Analyse af cellecyklus-relaterede proteiner i gastrisk intramucosal kræftformer differentieret-type baseret på mucin fænotyper: en roman hypotese af tidlig gastrisk carcinogenese baseret på mucin phenotype

Analyse af cellecyklus-relaterede proteiner i gastrisk kræft intramucosal differentieret-type baseret på mucin fænotyper: en roman hypotese af tidlig gastrisk carcinogenese baseret på mucin fænotype
Abstract
Baggrund
abnormaliteter af cellecyklus regulatorer er fælles træk i humane kræftformer, og flere af disse faktorer er forbundet med den tidlige udvikling af gastrisk kræft. Imidlertid har nyere undersøgelser vist, at mavekræft tumorigenese var præget af mucin udtryk. Således blev ekspressionsmønstre for cellecyklus-relaterede proteiner undersøgt i den tidlige fase af differentieret gastriske cancere at fastslå eventuelle mekanistiske relationer med mucin fænotyper. Salg Metoder
Immunfarvning for Cycliner D1, A, E, og p21, p27, p53 og β-catenin blev anvendt til at undersøge svækkelser af cellecyklus i 190 gastrisk intramucosal differentieret type kræftformer. Mucin fænotyper blev bestemt af de udtryk for MUC5AC, MUC6, MUC2 og CD10. En Ki-67 positive rate (PR) blev også undersøgt.
Resultater Salg Overexpressions af p53, cyclin D1 og cyclin A var signifikant mere hyppige i en gastrisk fænotype end en intestinal fænotype. Cyclin A blev overudtrykt i en blandet fænotype sammenlignet med en intestinal fænotype, mens p27-overekspression var hyppigere i en intestinal fænotype end i et blandet fænotype. Reduktion af p21 var et fælles træk ved de gastriske intramucosal differentieret-type kræft undersøgt.
Konklusioner
Vores resultater tyder på, at niveauet for nogle cellecyklus regulatorer synes at være forbundet med mucin fænotyper af tidlige gastrisk differentieret type kræft.
Baggrund
Progression gennem cellecyklussen og cellulær proliferation er under kontrol af en række cykliner og cyclinafhængige kinase (cdk) komplekser [1-3]. Akkumulerende beviser for, at udviklingen af ​​tumorigenese ofte involverer abnormiteter i udtrykkene for cycliner og andre celle-cyklus gener [1-3]. Abnormiteter er blevet fundet for cycliner D1, A, E og deres samarbejdspartnere, såsom cyklin-afhængige kinase (CDK), der fremmer cellecyklusprogression [1, 3]. Derudover kan disse progressive faktorer inhiberes ved blokkere, såsom p21, p27 og p57, og en anden gruppe af inhibitor-proteiner, herunder p16, p15 og p18 [4-10]. Ukontrolleret spredning, der kendetegner tumorceller kan i vid udstrækning forklares med forstærkningen og /eller tab af proteinet fungerer som omfatter cellecyklussen. Regulering af disse cellecyklus-relaterede proteiner er også styret af andre faktorer, herunder p53 og β-catenin, og deres ændringer også forringe cellecyklus, hvilket resulterer i ukontrolleret spredning [11-15].
Af ovenstående celle cycle- relaterede proteiner, vigtige regulatorer af progression gennem G1-fasen af ​​cellecyklussen er cyclin D1 og cyclin E, p53, p21 og p27 [1, 4, 6, 12]. Deres unormale udtryk er blevet anset for at spille afgørende roller i udviklingen af ​​tumorigenese og har vist sig at blive forstyrret i en række humane maligniteter. Cyclin A er også et medlem af cyclin proteinsuperfamilien som kan aktiveres under overgangen fra G1 til S-fasen af ​​cellens cyklus. Unormale udtryk for cyclin A er korreleret med dårlige resultater i forskellige humane cancere [8, 9]. Desuden er nuklear ekspression af β-catenin impliceret i gastrointestinale cancere [14, 15]. β-catenin akkumuleres i kernen på grund af værdiforringelse af Wnt-signal-vejen, og dets nukleare ekspression fremmer progression af cellecyklus og cellulær proliferation [14, 15]. Men til dato, dens aktivitet er ikke blevet påvist, at påvirke patogenesen af ​​tidlige differentierede gastriske cancere.
Nylige undersøgelser har vist, at cellulære mucin udtryk og tumor fænotyper er forbundet med de klinisk-patologiske fund og tumorigenese i differentiated- gastriske cancere [16-19]. Mucin fænotyper af tumorer er primært inddeles i 3 typer: gastrisk, intestinal og blandede fænotyper [16, 17]. Den gastriske fænotype er kendetegnet ved dårlige resultater, distinkte histologiske træk og en specifik undertype af genetiske ændringer, herunder mikrosatellit instabilitet (MSI) [17, 18]. I modsætning hertil er den intestinale fænotype er et meget godt differentieret type, med lav proliferativ aktivitet og mangel på MSI [17]. De udtryk for muciner ved tumorceller definere tumor karakteristika i gastrisk kræft [16-19]. Således er det vigtigt for forståelsen af ​​tidlige tumorigeneis af gastriske cancere til at undersøge biologiske ændringer ifølge disse mucin fænotyper [16-19].
Selv om en række undersøgelser vedrørende udtrykkene for cellecyklus-relaterede faktorer er blevet rapporteret [ ,,,0],3-7], er sammenslutninger af tidlige differentieret-gastriske kræft og deres mucin fænotyper og ændringer af celle-cyklus-relaterede proteiner ikke fuldt forstået. I den foreliggende undersøgelse undersøgte vi abnormaliteter af cellecyklus-relaterede proteiner af den tidlige fase af differentieret gastriske cancere baseret på mucin fænotyper. Salg Metoder
Patienter Salg Materialer til denne undersøgelse blev opnået fra 190 patienter med primære tidlige gastrisk kræft, der blev diagnosticeret ved afdelingen for Molekylær diagnostisk Patologi, Patologisk Institut, Iwate Medical University, Morioka, Japan. Informeret samtykke blev givet i alle patienter, som vi undersøgte. Desuden blev vores undersøgelse godkendt af vores etiske komité (titel, molekylær analyse af mave tumorer og de omkringliggende slimhinde; referencenummer, H21-140, etiske komité af Iwate Medical University). Disse tumorer var i overensstemmelse med intramucosal differentieret-type kræft, og blev opnået fra prøver af endoskopisk submukøse dissektion (ESD). De histologiske kriterier bruges til at lave histologiske diagnoser var baseret på vores hospital kriterier [16], som blev modificeret fra dem for den japanske Research Society for Gastric Kræft [20], som uoverensstemmelser i histologiske domme eksisterer mellem japanske og vestlige patologer. Detaljerede klinisk-patologiske data (patientens alder, køn, stedet for tumoren, tumorstørrelse, makroskopisk og -grad tumor differentiering) er vist i supplerende fil 1.
I denne undersøgelse, intramucosal differentieret type cancere blev sub-klassificeret i 3 grupper efter tumoren nuklear kvalitet: lav, mellemliggende eller høje. Tumoren klasse blev bestemt ifølge tidligere offentliggjorte kriterier [17]. I korte træk blev low-grade kræft diagnosticeret ved tilstedeværelsen af ​​celler med forstørrede, hyperkromatiske kerner, der var stort set begrænset til de basale dele af cellerne, men som havde mere uregelmæssig og komplekse kirtler end gastriske adenomer. Tumorer, der indeholdt celler, der har en indlysende tab af polaritet, høj nukleare uregelmæssighed, blev forstørret nucleolus og hyperchromatin klassificeret som høj kvalitet kræftformer. De høje kvalitet kræft ofte viste signifikant arkitektonisk atypia, såsom høje arkitektoniske eller glandulær forvridninger. Mellemliggende resultater mellem lav og høj kvalitet kræftformer blev anerkendt som mellemprodukter kræftformer. Men den histologiske skelnen mellem gastrisk adenom og lav kvalitet kræft var til tider meget vanskeligt. Glassene blev uafhængigt evalueret af 2 erfarne patologer (S. T. og N. S.); i nogle tilfælde, hvor de evalueringer, forudsat forskellige resultater, blev en konsensus fortolkning nået efter fornyet undersøgelse.
Immunhistokemi
Umiddelbart efter excision, blev prøver fikseret i 20% neutral bufferet formalin, indlejret i paraffin, skåret i 3 um paraffinsnit og farvet med hæmatoxylin og eosin (HE) til rutinemæssig lysmikroskopi. Til immunhistokemisk farvning blev yderligere 3 um tykke snit skæres fra paraffinindlejret væv og placeret på poly-L-lysin-coatede objektglas. Kort fortalt blev snit deparaffiniseret i xylen og dehydreret. Til bestemmelse af mucin fænotyper, blev immunfarvning gjort for MUC 2 (Ccp58, Novocastra Laboratories, Newcastle, UK), CD10 (56C6, Novocastra Laboratories), MUC 5AC (CLH2, Novocastra Laboratories) og MUC 6 (CLH5, Novocastra Laboratories, Newcastle , UK). Desuden blev immunfarvning gjort for p53 (klon, DO7, DAKO, Carpinteria, CA, USA), Ki-67 (MIB-1, Dako), p21 (SX118, Dako), p27 (SX53G8, Dako), cyclin D1 ( SP4, Nichirei Co., Tokyo), cyclin E (13A3, Novocastra Laboratories), cyclin A (6E6, Novocastra Laboratories) og β-catenin (bd, Transduction Laboratories).
Immunhistokemi brugte DAKO Envision +, bestående af dextran polymerer konjugeret med peberrodsperoxidase (DAKO), som tidligere beskrevet [16, 17]. Prøverne blev opvarmet ved mikrobølgeovn i citratbuffer (pH 6,0) 3 gange i 5 minutter hver ved 750 W, før reaktionerne med antistoffer (H2500, Mikrobølgeovn Processor, Bio Rad, USA), som tidligere beskrevet [16, 17]. Hematoxylin blev anvendt som kontrastfarve.
Evaluering af mucinekspression
I denne undersøgelse blev gastriske tumorer klassificeres i 4 grupper efter deres Immunofarvning mønstre. En gastrisk fænotype blev defineret som tumorer med fremherskende intracytoplasmatisk mucin i mavens type, som bestemt ved immunfarvning med human gastrisk mucin (MUC5AC) og /eller pyloric kirtel mucin (MUC6), men uden MUC-2-positive celler. En intestinal fænotype blev indikeret ved en tumor, der viser MUC2-positive celler og /eller CD10 positive (sammen med en børste grænsen). Disse tumorer blev differentieret til små tarm absorberende celler. Intestinal fænotype tumorer blev sub-klassificeret i 2 grupper: colon type (positiv for MUC 2 kun) og tyndtarmens type (positiv for CD10). En blandet fænotype blev defineret som en tumor, der har immunfarvning overensstemmelse med gastrisk type (positive celler for MUC5AC og /eller pyloric kirtel mucin) samt intestinal type, mucin (positive celler for CD10 og /eller MUC2). Endelig blev tumorer uden immunfarvning til enten mave- tarm fænotyper tildelt en "uklassificerede" type. Immunpositive resultater for > 5% af tumorcellerne blev betragtet som positive, og immunpositive resultater for < 5% som negativ, i overensstemmelse med tidligere rapporter [16, 17, 21].
Måling af Ki-67 positive rate (PR)
Tilfældige områder fra hver prøve blev udvalgt til at tælle Ki-67 positive kerner . Ki-67 positive blev beregnet som procentdelen af ​​Ki-67 positive tumor cellekerner bestemt i 10 high-power felter (HPF, × 400), som blev bestemt efter tælling mindst 500 tumorceller pr tumorprøve. Tumor proliferativ aktivitet blev klassificeret i 2 grupper: høj og lav. Den proliferative aktivitet blev bestemt ifølge vores kriterier [16, 17]. Kort fortalt blev PR af vævet målt i både tumorvævet og dens omgivende ikke-neoplastisk væv. Høj proliferation blev anset hvis PR var højere i tumorvævet end i den ikke-neoplastisk væv. Lav proliferation blev vurderet hvis PR var lavere i tumorvævet end i den ikke-neoplastisk væv.
Immunohistokemisk vurdering af cellecyklus-relaterede proteiner
Andelen af ​​tumorceller per sektion blev vurderet ved øjet og tildelt en score som sammenfattet i supplerende fil 2A. I alt 500 celler blev talt i tilfældige felter fra repræsentative områder af læsionen. For alle markører, blev kun kernefarvning som positiv. Den farvningsintensitet blev anslået på en 5-punkts skala (0 til 6 +) og blev tildelt en score i henhold til den intensitet (Ekstra fil 2B). Farvningen indekset var en simpel multiplikativ produkt af de cellularitet og farvning scoringer. Dernæst blev høj ekspression for tumorceller registreres, hvis farvningen indeks var højere i tumorcellerne end i dens omgivende ikke-neoplastisk væv. I modsætning hertil blev lav ekspression for tumorceller registreres, hvis farvningen indekset var lavere eller lig i tumorcellerne end i den ikke-neoplastisk væv. For eksempel er et repræsentativt tal vist i figur 1. De oprindelige kriterier beskrevet tidligere [22], og de nuværende kriterier blev anvendt med mindre modifikationer. To snit blev farvet og værdier var baseret på gennemsnittet af de 2 individuelle resultater. Figur 1 Eksempel på gastrisk intramucosal differentieret type cancer. Henviser til, at indekset score for cyclin D1 udtryk er 16 i mavekræft mucosa (b), scoren er 4 i dens omgivende ikke-neoplastiske mucosa (a). Tumoren, der er vist i figur 1b anses såvel differentieret adenocarcinom af japanske patologer, selv om denne tumor anses gastrisk adenom eller dysplasi af vestlige patologer.
Statistiske analyser
Resultaterne er angivet som median eller middelværdier. Statistisk analyse bruges Tamhane Test for sammenligninger mellem 3 grupper og chi-square test for sammenligninger mellem 2 grupper. Statistisk signifikans blev etableret i p < 0,05 niveau.
Resultater
klinisk-patologiske karakteristika
Som vist i supplerende fil 3, af de 190 gastrisk intramucosal differentieret-type kræft, 23 (12,1%) var af den gastriske fænotype, 85 (44,7%) blev tarmens fænotype og 79 (41,6%) blev klassificeret som blandede fænotyper. Kun 3 (1,6%) tumorer var af uklassificeret type. Klinisk-patologiske afgørelser baseret på mucin fænotyper er også opført i supplerende fil 3. Der var ingen signifikante forskelle for alder, tumorstørrelse, beliggenhed, mikroskopisk type eller histologisk type, mellem de 3 fænotyper. Men for de gastriske og blandede fænotyper, forekomsten af ​​høje kvalitet tumorer var signifikant højere for de gastriske og blandede fænotyper end den intestinale fænotype (p < 0,01 og p < 0,05, henholdsvis). Derudover mand /kvinde ratio for blandet fænotype var ower end for de andre typer (p < 0,05)
I den foreliggende undersøgelse blev gastriske fænotyper klassificeret i 3 sub-fænotyper:. MUC5AC (+) /MUC6 (+), MUC5AC (+) /MUC6 (-) og MUC5AC (-) /MUC6 (+). Femten (65,2%) havde MUC5AC (+) /MUC6 (+) mønster, 5 (21,7%) havde MUC5AC (+) /MUC6 (-) mønster og 3 (13,1%) blev underklassificeres som MUC5AC (-) /MUC6 (+) mønster. Blandt de 3 gastriske sub-fænotyper, blev der ikke fundet klinisk-patologiske forskelle. I modsætning hertil intestinale fænotyper var underopdelt i tyndtarmens (N = 67) og colon (n = 18) fænotyper. Der var ingen signifikante forskelle mellem dem for alder, tumorstørrelse, beliggenhed, makroskopisk type eller histologisk type.
Udtryk for cellecyklus-relaterede proteiner ved mucin fænotyper
Ingen p53 overekspression blev fundet i en hvilken som helst omgivende ikke-neoplastisk slimhinde. Overekspression af p53 blev observeret i 33 ud af 190 tilfælde, som vi undersøgte (17,4%), og blev hyppigere set i gastrisk fænotype (10/23, 43,5%) sammenlignet med de andre 2 typer (intestinal fænotype, 13/85, 15,3 % og blandet fænotype, 9/79, 11,4%). Selv om forskellen mellem de gastriske og intestinale fænotyper ikke nåede statistisk signifikans (p = 0,054), mavens og blandede fænotyper faktisk viste en signifikant forskel (p < 0,05). Desuden blev ingen p53-overekspression findes i lav kvalitet cancere (0/26). I modsætning hertil blev p53 overudtrykt i 11 af 103 mellemliggende kvalitet kræftformer (10,7%) og 22 af 61 high-grade kræftformer (36,1%). Væsentlige forskelle mellem høj kvalitet kræft og lav kvalitet eller mellemliggende-grade kræft blev fundet (p < 0,01).
P21 primært til udtryk i den overfladiske epitel af tarmens metaplastisk kirtel, mavens foveolar epitel. Hyppigheden af ​​reduceret p21-ekspression var 59 190 tumorer (31,1%). Reduceret p21-ekspression var almindeligt observeret i mavens, tarm og blandede fænotyper. Der var ingen signifikant forskel for reduceret p21 udtryk mellem de 3 fænotyper.
Ekspression af p27 var begrænset til overfladiske epitel og bunden af ​​den intestinale metaplastisk kirtel. Hyppigheden af ​​reduceret p27-ekspression var meget lav i de gastriske cancere, vi undersøgte (12/190, 6,3%). I modsætning hertil var frekvensen for P27 overekspression observeret i 53 af 190 tumorer (27,9%). Hyppigheden af ​​p 27 overekspression var højere i den intestinale fænotype (31/85, 36,5%) end i den gastriske (6/23, 26,1%) og blandede fænotyper (16/79, 20,2%). Men disse forskelle var ikke signifikante.
Cyclin D1 blev udtrykt i den nedre halvdel af den intestinale metaplastisk kirtel. I mavens kræft undersøgte, 27 af 190 tilfælde (14,2%) viste overudtrykte cyclin D1. Cyclin D1 er overudtrykt i den gastriske fænotype for 7 af 23 sager (30,4%). Til sammenligning blev overekspression af cyclin D1 fundet i 11,8% (10/85) og 12,7% (10/79) af de intestinale og blandede fænotyper hhv. Ingen signifikant forskel blev fundet mellem den gastriske fænotype og de andre typer.
Ekspression af cyclin A var primært begrænset til den nedre halvdel af den intestinale metaplastisk kirtel. Positiv farvning for cyclin A blev detekteret i 42,1% (80/190). Hyppigheden af ​​cyclin A overekspression var højere i det gastriske fænotype (16/23, 69,6%) end i den intestinale fænotype (25/85, 29,4%; p < 0,01). Imidlertid blev ingen signifikant forskel mellem den gastriske og blandede fænotyper (39/79, 49,4%).
Non-neoplastiske kirtler var for det meste negative for cyclin E. I mavens kræft undersøgte, hyppigheden af ​​cyklin E overekspression var meget lav. Ingen signifikant forskel mellem de 3 mucin fænotyper blev set.
I denne undersøgelse kun den nukleare udtryk for β-catenin blev betragtet som positive. Noget nukleart ekspression af β-catenin blev observeret i den omgivende ikke-neoplastisk slimhinde, undtagen for pylorus kirtler. De fleste pylorus kirtler udtrykte nukleare β-catenin. Nuklear β-catenin-ekspression blev fundet i 80 ud af 190 tumorer (36,8%). Selvom den intestinale fænotype (44/85, 51,8%) viste den højeste frekvens for nuklear β-catenin blandt de 3 fænotyper, forskellen var ikke signifikant.
En høj proliferationshastighed af tumorceller blev vist mere end 30% Ki -67 PR i de fleste af de gastrisk kræft, som vi undersøgte. Ifølge vores kriterier, blev høj spredning findes i 101 af 190 tumorer (53.2%). Høj proliferation af tumorceller blev observeret hyppigere i de gastriske og blandede fænotyper sammenlignet med den intestinale fænotype (p < 0,01 og p < 0,05). Vi har samlet disse resultater for cellecyklus-relaterede proteiner baseret på mucin fænotype i figur 2. Endvidere er et repræsentativt eksempel er vist i figur 3. Figur 2 Frekvensen af ​​cellecyklus-relateret protein udtryk i gastrisk, intestinal og blandede fænotyper. Gastric fænotype cancere er kendetegnet ved p53 og cyclin A overexpressions. Selvom hyppigheden af ​​p27-overekspression mellem de intestinale fænotype og andre fænotyper ikke nåede statistisk forskel, kan dette være karakteristisk for den intestinale fænotype. Reduktion af p21 og akkumulering af β-catenin er almindeligt observeret i de 3 fænotyper. Ki-67 positive er højere i det gastriske fænotype eller blandet fænotype end i den intestinale fænotype. Statistiske sammenligninger anvendte Tamhane test for alle 3 fænotyper.
Figur 3 Et repræsentativt eksempel på intestinal intramucosal differentieret type kræft i gastrisk fænotype. en. Low power visning af tumorvæv. b. Højeffektvisning af tumorvæv. c. p53-overekspression blev set. d. p21 blev reduceret. e. p27 blev overudtrykt. f. Overekspression af cyclin A. g. Lav ekspression af cyclin D1. h. Kun MUC2 blev udtrykt i denne tumor, hvilket tyder på tarm fænotype.
Diskussion
Trods en faldende tendens i forekomsten, mavekræft er fortsat et vigtigt medicinsk problem i hele verden, og det er den mest almindelige neoplasme i Japan. Intramucosal cancer er defineret som en tumor på det mest tidlige stadium af mavecancer. Det er vigtigt at undersøge intramucosal kræft til evaluering af patogenesen af ​​mavekræft. Det er almindeligt accepteret, at en cancercelle opstår på grund af abnormiteter i cellecyklusregulering, der består af flere cellecyklus-relaterede proteiner, såsom cykliner, cyclin-afhængig kinase inhibitor, p53 og β-catenin. Desuden har nylige undersøgelser vist, at distinkte klinisk-patologiske fund til gastrisk cancer er kendetegnet ved mucin udtryk. Vi studerede abnorme udtryk for cellecyklus-relaterede proteiner, der fremmer gastrisk carcinogenese baseret på mucin fænotyper i gastriske intramucosal differentieret type kræftformer.
I den foreliggende undersøgelse, immunohistokemi blev anvendt til at undersøge ekspressionsniveauerne af cellecyklus-relaterede proteiner. Immunopositivitet for cellecyklus-relaterede proteiner af tumorvæv blev bestemt ved sammenligning af niveauer mellem tumorvæv og dens omgivende ikke-neoplastisk væv. Ifølge disse kriterier, kan niveauet af immunopositivitet af tumorvæv er forskellige for hver enkelt sag. separering af parametre i disse kræftformer i "lav" og "høj" kategorier baseret på sammenligninger af disse faktorer med ikke-neoplastisk væv, kan imidlertid være en utraditionel metode. Den "ikke-neoplastiske" væv omfatter gastritis (kronisk eller kronisk aktiv) og /eller tarm metaplasi; parametrene i disse forskellige inflammatoriske eller metaplastiske væv kunne variere betydeligt. Det kan være mere meningsfuldt at bruge en absolut hastighed (dvs. den egentlige%), snarere end denne interne relative værdi. Men vi mener, at dette immunhistokemisk kriterium er vigtigt for at finde de mulige aktiviteter af cellecyklus-relaterede proteiner på et tidligt stadium af gastriske differentieret type cancere, eftersom den ikke-neoplastisk væv, der omgiver tumorvæv er tæt forbundet med tumorudvikling.
det har været antaget, blandt patologer, at den gastriske fænotype af mavekræft viser low-grade atypi i gastriske intramucosal differentieres-type kræft (19). Men i den foreliggende undersøgelse, i det gastriske intramucosal differentierede-type kræft, som vi undersøgte, viste høj kvalitet atypia, mavens fænotype. Selvom årsagen er ukendt, en mulig årsag er, at en gastrisk fænotype viser lav kvalitet atypia, som ligner gastrisk foveolar epitel histologisk kan have været medtaget i tidligere undersøgelser. I den foreliggende undersøgelse blev der kun én sådan tumor observeret. Desuden kunne disse forskelle skyldes antallet af prøver eller etniske eller ætiologiske faktorer. Det er velkendt, at p53-overekspression er korreleret med tumorklassificering. I den foreliggende undersøgelse, foreslår vi, at det er rimeligt at vise en høj frekvens af p53-overekspression for den gastriske fænotype sammenlignet med andre fænotyper.
I denne undersøgelse blev p53-overekspression mere hyppigt i det gastriske fænotype end i den intestinale eller blandes fænotyper. Dette fund tyder på, at p53-overekspression spiller en væsentlig rolle, i det mindste i den tidlige udvikling af gastrisk fænotype cancer, selv om tidligere undersøgelser har vist tiltagende øgning af p53-overekspression i gastriske cancere fra begyndelsen til fremskredne stadier [12].
I denne undersøgelse blev reduceret p21-ekspression observeret hos ca. 30% af de 3 mucin fænotyper. Tidligere undersøgelser har vist, at lav ekspression af p21 er forbundet med patientens prognose i gastrisk cancer [5, 6]. Men lidt er kendt om p21-ekspression af gastrisk kræft baseret på mucin fænotyper. Desuden, enhver sammenslutning af p21 udtryk med tumor stadie (tumor dybde) forbliver ukendt. Vores fund tyder på, at reduceret p21 udtryk spiller en fælles rolle i den tidlige udvikling af de 3 mucin fænotyper af gastrisk differentieret-type kræft. en tidligere undersøgelse foreslås imidlertid, at en progressiv reduktion af p21-ekspression forekom i en fremskreden fase af gastrisk differentierede type kræft fra den tidlige fase [6]. p21-ekspression også korreleret med udtrykkene for andre cellecyklus-relaterede proteiner, såsom p27 og Ki-67, eventuelt gennem en p53-afhængige vej [1, 5, 6]. Det er blevet antaget, at p21 samarbejder med p53 og, som følge heraf er cellecyklussen styres gennem en p53-afhængige vej [1, 5]. Endvidere antages det, at p21 også inhiberes af samarbejdet med p27 [1, 5]. I den foreliggende undersøgelse, men vi fandt hverken en korrelation af p21 reduktion med reduktion p27 eller en omvendt korrelation af p27 reduktion med p53-overekspression (data ikke vist). Vi foreslår, at der eksisterer en anden vej til styring af cellecyklus i humane gastriske cancere.
Det er velkendt, at p27 er et prototypisk tumorsuppressorgen [1-3]. Imidlertid har en nylig undersøgelse vist, at mens der i nogle tilfælde p27 inhiberer cellecyklussen, i andre tilfælde fremmer progression til den næste fase af cellecyklussen [23]. Det er blevet rapporteret, at enten et tab eller en lav ekspression af p27 er korreleret med tumorprogression eller patient prognose [24, 25]. I modsætning til andre undersøgelser, viste vi, at lav ekspression (reduktion) af p27 havde en meget lav frekvens i vores serie af gastriske cancere. Ifølge de foreliggende resultater, reduceret p27 ekspression spiller en mindre rolle i udviklingen af ​​differentierede gastriske cancere.
I modsætning hertil blev overekspression af p27 ofte findes i den intestinale fænotype sammenlignet med de andre 2 fænotyper, selv om forskellen mellem dem nåede ikke en statistisk signifikant niveau. Hvorvidt denne overekspression af p27 er associeret med cellecyklus hæmning eller cellecyklusprogression er ikke kendt, selv om flere forklaringer er foreslået. Første er, at p27, der overudtrykkes til undertrykkelse af cellecyklusprogression i tumorceller resultater fra en negativ feedback-mekanisme. Omvendt er en anden forklaring er, at overekspression af p27 er positivt forbundet med progressionen af ​​cellecyklussen for tumorceller; det er, P27 virker som et onkogent faktor [23]. Derudover har en nylig undersøgelse vist, at ekspression af p27 er reguleret af ekspression af Skp2, som er et ubiquitin-ligase underenhed af p27 [26]. Ifølge denne rapport, blev udtryk for p27 omvendt korreleret med Skp2 udtryk.
Cyclin D1 overekspression viste kun en lav frekvens i den tidlige fase af gastrisk differentierede typen kræftformer (27/190, 14,2%). Selv om forskellene ikke nåede et betydeligt niveau, frekvensen af ​​cyclin D1 overekspression var højere i det gastriske fænotype end i de intestinale og blandede fænotyper. Cyclin D1 er tidligere undersøgt i flere serier af gastrisk kræft, med en rapporteret frekvens på 20 ~ 56% af overekspression rapporteres [27-29], forskellig fra vores resultater. Som en mulig årsag til disse forskelle i cyclin D1 overekspression, selvom tidligt differentieres-type kræft, bortset gastrisk fænotype, ikke kræver en forøgelse af cyclin D1, når tumoren har udviklet, tumorcellerne brug for en høj grad af cyclin D1 for tumorprogression. Dette antyder, at cyclin D1 overekspression er korreleret med patientens prognose i gastriske cancere [28].
Overekspression af cyclin A var også mere fremherskende i det gastriske og blandede fænotyper sammenlignet med den intestinale fænotype. Dette antyder, at overekspression af cyclin A spiller en stor rolle i tumorigenese af gastriske og blandede fænotyper. Således i gastriske cancere, erhvervelse af gastrisk mucin ekspression kan være forbundet med cyclin A overekspression, som derefter forårsager høj tumorproliferation. Desuden blev cyclin A tæt forbundet med patientens prognose eller tumor aggressivitet [8, 9]. Dette kan indikere, at cyclin A overekspression er relateret til både tumorudvikling og progression hos cirka halvdelen af ​​differentierede gastriske cancere.
I den foreliggende undersøgelse viste cyclin E overekspression lave frekvenser i de 3 fænotyper. I modsætning hertil har tidligere undersøgelser vist, at cyclin E overekspression var korreleret med dårligt resultat [4, 10], selv om kontrasterende resultater er blevet foreslået [30]. De foreliggende resultater viser, at cyclin E overekspression spiller nogen væsentlig rolle i den tidlige tumorgenese af differentieret gastriske cancere. Derudover kan overekspression af cyclin E primært fremme udviklingen af ​​gastriske cancere. Disse resultater antyder, at den høje proliferation af mavens fænotype kan karakteriseres ved overekspression af cyclin D1 og /eller cyclin A, og at den blandede fænotype er associeret med cyclin A overekspression.
Det er velkendt, at β-catenin-ekspression opregulerer cellecyklussen og spiller en central rolle i Wnt-signaltransduktionsvej [14, 15]. I den foreliggende undersøgelse, er det interessant at bemærke, at β-catenin ekspression almindeligvis blev observeret i de tidlige differentierede gastriske cancere, vi undersøgte. Det er allerede accepteret, at β-catenin udtryk er afgørende for colon adenom udvikling [31, 32]. De foreliggende resultater og tidligere undersøgelser vedrørende kolorektal adenom indikerer, at β-catenin ekspression kan være en fælles ændring i den tidlige udvikling af gastrointestinale tumorer [31]. Dette kunne forklares ved de resultater, der, i gastrisk kræft, er gen initiativtagere forbundet med Wnt signalvejen meget methylerede [32-34], hvilket resulterer i den nukleare ophobning af β-catenin udtryk.
Konklusioner
In sammenfattende foreslår vi, at de cellulære mucin fænotyper af intramucosal differentieret type adenocarcinomer i maven er afhængige af distinkte cellecyklus-relaterede ændringer, og at klinisk-patologiske fund skyldes forskellige veje baseret på mucin udtryk: gastriske, tarm- og blandede fænotyper . Figur 4 illustrerer en hidtil ukendt carcinogenese model for intramucosal differentieret type adenocarcinomer, der bygger på deres mucin fænotyper. Baseret på abnormaliteter af cellecyklus-relaterede proteiner, overexpressions af p53 og cyclin A karakterisere gastriske fænotype cancere, hvorimod overekspression af p27 kan være forbundet med udviklingen af ​​intestinale fænotype kræftformer.

• Sammenslutninger af en PTPN11 G /A polymorfi ved intron 3 med Helicobactor pyloriseropositivity, gastrisk atrofi og mavekræft i japansk
• Systematisk gennemgang og meta-analyse af laparoskopisk og åben gastrektomi til avanceret gastrisk kræft