Análise de proteínas relacionadas com o ciclo celular em intramucoso gástrico cânceres do tipo diferenciado com base em mucina fenótipos: a nova hipótese de carcinogênese gástrico precoce baseado em mucina Análise phenotype

de proteínas relacionadas com o ciclo celular em cancros intramucoso de tipo diferenciado gástricas com base em mucina fenótipos: a nova hipótese da carcinogênese gástrico precoce baseado em mucina fenótipo da arte abstracta
Fundo
Anormalidades do celular reguladores do ciclo são características comuns em cancros humanos, e vários destes fatores estão associados com o desenvolvimento precoce de cancros gástricos. No entanto, estudos recentes têm demonstrado que a tumorigénese cancro gástrico foi caracterizado por mucina expressão. Assim, os padrões de proteínas relacionadas com o ciclo de células de expressão foram investigados na fase precoce do cancro gástrico do tipo diferenciado a avaliar quaisquer relações mecanicistas com fenótipos de mucina.
Métodos
imunocoloração para ciclinas D1, A, E, e p21, p27, p53 e β-catenina foi usado para examinar deficiências do ciclo celular em 190 intramucosal gástrico do tipo diferenciado cancros. fenótipos de mucina foram determinados pelas expressões de MUC5AC, MUC6, MUC2 e CD10. A taxa positiva Ki-67 (PR) também foi examinada.
Resultados
Overexpressions de p53, ciclina D1 e ciclina A foram significativamente mais freqüentes em um fenótipo gástrica do que um fenótipo intestinal. Ciclina A foi sobre-expresso em um fenótipo misto em comparação com um fenótipo intestinal, enquanto p27 superexpressão foi mais frequente em um fenótipo intestinal do que em um fenótipo misto. Redução da p21 era uma característica comum dos intramucoso gástrico do tipo diferenciado cancros examinados.
Conclusões
Nossos resultados sugerem que os níveis de alguns reguladores do ciclo celular parecem estar associados com mucina fenótipos de cânceres do tipo diferenciado gástrico precoce.
fundo
progressão através do ciclo celular e a proliferação celular estão sob o controle de uma série de ciclinas e os complexos de ciclina-dependente cinase (CDK) [1-3]. Evidências acumuladas mostram que a progressão da tumorigênese frequentemente envolve anormalidades nas expressões de ciclinas e outros genes de células de ciclo relacionados [1-3]. Anormalidades foram encontrados para ciclinas D1, A, E e seus parceiros de cooperação, como dependente da ciclina quinase (CDK), que promovem a progressão do ciclo celular [1, 3]. Além disso, estes factores progressivos pode ser inibida por inibidores, tais como p21, p27 e p57, e outro grupo de proteínas, incluindo inibidores de p16, p15 e p18 [4-10]. A proliferação descontrolada que caracteriza as células tumorais podem ser amplamente explicado pelo ganho e /ou perda das funções das proteínas que compreendem o ciclo celular. Regulação destas proteínas relacionadas com ciclo-célula também é regulado por outros factores, incluindo p53 e β-catenina, e as suas alterações também prejudicar o ciclo celular, resultando na proliferação descontrolada [11-15].
Da célula acima cycle- proteínas relacionadas, os reguladores-chave da progressão através da fase G1 do ciclo celular são ciclina D1 e ciclina e, p53, p21 e p27 [1, 4, 6, 12]. As expressões anormais foram pensados ​​para desempenhar um papel central na progressão da tumorigénese e foram encontrados para ser perturbado em várias malignidades humanas. A ciclina A é também um membro da superfamília de proteínas ciclina que pode ser activado durante a transição de G1 para a fase S do ciclo celular. expressões anormais de ciclina A estão correlacionados com resultados pobres em vários cancros humanos [8, 9]. Além disso, a expressão nuclear de β-catenina está implicada em cancros gastrointestinais [14, 15]. β-catenina acumula-se no núcleo devido a deficiência da via de sinal de Wnt, e a sua expressão nuclear promove a progressão do ciclo celular e a proliferação celular [14, 15]. No entanto, até à data, a sua actividade não foi demonstrado que afecta a patogénese de cancros gástricos do tipo diferenciado início.
Estudos recentes têm mostrado que as expressões de mucina celulares e fenótipos de tumor estão associados com os achados clínico-patológicos e tumorigénese em differentiated- digita cancros gástricos [16-19]. Os fenótipos de mucina de tumores foram classificados principalmente em 3 tipos: fenótipos gástricas, intestinais e mistos [16, 17]. O fenótipo gástrica é caracterizado por maus resultados, características histológicas distintas e um subtipo específico de alterações genéticas, incluindo instabilidade de microssatélites (MSI) [17, 18]. Em contraste, o fenótipo intestinal é um tipo muito bem diferenciada, com baixa actividade proliferativa e uma falta de MSI [17]. As expressões de mucinas por células tumorais definir as características do tumor em cancros gástricos [16-19]. Assim, é importante para a compreensão de tumorigeneis precoces de cancros gástricos para examinar as alterações biológicas de acordo com estes fenótipos de mucina [16-19].
Embora um certo número de estudos sobre a expressão de factores relacionados com o ciclo celular foram relatados [ ,,,0],3-7], as associações de câncer gástrico de tipo diferenciado precoces e seus fenótipos de mucina e alterações de proteínas de células de ciclo relacionados não são totalmente compreendidos. No presente estudo, examinamos anormalidades das proteínas relacionadas com o ciclo celular da fase precoce de cancros gástricos do tipo diferenciado com base em mucina fenótipos.
Métodos
Pacientes
Materiais para este estudo foram obtidos a partir de 190 pacientes com cancros gástricos primeiras primárias que foram diagnosticados na Divisão de Molecular Diagnostic Patologia, Departamento de Patologia, Iwate Medical University, Morioka, Japão. O consentimento informado foi dado em todos os pacientes que examinamos. Além disso, nosso estudo foi aprovado pelo nosso comitê de ética (título, a análise molecular de tumores gastrointestinais e os mucosa circundantes; número de referência, H21-140, comitê de ética da Universidade de Medicina de Iwate). Estes tumores eram consistentes com cancros de tipo diferenciado intramucosal, e foram obtidos a partir de amostras de dissecção endoscópica submucosa (ESD). Os critérios histológicos usados ​​para fazer diagnósticos histológicos foram baseados nos critérios hospitalares [16], que foram modificadas das do japonês Sociedade de Pesquisa para o câncer gástrico [20], uma vez que existem discrepâncias nos julgamentos histológicas entre patologistas japoneses e ocidentais. dados clínico-patológicos detalhados (idade do paciente, sexo, localização do tumor, tamanho do tumor, o tipo macroscópica e grau de diferenciação do tumor) são mostrados no arquivo adicionais 1.
Neste estudo, intramucoso de tipo diferenciado cânceres foram sub-classificados em 3 grupos de acordo com o grau nuclear tumor: baixo, intermediário ou alto. O grau do tumor foi determinado de acordo com critérios previamente publicados [17]. Em breve, o cancro de baixo grau foi diagnosticada pela presença de células com núcleos, hipercromáticas alargada que foram largamente confinado às porções basais das células, mas que tinha mais glândulas irregulares e complexos que os adenomas gástricas. Os tumores que continham células que têm uma perda óbvia de polaridade, irregularidade nuclear alta, nucléolo alargada e hyperchromatin foram classificados como cancros de grau elevado. Os cânceres de alto grau, muitas vezes mostrou atipia arquitectónico significativo, tais como altas distorções arquiteturais ou glandulares. resultados intermédios entre cancros baixa e de alta qualidade foram reconhecidos como cancros intermediários. No entanto, a distinção histológica entre adenoma de estômago e câncer de baixo grau foi por vezes muito difícil. As lâminas foram avaliadas independentemente por 2 patologistas experientes (S. T. e N. S.); em alguns casos em que as avaliações previstas diferentes resultados, uma interpretação consenso foi alcançado depois de re-exame. A imuno-histoquímica

Imediatamente após a excisão, as amostras foram fixadas em 20% de formalina tamponada neutra, embebidos em parafina, cortados em três mm parafina e corados com hematoxilina e eosina (HE) para microscopia de luz de rotina. Para coloração imuno-histoquímica, 3 mm de espessura foram cortadas adicionais a partir de tecido embebido em parafina e colocadas em lâminas de vidro com poli-L-lisina-revestidas. Resumidamente, os cortes foram desparafinados em xileno e desidratadas. Para a determinação da mucina fenótipos, imunocoloração foi feito para MUC 2 (Ccp58, Novocastra Laboratories, Newcastle, UK), CD10 (56C6, Novocastra Laboratories), MUC 5AC (CLH2, Novocastra Laboratories) e MUC 6 (CLH5, Novocastra Laboratories, Newcastle , Reino Unido). Além disso, a imunocoloração foi feito para p53 (clone, DO7, DAKO, Carpinteria, CA, EUA), Ki-67 (MIB-1, Dako), p21 (SX118, Dako), p27 (SX53G8, Dako), ciclina D1 ( SP4, Nichirei Co., Tóquio), ciclina e (13A3, Novocastra Laboratories), ciclina a (6E6, Novocastra Laboratories) e β-catenina (BD, transdução Laboratories).
imunohistoquímica utilizado o sistema DAKO Envision +, que consiste em dextrano polímeros conjugados com peroxidase de rábano (Dako), como previamente descrito [16, 17]. As amostras foram aquecidas por micro-ondas em tampão citrato (pH 6,0) 3 vezes durante 5 min cada em 750W antes das reacções com os anticorpos (H2500, Processador de microondas, Bio Rad, EUA), como descrito anteriormente [16, 17]. Hematoxilina foi usado como o corante de contraste.
Avaliação da expressão de mucina
Neste estudo, os tumores gástricos foram classificados em 4 grupos de acordo com os seus padrões de imunocoloração. Um fenótipo gástrica foi definida como tumores que têm mucina intracitoplasmática predominante do tipo gástrico, como determinado por imunocoloração com mucina gástrica humana (MUC5AC) e /ou mucina da glândula pilórica (MUC6), mas não com células positivas para MUC-2. Um fenótipo intestinal foi indicada por um tumor que mostra células MUC2-positivas e /ou CD10 positivas (juntamente com uma borda em escova). Estes tumores foram diferenciadas de células de absorção do intestino delgado. tumores de fenótipo intestinal foram sub-classificados em 2 grupos: tipo de cólon (positivo para MUC 2 apenas) e pequena tipo intestinal (positivo para CD10). Um fenótipo misto foi definida como tendo um tumor imunocoloração consistente com o tipo gástrico (células positivas para MUC5AC e /ou mucina da glândula pilórica), bem como do tipo intestinal mucina (células positivas para CD10 e /ou MUC2). Finalmente, os tumores sem imunomarcação para fenótipos quer gástricos ou intestinais foram atribuídos a um tipo de "não classificado". resultados imunopositivas para > 5% das células tumorais foram considerados como resultados positivos, e imunopositivas para < 5% como negativo, de acordo com relatórios anteriores [16, 17, 21].
Medindo a taxa positiva Ki-67 (PR)
áreas aleatórias de cada amostra foram selecionados em que a contagem Ki-67 núcleos positivos . A taxa positiva de Ki-67 foi calculada como a percentagem da Ki-67 núcleos de células tumorais positivas determinada em 10 campos de alta potência (HPF, 400x), que foi determinada depois de contar, pelo menos, 500 células tumorais por amostra de tumor. actividade proliferativa do tumor foi classificada em 2 grupos: altas e baixas. A atividade proliferativa foi determinada de acordo com os nossos critérios [16, 17]. Em resumo, PR do tecido foi medido em ambos o tecido do tumor e do seu tecido circundante não neoplásico. Alta proliferação foi considerada se a PR foi superior no tecido tumoral do que no tecido não neoplásico. Low proliferação foi julgado se PR foi menor no tecido tumoral do que no tecido não-neoplásica.
Avaliação imuno-histoquímica de proteínas relacionadas com o ciclo celular
A proporção de células tumorais por seção foi avaliada por olho e atribuída uma pontuação tão resumidos na 2A arquivo adicionais. Um total de 500 células foram contadas em campos aleatórios de áreas representativas da lesão. Para todos os marcadores, apenas a coloração nuclear foi considerada positiva. A intensidade da coloração foi estimada em uma escala de 5 pontos (0 a 6+) e uma pontuação foi atribuída de acordo com a intensidade (2B arquivo adicionais). O índice de marcação foi um produto multiplicativa simples das pontuações celularidade e coloração. Em seguida, elevada expressão para células de tumor foi gravado se o índice de coloração foi maior nas células do tumor do que no seu tecido circundante não neoplásico. Em contraste, baixa expressão para células de tumor foi gravado se o índice de coloração foi inferior ou igual nas células do tumor do que no tecido não neoplásico. Por exemplo, um valor representativo é mostrado na Figura 1. Os critérios originais foram descritos anteriormente [22], e os actuais critérios foram utilizados, com pequenas modificações. Duas secções foram coradas e os valores foram baseados na média dos resultados individuais 2. Figura 1 Exemplo de intramucoso câncer gástrico de tipo diferenciado. Considerando que a pontuação do índice para a expressão da ciclina D1 é de 16 na mucosa câncer gástrico (b), o resultado é 4 em seu entorno mucosa não-neoplásica (a). O tumor que é mostrada na Figura 1B é considerado adenocarcinoma bem diferenciado por patologistas japoneses, embora este tumor é considerado adenoma gástrica ou displasia por patologistas ocidentais.
Análise Estatística
Os resultados são apresentados como média ou valores médios. A análise estatística utilizou o teste Tamhane para comparações entre 3 grupos e testes qui-quadrado para comparações entre os 2 grupos. A significância estatística foi estabelecida no p < 0,05.
Resultados
características clínico-patológicas
Como mostrado no arquivo adicionais 3, dos cancros 190 intramucoso gástrico do tipo diferenciado, 23 (12,1%) eram do fenótipo gástrico, 85 (44,7%) foram o fenótipo intestinal e 79 (41,6%) foram classificados como fenótipos mistos. Apenas 3 (1,6%) tumores eram do tipo não classificados. achados clínico-patológicas com base nos fenótipos de mucina também estão listados no arquivo adicionais 3. Não houve diferenças significativas para a idade, tamanho do tumor, localização, tipo microscópica ou tipo histológico entre as 3 fenótipos. No entanto, para os fenótipos gástricas e misturados, a incidência de tumores de grau elevado foram significativamente mais elevados para os fenótipos gástricas e mistos do que o fenótipo intestinal (p < 0,01 e P < 0,05, respectivamente). Além disso, a relação homem /mulher para o fenótipo misto foi ower do que para os outros tipos (p < 0,05)
No presente estudo, fenótipos gástricos foram classificados em 3 sub-fenótipos:. MUC5AC (+) /MUC6 (+), de MUC5AC (+) /MUC6 (-) e MUC5AC (-) /MUC6 (+). Quinze (65,2%) teve o MUC5AC (+) /MUC6 (+) padrão, 5 (21,7%) teve o MUC5AC (+) /MUC6 (-) padrão e 3 (13,1%) foram subclassificados como o MUC5AC (-) /MUC6 (+) padrão. Entre os 3 sub-fenótipos gástricos, não houve diferenças clínico-patológicos foram encontrados. Em contraste, os fenótipos intestinais foram sub-dividida em intestino delgado (N = 67) e do cólon (n = 18) fenótipos. Não houve diferenças significativas entre eles para a idade, tamanho do tumor, localização, tipo macroscópica ou tipo histológico.
Expressões de proteínas relacionadas com o ciclo celular por meio de mucina fenótipos
Sem proteína p53 foi encontrado em qualquer ambiente mucosa não-neoplásica. Observou-se sobre-expressão de p53 em 33 de 190 casos que examinamos (17,4%), e foi mais freqüente no fenótipo gástrica (10/23, 43,5%) em comparação com os outros 2 tipos (fenótipo intestinal, 13/85, 15,3 % e fenótipo misto, 9/79, 11,4%). Embora a diferença entre os fenótipos gástricas e intestinais não atingiram significância estatística (p = 0,054), o gástrica e fenótipos mistos mostrou uma diferença significativa (p < 0,05). Além disso, nenhuma proteína p53 foi encontrada em cancros de baixo grau (0/26). Em contraste, a p53 foi sobre-expresso em 11 de 103 cancros de grau intermediário (10,7%) e 22 de 61 cânceres de alto grau (36,1%). As diferenças significativas entre o cancro de alto grau e de baixo grau ou cancros de grau intermediário foram encontrados (p < 0,01).
p21 foi expresso principalmente no epitélio superficial da glândula metaplásico intestinal e o epitélio gástrico foveolar. A frequência de expressão p21 reduzida foi de 59 de 190 tumores (31,1%). a expressão da p21 reduzida foi comumente observada nos fenótipos gástricas, intestinais e mistos. Não houve diferença significativa para expressões p21 reduzido entre os fenótipos 3.
Expressão de p27 foi confinado ao epitélio superficial e a base da glândula metaplásico intestinal. A frequência de expressão p27 reduzida foi muito baixa nos cancros gástricos que examinamos (12/190, 6,3%). Em contraste, a frequência para a sobre-expressão de p27 foi observada em 53 dos 190 tumores (27,9%). A frequência da superexpressão p 27 foi maior no fenótipo intestinal (31/85, 36,5%) do que no gástrica (23/06, 26,1%) e fenótipos mistos (16/79, 20,2%). No entanto, estas diferenças não eram significativas.
Ciclina D1 foi expressa na metade inferior da glândula metaplásico intestinal. Nos cancros gástricos analisados, 27 de 190 casos (14,2%) mostraram overexpressed ciclina D1. Da ciclina D1 foi overexpressed no fenótipo gástrica para 7 de 23 casos (30,4%). Por comparação, a sobre-expressão de ciclina D1 foi encontrada em 11,8% (10/85) e 12.7% (10/79) dos fenótipos e intestinais mistas, respectivamente. Não houve diferença significativa foi encontrada entre o fenótipo gástrica e outros tipos.
Expressão de ciclina A foi confinada principalmente à metade inferior da glândula metaplásico intestinal. A coloração positiva para a ciclina A foi detectado em 42,1% (80/190). A frequência de ciclina A sobre-expressão foi mais elevada no fenótipo gástrica (16/23, 69,6%) do que no fenótipo intestinal (25/85, 29,4%; p < 0,01). No entanto, não houve diferença significativa entre o gástrica e fenótipos mistos (39/79, 49,4%). Glândulas
não-neoplásicas eram em sua maioria negativa para a ciclina E. Nos cancros gástricos analisados, a frequência de ciclina E superexpressão foi muito baixo. Não houve diferença significativa entre a era visto os 3 fenótipos de mucina.
Neste estudo, apenas a expressão nuclear para β-catenina foi considerado como positivo. Nenhuma expressão nuclear de β-catenina foi observada em torno mucosa não-neoplásicas, com excepção de glândulas pilórica. A maioria das glândulas pyloric expressa nuclear β-catenina. expressão β-catenina nuclear foi encontrado em 80 dos 190 tumores (36,8%). Embora o fenótipo intestinal (44/85, 51,8%) apresentaram a maior frequência para β-catenina nuclear entre os fenótipos 3, a diferença não era significativa.
Uma elevada taxa de proliferação de células tumorais foi mostrado em mais de 30% Ki -67 PR na maioria dos cancros gástricos que foram examinados. De acordo com os nossos critérios, a alta proliferação foi encontrado em 101 de 190 tumores (53,2%). Alta proliferação de células tumorais foi mais frequentemente observada nos fenótipos gástricas e mistas em comparação com o fenótipo intestinal (p < 0,01 e P < 0,05). Temos resumidos estes resultados para as proteínas relacionadas com o ciclo celular com base no fenótipo de mucina na Figura 2. Além disso, um exemplo representativo é mostrado na Figura 3. A Figura 2 frequências de expressão de proteínas relacionadas com o ciclo celular em gástrica, intestinal e fenótipos mistos. cancros gástricos fenótipo são caracterizados por overexpressions A p53 e ciclina. Embora a frequência de sobre-expressão de p27 de fenótipo entre as intestinais e outros fenótipos não alcançou diferença estatística, esta característica pode ser do fenótipo intestinal. Redução da p21 e acúmulo de β-catenina são comumente observados nos 3 fenótipos. Ki-67 é mais elevada taxa positiva no fenótipo gástrica ou fenótipo misto do que no fenótipo intestinal. As comparações estatísticas utilizados testes Tamhane para todos os 3 fenótipos.
Figura 3 Um exemplo representativo de intramucoso intestinal câncer do tipo diferenciado do fenótipo gástrico. uma. vista de baixa potência do tecido tumoral. b. vista alto poder de tecido tumoral. c. proteína p53 foi visto. d. p21 foi reduzida. e. p27 foi sobre-expresso. f. A sobre-expressão de ciclina A. G. Baixa expressão da ciclina D1. h. Apenas MUC2 foi expresso neste tumor, sugerindo fenótipo intestinal.
Discussão
Apesar de uma tendência para a diminuição da incidência, o câncer gástrico continua a ser um problema de saúde importante em todo o mundo, e é a neoplasia mais comum no Japão. cancro intramucosal é definida como um tumor na fase mais precoce do cancro gástrico. É essencial examinar o câncer intramucoso para avaliar a patogênese do câncer gástrico. É amplamente aceite que uma célula cancerosa surge devido a anormalidades de regulação do ciclo celular, que é composta de várias proteínas relacionadas com o ciclo celular, tais como ciclinas, ciclina inibidor da quinase dependente de p53, e β-catenina. Além disso, estudos recentes demonstraram que os achados clínico-patológicos distintos de cancro gástrico são caracterizados pela expressão de mucina. Nós estudamos expressões anormais de proteínas relacionadas com o ciclo celular que promovem carcinogênese gástrica baseado em mucina fenótipos em intramucoso de tipo diferenciado cancros gástricos.
No presente estudo, imuno-histoquímica foi utilizada para investigar os níveis de proteínas relacionadas com o ciclo celular de expressão. Imunopositividade para as proteínas relacionadas com o ciclo celular de tecido tumoral foi determinada por comparação dos níveis de entre o tecido tumoral e do seu tecido não neoplásico circundante. De acordo com estes critérios, o grau de imunopositividade de tecido de tumor pode ser diferente para cada caso. No entanto, separando os parâmetros dentro destes cancros em "baixa" e as categorias de "alta" com base em comparações entre esses fatores e tecido não-neoplásica pode ser um método não convencional. O tecido "não-neoplásica" inclui gastrite (crónica ou crónica activa) e /ou a metaplasia intestinal; os parâmetros nestes vários tecidos inflamatórios ou metaplásicas pode variar consideravelmente. Pode ser mais significativo para usar uma taxa absoluta (isto é, a% real), em vez do que este valor relativo interna. No entanto, considera-se que este critério imuno-histoquímica é importante para encontrar as potenciais actividades de proteínas relacionadas com o ciclo celular na fase precoce de cancros do tipo diferenciado gástricas, dado que o tecido do tumor de tecido não neoplásico circundante está estreitamente associada com o desenvolvimento do tumor.
foi acredita-entre os patologistas que o fenótipo gástrica do cancro gástrico mostra atipia de baixo grau em cancros intramucoso de tipo diferenciado gástrico (19). No entanto, no presente estudo, nos cancros do tipo diferenciado intramucoso gástrico que examinamos, o fenótipo gástrica mostrou atipia de alta qualidade. Embora a razão pela qual permanece desconhecida, uma razão possível é que um fenótipo gástrica mostrando atipia de baixo grau, que se assemelha histologicamente epitélio gástrico foveolar, pode ter sido incluída nos estudos anteriores. No presente estudo, foi observado apenas um tal tumor. Além disso, estas diferenças podem ser devido ao número de amostras ou a factores etiológicos ou étnicas. É bem conhecido que a p53 sobre-expressão correlaciona-se com o grau do tumor. No presente estudo, sugerimos que é razoável para mostrar uma alta frequência de proteína p53 para o fenótipo gástrica quando comparado com outros fenótipos.
Neste estudo, a superexpressão do p53 foi mais encontrada no fenótipo gástrica do que no intestinal ou fenótipos misturados. Esta descoberta sugere que proteína p53 desempenha um papel essencial, pelo menos no início do desenvolvimento de câncer gástrico fenótipo, embora estudos anteriores mostraram aumentos progressivos da proteína p53 em cancros gástricos da cedo para estágios avançados [12].
Neste estudo, a diminuição da expressão de p21 foi observada em aproximadamente 30% dos fenótipos 3 mucina. Estudos anteriores mostraram que a baixa expressão da p21 correlaciona-se com o prognóstico do paciente no cancro gástrico [5, 6]. No entanto, pouco se sabe sobre a expressão da p21 por câncer gástrico com base em mucina fenótipos. Além disso, qualquer associação de expressão p21 com o estágio do tumor (profundidade do tumor) permanece desconhecida. Nossa descoberta sugere que a reduzida expressão p21 desempenha um papel comum no desenvolvimento inicial das 3 fenótipos de mucina de cânceres do tipo diferenciado gástricas. No entanto, um estudo anterior sugeriu que uma diminuição progressiva de expressão p21 ocorreu em fase avançada de câncer gástrico do tipo diferenciada da fase inicial [6]. a expressão da p21 também se correlacionou com as expressões de outras proteínas relacionadas com o ciclo celular, tal como p27 e Ki-67, eventualmente através de uma via dependente de p53 [1, 5, 6]. Postula-se que a p21 coopera com p53 e, como resultado, o ciclo celular é controlado através de uma via dependente de p53 [1, 5]. Além disso, acredita-se que a p21 também é inibida por co-operação com p27 [1, 5]. No presente estudo, no entanto, verificou-se uma correlação de não redução de p21 com p27 redução nem uma correlação inversa de redução p27 com sobreexpressão de p53 (dados não apresentados). Sugere-se que existe uma via diferente para o controlo do ciclo celular em cancros gástricos humanos.
É bem conhecido que p27 é um gene supressor de tumor prototípico [1-3]. No entanto, um estudo recente mostrou que, ao passo que, em alguns casos, p27 inibe o ciclo celular, em outros casos, ela promove a progressão para a fase seguinte do ciclo celular [23]. Tem sido relatado que, quer uma perda ou uma baixa expressão de p27 está correlacionada com a progressão do tumor ou o prognóstico do paciente [24, 25]. Em contraste com outros estudos, que mostraram que a baixa expressão (redução) do p27 teve uma freqüência muito baixa em nossa série de cancros gástricos. De acordo com os achados, reduzida expressão p27 desempenha um papel menor no desenvolvimento de cancros gástricos tipo diferenciado.
Em contraste, a sobre-expressão de p27 foi frequentemente encontrada no fenótipo intestinal em comparação com os outros 2 fenótipos, embora a diferença entre eles não atingiu um nível de significância estatística. Seja ou não esta sobre-expressão de p27 está associada com a inibição do ciclo celular ou a progressão do ciclo celular não é conhecido, embora várias explicações são sugeridos. Em primeiro lugar é que p27 que é sobre-expresso para a supressão da progressão do ciclo celular em células tumorais resultados a partir de um mecanismo de feedback negativo. Por outro lado, uma segunda explicação é de que a sobre-expressão de p27 é positivamente associados com a progressão do ciclo celular de células de tumor; isto é, p27 actua como um factor oncogénica [23]. Além disso, um estudo recente demonstrou que a expressão de p27 é regulada através da expressão de Skp2, que é uma sub-unidade de ligase de ubiquitina de p27 [26]. De acordo com este relatório, a expressão da p27 foi inversamente correlacionada com a expressão Skp2.
Ciclina D1 superexpressão só mostrou uma frequência baixa no estágio inicial de câncer de tipo diferenciadas gástrico (27/190, 14,2%). No entanto, embora as diferenças não atingiram um nível significativo, a frequência da superexpressão da ciclina D1 foi maior no fenótipo gástrico do que os fenótipos e intestinais mistas. Da ciclina D1 foi previamente estudada em várias séries de cancros gástricos, com uma frequência relatada de 20 ~ 56% da superexpressão sendo relatado [27-29], diferente de nossos resultados. Como uma possível razão para estas diferenças de ciclina D1 sobre-expressão, apesar de cancros do tipo diferenciado cedo, excepto quanto ao fenótipo gástrica, não exigir um aumento da ciclina D1, uma vez que o tumor se desenvolveu, as células tumorais necessitam de um elevado nível de ciclina D1 para a progressão do tumor. Isto sugere que a sobre-expressão de ciclina D1 está correlacionada com o prognóstico do paciente em cancros gástricos [28].
Sobre-expressão de ciclina A também foi mais prevalente no gástrica e fenótipos mistas em comparação com o fenótipo intestinal. Isto sugere que a sobre-expressão de ciclina A desempenha um papel importante na tumorigénese dos fenótipos gástricas e mistos. Assim, em cancros gástricos, aquisição de mucina gástrica de expressão pode ser associada com ciclina A sobre-expressão, o que resulta na proliferação tumoral elevada. Além disso, a ciclina A foi intimamente associado com o prognóstico do paciente ou a agressividade do tumor [8, 9]. Isto pode indicar que ciclina A sobre-expressão está relacionada tanto para o desenvolvimento e progressão do tumor em cerca de metade dos cancros gástricos do tipo diferenciado.
No presente estudo, a sobre-expressão de ciclina E mostraram baixas frequências nos 3 fenótipos. Em contraste, estudos anteriores demonstraram que a sobre-expressão de ciclina E foi correlacionado com um mau resultado [4, 10], embora os resultados contrastantes ter sido sugerido [30]. Os presentes resultados indicam que a sobre-expressão de ciclina E desempenha qualquer papel essencial na tumorigénese precoce de cancros gástricos do tipo diferenciado. Além disso, a sobre-expressão de ciclina E pode promover essencialmente a progressão de cancros gástricos. Estas descobertas sugerem que a elevada proliferação do fenótipo gástrica pode ser caracterizado pela sobre-expressão de ciclina D1 e /ou ciclina A, e que o fenótipo misto está associada a ciclina A sobre-expressão.
É bem conhecido que a expressão β-catenina regula positivamente o ciclo celular e desempenha um papel central na via de transdução de sinal de Wnt [14, 15]. No presente estudo, é interessante notar que a expressão β-catenina foi frequentemente observada nos cancros gástricos do tipo diferenciado iniciais que foram examinados. já Admite-se que a expressão β-catenina é fundamental para o desenvolvimento de adenoma do cólon [31, 32]. Os presentes resultados e estudos anteriores sobre adenoma colorrectal indicam que a expressão β-catenina pode ser uma alteração comum no desenvolvimento precoce de tumores gastrointestinais em [31]. Isso pode ser explicado pela descoberta de que, em cânceres gástrico, promotores de genes associados à via de sinalização Wnt são altamente metilados [32-34], o que resulta na acumulação nuclear de expressão β-catenina.
Conclusões Online em resumo, propomos que os fenótipos de mucina celulares de intramucosal adenocarcinomas do tipo diferenciado do estômago são dependentes de alterações relacionadas com o ciclo celular distintas, e que os resultados clinico-patológico resultar de diferentes vias com base na mucina expressão: fenótipos gástricas, intestinais e mistos . A Figura 4 ilustra um modelo de carcinogénese novo para adenocarcinomas do tipo diferenciado intramucosal que se baseia nos seus fenótipos de mucina. Com base nas alterações das proteínas relacionadas com o ciclo celular, overexpressions de p53 e ciclina A caracterizar o fenótipo cancros gástricos, ao passo que a sobre-expressão de p27 pode estar associada com o desenvolvimento de cancros intestinais fenótipo.

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