Una nueva terapia y la imagen técnica basadas en estos agentes para el cáncer gástrico usando un virus de vacuna por ingeniería genética que lleva el cotransportador de yoduro de sodio humana

Una nueva terapia y la imagen técnica basadas en estos agentes para el cáncer gástrico usando un virus de vacuna por ingeniería genética que lleva el cotransportador de yoduro de sodio humana
Resumen Antecedentes

Los cánceres gástricos tienen la supervivencia global pobre a pesar de los recientes avances en los métodos de detección temprana, la resección endoscópica las técnicas y los tratamientos de quimioterapia. La terapia viral vaccinia ha tenido un potencial terapéutico prometedor para varios tipos de cáncer y tiene un gran perfil de seguridad. Se investigó la eficacia terapéutica de un nuevo virus de vaccinia por ingeniería genética que lleva el cotransportador de yoduro de sodio gen humano (h
NIS), GLV-1 H153, en los cánceres gástricos y su potencial utilidad para la formación de imágenes con 99mTc gammagrafía pertecnetato y 124I tomografía por emisión de positrones (PET).
Métodos
GLV-1 H153 fue probado contra cinco líneas celulares de cáncer gástrico humano utilizando citotoxicidad y ensayos estándar de placas virales. En vivo
, tumores en los flancos subcutáneos se generaron en ratones desnudos con células de cáncer gástrico humano, MKN-74. Los tumores se inyectaron posteriormente con cualquiera GLV-1 H153 o PBS y seguidos por el crecimiento del tumor. La gammagrafía 99m pertecnetato y 124I de imágenes microPET se realizaron
. Resultados
expresión de GFP, un sustituto para la infectividad viral, confirmaron la infección viral por 24 horas. En una multiplicidad de infección (MOI) de 1, GLV-1 H153 logra > 90% de citotoxicidad en MNK-74, OCUM-2MD3, y AGS de más de 9 días, y > 70% de citotoxicidad en MNK- 45 y TMK-1. In vivo
, GLV-1 H153 fue eficaz en el tratamiento de xenoinjertos (p < 0,001) después de 2 semanas de tratamiento. tumores H153 infectadas por GLV-1 se obtuvieron imágenes fácilmente por 99m pertecnetato gammagrafía y 124I de imágenes microPET 2 días después del tratamiento.
Conclusiones
GLV-1 H153 es un virus oncolítico que expresa la efectiva h
proteína NIS que puede retroceder de manera eficiente los tumores gástricos y permiten imágenes de tejidos profundos. Estos datos anima a su continua investigación en el ámbito clínico.
Palabras clave
Oncolítico la terapia viral del cáncer GLV-1 H153 gástrico cotransportador de yoduro de sodio humana (h
NIS) Antecedentes
El cáncer gástrico es una de las más prevalentes maligna tumores, especialmente en Asia [1]. Aunque los métodos de detección temprana, el desarrollo de la resección endoscópica o quirúrgica, y quimioterapias más eficaces han mejorado la supervivencia global en pacientes con cáncer gástrico, el pronóstico de los pacientes con cáncer gástrico avanzado, sigue siendo insuficiente [2-4]. La mayoría de los tratamientos de quimioterapia convencionales han demostrado la eficacia moderada. Una posible explicación para la resistencia de cáncer gástrico a la terapia convencional podría ser su no susceptibilidad a la apoptosis [5]. Sin embargo, los virus oncolíticos tienen grandes efectos terapéuticos contra las células cancerosas que expresan altos niveles de la ribonucleótido reductasa, las enzimas de reparación del ADN, y por tanto son resistentes a la apoptosis [6, 7]. Muchas de estas características que hacen que las células de cáncer gástrico resistentes a la quimioterapia, que sean susceptibles a la terapia viral oncolítico. Por lo tanto, la terapia génica usando virus oncolítico ofrece una alternativa atractiva para el tratamiento del cáncer gástrico [8].
Terapia basadas en estos agentes ha sido estudiado durante el siglo pasado y se muestra el éxito en los ensayos preclínicos y clínicos como una modalidad novedosa tratamiento contra el cáncer [9 ]. virus vaccinia (VACV) cepas son particularmente atractivos como agentes antitumorales potenciales, ya que pueden incorporar grandes cantidades de ADN extraño sin reducir su eficacia de la replicación. Por otra parte, VACV ha mostrado un buen perfil de seguridad en los seres humanos [10-12]. Por último, además de su potencial terapéutico, VACV también se ha utilizado como una técnica de imagen no invasiva que permite a los médicos a realizar un seguimiento de la entrega de genes terapéuticos en el cuerpo [10, 13].
En esta publicación, se analizó el potencial terapéutico de una novela VACV expresar el yoduro de sodio symporter humana (h
NIS), GLV-1 H153, contra el cáncer gástrico in vitro
in vivo
y, y probado su potencial como una herramienta de imagen.
Materiales y métodos Las líneas celulares
se obtuvieron células AGS de cáncer gástrico humano (una línea celular de adenocarcinoma epitelial gástrica) de la American Type Culture Collection (ATCC; Manassas, VA) y se cultivaron en Ham F-12 K Medio. Las células humanas OCUM-2MD3 eran un regalo del doctor Masakazu Yashiro (Universidad Escuela de Medicina de la ciudad de Osaka, Japón) y se cultivaron en la Dulbecco Modificado Medio Eagle (DMEM). MKN-74 y las células TMK-1 fueron proporcionadas por el Dr. T. Suzuki (Fukushima Medical College, Japón) y se cultivaron en Roswell Park Memorial Institute (RPMI). MKN-45 se obtuvo como un regalo del doctor Yutaka Yonemura (Universidad de Kanazawa, Japón) y se mantuvo en RPMI. de fibroblastos de riñón de mono verde africano (Cercopithecus aethiops
; 1-CV) células utilizadas para ensayos de placas virales se adquirieron de ATCC (Manassas, VA) y se cultivaron en el medio esencial mínimo (MEM). Todos los medios se complementaron con 10% de FBS, 1% de penicilina y 1% de estreptomicina.
Virus
GLV-1 H153 es un virus vaccinia recombinante competente para la replicación derivado de su cepa parental, GLV-1 H68, a través recombinación homóloga. Contiene cuatro casetes insertados que codifican Renilla Aequorea
proteína luciferase- proteína verde fluorescente (RUC-GFP) de fusión, un receptor de transferrina humana inversa insertado (RTFR
), β-galactosidasa, y symporter yoduro de sodio humana (h
NIS) en la F14.5
, J2R gratis (que codifica la timidina quinasa), y A56R gratis (que codifica la hemaglutinina) loci del virus genome.GLV-1 H153 fue proporcionada por Genelux Corporation (I + & D instalaciones en San Diego, CA, EE.UU.).
ensayo de citotoxicidad página 4 × 10 4 células por pocillo de cada línea celular se sembraron en placas de 12 pocillos y se incubaron en un 5% de CO 2 humidificado incubadora a 37 ° C durante la noche. Se añadió GLV-1 H153 a cada pocillo a diferentes multiplicidad de infección (MOI) de 0,01, 0,1, y 1,0. citotoxicidad viral se ensayó usando una lactato deshidrogenasa (LDH) de ensayo diario. Las células se lavaron con PBS una vez, y luego se lisaron con 1,35% de Triton X-100 (Sigma, St. Louis, MO). La liberación de LDH después de la lisis intracelular se midió posteriormente con CytoTox 96® (Promega, Madison, WI) en un espectrofotómetro (EL321e, Bio-Tek Instruments) a 490 nm. Los resultados se expresan como el porcentaje de células supervivientes, que se calcula como la liberación de LDH de muestras infectadas en comparación con el control no infectado. Todas las condiciones se ensayaron por triplicado.
Virales ensayo de replicación
sobrenadantes de cada pocillo infectadas se recogen diariamente y se congeló inmediatamente a -80 ° C. Se hicieron diluciones en serie de todas las muestras de sobrenadante para realizar ensayos de placas virales estándar en células confluentes CV-1. Todas las muestras se midieron por triplicado.
En vivo
murino flanco terapia de tumores
Todos los experimentos con animales se realizaron bajo los protocolos aprobados y de acuerdo con las directrices éticas del Comité para el Cuidado y Uso de Animales Institucional (IACUC) en el Memorial Sloan Centro de cáncer -Kettering (MSKCC). MKN-74 se establecieron xenoinjertos de 6 a 8 semanas de edad ratones desnudos hembra (NCI: HSD: atímicos Nude-nu, Harlan) por inyección subcutánea de 5 x 10 6 MKN-74 células en el flanco derecho. El crecimiento del tumor se registró dos veces a la semana usando un volumen calibre y el tumor digitales se calculó utilizando la ecuación, a Luxury × b
2 × 0,5, en el que un
y b ¿Cuáles son las más grande y los diámetros más pequeños, respectivamente. Cuando los tumores alcanzaron un diámetro de aproximadamente 6-8 mm en 10 días, los animales se agrupan en grupos de control y tratamiento con tamaños tumorales equitativas. Una sola dosis de 2 x 10 6 unidades formadoras de placas (UFP) de GLV-1 H153 en 100 l de PBS o 100 l de PBS como control se inyectaron por vía intratumoral a cada tumor designado. Los animales fueron observados diariamente en busca de signos de toxicidad, y se sacrificaron cuando sus tumores alcanzaron un diámetro de aproximadamente 15 mm.
imágenes fluorescentes (Maestro)
En vivo
imágenes GFP se obtuvieron utilizando el sistema CRi Maestro (Cambridge Investigación e Instrumentación, Woburn, MA) utilizando los filtros apropiados (excitación = 445-490 nm, emisión = 515 filtro de paso largo nm, ajustes de adquisición = 500 a 720 en 10 nm). Después se obtuvo cada imagen, era espectralmente sin mezclar para eliminar la fluorescencia de fondo. Las imágenes fueron cuantificados usando región de interés (ROI) de software de análisis que se suministra con el sistema Maestro.
En vivo
emisión de fotón único de formación de imágenes de tomografía computarizada SPECT
Cinco MKN-74 xenoinjertos fueron inyectados por vía intratumoral con 2 × 10 7 UFP GLV-1 H153 y 5 con PBS como controles. Dos días después de la infección, 200 Ci de pertecnetato 99mTc se administraba por vía vena de la cola. Tc 99m pertecnetato imágenes se obtuvieron durante 10 minutos, 3 horas después de la administración del radiotrazador. Imágenes se realizó con la cámara gamma subsistema de doble detector del sistema de pequeños animales SPECT-TAC X-SPECT (Gamma Medica, Northridge, CA). El sistema de γ-cámara X-SPECT fue calibrado por imágenes de un ratón de tamaño (30 ml) cilindro lleno de una concentración medida (MBq /ml) de 99m usando una ventana de energía máximo de luz por 126 154 keV y de bajo consumo energético de alta resolución de colimación. Las 99mTc imágenes resultantes se exportan a Interfile y luego importados en los ASIPro (Soluciones Siemens pre-clínicos, Knoxville, TN), entorno de software de procesamiento de imágenes. Por análisis de ROI, se deriva un factor de calibración del sistema (en cpm /píxel por MBq /ml). imágenes animales fueron igualmente exportan a Interfile y luego importados en ASIPro y parametrizada en términos de la dosis porcentaje inyectado descomposición corregida por gramo (% ID /g), basado en el factor de calibración anterior, la actividad administrada, el tiempo después de la administración de formación de imágenes, y la duración de la imagen.
En vivo
imágenes PET
se inyectaron tres MKN-74 xenoinjertos intratumoral con 2 × 10 7 UFP GLV-1 H153 y dos con PBS. Dos días después de la inyección vírica, 300 Ci de 124I se administraba por vía vena de la cola. Una hora después de la administración del radiotrazador, los datos en 3 dimensiones en modo de lista fueron adquiridos utilizando una ventana de energía de entre 350 y 700 keV y una ventana de temporización coincidencia de 6 nanosegundos. Imágenes se realizó con un enfoque 120 microPET dedicado escáner PET de pequeños animales (Concorde Microsystems Inc., Knoxville, TN). Estos datos se clasificaron en los histogramas de 2 dimensiones por rebinning de Fourier. Las tasas de recuento en las imágenes reconstruidas se convirtieron a concentración de actividad (% ID /g) utilizando un factor de calibración del sistema (MBq /ml por cps /voxel) derivado de obtención de imágenes de un fantasma tamaño ratón lleno de una solución acuosa uniforme de 18F. Análisis de imágenes se realizó utilizando ASIPro se determinaron análisis estadístico

diferencias significativas entre los grupos mediante la t de Student
(Excel 2007; Microsoft, Redmond, WA, EE.UU.).. Un valor de p < 0,05 fue considerado significativo.
Resultados
Ensayo de citotoxicidad
Todas las cinco líneas celulares de cáncer gástrico humanos eran susceptibles a la oncolisis por GLV-1 H153 (Figura 1). Las líneas de células AGS MKN-74, OCUM-2MD3, y eran más sensibles a la lisis viral en comparación con MKN-45 y TMK-1 en las células. Todas las líneas celulares mostraron una respuesta dependiente de la dosis, con una mayor y más rápida la muerte de células en las MOI superiores. En líneas celulares AGS MKN-74, OCUM-2MD3, y, más del 90% de las células fueron asesinados por día 9 en una MOI de 1. La línea celular MKN-74 fue particularmente susceptibles a la oncolisis viral, con más del 77% la muerte de células por día 9 en el MOI más bajo de 0,01. Figura 1 Citotoxicidad de GLV-1 H153 contra 5 líneas celulares de cáncer gástrico humano in vitro. Todas las líneas celulares sostenidos citotoxicidad significativa a una MOI de 1, tres líneas celulares fueron sensibles a una MOI de 0,1, y dos líneas celulares demostraron una sensibilidad exquisita para GLV-1 H153 incluso a la más baja MOI de 0,01.
Replicación viral
ensayos de placas virales estándar demostraron la replicación viral eficiente de GLV-1 H153 en todas las líneas celulares de cáncer gástrico en una MOI de 1 (Figura 2). MKN-74 demostró el título viral más alta con un título máximo de 1,06 × 10 6 UFP por pocillo, un aumento de 26 veces de la dosis inicial, por el día 7. La figura 2 in vitro cuantificación de la replicación viral por GLV-1 H153 en líneas celulares de cáncer gástrico humano. Virus se recogió de los pocillos de células infectadas a una MOI de 1. ensayos de placas virales demostraron la replicación viral eficiente en todas las 5 líneas celulares, llegando a la proliferación viral más alta (1,06 × 106 virales unidades formadoras de placas por día 7) en la línea celular , MKN-74, lo que representa un aumento de 26 veces de la dosis inicial.
en vivo
murino xenoinjertos la terapia con GLV-1 H153
Para establecer los efectos citolíticos de GLV-1 H153 in vivo
, ratones portadores de xenoinjertos de MKN-74 fueron tratados con una sola dosis de la inyección intratumoral de GLV-1 H153 o PBS. Los tumores tratados mostraron regresión tumoral sostenida /continua durante un periodo de cuatro semanas. Por día 28, el volumen medio del tumor del grupo de tratamiento fue de 221,6 mm 3 (Figura 3). Uno de los animales demostró una regresión completa del tumor. Por el contrario, todos los tumores de control continuaron creciendo con un volumen medio de 1073.2 mm 3 al día 28 (t-test
, que compara el tratamiento y el grupo control en el día 28, p < 0,001). No hubo ningún cambio significativo en el peso corporal en ninguno de los grupos, y no se observó la morbilidad o la mortalidad relacionada con GLV-1 H153 tratamiento. Figura 3 GLV-1 H153 suprime MKN-74 el crecimiento del tumor. 2 x 106 partículas virales de GLV-1 H153 o PBS se inyectaron por vía intratumoral en ratones desnudos portadores de tumores en los flancos subcutáneas de MKN-74. La inhibición del crecimiento del tumor debido al tratamiento con GLV-1 H153 comenzó por día 15 (p < 0,001). Los volúmenes tumorales que se muestran representan volúmenes medios a partir de 5 ratones en cada grupo de tratamiento.
in vitro e in vivo

expresión de GFP
la expresión de GFP se controló por microscopía de fluorescencia 1, 3, 5, 7, y 9 días después de la infección viral a un MOI de 1,0. La mayoría de las células MKN-74 fueron infectadas y expresan GFP en el día 7 (Figura 4A). In vivo,
señal de GFP se puede detectar sólo en el xenoinjerto inyectado con GLV-1 H153 (Figura 4B). Figura 4 la expresión proteína fluorescente verde (GFP) de MKN-74 in vitro e in vivo. A. MKN-74 células fueron infectadas con GLV-1 H153 y mostraron una fuerte fluorescencia verde por día 7, lo que demuestra la infección eficaz (magnificación 100 x). B. MKN-74 tumores en los flancos se trataron con 2 x 106 partículas virales de GLV-1 H153. fluorescencia verde del tumor con el escáner Maestro indica éxito de la infección y la localización específica del tumor de GLV-1 H153.
Funcionamiento h
expresión de NIS fotografiada por la gammagrafía con 99mTc-pertecnetato y 124I PET
Todos MKN-74 xenoinjertos inyectados con GLV-1 H153 mostraron localizados acumulación de radiactividad 99mTc en los tumores en los flancos mientras no acumulación de radiactividad en los tumores de control (Figura 5A). -H153 infectadas GLV-1 MKN-74 tumores también facilitaron la captación de yodo radiactivo 124I y han permitido obtener imágenes mediante PET (Figura 5B), mientras que los tumores inyectados con PBS no podían ser visualizados. Figura 5 de formación de imágenes nucleares de GLV-1 infectadas con H153 MKN-74 xenoinjertos. A. 99mTc exploración pertecnetato se realizó 48 horas después de la infección y 3 horas después de la administración del radiotrazador. Los tumores tratados con GLV-1 H153 virus se visualizan claramente (flecha). El estómago y tiroides son vistos debido a la expresión nativa de NIS, y la vejiga se ve desde la excreción del radiotrazador. B. axial, coronal y sagital de una imagen PET 124I 48 horas después de GLV-1 H153 inyección de muestra unos mayores señal de GLV-1-H153 infectadas MKN-74 tumores (flecha).
Discusión El cáncer gástrico es
el cuarto cáncer más común y la segunda causa más frecuente de muerte por cáncer en todo el mundo [1, 14]. Recurrencia o metástasis a distancia es una de las complicaciones más frecuentes y, a menudo la causa de la muerte [15]. Mientras que la quimioterapia es una terapia útil adyuvante en comparación con la terapia quirúrgica sola, su potencial terapéutico es limitado [16]. La mayoría de los cánceres gástricos son resistentes a los regímenes de quimioterapia actualmente disponibles. Por lo tanto, se necesitan nuevos agentes terapéuticos para mejorar los resultados para los pacientes con cáncer gástrico que no responden a las terapias convencionales. terapia viral oncolítico es un enfoque prometedor para el tratamiento del cáncer que depende de la capacidad de los virus para infectar, replicarse dentro de, y la lisis de una célula huésped [17, 18]. En este estudio, hemos descrito los efectos citotóxicos de GLV-1 H153, una novela VACV recombinante que lleva el gen NIS
h, en células de cáncer gástrico in vitro
. Además, demostró que GLV-1 H153 infectadas xenoinjertos de cáncer gástrico expresaron funcionamiento h
proteína NIS que permitió la formación de imágenes no invasivo del tumor y también la regresión del tumor in vivo eficiente
.
Una variedad de virus tienen oncolíticos propiedades que se muestran incluyendo adenovirus, virus del herpes simple, el virus de la enfermedad de Newcastle, virus de la estomatitis vesicular, y reovirus [17]. Entre una variedad de agentes virales oncolíticos, virus vaccinia tiene varias ventajas. VACV replica exclusivamente en el citoplasma sin el uso de maquinaria de síntesis de ADN del huésped, lo que reduce el riesgo de la integración del genoma viral en el genoma huésped [10]. Una gran cantidad de ADN extraño (hasta 25 kb) se puede incorporar sin reducir significativamente la eficacia de la replicación viral [19]. Por otra parte, vaccinia se ha demostrado tener un buen perfil de seguridad, ya que se ha dado históricamente a millones durante la vacunación contra la viruela. También demuestra la replicación eficiente y una amplia gama de tropismos de células huésped [10]. Varios estudios preclínicos han demostrado que la inyección sistémica de VACV recombinante en xenoinjertos dado lugar a altos títulos virales en sólo los tumores, lo que indica la colonización específico de tumor [11, 20, 21]. Hay una pequeña preocupación de que los pacientes que han recibido vacunación contra la viruela en el pasado tienen anticuerpos neutralizantes contra el virus. Esto podría resultar en la eficacia del tratamiento comprometida. Sin embargo, en la sangre, complemento juega un papel más importante en la inactivación de VACV que los anticuerpos neutralizantes. Por lo tanto, podemos predecir que la presencia de anticuerpos neutralizantes en pacientes que no debe obstaculizar el tratamiento VACV; sin embargo, podría ser necesaria una dosis de tratamiento superior. VACVs
ingeniería genética han demostrado eficacia en el tratamiento de una amplia gama de cánceres humanos [12]. GLV-1 H168 ya ha demostrado ser un vector de diagnóstico y terapéutica eficaz en varios modelos de tumores humanos, incluyendo tumores de mama, mesotelioma, cáncer de páncreas y el carcinoma de células escamosas [11] El h
proteína NIS, que es una membrana intrínseca glicoproteína con 13 dominios transmembrana putativos, transporta activamente tanto Na + y I - iones a través de la membrana de la célula [22]. Funcionamiento h
proteína NIS puede absorción varios radio-nucleótidos disponibles en el mercado, incluyendo 123 I, 124I, 125I, 131 I, 99m y 188Re [22, 23 ]. En este estudio, GLV-1 y la expresión de la proteína NIS h
en infectados MKN-74 xenoinjertos H153 mediada resultó en un 99m y captación del radiotrazador 124I localizada. Nuestros resultados sugieren que la expresión h
gen NIS a través de vector viral se puede utilizar como una técnica de imagen no invasiva para controlar la progresión y tratamiento de los efectos tumorales.
Una sola inyección intratumoral de GLV-1 H153 en MKN-74 xenoinjertos exhibido GFP localizada y intratumoral h
expresión de NIS. Por otra parte, no hubo evidencia de diseminación viral a cualquier otro órgano de formación de imágenes basados ​​en GFP, gammagrafía 99mTc, y 124I PET, infección viral específico de tumor de indicación y actividad. Se demostró además que GLV-1 H153 es eficaz y segura en el tratamiento de tumores gástricos en un modelo de xenoinjerto murino. El-1 GLV grupo H153 tratados fue seguido continuamente hasta día 35 y no había crecimiento tumoral (datos no mostrados entre el día 28 y 35). El grupo de control tuvo que ser sacrificado de acuerdo a nuestro animal protocolo aprobado en el día 28. Expresar el gen NIS
h en un tejido de otra forma no hNIS que expresan es emocionante. Que potencialmente podría hacer uso de la toma de imágenes bien establecida y la terapia en sí no tiroides originado cánceres. Varios estudios han demostrado resultados prometedores en una variedad de tumores utilizando tratamiento con yodo radiactivo a través de la expresión específica del tumor del gen NIS h
, incluyendo carcinoma medular de tiroides [24], cáncer de próstata [25], cáncer de colon [26], y de mama cáncer [27]. expresión h
NIS-Tumor concreto utilizando GLV-1 H153 puede maximizar la acumulación de yodo radioactivo localizada y minimizar la absorción no específica en otros órganos. En base a los resultados prometedores, sería de importancia clínica significativa para evaluar el efecto de la terapia de combinación de GLV-1 H153 y yodo radiactivo.
Conclusión
Este estudio demuestra una novela VACV oncolítico diseñado para expresar la h
NIS puede infectar eficazmente, replicarse dentro de, y causar la regresión del cáncer gástrico en un modelo de xenoinjerto murino. la expresión de GFP puede servir como un sustituto de la infectividad viral. En vivo
, GLV-1 H153 células infectadas pueden ser fácilmente imágenes impresas con gammagrafía con 99mTc y la imagen 124I de PET. Estos datos proporcionan más apoyo para la futura investigación de GLV-1 H153 como agente de tratamiento y una técnica de imagen no invasiva en los entornos clínicos
abreviaciones
VACV:.
Virus vaccinia

hNIS:
de sodio humana yoduro de cotransportador
ATCC: American Type Culture
Colección
RUC-GFP:
proteína verde fluorescente Renilla luciferasa
-Aequorea
LDH:
lactato deshidrogenasa ()
CICUAL: Francia El Comité de Cuidado y uso de Animales institucional
MSKCC:
Memorial Sloan-Kettering Cancer Center
PFU:
unidades formadoras de placa
MOI: multiplicidad de infección

PET: tomografía por emisión de positrones


ROI:
región de interés
RTFR: Read inversa receptor de transferrina humana insertada
SPECT:.
emisión de fotón único tomografía computarizada
Declaraciones
Agradecimientos
servicios técnicos proporcionados por el Fondo para el MSKCC Small Animal-Imaging Core, apoyado en parte por el NIH Pequeño Programa de Investigación de Imagen -animal (SAIRP) subvención Sin R24 CA83084 y NIH Centro de Grant P30 CA08748 No, se agradece.
los autores originales presentados archivos de imágenes
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No existen intereses económicos que compiten por Kyong Hwa-jun, Tae-Jin Song, Sepideh Gholami, Joyce Au, Dana Haddad, Carson Joshua, Chun-Hao Chen, Kelly Mojica, Pat Zanzonico, y Yuman Fong. Nanhai G. Chen, Zhang Qian, y Aladar A. Szalay están afiliados a Genelux Corporation.
Contribuciones de los autores
SG ayudó con la reseña del manuscrito. TS asistidos en los experimentos in vivo en
y contribuyó al diseño del estudio. JA contribuyó al ensayo de citotoxicidad. DH contribuyó a la vivo
PET y SPECT en. JC contribuyó a imágenes fluorescentes. CC contribuido al análisis estadístico de los datos. KM contribuyó al ensayo de replicación viral. PZ contribuido al diseño del estudio y los experimentos de imagen radiactivos. Carolina del Norte y QZ contribuyeron a la secuencia viral y la construcción. AS y YF contribuido al diseño del estudio y la terminación del manuscrito. Todos los autores leído y aprobado el manuscrito final.

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