Analisi delle proteine ​​del ciclo legati cellulari in intramucoso gastrico differenziato tipo di cancro a base di mucina fenotipi: una nuova ipotesi di inizio carcinogenesi gastrica sulla base di mucina fenotipo

Analisi delle proteine ​​del ciclo legati cellulari in intramucoso gastrico differenziato tipo di cancro a base di mucina fenotipi: una nuova ipotesi di inizio carcinogenesi gastrica sulla base di mucina fenotipo
Abstract
sfondo
Anomalie di cella regolatori del ciclo sono caratteristiche comuni a tumori umani, e molti di questi fattori sono associati con lo sviluppo precoce dei tumori gastrici. Tuttavia, recenti studi hanno dimostrato che gastrica tumorigenesi il cancro è stato caratterizzato da mucina espressione. Così, pattern di espressione di proteine ​​del ciclo legati cellulari sono stati esaminati nella fase iniziale di differenziata del tipo di cancro gastrico per l'accertamento di eventuali rapporti meccanicistici con fenotipi mucina.
Metodi
Immunocolorazione per cicline D1, A, E, e p21, p27, p53 e β-catenina è stato utilizzato per esaminare i danni del ciclo cellulare in 190 intramucoso gastrico differenziato tipo di cancro. fenotipi mucina sono stati determinati dalle espressioni di MUC5AC, MUC6, MUC2 e CD10. Un Ki-67 tasso positivo (PR) è stato inoltre esaminato.
Risultati
Overexpressions di p53, ciclina D1 e ciclina A erano significativamente più frequenti in un fenotipo gastrica di un fenotipo intestinale. Ciclina A è stato overexpressed in un fenotipo mista rispetto ad un fenotipo intestinale, mentre p27 sovraespressione era più frequente in un fenotipo intestinale che in un fenotipo misto. La riduzione di p21 era una caratteristica comune dei intramucoso gastrico differenziato di tipo tumori esaminati
. Conclusioni
I nostri risultati suggeriscono che i livelli di alcuni regolatori del ciclo cellulare sembrano essere associati con mucina fenotipi dei primi tumori differenziata di tipo gastrico.
Sfondo
progressione attraverso il ciclo cellulare e la proliferazione cellulare sono sotto il controllo di una serie di cicline e chinasi (CDK) complessi ciclina-dipendenti [1-3]. Accumulando prove dimostrano che la progressione della tumorigenesi coinvolge frequentemente anomalie nelle espressioni di cicline e altri geni del ciclo cellulare relativi [1-3]. Anomalie sono state trovate per cicline D1, A, E e le loro partner co-operativi, come ciclina-dipendente chinasi (CDK), che promuovono la progressione del ciclo cellulare [1, 3]. Inoltre, questi fattori progressivi possono essere inibiti dai bloccanti, come la p21, p27 e p57, e un altro gruppo di proteine, tra cui inibitori p16, p15 e p18 [4-10]. La proliferazione incontrollata che caratterizza le cellule tumorali può essere dovuto in gran parte il guadagno e /o perdita di funzioni proteiche che compongono il ciclo cellulare. Regolamento di queste proteine ​​ciclo del cellulare è anche governato da altri fattori, tra cui p53 e β-catenina, e loro alterazioni anche compromettere il ciclo cellulare, con conseguente proliferazione incontrollata [11-15]. La rosa della ciclo- cella sopra proteine ​​correlate, regolatori chiave di progressione attraverso la fase G1 del ciclo cellulare sono ciclina D1 e ciclina e, p53, p21 e p27 [1, 4, 6, 12]. Le loro espressioni anormali sono stati pensati a svolgere ruoli cardine nella progressione della tumorigenesi e sono stati trovati ad essere disturbato in un certo numero di tumori umani. Ciclina A è anche un membro della superfamiglia di proteine ​​ciclina che può essere attivato durante il passaggio dal G1 alla fase S del ciclo cellulare. espressioni anormali di ciclina A sono correlati con scarsi risultati in diversi tumori umani [8, 9]. Inoltre, l'espressione nucleare della β-catenina è implicato nei tumori gastrointestinali [14, 15]. β-catenina accumula nel nucleo causa danni del percorso del segnale Wnt, e la sua espressione nucleare promuove la progressione del ciclo cellulare e proliferazione cellulare [14, 15]. Tuttavia, ad oggi, la sua attività non è stato mostrato di influenzare la patogenesi dei primi differenziata di tipo tumori gastrici.
Recenti studi hanno dimostrato che le espressioni mucina cellulari e fenotipi tumorali sono associati con i risultati clinico-patologici e tumorigenesi in differentiated- digitare tumori gastrici [16-19]. I fenotipi mucina di tumori sono stati classificati principalmente in 3 tipi: fenotipi gastrici, intestinali e misti [16, 17]. Il fenotipo gastrica è caratterizzata da scarsi risultati, caratteristiche istologiche distinte e un sottotipo specifico di alterazioni genetiche, tra cui instabilità dei microsatelliti (MSI) [17, 18]. Al contrario, il fenotipo intestinale è un tipo molto ben differenziato, con bassa attività proliferativa e una mancanza di MSI [17]. Le espressioni di mucine di cellule tumorali definiscono le caratteristiche del tumore nel cancro gastrico [16-19]. Pertanto, è importante per la comprensione dei primi tumorigeneis di tumori gastrici esaminare alterazioni biologiche secondo questi fenotipi mucina [16-19].
Sebbene siano stati riportati numerosi studi riguardanti le espressioni di fattori ciclo del cellulari [ ,,,0],3-7], le associazioni dei primi differenziata di tipo tumori gastrici e le loro fenotipi mucina e alterazioni delle proteine ​​del ciclo cellulare legati non sono pienamente compresi. Nel presente studio, abbiamo esaminato le anomalie di proteine ​​del ciclo legati cellulari della fase iniziale di differenziata del tipo di cancro gastrico sulla base di mucina fenotipi.
Metodi
Pazienti
Materiali per questo studio sono stati ottenuti da 190 pazienti con primi tumori gastrici primari che sono stati diagnosticati presso la Divisione di Patologia diagnostica molecolare, Dipartimento di Patologia, Iwate Medical University, Morioka, Giappone. Il consenso informato è stato dato in tutti i pazienti che abbiamo esaminato. Inoltre, il nostro studio è stato approvato dal nostro comitato etico (titolo, l'analisi molecolare dei tumori gastrointestinali e le mucose circostanti; numero di riferimento, H21-140, comitato etico di Iwate Medical University). Questi tumori sono stati coerenti con intramucoso tumori differenziati tipo, e sono stati ottenuti da campioni di dissezione sottomucosa endoscopica (ESD). I criteri istologici utilizzati per rendere le diagnosi istologiche sono basate su nostri criteri ospedalieri [16], che sono stati modificati rispetto a quelli della Società di Ricerca giapponese per tumori gastrici [20], in quanto esistono discrepanze nel giudizio istologiche tra patologi giapponesi e occidentali. dati clinico-patologici dettagliate (età del paziente, il sesso, luogo di tumore, le dimensioni del tumore, il tipo macroscopica e grado di differenziazione del tumore) sono mostrati in file aggiuntive 1.
In questo studio, intramucoso differenziata tipo di cancro sono stati sub-classificati in 3 gruppi in base al grado nucleare del tumore: basso, medio o alto. Il grado del tumore è stata determinata secondo criteri precedentemente pubblicati [17]. In breve, il cancro basso grado è stata diagnosticata per la presenza di cellule con allargate, nuclei ipercromatici che sono stati in gran parte confinati alle porzioni basali delle cellule, ma che aveva le ghiandole più irregolare e complesso di adenomi gastrici. I tumori che contenevano le cellule che hanno una perdita evidente di polarità, alta irregolarità nucleare, nucleolo allargata e hyperchromatin sono stati classificati come tumori ad alto grado. I tumori ad alto grado spesso hanno mostrato significative atipie architettonico, come l'elevata distorsioni architettoniche o ghiandolari. risultati intermedi tra basso e alto grado di cancro sono stati riconosciuti come i tumori intermedi. Tuttavia, la distinzione tra il istologico adenoma gastrica e cancro basso grado è stato a volte molto difficile. I vetrini sono stati valutati in modo indipendente da 2 patologi esperti (S. T. e N. S.); in alcuni casi in cui le valutazioni previste risultati diversi, un'interpretazione consenso è stato raggiunto dopo la ri-esame.
immunoistochimica
Subito dopo l'asportazione, i campioni sono stati fissati in 20% formalina tamponata neutra, incorporato in paraffina, tagliato a 3 micron sezioni di paraffina e colorati con ematossilina ed eosina (HE) per la microscopia ottica di routine. Per la colorazione immunoistochimica, altri 3 micron sezioni spesse sono stati tagliati da tessuto incluso in paraffina e poste su vetrini poli-L-lisina rivestite. In breve, le sezioni sono state deparaffinate in xilene e disidratata. Per la determinazione della mucina fenotipi, immunostaining è stato fatto per MUC 2 (Ccp58, Novocastra Laboratories, Newcastle, Regno Unito), CD10 (56C6, Novocastra Laboratories), MUC 5AC (CLH2, Novocastra Laboratories) e MUC 6 (CLH5, Novocastra Laboratories, Newcastle , UK). Inoltre, immunostaining è stato fatto per p53 (clone, DO7, DAKO, Carpinteria, CA, USA), Ki-67 (MIB-1, Dako), p21 (SX118, Dako), p27 (SX53G8, Dako), ciclina D1 ( SP4, Nichirei Co., Tokyo), ciclina e (13A3, Novocastra Laboratories), ciclina A (6E6, Novocastra Laboratories) e β-catenina (BD, la trasduzione Laboratories).
immunoistochimica hanno utilizzato il sistema DAKO Envision +, che consiste di destrano polimeri coniugati con perossidasi di rafano (DAKO), come precedentemente descritto [16, 17]. I campioni sono stati riscaldati da microonde in tampone citrato (pH 6,0) 3 volte per 5 minuti ciascuno a 750W prima delle reazioni con anticorpi (H2500, Microonde processore, Bio Rad, USA), come precedentemente descritto [16, 17]. Ematossilina è stato utilizzato come di contrasto.
Valutazione della mucina espressione
In questo studio, i tumori gastrici sono stati classificati in 4 gruppi in base alle loro modelli immunocolorazione. Un fenotipo gastrica è stata definita come tumori aventi predominante mucina intracitoplasmatica di tipo gastrico, come determinato mediante immunocolorazione con mucina gastrica umana (MUC5AC) e /o pilorica ghiandola mucina (MUC6), ma senza MUC-2 cellule positive. Un fenotipo intestinale è stato indicato da un tumore che mostra cellule MUC2-positivi e /o CD10 positivo (insieme con un bordo pennello). Questi tumori sono stati differenziati a piccole cellule assorbenti intestinali. tumori intestinali fenotipo sono stati sub-classificati in 2 gruppi: tipo colica (positivo per MUC 2 solo) e piccoli tipo intestinale (positivo per CD10). Un fenotipo mista è stata definita come un tumore avente immunostaining coerenti con il tipo gastrica (cellule positive per MUC5AC e /o pilorica mucina della ghiandola) nonché il tipo mucina intestinale (cellule positive per CD10 e /o MUC2). Infine, i tumori senza immunocolorazione per fenotipi o gastriche o intestinali sono stati assegnati ad un tipo "non classificato". risultati immunopositive per > 5% delle cellule tumorali sono stati considerati positivi, e immunopositive per < 5% come negativo, in accordo con precedenti relazioni [16, 17, 21].
Misurare il tasso positivo Ki-67 (PR)
aree casuali da ogni campione sono stati selezionati in cui contare Ki-67 nuclei positivi . Il tasso positivo Ki-67 è stata calcolata come percentuale di Ki-67 nuclei cellulari tumorali positive determinato in 10 campi ad alta potenza (HPF, × 400), che è stata determinata dopo aver contato almeno 500 cellule tumorali per campione tumorale. Tumore attività proliferativa è stato classificato in 2 gruppi: alto e basso. L'attività proliferativa è stata determinata secondo i nostri criteri [16, 17]. In breve, PR del tessuto è stata misurata sia nel tessuto tumorale e il suo tessuto non-neoplastico circostante. Alta proliferazione è valutato se PR era superiore nel tessuto tumorale rispetto al tessuto non-neoplastico. Bassa proliferazione è stato giudicato se PR era più bassa nel tessuto tumorale rispetto al tessuto non-neoplastico.
Valutazione immunoistochimica di proteine ​​del ciclo legati cellulari
La percentuale di cellule tumorali per sezione è stata valutata mediante l'occhio e assegnato un punteggio più riassunte nel file aggiuntive 2A. Un totale di 500 cellule sono state contate in campi casuali da aree rappresentative della lesione. Per tutti i marcatori, solo colorazione nucleare è stato considerato positivo. L'intensità della colorazione è stata stimata su una scala a 5 punti (da 0 a 6 +) e un punteggio è stato assegnato secondo l'intensità (sui file 2B). L'indice di colorazione era un prodotto semplice moltiplicativo dei punteggi cellularità colorazione. Successivamente, alta espressione per cellule tumorali è stato registrato se l'indice di colorazione era maggiore nelle cellule tumorali rispetto al suo tessuto non-neoplastico circostante. Al contrario, una bassa espressione di cellule tumorali è stato registrato se l'indice di colorazione era inferiore o uguale nelle cellule tumorali rispetto al tessuto non-neoplastico. Ad esempio, una figura rappresentativa è mostrato in Figura 1. I criteri originali sono stati descritti in precedenza [22], e le presenti criteri sono stati utilizzati con piccole modifiche. Due sezioni sono state colorate e valori erano basati sulla media dei risultati 2 singoli. Figura 1 Esempio di intramucoso gastrico differenziato tipo di cancro. Considerando che il punteggio dell'indice per l'espressione della ciclina D1 è di 16 nella mucosa cancro gastrico (b), il punteggio è 4 nella sua mucosa non neoplastica circostante (a). Il tumore che viene mostrato in figura 1b è considerato adenocarcinoma e differenziato dai patologi giapponesi, anche se questo tumore è considerato adenoma displasia gastrica o dai patologi occidentali.
Analisi statistica
I risultati sono riportati come mediana o valori medi. L'analisi statistica ha utilizzato il test Tamhane per i confronti tra i 3 gruppi e test chi-quadrato per il confronto tra i 2 gruppi. La significatività statistica è stata istituita presso il p < 0.05 di livello.
Risultati
caratteristiche clinico-patologiche
Come mostrato nel file aggiuntive 3, dei tumori gastrici 190 intramucoso differenziata di tipo, 23 (12,1%) erano del fenotipo gastrica, 85 (44,7%) sono stati il ​​fenotipo intestinale e 79 (41,6%) sono stati classificati come fenotipi misti. Solo 3 (1,6%) tumori erano del tipo non classificati. risultati clinico-patologici basati sui fenotipi mucina sono elencati anche nel file aggiuntive 3. Non ci sono state differenze significative per età, dimensione del tumore, l'ubicazione, il tipo microscopica o tipo istologico tra i 3 fenotipi. Tuttavia, per i fenotipi gastriche e misti, l'incidenza di tumori ad alto grado erano significativamente più alti per i fenotipi gastriche e contrastanti rispetto al fenotipo intestinale (p < 0,01 e p < 0,05, rispettivamente). Inoltre, il rapporto maschi /femmine per il fenotipo misto era ower che per gli altri tipi (p < 0,05)
Nel presente studio, fenotipi gastrici sono stati classificati in 3 sotto-fenotipi:. MUC5AC (+) /MUC6 (+), MUC5AC (+) /MUC6 (-) e MUC5AC (-) /MUC6 (+). Quindici (65,2%) hanno avuto la MUC5AC (+) /MUC6 (+) modello, 5 (21,7%) hanno avuto la MUC5AC (+) /MUC6 (-) modello e 3 (13,1%) sono stati sottoclassificate come MUC5AC (-) /MUC6 (+) modello. Tra i 3 gastrici sotto-fenotipi, non sono state trovate differenze clinico-patologici. Al contrario, i fenotipi intestinali erano suddivisi in piccola intestinale (N = 67) e colon (N = 18) fenotipi. Non ci sono state differenze significative tra di loro per età, dimensione del tumore, l'ubicazione, il tipo macroscopica o il tipo istologico.
Espressioni di proteine ​​del ciclo delle cellule legate da mucina fenotipi
No p53 sovraespressione è stata trovata in alcun mucosa non neoplastica circostante. Sovraespressione di p53 è stata osservata in 33 dei 190 casi che abbiamo esaminato (17,4%), ed era più spesso visto nel fenotipo gastrica (10/23, 43,5%) rispetto agli altri 2 tipi (fenotipo intestinale, 13/85, 15.3 % e fenotipo misto, 9/79, 11,4%). Anche se la differenza tra i fenotipi gastrico o intestinale non ha raggiunto la significatività statistica (p = 0,054), gastrici e fenotipi misti ha evidenziato una differenza significativa (p < 0,05). Inoltre, nessun sovraespressione di p53 è stata trovata nei tumori di basso grado (0/26). Al contrario, p53 era sovraespresso in 11 su 103 tumori intermedia grado (10,7%) e 22 su 61 tumori ad alto grado (36,1%). Differenze significative tra tumore ad alto grado e basso grado o tumori intermedio-grade sono stati trovati (p < 0,01).
p21 è stato espresso principalmente a livello dell'epitelio superficiale della ghiandola metaplastica intestinale e l'epitelio foveolare gastrica. La frequenza di espressione p21 ridotta era 59 di 190 tumori (31,1%). espressione di p21 ridotta era comunemente osservato nei fenotipi gastrici, intestinali e misti. Non vi era alcuna differenza significativa per la riduzione delle espressioni p21 tra i 3 fenotipi.
Espressione di p27 era limitata a l'epitelio superficiale e la base della ghiandola metaplastica intestinale. La frequenza di espressione di p27 ridotta era molto bassa nei tumori gastrici che abbiamo esaminato (12/190, 6,3%). Al contrario, la frequenza per p27 sovraespressione è stata osservata in 53 su 190 tumori (27,9%). La frequenza di p 27 sovraespressione è stata maggiore nel fenotipo intestinale (31/85, 36,5%) rispetto al gastrica (6/23, 26.1%) e fenotipi misti (16/79, 20.2%). Tuttavia, queste differenze non erano significative.
Ciclina D1 è stato espresso alla metà inferiore della ghiandola metaplastica intestinale. Nei tumori gastrici esaminati, 27 dei 190 casi (14,2%) hanno mostrato overexpressed ciclina D1. Ciclina D1 è stato sovraespresso nel fenotipo gastrica per 7 su 23 casi (30,4%). In confronto, la sovraespressione della ciclina D1 è stato trovato in 11,8% (10/85) e il 12,7% (10/79) dei fenotipi intestinali e misti, rispettivamente. Nessuna differenza significativa è stata trovata tra il fenotipo gastrica e gli altri tipi.
Espressione della ciclina A era confinata principalmente per la metà inferiore della ghiandola metaplastica intestinale. La colorazione positiva per ciclina A è stata rilevata nel 42,1% (80/190). La frequenza di ciclina A sovraespressione è stata maggiore nel fenotipo gastrica (16/23, 69,6%) rispetto al fenotipo intestinale (25/85, 29.4%; p < 0,01). Tuttavia, è stata trovata alcuna differenza significativa tra gastrici e fenotipi misti (39/79, 49,4%). Ghiandole
non neoplastiche erano per lo più negativi per la ciclina E. Nei tumori gastrici esaminati, la frequenza della ciclina E sovraespressione molto era Basso. Nessuna differenza significativa tra i 3 fenotipi mucina è stato visto.
In questo studio, solo l'espressione nucleare per β-catenina è stata considerata positiva. Nessuna espressione nucleare della β-catenina è stata osservata nella mucosa non neoplastica circostante, tranne ghiandole pilorica. La maggior parte delle ghiandole pilorica espressi nucleare β-catenina. Nucleare espressione β-catenina è stato trovato in 80 dei 190 tumori (36,8%). Sebbene il fenotipo intestinale (44/85, 51,8%) ha mostrato la più alta frequenza per il nucleare β-catenina tra i 3 fenotipi, la differenza non era significativa.
Un alto tasso di proliferazione delle cellule tumorali è stato mostrato in più del 30% Ki -67 PR nella maggior parte dei tumori gastrici che abbiamo esaminato. In base ai nostri criteri, alta proliferazione è stato trovato in 101 dei 190 tumori (53,2%). Alta proliferazione delle cellule tumorali è stata più frequentemente osservato nei fenotipi gastriche e misti rispetto al fenotipo intestinale (p < 0,01 e p < 0,05). Abbiamo riassunto questi risultati per le proteine ​​ciclo del cellulari basate su mucina fenotipo nella figura 2. Inoltre, un esempio rappresentativo è mostrato in Figura 3. Figura 2 Frequenze di ciclo del espressioni proteine ​​cellulari in gastrica, intestinale e fenotipi misti. tumori gastrici fenotipo sono caratterizzati da p53 e ciclina A overexpressions. Sebbene la frequenza di p27 sovraespressione tra intestinali fenotipo e altri fenotipi non ha raggiunto differenza statistica, questo può essere caratteristica del fenotipo intestinale. Riduzione di p21 e l'accumulo di β-catenina sono comunemente osservati nei 3 fenotipi. Ki-67 tasso positivo è più alta nel fenotipo gastrica o fenotipo mista rispetto al fenotipo intestinale. confronti statistici utilizzati test Tamhane per tutti e 3 i fenotipi.
Figura 3 Un esempio rappresentativo di intramucoso intestinale differenziato tipo di cancro del fenotipo gastrica. un. vista di potere basso del tessuto tumorale. b. vista Elevato potere di tessuto tumorale. c. p53 sovraespressione è stato visto. d. p21 è stata ridotta. e. p27 è stato sovraespresso. f. Sovraespressione di ciclina A. g. Bassa espressione della ciclina D1. h. Solo MUC2 era espresso in questo tumore, suggerendo fenotipo intestinale.
Discussione
Nonostante una tendenza alla diminuzione di incidenza, cancro gastrico rimane un importante problema medico in tutto il mondo, ed è la neoplasia più comune in Giappone. cancro intramucosa è definito come un tumore al massimo stadio precoce del cancro gastrico. E 'essenziale esaminare cancro intramucosa per valutare la patogenesi del cancro gastrico. E 'ampiamente accettato che una cellula cancerosa si pone a causa di anomalie di regolazione del ciclo cellulare, che è composta da diverse proteine ​​ciclo del cellulari, come ad esempio cicline, ciclina inibitore della chinasi dipendenti, p53 e β-catenina. Inoltre, recenti studi hanno dimostrato che i risultati clinico-patologici distinti per cancro gastrico sono caratterizzati da espressioni mucina. Abbiamo studiato le espressioni anomale di proteine ​​del ciclo legati cellule che promuovono la carcinogenesi gastrica sulla base di mucina fenotipi in gastrici intramucoso differenziata tipo di cancro.
Nel presente studio, immunoistochimica è stata utilizzata per indagare i livelli di espressione di proteine ​​del ciclo legati cellulari. Immunopositività per proteine ​​del ciclo legati cellulari del tessuto tumorale è stata determinata confrontando i livelli tra tessuto tumorale e il suo tessuto non-neoplastico circostante. Secondo questi criteri, il livello di immunopositività del tessuto tumorale può variare per ogni caso. Tuttavia, separando i parametri all'interno di questi tipi di cancro in "basso" e le categorie "alti" basati sul confronto di questi fattori con tessuto non-neoplastico può essere un metodo non convenzionale. Il tessuto "non-neoplastica" comprende gastrite (cronica o cronica attiva) e /o metaplasia intestinale; i parametri in questi vari tessuti infiammatori o metaplastiche possono variare considerevolmente. Può essere più significativo per utilizzare un valore assoluto (cioè, l'attuale%), piuttosto che il valore relativo interna. Tuttavia, riteniamo che questo criterio immunoistochimica è importante per trovare le potenziali attività di proteine ​​del ciclo legati cellule in una fase iniziale di gastrici tumori differenziati tipo, dato che il tessuto tumorale tessuto non-neoplastico circostante è strettamente associato con lo sviluppo del tumore.
E 'stato creduto tra patologi che il fenotipo gastrica del cancro gastrico mostra di basso grado atipie nei tumori intramucoso differenziata di tipo gastrico (19). Tuttavia, in questo studio, nei gastrici intramucoso tumori differenziati tipo che abbiamo esaminato, il fenotipo gastrico ha dimostrato di alta qualità atipie. Anche se il motivo rimane sconosciuto, una possibile ragione è che un fenotipo gastrica che mostra atipie basso grado, che assomiglia gastrico istologicamente epitelio foveolare, può essere incluso in studi precedenti. Nel presente studio, è stata osservata solo una di tali tumori. Inoltre, queste differenze potrebbero essere dovute al numero di campioni o di fattori etnici o eziologici. È ben noto che p53 sovraespressione è correlata con il grado tumorale. Nel presente studio, suggeriamo che è ragionevole per mostrare un'elevata frequenza di p53 sovraespressione del fenotipo gastrica se confrontato con altri fenotipi.
In questo studio, p53 sovraespressione è stata più frequentemente trovata nel fenotipo gastrica rispetto al intestinale o fenotipi misti. Questa scoperta suggerisce che p53 sovraespressione gioca un ruolo essenziale, almeno nei primi anni di sviluppo del cancro gastrico fenotipo, sebbene studi precedenti hanno dimostrato un progressivo aumento della p53 sovraespressione nei tumori gastrici dalla presto per stadi avanzati [12]. In questo
studio, ridotta espressione di p21 è stata osservata in circa il 30% dei 3 fenotipi mucina. Precedenti studi hanno dimostrato che una bassa espressione di p21 è correlato con la prognosi del paziente nel cancro gastrico [5, 6]. Tuttavia, si sa poco riguardo l'espressione di p21 da tumori gastrici sulla base di mucina fenotipi. Inoltre, tutte le associazioni di espressione di p21 con lo stadio del tumore (profondità del tumore) rimane sconosciuto. La nostra scoperta suggerisce che la ridotta espressione di p21 ha un ruolo comune nel sviluppo iniziale dei 3 mucina fenotipi di gastrici tumori differenziati tipo. Tuttavia, uno studio precedente ha suggerito che una progressiva diminuzione di espressione p21 verificato in fase avanzata di cancro differenziato tipo gastrico dalla prima fase [6]. espressione p21 anche correlata con le espressioni di altre proteine ​​del ciclo legati cellulari, come p27 e Ki-67, possibilmente attraverso un pathway p53-dipendente [1, 5, 6]. È stato ipotizzato che p21 coopera con p53 e, di conseguenza, il ciclo cellulare è controllato attraverso un percorso p53-dipendente [1, 5]. Inoltre, si ritiene che p21 è inibito anche dalla cooperazione con p27 [1, 5]. Nel presente studio, tuttavia, abbiamo trovato né una correlazione di riduzione di p21 con riduzione di p27, né una correlazione inversa di riduzione p27 con p53 sovraespressione (dati non mostrati). Si suggerisce che esiste un percorso diverso per il controllo del ciclo cellulare nei tumori gastrici umani.
È ben noto che p27 è un gene soppressore del tumore prototipo [1-3]. Tuttavia, uno studio recente ha dimostrato che, mentre in alcuni casi, p27 inibisce il ciclo cellulare, in altri casi promuove progressione alla fase successiva del ciclo cellulare [23]. E 'stato riportato che o una perdita o una bassa espressione di p27 è correlata con la progressione del tumore o la prognosi del paziente [24, 25]. A differenza di altri studi, abbiamo dimostrato che una bassa espressione (riduzione) di p27 ha una frequenza molto bassa nella nostra serie di tumori gastrici. Secondo i risultati attuali, ridotta espressione p27 gioca un ruolo minore nello sviluppo di tipo differenziato tumori gastrici.
Al contrario, sovraespressione di p27 è risultata spesso nel fenotipo intestinale rispetto agli altri 2 fenotipi, anche se la differenza tra loro non ha raggiunto un livello statisticamente significativo. Se questo sovraespressione di p27 è associato con l'inibizione del ciclo cellulare o la progressione del ciclo cellulare non è nota, anche se diverse spiegazioni sono suggeriti. Il primo è che p27 che è sovraespresso per la soppressione della progressione del ciclo cellulare nelle cellule tumorali i risultati di un meccanismo di feedback negativo. Viceversa, una seconda spiegazione è che la sovraespressione di p27 è positivamente associato con la progressione del ciclo cellulare per le cellule tumorali; cioè, p27 agisce come un fattore oncogenico [23]. Inoltre, un recente studio ha dimostrato che l'espressione di p27 è regolata da espressione di Skp2, che è una subunità ubiquitina ligasi di p27 [26]. Secondo questo rapporto, l'espressione di p27 era inversamente correlata con l'espressione Skp2.
Ciclina D1 sovraespressione ha mostrato solo una bassa frequenza nella fase iniziale dei tumori di tipo differenziate gastrici (27/190, 14,2%). Tuttavia, anche se le differenze non hanno raggiunto un livello significativo, la frequenza di ciclina D1 sovraespressione era maggiore nel fenotipo gastrica rispetto ai fenotipi intestinali e misti. Ciclina D1 è stato precedentemente studiato in diverse serie di tumori gastrici, con una frequenza riferito di 20 ~ 56% della sovraespressione essere segnalati [27-29], diverso dai nostri risultati. Come un possibile motivo di queste differenze di ciclina D1 sovraespressione, anche se presto differenziato tipo di cancro, ad eccezione di fenotipo gastrica, non richiedono un aumento della ciclina D1, una volta che il tumore si è sviluppato, le cellule tumorali hanno bisogno di un alto livello di ciclina D1 per la progressione del tumore. Ciò suggerisce che la ciclina D1 sovraespressione è correlata con la prognosi del paziente nel cancro gastrico [28].
Sovraespressione di ciclina A era anche più prevalente nel gastrica e fenotipi misti rispetto al fenotipo intestinale. Questo suggerisce che la sovraespressione della ciclina A gioca un ruolo importante nella tumorigenesi di fenotipi gastriche e misti. Così, nei tumori gastrici, acquisizione di espressione mucina gastrica può essere associato con ciclina A sovraespressione, che si traduce poi in una forte proliferazione tumorale. Inoltre, la ciclina A è stato strettamente associato con la prognosi del paziente o aggressività del tumore [8, 9]. Questo può indicare che ciclina A sovraespressione è correlato sia lo sviluppo del tumore e la progressione in circa la metà di differenziata del tipo di cancro gastrico.
Nel presente studio, ciclina E sovraespressione ha mostrato le basse frequenze nelle 3 fenotipi. Al contrario, gli studi precedenti hanno dimostrato che l'iperespressione ciclina E è stata correlata con scarso esito [4, 10], anche se i risultati contrastanti sono stati proposti [30]. I risultati attuali indicano che la ciclina E sovraespressione non gioca alcun ruolo essenziale nel primo tumorigenesi di differenziata del tipo di cancro gastrico. Inoltre, l'iperespressione di ciclina E può in primo luogo di promuovere la progressione dei tumori gastrici. Questi risultati suggeriscono che l'elevata proliferazione del fenotipo gastrica può essere caratterizzato dalla sovraespressione di ciclina D1 e /o ciclina A, e che il fenotipo misto è associato con ciclina A sovraespressione.
E 'noto che l'espressione β-catenina upregulates il ciclo cellulare e svolge un ruolo centrale nella trasduzione del segnale Wnt [14, 15]. Nel presente studio, è interessante notare che l'espressione β-catenina è stata comunemente osservata nei primi differenziata di tipo tumori gastrici che abbiamo esaminato. E 'già accettato che l'espressione β-catenina è fondamentale per lo sviluppo adenoma del colon [31, 32]. I risultati attuali e precedenti studi riguardanti colorettale adenoma indicano che l'espressione di β-catenina possa essere un'alterazione comune nei primi anni di sviluppo di tumori gastrointestinali [31]. Questo potrebbe essere spiegato con i risultati che, nei tumori gastrici, promotori dei geni associati con la via di segnale Wnt sono altamente metilati [32-34], che si traduce in un accumulo nucleare di espressione β-catenina.
Conclusioni
in sintesi, proponiamo che i fenotipi mucina cellulari di intramucoso differenziata di tipo adenocarcinomi dello stomaco dipendono da alterazioni del ciclo legati cellule distinte, e che i risultati clinico-patologiche derivano da percorsi diversi in base a mucina espressione: fenotipi gastrici, intestinali e misti . La figura 4 illustra un modello di carcinogenesi romanzo per intramucoso adenocarcinomi differenziati tipo che si basa sulle loro fenotipi mucina. Sulla base di anomalie di proteine ​​del ciclo legati cellulari, overexpressions di p53 e ciclina A caratterizzare i tumori gastrici fenotipo, mentre sovraespressione di p27 può essere associata con lo sviluppo di tumori intestinali fenotipo. Al contrario, i tumori misti-fenotipo sono caratterizzati da ciclina A sovraespressione.

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