Analyse van de celcyclus verwante proteïnen in gastrische darmslijmvlies gedifferentieerde type kanker op basis van mucine fenotypes: een nieuwe hypothese van vroege maagkanker gebaseerd op mucine fenotype

Analyse van celcyclus-gerelateerde eiwitten in de maag-darmslijmvlies gedifferentieerde-type van kanker op basis van mucine fenotypes: een nieuwe hypothese van de vroege maagkanker gebaseerd op mucine fenotype
Abstracte achtergrond
Afwijkingen van celcyclus regulatoren zijn gemeenschappelijke kenmerken in menselijke kankers, en verscheidene van deze factoren geassocieerd met de vroege ontwikkeling van maagkanker. Echter, recente studies hebben aangetoond dat maagkanker ontstaan ​​van tumoren werd gekenmerkt door mucine expressie. Aldus expressiepatronen van met celcyclus verwante proteïnen werden onderzocht in de vroege fase van gedifferentieerde type maagkanker één mechanistische relaties met mucine fenotypes bepalen.
Werkwijzen
Immunokleuring voor Cyclinen D1, A, E, en p21, p27, p53 en β-catenine werd gebruikt om stoornissen van de celcyclus van 190 maag- darmslijmvlies gedifferentieerde type kanker te onderzoeken. Mucine fenotypes werden bepaald door de uitingen van MUC5AC, MUC6, MUC2 en CD10. Een Ki-67 positieve rate (PR) werd eveneens onderzocht.
Resultaten
Overexpressions van p53, cycline D1 en cycline A significant vaker in een gastrische fenotype dan een intestinale fenotype. Cycline A werd tot overexpressie gebracht in een gemengd fenotype vergeleken met een intestinale fenotype, terwijl p27 overexpressie werd vaker per intestinale fenotype dan in een gemengd fenotype. Reductie van p21 was een gemeenschappelijk kenmerk van het maag-darmslijmvlies gedifferentieerde-type van kanker onderzocht.
Conclusies
Onze resultaten suggereren dat de niveaus van sommige celcyclus regelgevers lijken te worden geassocieerd met mucine fenotypes van de vroege gastric gedifferentieerde-type kanker. achtergrond
voortgang door de celcyclus en celproliferatie staat onder controle van een reeks cyclinen en cycline-afhankelijke kinase (cdk) -complexen [1-3]. Accumulerende bewijs toont aan dat de progressie van tumorigenese gaat vaak afwijkingen in de uitingen van cyclinen en andere celcyclus-gerelateerde genen [1-3]. Afwijkingen gevonden voor cyclinen D1, A, E en hun samenwerkende partners, zoals cycline-afhankelijke kinase (cdk), die celcyclusprogressie bevorderen [1, 3]. Bovendien kunnen deze elementen progressief worden geremd door blokkers, zoals p21, p27 en p57, en een andere groep remmer eiwitten, zoals p16, p15 en p18 [4-10]. De ongecontroleerde proliferatie dat tumorcellen kenmerkend is voor een groot deel worden verklaard door de winst en /of verlies van eiwit functies die de celcyclus omvatten. Regulering van deze celcyclus verwante proteïnen is ook bepaald door andere factoren, zoals p53 en β-catenine en hun veranderingen beïnvloeden eveneens de celcyclus, waardoor ongecontroleerde proliferatie [11-15]. Website van bovengenoemde cel fiets- gerelateerde eiwitten, sleutelregulatoren van voortgang door de G1 fase van de celcyclus zijn cycline D1 en cycline E, p53, p21 en p27 [1, 4, 6, 12]. De abnormale uitdrukkingen zijn gericht op cruciale rol spelen in de progressie van tumorigenese en zijn gevonden te worden verstoord in een aantal menselijke maligniteiten. Cycline A is ook een lid van de superfamilie cycline eiwit dat kan worden geactiveerd tijdens de overgang van de G1 naar de S fase van de celcyclus. Abnormale uitingen van cycline A gecorreleerd met slechte resultaten bij verschillende menselijke kankers [8, 9]. Daarnaast is nucleaire expressie van β-catenine betrokken bij gastro-intestinale kankers [14, 15]. β-catenine accumuleert in de kern als gevolg van beperkingen van de Wnt-signaalroute, en zijn nucleaire expressie bevordert progressie van de celcyclus en celproliferatie [14, 15]. Tot op heden, zijn activiteit niet aangetoond dat de pathogenese van vroege gedifferentieerde type maagkanker beïnvloeden.
Recente studies hebben aangetoond dat cellulaire mucine uitdrukkingen en tumor fenotypen geassocieerd met klinische en pathologische bevindingen en tumorigenese in differentiated- typ maagkanker [16-19]. Het mucine fenotypen van tumoren zijn hoofdzakelijk geclassificeerd in 3 soorten: maag-, darm- en gemengde fenotypen [16, 17]. De maag fenotype gekenmerkt door slechte resultaten, duidelijke histologische kenmerken en een specifiek subtype van genetische afwijkingen, zoals microsatelliet instabiliteit (MSI) [17, 18]. In tegenstelling, de intestinale fenotype is een zeer goed gedifferentieerd type met lage proliferatie activiteit en een gebrek aan MSI [17]. De uitingen van mucinen door tumorcellen te definiëren tumor kenmerken in maagkanker [16-19]. Aldus is het voor het begrip van de eerste tumorigeneis van maagkanker biologische veranderingen onderzocht volgens deze mucine fenotypen [16-19].
Hoewel een aantal studies uitingen van celcyclus factoren zijn gerapporteerd [ ,,,0],3-7], de verenigingen van vroege gedifferentieerde-type maagkanker en hun mucine fenotypes en veranderingen van cel-cyclus-gerelateerde eiwitten worden niet volledig begrepen. In het onderhavige onderzoek onderzochten we afwijkingen van met celcyclus verwante proteïnen van de vroege fase van gedifferentieerde type maagkanker basis van mucine fenotypes.

Werkwijzen Patiënten
Materialen voor dit onderzoek werd verkregen van 190 patiënten met primaire vroege maag kanker die bij de afdeling Moleculaire Pathologie Diagnostic, afdeling Pathologie, Iwate Medical University, Morioka, Japan werden gediagnosticeerd. Geïnformeerde toestemming werd bij alle patiënten die wij onderzocht. Daarnaast werd onze studie goedgekeurd door onze ethische commissie (titel, moleculaire analyse van gastro-intestinale tumoren en de omringende mucosa; referentienummer, H21-140, ethische commissie van Iwate Medical University). Deze tumoren waren consistent met het darmslijmvlies gedifferentieerde type kanker en werden verkregen uit monsters van endoscopische submucosale dissectie (ESD). De histologische criteria voor histologische diagnoses waren gebaseerd op onze kliniek criteria [16], die werden gewijzigd van die van de Japanse Research Society for maagkanker [20], zoals verschillen in histologische beslissingen bestaan ​​tussen Japanse en westerse pathologen. Gedetailleerde clinico-pathologische gegevens (leeftijd van de patiënt, geslacht, plaats van de tumor, tumorgrootte, macroscopische type en de mate van de tumor differentiatie) getoond in Extra file 1.
In deze studie, intramucosale gedifferentieerde-type kanker werden sub-ingedeeld in 3 groepen volgens de tumor kernreactoren: laag, gemiddeld of hoog. De tumorgraad werd bepaald volgens de eerder gepubliceerde criteria [17]. In het kort, werd low-grade gediagnosticeerd door de aanwezigheid van cellen met vergrote, hyperchromatische kernen die grotendeels werd beperkt tot de basale gedeelten van de cellen, maar dat onregelmatiger en complexe klieren dan maag adenomen had. Tumoren die cellen met een duidelijk verlies van polariteit, hoge nucleaire onregelmatigheden bevatte, vergroot nucleolus en hyperchromatin werden geclassificeerd als high-grade kankers. De hoge graad van kanker bleek vaak belangrijke architectonische atypia, zoals hoge architectonische of klier vervormingen. Intermediate bevindingen tussen hoge en lage-grade kankers werden erkend als intermediair kanker. Echter, de histologische onderscheid tussen de maag adenoom en low-grade kanker was soms erg moeilijk. De objectglaasjes werden onafhankelijk beoordeeld door 2 ervaren pathologen (S. T. en N. S.); In sommige gevallen waarin de evaluaties verschillende resultaten, werd een consensus interpretatie bereikt na een nieuw onderzoek.
Immunohistochemie
Onmiddellijk na excisie, monsters werden gefixeerd in 20% neutraal gebufferde formaline, ingebed in paraffine, gesneden in 3 um paraffine secties en gekleurd met hematoxyline en eosine (HE) voor routine lichtmicroscopie. Voor immunohistochemische kleuring werden bijkomende 3 pm dikke coupes van in paraffine ingebed weefsel gesneden en op glasplaatjes-poly-L-lysine bekleed. In het kort werden secties paraffine ontdaan in xyleen en uitgedroogd. Voor de bepaling van mucine fenotypes, werd immunokleuring gedaan MUC 2 (Ccp58, Novocastra Laboratories, Newcastle, UK), CD10 (56C6, Novocastra Laboratories), MUC 5AC (CLH2, Novocastra Laboratories) en MUC 6 (CLH5, Novocastra Laboratories, Newcastle , UK). Daarnaast werd immunokleuring uitgevoerd voor p53 (kloon, DO7, DAKO, Carpinteria, CA, USA), Ki-67 (MIB-1, Dako), p21 (SX118, Dako), p27 (SX53G8, Dako), cycline D1 ( SP4, Nichirei Co., Tokyo), cycline E (13A3, Novocastra Laboratories), cycline A (6E6, Novocastra Laboratories) en β-catenine (BD Transduction Laboratories).
Immunohistochemie gebruikte DAKO Envision +, bestaande uit dextran polymeren geconjugeerd met mierikswortelperoxidase (DAKO), zoals eerder beschreven [16, 17]. De monsters werden verwarmd door microgolf in citraatbuffer (pH 6,0) 3 maal gedurende 5 minuten elk in 750 W voor de reacties met antilichamen (H2500, Magnetron Processor, Bio Rad, USA), zoals eerder beschreven [16, 17]. Hematoxyline werd als tegenkleuring.
Evaluatie van mucine expressie
In deze studie werden maagtumoren ingedeeld in 4 groepen volgens hun immunokleuring patronen. Een maag fenotype werd gedefinieerd als tumoren die overheersende intracytoplasmatische mucine van de maag soort, zoals bepaald door immunokleuring met humane gastrische mucine (MUC5AC) en /of pylorus gland mucine (MUC6), maar zonder MUC-2 positieve cellen. Een intestinale fenotype bleek uit een tumor tonen MUC2-positieve cellen en /of CD10 positieve (samen met een borstelzoom). Deze tumoren werden gedifferentieerd om dunne darm zuigcellen. Intestinale fenotype tumoren werden-sub ingedeeld in 2 groepen: colon type (positief voor MUC 2 only) en dunne darm type (positief voor CD10). Een gemengde fenotype werd gedefinieerd als een tumor met immunokleuring overeenstemming met gastrische type (positieve cellen voor MUC5AC en /of pylorus klier mucine) en intestinale Type mucine (positieve cellen voor CD10 en /of MUC2). Tenslotte tumoren zonder immunokleuring voor zowel maag- en darmklachten fenotypen werden gedefineerd "geclassificeerde" type. Immunopositive resultaten voor > 5% van de tumorcellen werden beschouwd als positief en immunopositive resultaten < 5% negatief, in overeenstemming met eerdere rapporten [16, 17, 21].
Meten van de Ki-67 positieve rate (PR)
Willekeurige gebieden van elk monster werden geselecteerd waarin Ki-67 positieve kernen tellen . De Ki-67 positieve werd berekend als het percentage van Ki-67 positieve tumorcel kernen bepaald 10 hoge krachtvelden (HPF × 400), die werd bepaald na het tellen ten minste 500 tumorcellen per tumormonster. Tumor proliferatieve activiteit werd ingedeeld in 2 groepen: hoog en laag. De proliferatieve activiteit werd bepaald volgens onze criteria [16, 17]. Kortom, PR van het weefsel werd gemeten in zowel het tumorweefsel en de omliggende niet-neoplastisch weefsel. Hoge proliferatie werd beschouwd als PR hoger in het tumorweefsel dan in de niet-neoplastisch weefsel was. Lage proliferatie werd beoordeeld als PR lager in het tumorweefsel dan in de niet-neoplastisch weefsel was.
Immunohistochemische evaluatie van met celcyclus verwante proteïnen
percentage tumorcellen per groep werd onderzocht op het oog en een score toegekend als samengevat in Extra file 2A. Een totaal van 500 cellen werden geteld in willekeurige velden van representatieve gebieden van de laesie. Voor alle markeerders werd slechts nucleaire kleuring positief beschouwd. De intensiteit van kleuring werd geschat op een 5-puntsschaal (0 tot 6+) en een score werd toegekend op basis van de intensiteit (Extra file 2B). De kleuring index was een eenvoudige multiplicatieve product van de cellulariteit en vlekken scores. Vervolgens hoge expressie van tumorcellen werd opgenomen als de kleuring index hoger in tumorcellen dan in de omringende niet-neoplastisch weefsel was. Daarentegen lage expressie tumorcellen werd opgenomen als de vlekkenwijzer of lager in de tumorcellen dan in de niet-neoplastisch weefsel was. Zo wordt een representatieve waarde figuur 1. Het origineel criteria eerder [22] beschreven, en deze criteria gebruikt met ondergeschikte modificaties. Twee werden gekleurd en waarden waren gebaseerd op het gemiddelde van de 2 individuele resultaten. Figuur 1 Voorbeeld van maag- darmslijmvlies gedifferentieerde-type kanker. Overwegende dat de index score voor cycline D1 expressie 16 in de maagkanker slijmvlies (b), de score is 4 in de omliggende niet-neoplastische slijmvlies (a). De tumor die is weergegeven in figuur 1b wordt geacht goed gedifferentieerd adenocarcinoom door Japanse pathologen, hoewel deze tumor wordt beschouwd gastrische dysplasie adenoom of door Western pathologen.

Statistische analyse Resultaten worden gegeven als mediaan en gemiddelde waarden. Statistische analyse van de Tamhane test voor vergelijkingen tussen 3 groepen en chi-kwadraat testen voor vergelijkingen tussen de 2 groepen. De statistische significantie werd vastgesteld op de p < 0,05 niveau.
Resultaten
klinische en pathologische kenmerken
Zoals in aanvullende bestandsinformatie 3, van de maag 190 darmslijmvlies gesplitste type kanker, 23 (12,1%) waren van de maag fenotype, 85 (44,7%) werden de intestinale fenotype en 79 (41,6%) werden geclassificeerd als gemengde fenotypes. Slechts 3 (1,6%) tumoren van de geclassificeerde typen. Clinico-pathologische bevindingen op basis van de mucine fenotypes worden ook vermeld in de aanvullende file 3. Er waren geen significante verschillen voor leeftijd, grootte van de tumor, de locatie, microscopische type of histologische soort tussen de 3 fenotypes. Voor de maag en gemengde fenotypes, de incidentie van hooggradige tumoren waren significant hoger voor de maag en gemengde fenotypen dan de intestinale fenotype (p < 0,01 en p < 0,05, respectievelijk). Daarnaast is de verhouding man /vrouw voor de gemengde fenotype ower dan de andere (p < 0,05)
In de onderhavige studie werden maag fenotypes ingedeeld in 3 sub-fenotypen. MUC5AC (+) /MUC6 (+), MUC5AC (+) /MUC6 (-) en MUC5AC (-) /MUC6 (+). Vijftien (65,2%) de MUC5AC (+) /MUC6 (+) patroon, 5 (21,7%) de MUC5AC (+) /MUC6 (-) patroon en 3 (13,1%) werden subclassified als MUC5AC (-) /MUC6 (+) patroon. Onder de 3 maag sub-fenotypes, werden er geen klinisch-pathologische verschillen gevonden. Daarentegen intestinale fenotypes werden onderverdeeld in kleine darm (N = 67) en colon (N = 18) fenotypen. Er waren geen significante verschillen tussen hen leeftijd, tumorgrootte, locatie, macroscopische type of weefseltype.
Uitingen van met celcyclus verwante proteïnen door mucine fenotypen verhuur No p53 overexpressie werd gevonden in een omringende niet-neoplastische mucosa. Overexpressie van p53 werd waargenomen bij 33 van 190 gevallen onderzochten we (17,4%), en is vaker gezien in de maag fenotype (10/23, 43,5%) in vergelijking met de andere 2 types (intestinale fenotype, 13/85, 15,3 % en gemengde fenotype, 9/79, 11,4%). Hoewel het verschil tussen de maag en darmen fenotypen niet statistisch significant (p = 0,054) bereikte, de maag en gemengde fenotypen toonde een significant verschil (p < 0,05). Bovendien werd geen p53 overexpressie gevonden in laaggradige kanker (0/26). Daarentegen werd p53 overexpressie in 11 van 103 middenfrequente rangkanker (10,7%) en 22 van 61 hoogwaardige kankers (36,1%). Significante verschillen tussen high-grade kanker en low-grade of tussenproducten-grade kankers werden gevonden (p < 0,01).
P21 werd vooral tot uiting in de oppervlakkige epitheel van de intestinale metaplastisch klier en de maag foveolar epitheel. De frequentie van verlaagde p21 expressie was 59 van 190 tumoren (31,1%). Verlaagde p21 expressie werd vaak waargenomen in de maag, darm en gemengde fenotypes. Er was geen significant verschil verkleind p21 uitdrukkingen tussen de 3 fenotypen.
Expressie van p27 werd beperkt tot de oppervlakkige epitheel en de basis van de intestinale metaplasie klier. De frequentie van verlaagde p27 expressie was zeer laag in de maagkanker dat we onderzocht (12/190, 6,3%). In tegenstelling, de voor p27 overexpressie werd waargenomen in 53 van 190 tumoren (27,9%). De frequentie van p 27 overexpressie was hoger in de intestinale fenotype (31/85, 36,5%) dan in de maag (6/23, 26,1%) en gemengde fenotypen (16/79, 20,2%). Echter, deze verschillen waren niet significant.
Cycline D1 werd uitgedrukt in de onderste helft van de intestinale metaplastische klier. In de maag kankers onderzocht 27 van de 190 gevallen (14,2%) toonden overexpressie gebracht Cycline D1. Cycline D1 werd tot overexpressie gebracht in de maag fenotype 7 van 23 gevallen (30,4%). Ter vergelijking, overexpressie van cycline D1 werd in 11,8% (10/85) en 12,7% (10/79) van de intestinale en gemengde fenotypes, respectievelijk. Geen significant verschil gevonden tussen de maag fenotype en andere.
Expressie van cycline A werd voornamelijk beperkt tot de onderste helft van de intestinale metaplasie klier. Positieve kleuring voor cycline A werd gedetecteerd in 42,1% (80/190). De frequentie van cycline A overexpressie was hoger in de maag fenotype (16/23, 69,6%) dan in de intestinale fenotype (25/85, 29,4%; p < 0,01). Er werd echter geen significant verschil tussen de maag en gemengde fenotypen (39/79, 49,4%).
Niet-neoplastische klieren waren overwegend negatief voor cycline E. In de maagkanker onderzocht, de frequentie van cycline E overexpressie was erg laag. Geen significant verschil tussen de 3 mucine fenotypes waargenomen.
In dit onderzoek alleen de nucleaire expressie van β-catenine werd als positief beschouwd. Nr nucleaire expressie van β-catenine werd waargenomen in de omringende niet-neoplastische mucosa, behalve pylorus klieren. De meeste pyloric klieren uitgedrukt nucleair β-catenine. Nucleair β-catenine-expressie werd gevonden in 80 van 190 tumoren (36,8%). Hoewel de intestinale fenotype (44/85, 51,8%) vertoonden de hoogste frequentie nucleaire β-catenine bij de 3 fenotypen, het verschil was niet significant.
Een hoge proliferatiesnelheid van tumorcellen bleek meer dan 30% Ki -67 PR in de meeste maagkanker die we onderzocht. Volgens de criteria, werd hoge proliferatie in 101 of 190 tumoren (53,2%). Hoge proliferatie van tumorcellen werd vaker waargenomen in de maag- en gemengde fenotypen opzichte van de intestinale fenotype (p < 0,01 en p < 0,05). We hebben deze resultaten met celcyclus verwante proteïnen op basis van mucine fenotype in figuur 2. Bovendien samengevat, is een representatief voorbeeld getoond in figuur 3. Figuur 2 Frequenties van celcyclus verwante eiwitexpressies gastrische, intestinale en gemengde fenotypes. Fenotype gastrische kankers worden gekenmerkt door p53 en cycline A overexpressions. Hoewel de frequentie van p27 overexpressie tussen de intestinale fenotype en andere fenotypen niet statistisch verschil heeft bereikt, kan dit kenmerk van de intestinale fenotype. Reductie van p21 en accumulatie van β-catenine worden vaak waargenomen in de 3 fenotypen. Ki-67 positieve verhouding is hoger in de maag fenotype of gemengde fenotype dan in de intestinale fenotype. Statistische vergelijkingen gebruikt Tamhane tests voor alle 3 fenotypes.
Figuur 3 Een representatief voorbeeld van intestinale darmslijmvlies gedifferentieerde-type kanker van de maag-fenotype. een. Laag stroomverbruik weergave van tumorweefsel. b. Sterke vergroting van de tumor weefsel. c. p53 overexpressie werd waargenomen. d. p21 werd verminderd. e. p27 werd tot overexpressie gebracht. f. Overexpressie van cycline A. g. Lage expressie van cycline D1. h. Slechts MUC2 werd uitgedrukt in deze tumor, suggereert intestinale fenotype.
Discussie
Ondanks een dalende trend in incidentie blijft maagkanker een belangrijk medisch probleem in de wereld, en het is de meest voorkomende neoplasma in Japan. Darmslijmvlies kanker is gedefinieerd als een tumor in de vroege fase van maagkanker. Het is essentieel om darmslijmvlies kanker onderzocht voor het evalueren van de pathogenese van maagkanker. Het is algemeen aanvaard dat een kankercel ontstaat door afwijkingen in regulatie van de celcyclus, die bestaat uit verschillende celcyclus verwante proteïnen, zoals cyclinen, cycline- afhankelijke kinaseremmer, p53 en β-catenine. Daarnaast hebben recente studies aangetoond dat verschillende klinische en pathologische bevindingen maagkanker gekenmerkt door mucine uitdrukkingen. We bestudeerden abnormale uitingen van met celcyclus verwante proteïnen die maagkanker basis van mucine fenotypes gastrische darmslijmvlies gedifferentieerde type kanker bevorderen.
In dit onderzoek werd immunohistochemie gebruikt om de expressieniveaus van met celcyclus verwante proteïnen te onderzoeken. Immunopositivity voor celcyclus verwante proteïnen tumorweefsel werd bepaald door de niveaus tussen tumorweefsel en omgeving niet-neoplastisch weefsel. Volgens deze criteria, kan het niveau van immunopositivity tumorweefsel verschillen per geval. Echter, het scheiden van de parameters in deze kankers in "low" en "high" categorieën op basis van vergelijkingen van deze factoren met niet-neoplastisch weefsel kan een onconventionele methode. De "niet-neoplastisch" tissue omvat gastritis (chronische of chronisch actief) en /of intestinale metaplasie; de parameters in deze verschillende ontstekings- of metaplastische weefsels kunnen aanzienlijk variëren. Het kan zinvol zijn om een ​​absolute snelheid (d.w.z. de eigenlijke%), in plaats van deze interne relatief. Echter wij van mening dat deze immunohistochemische criterium is belangrijk voor het vinden van mogelijke activiteiten van met celcyclus verwante proteïnen in een vroeg stadium van gastrische gedifferentieerde type kankers, aangezien de niet-neoplastisch weefsel rond tumorweefsel nauw geassocieerd met tumorontwikkeling.
het is aangenomen dat onder pathologen de maag fenotype van maagkanker blijkt laaggradige atypia gastrische darmslijmvlies gedifferentieerde type kanker (19). In deze studie, in de maag darmslijmvlies gedifferentieerde type kankers die wij onderzocht, de maag fenotype vertoonden hoogwaardige atypie. Hoewel de reden onbekend is, kan dat betekenen dat een gastrische fenotype toont laagwaardige atypia die maag foveolar epitheel histologisch lijkt, kunnen worden opgenomen in eerdere studies. In de onderhavige studie werd slechts één dergelijke tumor waargenomen. Bovendien kunnen deze verschillen het gevolg zijn van het aantal monsters of etnische of etiologische factoren. Het is bekend dat p53 overexpressie wordt gecorreleerd met tumorgraad. In de huidige studie, stellen wij voor dat het redelijk is om een ​​hoge frequentie van p53 overexpressie van de maag-fenotype laten zien in vergelijking met andere fenotypes.
In deze studie werd p53 overexpressie vaker aangetroffen in de maag fenotype dan in de intestinale of gemengd fenotypen. Deze bevinding suggereert dat p53 overexpressie speelt een essentiële rol, althans in de vroege ontwikkeling van maag- fenotype kanker, hoewel eerdere studies toenemende verhoging van p53 overexpressie maagkanker van de vroege tot gevorderd stadium [12] hebben aangetoond. In dit
onderzoek verlaagde p21 expressie werd waargenomen bij ongeveer 30% van de 3 fenotypen mucine. Eerdere studies hebben aangetoond dat lage expressie van p21 is gecorreleerd met prognose voor de patiënt bij maagkanker [5, 6]. Echter, er is weinig bekend over p21 expressie door maagkanker op basis van mucine fenotypes. Bovendien, een vereniging van p21 expressie met tumor stadium (tumor diepte) blijft onbekend. Onze bevinding suggereert dat verlaagde p21 expressie gemeenschappelijke rol bij de vroege ontwikkeling van de 3 fenotypen van maag mucine gedifferentieerde type kankers. De eerdere studie suggereerde dat een geleidelijke afname van p21 expressie vond plaats in een vergevorderd stadium van maag-gedifferentieerde kankersoort de vroege fase [6]. p21 expressie ook gecorreleerd met de uitingen van andere celcyclus verwante proteïnen zoals p27 en Ki-67, eventueel via een p53-afhankelijke route [1, 5, 6]. Het wordt geopperd dat p21 samenwerkt met p53 en, als gevolg, wordt de celcyclus gecontroleerd door een p53-afhankelijke route [1, 5]. Verder wordt gemeend dat p21 ook geremd door samenwerking met p27 [1, 5]. In de onderhavige studie echter vonden we geen correlatie van een reductie met p21 p27 reductie of een omgekeerde correlatie van p27 reductie met p53 overexpressie (gegevens niet getoond). We stellen voor dat een andere route bestaat voor het regelen van de celcyclus in menselijke maagkanker.
Het is bekend dat p27 een prototypisch tumorsuppressorgen [1-3]. Echter, heeft een recente studie zien dat, terwijl in sommige gevallen, p27 remt de celcyclus, in andere gevallen bevordert progressie naar de volgende fase van de celcyclus [23]. Er werd gemeld dat een verlies, of een lage expressie van p27 is gecorreleerd met tumorprogressie of prognose voor de patiënt [24, 25]. In tegenstelling tot andere studies hebben we aangetoond dat lage expressie (reductie) van p27 had een zeer lage frequentie in onze reeks van maagkanker. Volgens de onderhavige bevindingen verlaagde p27 expressie speelt een ondergeschikte rol in de ontwikkeling van gedifferentieerde soort maagkanker.
Daarentegen werd overexpressie van p27 voorkomen bij de intestinale fenotype in vergelijking met de andere 2 fenotypes, hoewel het verschil ertussen heeft een statistisch significant niveau niet bereiken. Of dit overexpressie van p27 is geassocieerd met remming van de celcyclus of voortgang van de celcyclus is onbekend, hoewel verschillende verklaringen voorgesteld. Eerste is dat p27 dat tot overexpressie wordt gebracht voor het onderdrukken van celcyclusprogressie in tumorcellen resultaat van een negatief terugkoppelingsmechanisme. Omgekeerd, een tweede verklaring is dat overexpressie van p27 positief geassocieerd met de progressie van de celcyclus van tumorcellen; dat is, p27 werkt als een oncogeen factor [23]. Daarnaast heeft recent onderzoek aangetoond dat expressie van p27 gereguleerd door expressie van Skp2, een ubiquitine ligase subeenheid van p27 [26]. Volgens dit rapport, werd expressie van p27 omgekeerd gecorreleerd met Skp2 meningsuiting.
Cycline D1 overexpressie toonde slechts een lage frequentie in het vroege stadium van de maag gedifferentieerde soort kanker (27/190, 14,2%). Hoewel de verschillen een aanzienlijk niveau niet bereikten, de frequentie van cycline D1 overexpressie was hoger in de maag fenotype dan in de intestinale en gemengde fenotypes. Cycline D1 is eerder bestudeerd in verschillende series van maagkanker, met een gerapporteerde frequentie van 20 ~ 56% overexpressie wordt gerapporteerd [27-29], anders dan onze resultaten. Als mogelijke reden voor deze verschillen van cycline D1 overexpressie kan een vroeg gedifferentieerd type kankers, behalve maag fenotype niet tot verhoging van cycline D1 evenwel, zodra de tumor heeft ontwikkeld, de tumorcellen hebben een hoog cycline D1 tumorprogressie. Dit suggereert dat overexpressie van cycline D1 is gecorreleerd met prognose voor de patiënt in maagkanker [28].
Overexpressie van cycline A werd ook voor in de maag en gemengd fenotypen opzichte van de intestinale fenotype. Dit suggereert dat overexpressie van cycline A een belangrijke rol spelen bij tumorigenese van maag- en gemengde fenotypes speelt. Dus in maagkanker, verwerving van gastrische mucine expressie kan worden geassocieerd met cycline A overexpressie, hetgeen dan resulteert in hoge tumorproliferatie. Bovendien werd cycline A nauw verbonden met prognose voor de patiënt of tumor agressiviteit [8, 9]. Dit kan erop wijzen dat overexpressie van cycline A heeft betrekking op zowel tumorontwikkeling en progressie in ongeveer de helft van gedifferentieerde type maagkanker.
In deze studie cycline E overexpressie vertoonden lage frequenties in de 3 fenotypen. Daarentegen hebben eerdere onderzoeken aangetoond dat cycline E overexpressie was gecorreleerd met een slechte prognose [4, 10], alhoewel contrasterende resultaten [30] voorgesteld. De onderhavige resultaten geven aan dat overexpressie van cycline E speelt geen essentiële rol bij de vroege tumorigenese van gedifferentieerde type maagkanker. Bovendien kan overexpressie van cycline E voornamelijk bevorderen de progressie van maagkanker. Deze bevindingen suggereren dat de grote toename van de maag fenotype kan worden gekenmerkt door overexpressie van cycline D1 en /of cycline A, en dat de gemengde fenotype is geassocieerd met cycline A overexpressie.
Het is algemeen bekend dat β-catenine expressie reguleert de celcyclus en speelt een centrale rol in de Wnt signaaltransductieroute [14, 15]. In deze studie is interessant dat β-catenine-expressie vaak waargenomen in de vroege gedifferentieerde type maagkanker dat we onderzocht. Het is reeds aangenomen dat β-catenine expressie essentieel voor colon adenoom ontwikkeling [31, 32]. De huidige resultaten en eerdere studies inzake colorectaal adenoom aan dat β-catenine expressie gemeenschappelijke verandering in de vroege ontwikkeling van gastro-intestinale tumoren [31] kan zijn. Dit kan worden verklaard door de bevindingen dat, gastrische kanker, genpromoters geassocieerd met de Wnt signaalpaden zijn sterk gemethyleerd [32-34], hetgeen resulteert in de nucleaire accumulatie van β-catenine expressie.
Conclusies In
Samenvattend stellen wij dat de cellulaire mucine fenotypen van darmslijmvlies gedifferentieerde type adenocarcinoom van de maag zijn afhankelijk van verschillende celcyclus verwante veranderingen en de klinische en pathologische bevindingen voortvloeien uit verschillende trajecten voor mucine expressie: maag-, darm- en gemengde fenotypes . Figuur 4 toont een nieuw model voor carcinogenese darmslijmvlies gedifferentieerde adenocarcinomen type dat gebaseerd is op hun mucine fenotypen. Gebaseerd op afwijkingen van met celcyclus verwante proteïnen, overexpressions van p53 en cycline A kenmerkend fenotype gastrische kankers, terwijl overexpressie van p27 kan worden geassocieerd met de ontwikkeling van intestinale kankers fenotype. Daarentegen worden gemengd fenotype kankers gekenmerkt door cycline A overexpressie.

• Verenigingen van een PTPN11 G /A polymorfisme in intron 3 met Helicobactor pyloriseropositivity, maag-atrofie en maagkanker in het Japans
• Systematische review en meta-analyse van laparoscopische open gastrectomie voor geavanceerde maag cancer