El análisis de las proteínas relacionadas con el ciclo celular en intramucosos gástrica cánceres de tipo diferenciado basado en la mucina fenotipos: una nueva hipótesis de la carcinogénesis gástrica temprana basada en mucina fenotipo

El análisis de las proteínas relacionadas con el ciclo celular en intramucosos gástrica cánceres de tipo diferenciado basado en la mucina fenotipos: una nueva hipótesis de la carcinogénesis gástrica temprana basada en mucina fenotipo
Resumen Antecedentes

Anomalías de los reguladores del ciclo celular son características comunes en cánceres humanos, y varios de estos factores están asociados con el desarrollo temprano de cáncer gástrico. Sin embargo, estudios recientes han demostrado que la tumorigénesis del cáncer gástrico se caracterizó por expresión de mucina. Por lo tanto, los patrones de expresión de proteínas relacionadas con el ciclo de células se investigaron en la fase temprana de tipo diferenciado cánceres gástricos de verificar cualquiera de las relaciones mecanicistas con fenotipos de mucina.
Métodos
inmunotinción para ciclinas D1, A, E, y p21, p27, p53 y β-catenina se utilizó para examinar las deficiencias del ciclo celular en 190 intramucosos gástrico cánceres de tipo diferenciado. mucina fenotipos fueron determinados por las expresiones de MUC5AC, MUC6, MUC2 y CD10. También se examinó una tasa positiva Ki-67 (PR).
Resultados
sobreexpresiones de p53, ciclina D1 y ciclina A fueron significativamente más frecuentes en un fenotipo gástrico que un fenotipo intestinal. Ciclina A se sobreexpresa en un fenotipo mixto en comparación con un fenotipo intestinal, mientras que la sobreexpresión de p27 fue más frecuente en un fenotipo intestinal que en un fenotipo mixto. Reducción de p21 era una característica común de los cánceres gástricos intramucosos de tipo diferenciado examinado
. Conclusiones
Nuestros resultados sugieren que los niveles de algunos reguladores del ciclo celular parecen estar asociados con la mucina fenotipos de cáncer en etapas tempranas de tipo gástrico diferenciadas.
Antecedentes
progresión a través del ciclo celular y la proliferación celular están bajo el control de una serie de ciclinas y quinasa (cdk) complejos dependientes de ciclina [1-3]. La evidencia acumulada muestra que la progresión de la tumorigénesis implica con frecuencia alteraciones en la expresión de las ciclinas y otros genes relacionados con el ciclo celular [1-3]. Las anomalías se han encontrado para las ciclinas D1, A, E y sus socios cooperantes, como la quinasa dependiente de ciclina (CDK), que promueven la progresión del ciclo celular [1, 3]. Además, estos factores progresivos pueden ser inhibidas por los bloqueadores, tales como p21, p27 y p57, y otro grupo de proteínas inhibidoras, incluyendo p16, p15 y p18 [4-10]. La proliferación incontrolada que caracteriza a las células tumorales puede explicarse en gran medida por la ganancia y /o pérdida de funciones de la proteína que comprenden el ciclo celular. La regulación de estas proteínas de células relacionadas con el ciclo también se rige por otros factores, como p53 y β-catenina, y sus alteraciones también altera el ciclo celular, lo que resulta en la proliferación incontrolada [11-15]. Red de la ciclo-celular anterior proteínas relacionadas, reguladores clave de la progresión a través de la fase G1 del ciclo celular son la ciclina D1 y ciclina e, p53, p21 y p27 [1, 4, 6, 12]. Sus expresiones anormales han sido cree que desempeñan un papel fundamental en la progresión de la tumorigénesis y se han encontrado para ser perturbado en una serie de tumores malignos humanos. Ciclina A es también un miembro de la superfamilia de la proteína ciclina que puede ser activado durante la transición de G1 a la fase S del ciclo celular. expresiones anormales de la ciclina A se correlacionan con resultados deficientes en varios cánceres humanos [8, 9]. Además, la expresión nuclear de β-catenina está implicada en cánceres gastrointestinales [14, 15]. β-catenina se acumula en el núcleo debido a las deficiencias de la ruta de señal de Wnt, y su expresión nuclear promueve la progresión del ciclo celular y la proliferación celular [14, 15]. Sin embargo, hasta la fecha, su actividad no se ha demostrado que afectan a la patogénesis de los primeros cánceres gástricos de tipo diferenciado.
Estudios recientes han demostrado que las expresiones de mucina fenotipos celulares y tumores están asociados con los hallazgos clínico-patológicos y la tumorigénesis en differentiated- escriba el cáncer gástrico [16-19]. Los mucina fenotipos de los tumores se han clasificado principalmente en 3 tipos: fenotipos gástricas, intestinales y mixtos [16, 17]. El fenotipo gástrico se caracteriza por los resultados pobres, características histológicas distintas y un subtipo específico de alteraciones genéticas, incluyendo la inestabilidad de microsatélites (MSI) [17, 18]. En contraste, el fenotipo intestinal es un tipo muy bien diferenciado, con baja actividad proliferativa y una falta de MSI [17]. Las expresiones de mucinas por células tumorales definen las características del tumor en el cáncer gástrico [16-19]. Por lo tanto, es importante para la comprensión de los primeros tumorigeneis de cáncer gástrico para examinar alteraciones biológicas de acuerdo con estos fenotipos de mucina [16-19].
Aunque se han descrito una serie de estudios en relación con las expresiones de los factores relacionados con el ciclo celular [ ,,,0],3-7], las asociaciones de principios de los cánceres gástricos de tipo diferenciado y sus fenotipos de mucina y alteraciones de las proteínas del ciclo celular relacionadas no se entienden completamente. En el presente estudio se analizaron las anomalías de las proteínas relacionadas con el ciclo celular de la fase temprana de cáncer gástrico de tipo diferenciado basado en la mucina fenotipos.
Métodos Pacientes

Los materiales para este estudio se obtuvieron de 190 pacientes con principios de los cánceres gástricos primarios que fueron diagnosticados en la División de Patología Molecular de diagnóstico, Departamento de Patología de la Universidad médica de Iwate, Morioka, Japón. El consentimiento informado se da en todos los pacientes que hemos examinado. Además, nuestro estudio fue aprobado por el comité de ética (título, el análisis molecular de los tumores gastrointestinales y de la mucosa circundante; número de referencia, H21-140, el comité de ética de la Universidad Médica de Iwate). Estos tumores fueron consistentes con los cánceres de tipo diferenciado intramucosos, y se obtuvieron a partir de muestras de disección endoscópica de la submucosa (ESD). Los criterios histológicos se usan para hacer diagnósticos histológicos se basaron en los criterios de los hospitales [16], los cuales fueron modificados de los de la Sociedad Japonesa de Investigación para el cáncer gástrico [20], ya que existen discrepancias en los juicios histológicas entre patólogos japoneses y occidentales. los datos clínico-patológicos detallados (la edad del paciente, sexo, localización del tumor, el tamaño del tumor, el tipo macroscópico y el grado de diferenciación del tumor) se muestran en el archivo adicional 1.
En este estudio, intramucoso de tipo diferenciado cánceres se sub-clasifican en 3 grupos según el grado nuclear del tumor: bajo, intermedio o alto. El grado del tumor se determinó según los criterios publicados previamente [17]. En resumen, el cáncer de bajo grado fue diagnosticado por la presencia de células con núcleos hipercromáticos, alargados que se limita en gran medida a las porciones basales de las células, pero que tenía glándulas más irregulares y complejos que los adenomas gástricos. Los tumores que contenían células que tienen una pérdida obvia de la polaridad, de alta irregularidad nuclear, nucleolo ampliada y hyperchromatin fueron clasificados como cánceres de alto grado. Los cánceres de alto grado a menudo mostraron atipia arquitectónica significativa, tales como altas distorsiones arquitectónicas o glandulares. resultados intermedios entre los cánceres de bajo y alto grado fueron reconocidos como los cánceres intermedios. Sin embargo, la distinción histológica entre adenoma gástrico y cáncer de bajo grado a veces era muy difícil. Las diapositivas fueron evaluados independientemente por 2 patólogos experimentados (S. T. y N. S.); en algunos casos en los que las evaluaciones proporcionan diferentes resultados, se llegó a un consenso en la interpretación después de nuevo examen.
inmunohistoquímica
Inmediatamente después de la escisión, las muestras fueron fijadas en 20% formalina tamponada neutra, incrustado en cera de parafina, cortado en 3 m secciones de parafina y teñidas con hematoxilina y eosina (HE) para microscopía de luz de rutina. Para la tinción inmunohistoquímica, 3 micras de espesor secciones adicionales se cortaron a partir de tejido embebido en parafina y se colocaron en portaobjetos de vidrio de poli-L-lisina. En resumen, las secciones se desparafinaron en xileno y se deshidrataron. Para la determinación de mucina fenotipos, la inmunotinción se hizo para MUC 2 (Ccp58, Novocastra Laboratories, Newcastle, Reino Unido), CD10 (56C6, Novocastra Laboratories), MUC 5AC (CLH2, Novocastra Laboratories) y MUC 6 (CLH5, Novocastra Laboratories, Newcastle , REINO UNIDO). Además, la inmunotinción se realizó para p53 (clon, DO7, Dako, Carpinteria, CA, EE.UU.), Ki-67 (MIB-1, Dako), p21 (SX118, Dako), p27 (SX53G8, Dako), ciclina D1 ( SP4, Nichirei Co., Tokio), ciclina e (13A3, Novocastra Laboratories), ciclina A (6E6, Novocastra Laboratories) y β-catenina (BD transducción Laboratories,).
inmunohistoquímica utilizan el sistema Dako Envision +, que consiste en dextrano polímeros conjugados con peroxidasa de rábano picante (DAKO), como se describe anteriormente [16, 17]. Las muestras se calentaron por microondas en tampón de citrato (pH 6,0) 3 veces durante 5 minutos cada una a 750 W antes de que las reacciones con anticuerpos (H2500, procesador de microondas, Bio Rad, EE.UU.), como se describe anteriormente [16, 17]. Hematoxilina se utilizó como contratinción.
Evaluación de la expresión de mucina
En este estudio, los tumores gástricos se clasificaron en 4 grupos de acuerdo a sus patrones de inmunotinción. Un fenotipo gástrico se definió como tumores que tienen mucina intracitoplasmática predominante de tipo gástrico, tal como se determina por inmunotinción con mucina gástrico humano (MUC5AC) y /o mucina de la glándula pilórica (MUC6), pero sin células positivas MUC-2. Un fenotipo intestinal se indicó por un tumor que muestra células MUC2-positivas y /o CD10 positivas (junto con un borde en cepillo). Estos tumores se diferenciaron a las pequeñas células de absorción intestinal. tumores intestinales fenotipo se sub-clasifican en 2 grupos: de tipo colónico (positivo para MUC 2 solamente) y el tipo del intestino delgado (positivo para CD10). Un fenotipo mixto se definió como un tumor que tiene la inmunotinción de acuerdo con el tipo gástrico (células positivas para MUC5AC y /o mucina de la glándula pilórica) así como el tipo mucina intestinal (células positivas para CD10 y /o MUC2). Por último, los tumores sin inmunotinción para fenotipos bien gástricas o intestinales fueron asignados a un tipo de "sin clasificar". Immunopositive resultados de > 5% de las células tumorales se consideran resultados positivos, y immunopositive para < 5% como negativo, de acuerdo con informes anteriores [16, 17, 21].
La medición de la tasa positiva Ki-67 (PR)
se seleccionaron áreas azar de cada muestra en la que contar Ki-67 núcleos positivos . La tasa de positivo Ki-67 se calculó como el porcentaje de Ki-67 núcleos positivos de células tumorales determinado en 10 campos de alta potencia (HPF, × 400), que se determinó después de contar las células tumorales al menos 500 por muestra tumor. La actividad proliferativa del tumor se clasificó en 2 grupos: alto y bajo. La actividad proliferativa se determinó de acuerdo con los criterios de [16, 17]. En breve, PR del tejido se midió tanto en el tejido tumoral y el tejido no neoplásico circundante. Alta proliferación se consideró si PR fue mayor en el tejido tumoral que en el tejido no neoplásico. Bajo la proliferación se juzga si el PR fue menor en el tejido tumoral que en el tejido no neoplásico.
Evaluación inmunohistoquímica de las proteínas relacionadas con el ciclo celular
La proporción de células tumorales por sección se evaluó a simple vista y se asigna una puntuación tan 2A resume en el archivo adicional. Un total de 500 células fueron contados en campos aleatorios de áreas representativas de la lesión. Para todos los marcadores, únicamente tinción nuclear se consideró positiva. La intensidad de la tinción se estimó en una escala de 5 puntos (0 a 6 +) y un puntaje fue asignado de acuerdo a la intensidad (archivo adicional 2 B). El índice de tinción era un producto de la multiplicación simple de los puntajes celularidad y tinción. A continuación, la alta expresión para las células tumorales se registró si el índice de tinción fue mayor en las células tumorales que en su tejido no neoplásico circundante. Por el contrario, una baja expresión para las células tumorales se registró si el índice de tinción fue menor o igual en las células tumorales que en el tejido no neoplásico. Por ejemplo, una figura representativa se muestra en la Figura 1. Los criterios originales fueron descritas anteriormente [22], y se usaron los criterios actuales, con modificaciones menores. Dos secciones se tiñeron y valores se basan en la media de los 2 resultados individuales. Figura 1 Ejemplo de intramucoso cáncer gástrico de tipo diferenciado. Mientras que el índice de puntuación para la expresión de ciclina D1 es 16 en la mucosa cáncer gástrico (b), la puntuación es de 4 en su mucosa no neoplásica circundante (a). El tumor que se muestra en la Figura 1B se considera adenocarcinoma bien diferenciado como por patólogos japoneses, aunque este tumor se considera adenoma gástrico o displasia por patólogos occidentales.
Análisis estadístico
Los resultados se dan como mediana o valores medios. El análisis estadístico utilizó la prueba de Tamhane para las comparaciones entre los grupos 3 y pruebas de chi-cuadrado para las comparaciones entre los 2 grupos. La significación estadística se estableció a p < 0.05.
Resultados
características clínico-patológicas
Como se muestra en la disposición 3, los cánceres de 190 intramucoso gástrico de tipo diferenciado, 23 (12,1%) eran del fenotipo gástrico, 85 (44,7%) fueron el fenotipo intestinal y 79 (41,6%) fueron clasificados como fenotipos mixtos. Sólo 3 (1,6%), los tumores eran del tipo no clasificados. hallazgos clínicos y patológicos basados ​​en los fenotipos de mucina también se enumeran en el archivo adicional 3. No hubo diferencias significativas en la edad, el tamaño del tumor, localización, tipo microscópico o tipo histológico entre los 3 fenotipos. Sin embargo, para los fenotipos gástricas y mixtos, las incidencias de tumores de alto grado fueron significativamente mayores para los fenotipos gástricas y mixtos que el fenotipo intestinal (p < 0,01 y p < 0,05, respectivamente). Además, la relación hombre /mujer para el fenotipo mixto fue ower que para los otros tipos (p < 0,05): perfil en el presente estudio, los fenotipos gástricos se clasifican en 3 sub-fenotipos:. MUC5AC (+) /MUC6 (+), MUC5AC (+) /MUC6 (-) y MUC5AC (-) /MUC6 (+). Quince (65,2%) tenían la MUC5AC (+) /MUC6 (+) patrón, 5 (21,7%) tenían la MUC5AC (+) /MUC6 (-) y patrón de 3 (13,1%) fueron subclasificarán como el MUC5AC (-) /MUC6 (+) patrón. Entre los 3 sub-fenotipos gástricos, no se encontraron diferencias clínico-patológicos. En contraste, los fenotipos intestinales eran sub-dividido en intestino delgado (N = 67) y del colon (n = 18) fenotipos. No hubo diferencias significativas entre ellos la edad, el tamaño del tumor, localización, tipo macroscópica o tipo histológico.
Las expresiones de las proteínas relacionadas con el ciclo celular por la mucina fenotipos
Sin sobreexpresión de p53 se encontró en ninguna mucosa no neoplásica circundante. La sobreexpresión de p53 se observó en 33 de los 190 casos que hemos examinado (17,4%), y se observó con mayor frecuencia en el fenotipo gástrico (10/23, 43,5%) en comparación con los otros 2 tipos (fenotipo intestinal, 13/85, 15,3 % y fenotipo mixto, 9/79, 11,4%). Aunque la diferencia entre los fenotipos gástricos e intestinales no alcanzó significación estadística (p = 0,054), la gástrica y fenotipos mixtos mostraron una diferencia significativa (p < 0,05). Además, la sobreexpresión de p53 no se encontró en los cánceres de bajo grado (0/26). Por el contrario, p53 se sobreexpresa en 11 de los 103 cánceres de grado intermedio (10,7%) y 22 de 61 cánceres de alto grado (36,1%). No se encontraron diferencias significativas entre el cáncer de alto grado y bajo grado o cánceres de grado intermedio (p < 0,01).
p21 se expresa principalmente en el epitelio superficial de la glándula de metaplasia intestinal y el epitelio foveolar gástrico. La frecuencia de expresión de p21 fue reducido 59 de 190 tumores (31,1%). p21 expresión reducida se observa comúnmente en los fenotipos gástricas, intestinales y mixtos. No hubo diferencia significativa para la reducción de las expresiones de p21 entre los 3 fenotipos.
La expresión de p27 estaba confinada en el epitelio superficial y la base de la glándula metaplásico intestinal. La frecuencia de expresión de p27 reducida fue muy baja en los cánceres gástricos que hemos examinado (12/190, 6,3%). En contraste, se observó la frecuencia para la sobreexpresión p27 en 53 de 190 tumores (27,9%). La frecuencia de p 27 sobreexpresión fue mayor en el fenotipo intestinal (31/85, 36,5%) que en el gástrico (6/23, 26,1%) y fenotipos mixtos (16/79, 20,2%). Sin embargo, estas diferencias no fueron significativas.
Ciclina D1 se expresó en la mitad inferior de la glándula de metaplasia intestinal. En los cánceres gástricos examinados, 27 de 190 casos (14,2%) mostraron sobreexpresión de ciclina D1. Ciclina D1 se sobreexpresa en el fenotipo gástrico para 7 de 23 casos (30,4%). Por comparación, se encontró que la sobreexpresión de ciclina D1 en 11,8% (10/85) y 12,7% (10/79) de los fenotipos intestinales y mixtas, respectivamente. No se encontró diferencia significativa entre el fenotipo gástrico y los otros tipos.
expresión de la ciclina A se limitó principalmente a la mitad inferior de la glándula metaplásico intestinal. Se detectó tinción positiva para ciclina A en un 42,1% (80/190). La frecuencia de la ciclina A sobreexpresión fue mayor en el fenotipo gástrico (16/23, 69,6%) que en el fenotipo intestinal (25/85, 29,4%; p < 0,01). Sin embargo, no se encontraron diferencias significativas entre los gástrica y fenotipos mixtos (39/79, 49,4%). Glándulas
no neoplásicas eran en su mayoría negativos para la ciclina E. En los cánceres gástricos examinados, la frecuencia de la sobreexpresión de ciclina E era muy bajo. No hubo diferencias significativas entre los 3 mucina fenotipos fue visto.
En este estudio, sólo la expresión nuclear de β-catenina fue considerada como positiva. No se observó expresión nuclear de β-catenina en la mucosa no neoplásica que rodea, a excepción de las glándulas pilórico. La mayoría de las glándulas pilórico expresaron β-catenina nuclear. expresión β-catenina nuclear se encontró en 80 de 190 tumores (36,8%). Aunque el fenotipo intestinal (44/85, 51,8%) mostró la frecuencia más alta para β-catenina nuclear entre los 3 fenotipos, la diferencia no fue significativa.
Una alta tasa de proliferación de células tumorales se muestra en más de 30% Ki -67 PR en la mayoría de los cánceres gástricos que hemos examinado. De acuerdo con nuestros criterios, la proliferación alta se encontró en 101 de los 190 tumores (53,2%). Alta proliferación de células tumorales se observó con mayor frecuencia en los fenotipos gástricas y mixtos en comparación con el fenotipo intestinal (p < 0,01 y p < 0,05). Se han resumido los resultados para las proteínas relacionadas con el ciclo de células basados ​​en mucina fenotipo en la Figura 2. Además, un ejemplo representativo se muestra en la Figura 3. La Figura 2 frecuencias de las expresiones de proteínas relacionadas con el ciclo de células en gástrico, intestinal y fenotipos mixtos. cánceres gástricos fenotipo se caracterizan por p53 y ciclina A sobreexpresiones. Aunque la frecuencia de la sobreexpresión de p27 entre el fenotipo y otros intestinales fenotipos no alcanzó una diferencia estadística, esto puede ser característica del fenotipo intestinal. Reducción de la p21 y la acumulación de β-catenina se observan comúnmente en los 3 fenotipos. Ki-67 tasa positiva es mayor en el fenotipo gástrico o fenotipo mixto que en el fenotipo intestinal. Las comparaciones estadísticas utilizaron pruebas Tamhane para los 3 fenotipos.
Figura 3 Un ejemplo representativo de intramucoso intestinal cáncer de tipo diferenciado del fenotipo gástrico. a. punto de vista de la energía baja del tejido tumoral. segundo. Opinión de alto poder de tejido tumoral. do. se observó la sobreexpresión de p53. re. p21 se redujo. mi. p27 se sobreexpresa. F. La sobreexpresión de la ciclina A. g. Bajo la expresión de la ciclina D1. marido. Sólo Muc2 se expresó en este tumor, lo que sugiere fenotipo intestinal.
Discusión
A pesar de una tendencia decreciente en la incidencia, el cáncer gástrico sigue siendo un importante problema de salud en todo el mundo, y es la neoplasia más común en Japón. cáncer intramucoso se define como un tumor en la etapa más temprana del cáncer gástrico. Es esencial examinar cáncer intramucoso para la evaluación de la patogénesis del cáncer gástrico. Es ampliamente aceptado que una célula cancerosa se presenta debido a anomalías de la regulación del ciclo celular, que está compuesto de varias proteínas relacionadas con el ciclo de células, tales como ciclinas, ciclina inhibidor de quinasa dependiente de p53, y β-catenina. Además, estudios recientes han demostrado que los hallazgos clínico-patológicas distintas para el cáncer gástrico se caracterizan por expresiones de mucina. Se estudiaron las expresiones anormales de proteínas relacionadas con el ciclo celular que promueven la carcinogénesis gástrica sobre la base de mucina fenotipos en intramucosos cánceres gástricos de tipo diferenciado.
En el presente estudio, se utilizó la inmunohistoquímica para investigar los niveles de expresión de proteínas relacionadas con el ciclo celular. Immunopositivity para las proteínas relacionadas con el ciclo de células de tejido tumoral se determinó mediante la comparación de los niveles entre el tejido tumoral y el tejido no neoplásico circundante. De acuerdo con estos criterios, el nivel de immunopositivity de tejido tumoral puede ser diferente para cada caso. Sin embargo, la separación de los parámetros dentro de estos tipos de cáncer en "bajos" y las categorías de "alto", basada en la comparación de estos factores con el tejido no neoplásico puede ser un método no convencional. El tejido "no neoplásico" incluye gastritis (crónica o crónica activa) y /o metaplasia intestinal; los parámetros en estos diversos tejidos inflamatorios o metaplasia podrían variar considerablemente. Puede ser más significativa de utilizar una tasa absoluta (es decir, el% real), en lugar de este valor relativo interna. Sin embargo, consideramos que este criterio inmunohistoquímico es importante para la búsqueda de las posibles actividades de las proteínas relacionadas con el ciclo de células en una etapa temprana de los cánceres de tipo gástrico diferenciadas, dado que el tejido tumoral de tejido no neoplásico circundante está estrechamente asociado con el desarrollo de tumores.
se ha creído entre los patólogos que el fenotipo gástrico del cáncer gástrico muestra atipia de bajo grado en los cánceres intramucoso de tipo gástrico diferenciadas (19). Sin embargo, en el presente estudio, en los cánceres de tipo diferenciado intramucosos gástricos que hemos examinado, el fenotipo gástrico mostró atipia de alto grado. Aunque la razón sigue siendo desconocida, una posible razón es que un fenotipo gástrico que muestra atipia de bajo grado, que se asemeja gástrica histológicamente epitelio foveolar, puede haber sido incluidos en estudios anteriores. En el presente estudio, se observó solamente un tal tumor. Además, estas diferencias podrían ser debido al número de muestras o a factores étnicos o etiológicos. Es bien sabido que la sobreexpresión de p53 se correlaciona con el grado del tumor. En el presente estudio, se sugiere que es razonable para mostrar una alta frecuencia de sobreexpresión de p53 para el fenotipo gástrico en comparación con otros fenotipos.
En este estudio, la sobreexpresión de p53 se encuentra con mayor frecuencia en el fenotipo gástrico que en el intestino o fenotipos mezclado. Este hallazgo sugiere que la sobreexpresión de p53 juega un papel esencial, al menos en el desarrollo temprano de cáncer gástrico fenotipo, aunque estudios previos han demostrado aumentos progresivos en la sobreexpresión de p53 en el cáncer gástrico desde el temprano a los estadios avanzados [12]. En este
estudio, se observó la expresión de p21 reducido en aproximadamente el 30% de los 3 fenotipos de mucina. Estudios anteriores han demostrado que la baja expresión de p21 se correlaciona con el pronóstico del paciente en el cáncer gástrico [5, 6]. Sin embargo, poco se sabe acerca expresión de p21 por cáncer gástrico en base a la mucina fenotipos. Además, se desconoce cualquier asociación de la expresión de p21 con el estadio del tumor (profundidad del tumor). Nuestro hallazgo sugiere que la expresión p21 reducida desempeña un papel común en el desarrollo temprano de los 3 fenotipos de mucina de cáncer de tipo gástrico diferenciadas. Sin embargo, un estudio anterior sugiere que una disminución progresiva de la expresión de p21 se produjo en una fase avanzada de cáncer de tipo gástrico diferenciadas a partir de la fase temprana [6]. expresión de p21 también se correlacionó con la expresión de otras proteínas relacionadas con el ciclo de células, tales como p27 y Ki-67, posiblemente a través de una vía dependiente de p53 [1, 5, 6]. Se ha planteado la hipótesis de que p21 coopera con p53 y, como resultado, el ciclo celular está controlada a través de una vía dependiente de p53 [1, 5]. Además, se cree que p21 también se inhibe por la cooperación con p27 [1, 5]. En el presente estudio, sin embargo, encontramos ni una correlación de la reducción de p21 con la reducción de p27 ni una correlación inversa de la reducción de p27 con la sobreexpresión de p53 (datos no mostrados). Sugerimos que existe una vía diferente para el control del ciclo celular en el cáncer gástrico humano.
Es bien sabido que p27 es un gen supresor de tumor prototípico [1-3]. Sin embargo, un estudio reciente ha demostrado que, mientras que en algunos casos, p27 inhibe el ciclo celular, en otros casos se promueve la progresión a la fase siguiente del ciclo celular [23]. Se ha informado de que, o bien una pérdida o una baja expresión de p27 se correlaciona con la progresión del tumor o el pronóstico de los pacientes [24, 25]. En contraste con otros estudios, se demostró que la baja expresión (reducción) de p27 tenía una frecuencia muy baja en nuestra serie de cánceres gástricos. De acuerdo con los presentes hallazgos, la expresión de p27 reducida desempeña un papel menor en el desarrollo de tipo diferenciado cánceres gástricos.
Por el contrario, la sobreexpresión de p27 se encuentra con frecuencia en el fenotipo intestinal en comparación con los otros 2 fenotipos, aunque la diferencia entre ellos no alcanzó un nivel estadísticamente significativo. Sea o no la sobreexpresión de p27 se asocia con la inhibición del ciclo celular o la progresión del ciclo celular no se conoce, aunque se sugieren varias explicaciones. En primer lugar es que p27 que se sobreexpresa para la supresión de la progresión del ciclo celular en los resultados de las células tumorales de un mecanismo de retroalimentación negativa. Por el contrario, una segunda explicación es que la sobreexpresión de p27 se asocia positivamente con la progresión del ciclo celular para las células tumorales; es decir, p27 actúa como un factor oncogénico [23]. Además, un estudio reciente ha demostrado que la expresión de p27 está regulado por la expresión de Skp2, que es una subunidad de ubiquitina ligasa de p27 [26]. De acuerdo con este informe, la expresión de p27 se correlaciona inversamente con la expresión Skp2.
Sobreexpresión de ciclina D1 sólo mostró una baja frecuencia en la etapa temprana de los cánceres de tipo gástrico diferenciadas (27/190, 14,2%). Sin embargo, aunque las diferencias no alcanzaron un nivel significativo, la frecuencia de sobreexpresión de ciclina D1 fue mayor en el fenotipo gástrico que en los fenotipos intestinales y mixtos. Ciclina D1 se estudió anteriormente en varias series de los cánceres gástricos, con una frecuencia informado de 20 ~ 56% de la sobreexpresión de ser informado [27 a 29], a diferencia de nuestros resultados. Como una posible razón de estas diferencias de sobreexpresión de ciclina D1, aunque los cánceres de tipo diferenciado temprano, a excepción de fenotipo gástrico, no requieren un aumento de la ciclina D1, una vez que el tumor se ha desarrollado, las células tumorales tienen un alto nivel de ciclina D1 de la progresión del tumor. Esto sugiere que la sobreexpresión de ciclina D1 se correlaciona con el pronóstico del paciente en el cáncer gástrico [28].
La sobreexpresión de la ciclina A también fue más prevalente en la gástrica y fenotipos mixtos en comparación con el fenotipo intestinal. Esto sugiere que la sobreexpresión de la ciclina A juega un papel importante en la tumorigénesis de fenotipos gástricas y mixtos. Por lo tanto, en los cánceres gástricos, la adquisición de la expresión de mucina gástrica puede estar asociada con la ciclina A sobreexpresión, que luego resulta en la proliferación tumoral alta. Además, la ciclina A se asoció estrechamente con el pronóstico del paciente o la agresividad del tumor [8, 9]. Esto puede indicar que la ciclina A sobreexpresión se relaciona tanto con el desarrollo y progresión del tumor en aproximadamente la mitad de de tipo diferenciado cánceres gástricos.
En el presente estudio, la sobreexpresión de ciclina E mostró bajas frecuencias en los 3 fenotipos. Por el contrario, estudios anteriores han demostrado que la ciclina E sobreexpresión se correlaciona con un mal resultado [4, 10], aunque los resultados contrastantes se han sugerido [30]. Los presentes resultados indican que la ciclina E sobreexpresión no juega ningún papel esencial en las primeras tumorigénesis de tipo diferenciado cánceres gástricos. Además, la sobreexpresión de ciclina E puede promover principalmente la progresión de los cánceres gástricos. Estos hallazgos sugieren que la alta proliferación del fenotipo gástrico puede estar caracterizado por la sobreexpresión de ciclina D1 y /o ciclina A, y que el fenotipo mixto se asocia con ciclina A sobreexpresión.
Es bien sabido que la expresión de β-catenina upregulates el ciclo celular y desempeña un papel central en la transducción de señales vía Wnt [14, 15]. En el presente estudio, es interesante observar que la expresión de β-catenina se observó comúnmente en la década de los cánceres gástricos de tipo diferenciado que hemos examinado. Ya se acepta que la expresión de β-catenina es fundamental para el desarrollo de adenoma de colon [31, 32]. Los presentes resultados y estudios previos en relación con adenoma colorrectal indican que la expresión β-catenina puede ser una alteración común en el desarrollo temprano de los tumores gastrointestinales [31]. Esto podría explicarse por el hallazgo de que, en los cánceres gástricos, los promotores de genes relacionados con la vía de señales Wnt están altamente metilados [32-34], lo que resulta en la acumulación nuclear de expresión β-catenina.
Conclusiones En
resumen, proponemos que los fenotipos de mucina celulares de los adenocarcinomas de tipo diferenciado intramucosos del estómago dependen de alteraciones relacionadas con el ciclo de las células diferenciadas, y que los hallazgos clínico-patológicas son el resultado de diferentes vías basado en expresión de mucina: fenotipos gástricas, intestinales y mixtos . La Figura 4 ilustra un nuevo modelo de carcinogénesis de adenocarcinomas de tipo diferenciado intramucosos que se basa en sus fenotipos de mucina. Sobre la base de las anomalías de proteínas relacionadas con el ciclo celular, sobreexpresiones de p53 y ciclina A caracterizan cánceres gástricos fenotipo, mientras que la sobreexpresión de p27 puede estar asociada con el desarrollo de cánceres fenotipo intestinales. Por el contrario, los cánceres de mezclado-fenotipo se caracterizan por la sobreexpresión de ciclina A.

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