsikirjoituksen. TS apuna in vivo
kokeiluja ja osaltaan tutkimuksen suunnittelu. JA osaltaan sytotoksisuusanalyysin. DH osaltaan in vivo
PET ja SPECT kuvausta. JC osaltaan loisteputki kuvantamisen. CC osaltaan tilastollisen analyysin tietojen. KM osaltaan virusreplikaation määrityksessä. PZ osaltaan tutkimuksen suunnittelu ja radioaktiivisen kuvantaminen kokeita. NC ja QZ osaltaan viruksen sekvenssin ja konstruktio. AS ja YF osaltaan tutkimuksen suunnittelu ja loppuun käsikirjoituksen. Kaikki kirjoittajat luettu ja hyväksytty lopullinen käsikirjoitus.

• Kliinis ominaisuudet ja hoitostrategioita alussa mahasyövässä: retrospektiivinen kohorttitutkimus
• Valikoiva aryylihiilivetyreseptori modulaattori 3,3-Diindolylmethane estää mahalaukun syövän solujen kasvua