Analyse von Zellzyklus-verwandten Proteine ​​im Magen-intramukosalen differenzierten Typ Krebs basierend auf Phänotypen Mucin: a novel Hypothese von Magenfrüh Karzinogenese basierend auf Mucin phenotype

Analyse von Zellzyklus-verwandten Proteine ​​im Magen-intramukosalen differenzierten Typ Krebs basierend auf Mucin-Phänotypen: a Roman Hypothese von Magenfrüh Karzinogenese basierend auf den Phänotyp
Zusammenfassung
Hintergrund
Abnormitäten von Zellzyklusregulatoren Mucin sind gemeinsame Merkmale in menschlichen Krebserkrankungen, und mehrere dieser Faktoren sind mit der frühen Entwicklung von Magenkrebs in Verbindung gebracht. neuere Studien haben jedoch gezeigt, dass Magenkrebs tumorigenesis durch Muzinexpression charakterisiert wurde. Somit Expressionsmuster von Zellzyklus-verwandte Proteine ​​wurden in der frühen Phase der differenzierten artigen Magenkarzinome sucht alle mechanistischen Beziehungen mit Mucin Phänotypen zu bestimmen.
Methods
Immunostaining für Cycline D1, A, E, und p21, p27, p53 und β-Catenin wurde verwendet, in 190 Magenkrebs intramuköse differenzierte artige Beeinträchtigungen des Zellzyklus zu untersuchen. Mucin Phänotypen wurden durch die Ausdrücke von MUC5AC, MUC6, MUC2 und CD10 bestimmt. Ein Ki-67-Positiv-Rate (PR) wurde ebenfalls untersucht.
Ergebnisse | Overexpressions von p53, Cyclin D1 und Cyclin A waren signifikant häufiger in einem Magen-Phänotyp als eine intestinale Phänotyp. Cyclin A wurde in einem gemischten Phänotyp im Vergleich mit einer Darm-Phänotyp überexprimiert, während p27 Überexpression häufiger in einer intestinalen Phänotyp war als in einem gemischten Phänotyp. Reduktion von p21 war ein gemeinsames Merkmal der Magen intramukosalen differenzierten Typ Krebs untersucht.
Schlussfolgerungen Unsere Ergebnisse legen nahe, dass die
Werte einiger Zellzyklusregulatoren mit Mucin Phänotypen von Magenfrüh differenzierte-Typ Krebserkrankungen in Verbindung gebracht werden angezeigt.
Hintergrund
Progression durch den Zellzyklus und die Zellproliferation unter der Kontrolle einer Reihe von Cycline und Cyclin-abhängige Kinase (cdk) -Komplexe [1-3]. Thesaurierend Beweise zeigen, dass das Fortschreiten der Tumorentstehung häufig Anomalien in den Ausdrücken der Cycline und andere Zellzyklus-verwandte Gene [1-3] beinhaltet. Abnormalitäten wurden für Cycline D1, A, E und ihre Kooperationspartner, wie Cyclin-abhängige Kinase (CDK), gefunden, die den Zellzyklus [1, 3] zu fördern. Zusätzlich können diese progressive Faktoren durch Blocker inhibiert werden, beispielsweise p21, p27 und p57, und eine andere Gruppe von Inhibitorproteinen, einschließlich p16, p15 und p18 [4-10]. Die unkontrollierte Proliferation, die Tumorzellen charakterisiert weitgehend durch den Gewinn und /oder Verlust der Proteinfunktionen, die den Zellzyklus umfassen erläutert. Regulierung dieser Zellzyklus-verwandten Proteinen wird auch von anderen Faktoren ab, einschließlich p53 und β-Catenin und deren Änderungen auch beeinträchtigen den Zellzyklus, was zu einer unkontrollierten Proliferation [11-15]. Kader der obigen Zell Zyklus- geregelt verwandte Proteine, Schlüsselregulatoren der Progression durch die G1-Phase des Zellzyklus sind Cyclin D1 und Cyclin E, p53, p21 und p27 [1, 4, 6, 12]. Ihre abnormal Ausdrücke wurden gedacht, um eine entscheidende Rolle bei der Progression von Tumorgenese spielen und haben sich als in einer Reihe von humanen Malignomen gestört werden. Cyclin A ist ebenfalls ein Mitglied der Cyclin-Protein-Superfamilie, die während des Übergangs von der G1 zur S-Phase des Zellzyklus aktiviert werden kann. Abnormal Ausdrücke von Cyclin A mit schlechten Ergebnissen in verschiedenen menschlichen Krebserkrankungen korreliert [8, 9]. Zusätzlich Kern Expression von β-Catenin in gastrointestinalen Krebsarten verwickelt [14, 15]. β-Catenin reichert sich im Zellkern aufgrund Beeinträchtigungen des Wnt-Signalwegs, und seine Kernexpression fördert Progression des Zellzyklus und Zellproliferation [14, 15]. Doch bis heute hat sich ihre Tätigkeit nicht die Pathogenese zu beeinflussen frühen differenzierte-Typ Magenkrebs gezeigt.
Jüngste Studien haben gezeigt, dass zelluläre Mucin Ausdrücke und Tumorphänotypen assoziiert sind mit den klinisch-pathologischen Befunde und tumorigenesis in differentiated- Typ Magenkarzinome [16-19]. Die Mucin-Phänotypen von Tumoren wurden in 3 Typen hauptsächlich klassifiziert: Magen, Darm und gemischte Phänotypen [16, 17]. Die Magen-Phänotyp wird durch schlechte Ergebnisse, verschiedene histologische Eigenschaften und einen spezifischen Subtyp von genetischen Veränderungen, einschließlich der Mikrosatelliteninstabilität (MSI) [17, 18] aus. Im Gegensatz dazu ist die intestinale Phänotyp ein sehr gut differenzierten Art, mit geringer Proliferationsaktivität und ein Mangel an MSI [17]. Die Ausdrücke von Mucinen von Tumorzellen definieren Tumor-Eigenschaften in Magenkrebs [16-19]. Somit ist es wichtig für das Verständnis der frühen tumorigeneis von Magenkrebs nach diesen Mucin Phänotypen biologische Veränderungen zu untersuchen [16-19].
Obwohl eine Anzahl von Studien in Bezug auf die Ausdrücke der zellzyklusbezogenen Faktoren berichtet worden [ ,,,0],3-7], die Verbände der frühen differenzierten artigen Magenkarzinome und deren Mucin Phänotypen und Veränderungen der Zellzyklus-verwandten Proteine ​​sind nicht vollständig verstanden. In der vorliegenden Studie untersuchten wir Anomalien des Zellzyklus-verwandte Proteine ​​der frühen Phase der differenzierten Typ Magenkrebs basierend auf Mucin-Phänotypen.
Methoden
Patienten
Materialien für diese Studie von 190 Patienten erhalten wurden, mit primäre frühen Magenkrebs, die in der Abteilung für Molekulare Diagnostik Pathologie, Institut für Pathologie, Iwate Medical University, Morioka, Japan diagnostiziert wurden. Die Einwilligungserklärung wurde bei allen Patienten gegeben, die wir untersucht. (; Referenznummer, H21-140, Ethikkommission der Iwate Medical University Titel, molekulare Analyse von Magen-Darm-Tumoren und die umliegenden Schleimhaut) Darüber hinaus wurde unsere Studie unserer Ethikkommission genehmigt. Diese Tumoren waren konsistent mit intramukosalen differenzierten Typ Krebs und wurden aus den Proben der endoskopischen Submukosadissektion (ESD) erhalten. Die histologischen Kriterien zur histologischen Diagnosen wurden auf unserem Krankenhaus Kriterien [16], die sich von denen der japanischen Forschungsgesellschaft für Magenkarzinome modifiziert wurden [20], wie Diskrepanzen in histologischen Urteile zwischen japanischen und westlichen Pathologen existieren. Detaillierte klinisch-pathologischen Daten (Patientenalter, Geschlecht, Ort des Tumors, Tumorgröße, makroskopischen Art und Grad der Tumordifferenzierung) in den weiteren Datei 1.
In dieser Studie gezeigt werden, intramukosalen differenzierte Typ Krebserkrankungen wurden untergliedert in 3 Gruppen nach der Tumor Kerngrading: niedrig, mittel oder hoch. Der Tumorgrad wurde nach früher veröffentlichten Kriterien bestimmt [17]. Kurz gesagt, wurde minderwertige Krebs durch die Anwesenheit von Zellen mit vergrößerten, -hyperchromasie diagnostiziert, die auf die Basisabschnitte der Zellen weitgehend beschränkt waren, aber das war unregelmäßiger und komplexe Drüsen als Magen Adenome. Tumoren, die Zellen mit einem offensichtlichen Verlust der Polarität, hohe Kern Unregelmäßigkeit, vergrößerte Kernkörperchen und hyperchromatin wurden als hochwertige Krebsarten enthalten. Die hochgradigen Krebsarten zeigten oft bedeutende architektonische Atypien, wie hohe architektonische oder Drüsen Verzerrungen. Zwischen Erkenntnisse zwischen niedrigen und hochwertigen Krebserkrankungen wurden als Zwischenkrebserkrankungen anerkannt. Allerdings war die histologische Unterscheidung zwischen Magen-Adenom und low-grade Krebs manchmal sehr schwierig. Die Objektträger wurden unabhängig voneinander von zwei erfahrene Pathologen (S. T. und N. S.) ausgewertet; in einigen Fällen, in denen die Auswertungen unterschiedliche Ergebnisse lieferten, wurde ein Konsens Auslegung nach erneuter Prüfung erreicht.
Immunhistochemie
Unmittelbar nach der Exzision wurden die Proben in Paraffin in 20% neutral gepuffertem Formalin, eingebettet fixiert, geschnitten in 3 um Paraffinschnitten und mit Hämatoxylin und Eosin (HE) für die herkömmliche Lichtmikroskopie gefärbt. Für immunhistochemischen Färbung, weitere 3 &mgr; m dicke Abschnitte wurden aus in Paraffin eingebetteten Gewebe geschnitten und auf Poly-L-Lysin-beschichtete Glasobjektträger. Kurz gesagt wurden die Schnitte in Xylol und dehydrierte Paraffin befreit. Für die Bestimmung der Phänotypen Mucin wurde die Immunfärbung für MUC getan 2 (Ccp58, Novocastra Laboratories, Newcastle, UK), CD10 (56C6, Novocastra Laboratories), MUC 5AC (CLH2, Novocastra Laboratories) und MUC 6 (CLH5, Novocastra Laboratories, Newcastle , UK). Zusätzlich Immunofärbung wurde p53 (Klon, DO7, DAKO, Carpinteria, CA, USA), Ki-67 (MIB-1, Dako), p21 (SX118, Dako), p27 (SX53G8, Dako) getan, Cyclin D1 ( SP4, Nichirei Co., Tokyo), Cyclin E (13A3, Novocastra Laboratories), Cyclin A (6E6, Novocastra Laboratories) und β-Catenin (BD, Transduction Laboratories).
Immunhistochemie verwendet, um die DAKO Envision + System, bestehend aus Dextran konjugierte Polymere mit Meerrettich-Peroxidase (DAKO), wie zuvor beschrieben [16, 17]. Die Proben wurden durch Mikrowellen in Citratpuffer (pH 6,0) 3-mal für 5 min erhitzt, bei 750W jeweils vor den Reaktionen mit Antikörpern (H2500, Mikrowellen Processor, Bio Rad, USA), wie zuvor beschrieben [16, 17]. Hämatoxylin als counterstain verwendet wurde.
Bewertung der Expression Mucin
In dieser Studie wurden Magentumoren in 4 Gruppen nach ihrer Immunfärbung Muster. mit vorherrschenden intrazytoplasmatische Mucin des Magen Typ A Magen Phänotyp wurde als Tumoren definiert, wie durch Immunfärbung mit menschlichen Magen Mucin (MUC5AC) und /oder Pylorus gland Mucin (MUC6) bestimmt, aber ohne MUC-2 positive Zellen. Ein Darm-Phänotyp wurde durch einen Tumor zeigt MUC2-positive Zellen und /oder CD10 positiv (zusammen mit einem Bürstensaum) angezeigt. Diese Tumoren wurden zu kleinen Darm-Absorptions Zellen differenziert. Intestinale Phänotyp Tumoren wurden unterteilen sich in zwei Gruppen: Kolon-Typ (positiv für MUC 2 only) und Dünndarm-Typ (positiv für CD10). Ein gemischtes Phänotyp wurde als Tumor definiert Immunofärbung konsistent mit Magentyp aufweist (positive Zellen für MUC5AC und /oder Pylorus gland Mucin) sowie intestinalen Typ Mucin (positive Zellen für CD10 und /oder MUC2). Schließlich Tumoren ohne entweder für immunostaining Magen- oder Darm-Phänotypen wurden in einen "nicht klassifiziert" zugeordnet. Immunopositiv Ergebnisse für > 5% der Tumorzellen wurden als positive und immunopositive Ergebnisse für < 5% als negativ, in Übereinstimmung mit früheren Berichten [16, 17, 21].
Der Ki-67 positiven Messrate (PR)
Zufalls Bereiche von jeder Probe wurden ausgewählt, in denen zu zählen, Ki-67 positiven Kerne . Die Ki-67-Positiv-Rate als der Prozentsatz der Ki-67-positiver Tumorzellkerne in 10 Hochleistungsfeldern bestimmt berechnet wurde (HPF, × 400), die nach dem Zählen mindestens 500 Tumorzellen pro Tumorprobe bestimmt. Tumorproliferationsaktivität wurde in 2 Gruppen eingeteilt: hoch und niedrig. Die proliferative Aktivität wurde nach unseren Kriterien bestimmt [16, 17]. Kurz gesagt, wurde PR des Gewebes in gemessen sowohl das Tumorgewebe und seine umgebenden nicht-neoplastischen Gewebe. Hohe Proliferations wurde angesehen, wenn PR höher im Tumorgewebe war, als in dem nicht-neoplastischen Gewebe. Low-Proliferation wurde beurteilt, ob PR niedriger im Tumorgewebe war als in der nicht-neoplastischen Gewebe.
Immunhistochemischen Beurteilung der Zellzyklus-verwandten Proteinen
Der Anteil der Tumorzellen pro Abschnitt mit dem Auge beurteilt wurde und zugeordnet eine Punktzahl als in Weitere Datei 2A zusammengefasst. Insgesamt 500-Zellen wurden in zufälligen Feldern von repräsentativen Bereichen der Läsion gezählt. Für alle Marker wurde nur eine Kernfärbung positiv. Die Färbungsintensität wurde auf einer 5-Punkte-Skala (0 bis 6 +) geschätzt und eine Punktzahl wurde entsprechend der Intensität (Weitere Datei 2B) zugeordnet. Die Färbung Index war ein einfaches Multiplikationsprodukt der Zellularität und Färbung Partituren. Als nächstes wurde eine hohe Expression für die Tumorzellen erfasst, wenn die Färbungsindex in den Tumorzellen höher war als in seiner Umgebung nicht-neoplastischen Gewebe. Im Gegensatz dazu wurde geringe Expression auf Tumorzellen erfasst, wenn die Färbungsindex, der niedriger oder gleich in den Tumorzellen als in dem nicht-neoplastischen Gewebe. Zum Beispiel kann eine repräsentative Figur ist in Abbildung 1 dargestellt Die ursprünglichen Kriterien zuvor beschrieben wurden [22], und die vorliegenden Kriterien wurden mit geringfügigen Modifikationen verwendet. Zwei Schnitte wurden gefärbt und Werte wurden basierend auf dem Mittelwert der zwei Einzelergebnisse. Abbildung 1 Beispiel der Magen-intramukosalen differenziert-Typ Krebs. Während der Indexwert für die Expression von Cyclin D1 16 in der Magenkrebs Schleimhaut (b) ist, ist die Note 4 in seiner Umgebung nicht neoplastische Schleimhaut (a). Der Tumor, der in 1b gezeigt wird, wird als gut differenziertes Adenokarzinom von japanischen Pathologen angesehen, obwohl dieser Tumor Magen-Adenom oder Dysplasie von westlichen Pathologen betrachtet wird.
Statistische Analyse Die Ergebnisse sind als mittlere oder Mittelwerte angegeben. Die statistische Analyse verwendet, um die Tamhane-Test für Vergleiche zwischen den drei Gruppen und Chi-Quadrat-Tests für Vergleiche zwischen zwei Gruppen. Die statistische Signifikanz wurde bei p <etabliert; 0,05 Niveau.
Ergebnisse | Clinico-pathologischen Merkmale
Wie in den weiteren Datei 3, der 190 Magen intramukosalen differenziert Typ Krebserkrankungen, 23 (12,1%) waren der Magen-Phänotyp, 85 (44,7%) gezeigt der Darm-Phänotyp und 79 (41,6%) wurden als gemischte Phänotypen eingestuft. Nur 3 (1,6%) Tumoren des nicht klassifiziert Typ. Clinico-pathologische Befunde auf die Mucin Phänotypen basieren auch in den weiteren Datei aufgelistet 3. Es gibt keine signifikanten Unterschiede nach Alter waren, Tumorgröße, Standort, mikroskopische Typ oder histologischen Typ zwischen den drei Phänotypen. Doch für die Magen-und gemischten Phänotypen waren die Inzidenz von hochgradigen Tumoren signifikant höher für die Magen-und gemischten Phänotypen als der Darm-Phänotyp (p < 0,01 und p < 0,05). Darüber hinaus war das Verhältnis Männer /Frauen für den gemischten Phänotyp ower als bei den anderen Typen (p < 0,05) In der vorliegenden Studie
wurden Magen-Phänotypen in drei Sub-Phänotypen eingeteilt:. MUC5AC (+) /MUC6 (+), MUC5AC (+) /MUC6 (-) und MUC5AC (-) /MUC6 (+). Fünfzehn (65,2%) hatten die MUC5AC (+) /MUC6 (+) Muster, 5 (21,7%) hatten die MUC5AC (+) /MUC6 (-) Muster und 3 (13,1%) wurden als MUC5AC unterklassifiziert (-) /MUC6 (+) Muster. Unter den drei Magen-Sub-Phänotypen wurden keine klinisch-pathologischen Unterschiede gefunden. Im Gegensatz dazu waren intestinalen Phänotypen unterteilt in kleine intestinale (N = 67) und Kolon (N = 18) Phänotypen. Es gab keine signifikanten Unterschiede zwischen ihnen für Alter, Tumorgröße, Standort, makroskopischen Typ oder histologischen Typ.
Ausdrücke von Zellzyklus-verwandte Proteine ​​von Mucin Phänotypen
keine p53-Überexpression wurde in jede Umgebung ein nicht-neoplastische Schleimhaut gefunden. Eine Überexpression von p53 wurde in 33 von 190 Fällen beobachtet, dass wir (17,4%) untersucht und wurde häufiger im Magen-Phänotyp (10/23, 43,5%) im Vergleich mit den anderen zwei Typen (intestinale Phänotyp, 13/85, 15,3 gesehen % und gemischt Phänotyp, 9/79, 11,4%). Obwohl der Unterschied zwischen den Magen-und Darm-Phänotypen keine statistische Signifikanz erreichte (p = 0,054), hat der Magen-und gemischten Phänotypen einen signifikanten Unterschied zeigen (p < 0,05). Darüber hinaus wurde kein p53-Überexpression in low-grade Krebserkrankungen (0/26) gefunden. Im Gegensatz dazu wurde in 11 von 103 Zwischen-grade Krebserkrankungen (10,7%) und 22 von 61 hochgradigen Tumoren (36,1%) p53 überexprimiert. Signifikante Unterschiede zwischen den hochgradigen Krebs und minderwertige oder Zwischen-Grade-Tumoren gefunden wurden (p < 0,01).
P21 wurde in erster Linie in der oberflächlichen Epithel der intestinalen metaplastischen Drüse und der Magen-Becherzellhyperplasie Epithel exprimiert wird. Die Häufigkeit der reduzierten p21-Expression war 59 von 190 Tumoren (31,1%). Reduziert p21-Expression wurde in den Magen, Darm und gemischte Phänotypen häufig beobachtet. Es gab keinen signifikanten Unterschied für reduzierte p21 Ausdrücke zwischen den drei Phänotypen.
Expression von p27 auf die oberflächliche Epithel und der Basis des Darm-metaplastischen Drüse beschränkt war. Die Häufigkeit der reduzierten p27-Expression war in den Magen-Krebs sehr niedrig, die wir untersucht (12/190, 6,3%). Im Gegensatz dazu ist die Frequenz für p27 Überexpression wurde in 53 von 190 Tumoren (27,9%) beobachtet. Die Frequenz des p 27-Überexpression war höher im Darm Phänotyp (31/85, 36,5%) als in den Magen (6/23, 26,1%) und gemischte Phänotypen (16/79, 20,2%). Allerdings waren diese Unterschiede nicht signifikant.
Cyclin D1 wurde in der unteren Hälfte der intestinalen metaplastischen Drüse exprimiert. In den Magenkrebs untersucht, 27 von 190 Fällen (14,2%) zeigten überexprimiert Cyclin D1. Cyclin D1 wurde in der Magen-Phänotyp für 7 von 23 Fällen (30,4%) überexprimiert. Zum Vergleich: die Überexpression von Cyclin D1 wurde in 11,8% (10/85) bzw. 12,7% (10/79) der intestinalen und gemischt Phänotypen gefunden, respectively. Kein signifikanter Unterschied wurde zwischen den Magen Phänotyp und den anderen Arten gefunden.
Expression von Cyclin A wurde auf die untere Hälfte der intestinalen metaplastischen gland primär beschränkt. Eine positive Färbung für Cyclin A wurde in 42,1% (80/190) nachgewiesen. Die Häufigkeit von Cyclin A-Überexpression war höher in der Magen-Phänotyp (16/23, 69,6%) als in den Darm Phänotyp (25/85, 29,4%; p < 0,01). Es wurde jedoch kein signifikanter Unterschied zwischen dem Magen und gemischte Phänotypen gefunden (39/79, 49,4%).
Nicht-neoplastische Drüsen für Cyclin E. In den Magenkarzinome sucht meist negativ waren, war die Häufigkeit von Cyclin-E-Überexpression sehr niedrig. Kein signifikanter Unterschied zwischen den drei Mucin Phänotypen beobachtet.
In dieser Studie nur die Kernexpression für β-Catenin wurde als positiv angesehen. Keine Kernexpression von β-Catenin wurde in den umgebenden nicht-neoplastische Schleimhaut, mit Ausnahme Pylorusdrüsen beobachtet. Die meisten Pylorusdrüsen Kern β-Catenin exprimiert wird. Nuclear β-Catenin-Expression wurde in 80 von 190 Tumoren (36,8%) gefunden. Obwohl der Darm-Phänotyp (44/85, 51,8%) die höchste Frequenz für Kern β-Catenin unter den drei Phänotypen zeigte, war der Unterschied nicht signifikant.
Eine hohe Proliferationsrate von Tumorzellen wurde in mehr als 30% Ki gezeigt -67 PR in den meisten der Magenkrebserkrankungen, die wir untersucht. Nach unseren Kriterien wurde hohe Verbreitung in 101 von 190 Tumoren (53,2%) gefunden. Hohe Proliferation von Tumorzellen wurde häufiger in den Magen- und gemischten Phänotypen beobachtet, verglichen mit dem intestinalen Phänotyp (p < 0,01 und p < 0,05). Wir haben diese Ergebnisse für Zellzyklus-verwandte Proteine ​​zusammengefasst basierend auf in Fig Mucin Phänotyp 2. Zusätzlich ist ein repräsentatives Beispiel ist in Abbildung 3 Abbildung 2 Frequencies von Zellzyklus-verwandtes Protein Ausdrücke in Magen, Darm und gemischte Phänotypen gezeigt. Magen-Phänotyp Krebserkrankungen werden durch p53 und Cyclin A overexpressions gekennzeichnet. Obwohl die Häufigkeit von p27-Überexpression zwischen den Darm-Phänotyp und andere Phänotypen keine statistische Unterschied war, kann dies der Darm Phänotyp charakteristisch sein. Reduktion von p21 und Akkumulation von β-Catenin in den drei Phänotypen häufig beobachtet. Ki-67-Positiv-Rate höher ist in der Magen-Phänotyp oder gemischten Phänotyp als im Darm-Phänotyp. Statistische Vergleiche Tamhane Tests für alle drei Phänotypen verwendet.
3 Ein repräsentatives Beispiel für intestinale intramuköse differenziert Typ Krebs des Magen-Phänotyp Figur. ein. Geringer Strom Ansicht von Tumorgewebe. b. Hohe Leistung Ansicht von Tumorgewebe. c. p53-Überexpression wurde gesehen. d. p21 wurde reduziert. e. p27 wurde überexprimiert. f. Die Überexpression von Cyclin A. g. Niedrige Expression von Cyclin D1. h. Nur in diesem Tumor MUC2 wurde zum Ausdruck gebracht, Darm-Phänotyp hindeutet.
Diskussion
Trotz einer rückläufigen Entwicklung der Inzidenz bleibt Magenkrebs ein wichtiges medizinisches Problem in der ganzen Welt, und es ist die häufigste Neoplasie in Japan. Intramuköse Krebs ist als Tumor am meisten frühen Stadium von Magenkrebs definiert. Es ist wichtig, intramukosalen Krebs zur Bewertung der Pathogenese von Magenkrebs zu untersuchen. Es ist allgemein anerkannt, dass eine Krebszelle zu Störungen der Zellzyklusregulation durch entsteht, die aus mehreren Zellzyklus-verwandte Proteine, wie Cycline, Cyclin-abhängige Kinase-Inhibitor p53 und β-Catenin besteht. Darüber hinaus haben die jüngsten Studien gezeigt, dass verschiedene klinisch-pathologische Befunde für Magenkrebs sind durch Mucin Ausdrücke gekennzeichnet. Wir untersuchten abnormal Ausdrücke von zyklusbezogenen Zellproteinen, die Magen-Krebsentstehung fördern basierend auf Phänotypen im Magen-intramukosalen differenzierten Typ Krebs Mucin.
In der vorliegenden Studie wurden die Immunhistochemie verwendet wurde, um die Expression von Zellzyklus-verwandten Proteinen zu untersuchen. Immunopositivity für Zellzyklus-verwandte Proteine ​​von Tumorgewebe wurde durch Vergleich der Ebenen zwischen Tumorgewebe und dem umgebenden nicht-neoplastischen Gewebe bestimmt. Nach diesen Kriterien kann das Niveau der immunopositivity von Tumorgewebe für jeden Fall unterschiedlich sein. Jedoch in den "low" und "high" Kategorien innerhalb dieser Krebserkrankungen die Parameter Trennung basierend auf Vergleichen dieser Faktoren mit nicht-neoplastischen Gewebe kann eine unkonventionelle Methode. Die "nicht-neoplastischen" Gewebe enthält Gastritis (chronische oder chronisch aktiver) und /oder intestinale Metaplasie; Die Parameter in diesen verschiedenen entzündlichen oder metaplastischen Gewebe könnte erheblich variieren. Es kann sinnvoller sein, eine absolute Rate zu verwenden (das heißt, die tatsächliche%), anstatt diese interne relativen Wert. Allerdings betrachten wir, dass dieses immunhistochemische Kriterium für die Suche nach der möglichen Aktivitäten der Zellzyklus-verwandten Proteinen in einem frühen Stadium von Magen differenzierten artigen Tumoren wichtig ist, da die nicht-neoplastischen Gewebe umgebende Gewebe Tumor ist eng mit der Tumorentwicklung verbunden.
Es wurde unter Pathologen angenommen, dass der Magen-Phänotyp von Magenkrebs zeigt atypia low-grade im Magen-intramukosalen differenziert Typ Krebserkrankungen (19). Doch in der vorliegenden Studie, die in den Magen intramukosalen differenzierte-Typ Krebsarten, die wir untersucht, der Magen-Phänotyp zeigte hochgradige atypia. Obwohl der Grund unbekannt bleibt, ist ein möglicher Grund dafür, dass ein Magen-Phänotyp atypia low-grade zeigt, die histologisch Magen Becherzellhyperplasie Epithel ähnelt, in früheren Studien eingeschlossen wurden. In der vorliegenden Studie wurde nur ein solcher Tumor beobachtet. Darüber hinaus könnten diese Unterschiede auf die Anzahl von Proben oder ethnischen oder ätiologischen Faktoren zurückzuführen sein. Es ist bekannt, daß p53-Überexpression mit dem Tumorgrad korreliert. In der vorliegenden Studie schlagen wir vor, dass es sinnvoll, eine hohe Frequenz von p53-Überexpression für den Magen-Phänotyp zeigen, im Vergleich zu anderen Phänotypen.
In dieser Studie p53-Überexpression wurde häufiger in der Magen-Phänotyp gefunden als im Darm oder gemischt Phänotypen. Dieser Befund legt nahe, dass p53-Überexpression eine wesentliche Rolle spielt, zumindest in der frühen Entwicklung des Magen-Phänotyp Krebs, obwohl frühere Studien progressiven Anstieg der p53-Überexpression in Magenkrebs von den frühen bis fortgeschrittenen Stadien [12] gezeigt haben. In diesem
Studie reduzierte p21-Expression wurde in etwa 30% der 3-Mucin-Phänotypen beobachtet. Frühere Studien haben gezeigt, dass niedrige Expression von p21 mit der Prognose der Patienten bei Magenkrebs korreliert ist [5, 6]. Allerdings ist nur wenig von Magenkrebs in Bezug auf p21-Expression bekannt basierend auf Mucin-Phänotypen. Darüber hinaus bleibt jede Vereinigung von p21-Expression mit Tumorstadium (Tumordicke) nicht bekannt. Unsere Ergebnisse legen nahe, dass eine reduzierte p21 Ausdruck eine gemeinsame Rolle in der frühen Entwicklung der 3-Mucin-Phänotypen von Magen differenzierte-Typ Krebs spielt. Jedoch schlug eine frühere Studie, dass eine fortschreitende Abnahme der p21-Expression in einer fortgeschrittenen Phase der Magen differenzierte-Typ Krebs aus der frühen Phase aufgetreten [6]. p21-Expression auch mit den Ausdrücken von anderen Zellzyklus-verwandten Proteinen, wie p27 und Ki-67, gegebenenfalls über einen p53-abhängigen Weg [1, 5, 6] korreliert. Es wurde vermutet, dass p21 kooperiert mit p53 und als Ergebnis wird der Zellzyklus durch einen p53-abhängigen Weg gesteuert [1, 5]. Darüber hinaus wird angenommen, dass p21 auch durch Zusammenarbeit mit p27 [1, 5] inhibiert wird. In der vorliegenden Studie wurden wir jedoch weder eine Korrelation von p21 Reduktion mit p27 Reduktion noch eine inverse Korrelation von p27 Reduktion mit p53-Überexpression (Daten nicht gezeigt) gefunden. Wir schlagen vor, daß ein anderer Weg besteht in menschlichen Magenkrebs den Zellzyklus zu steuern.
Es ist bekannt, daß p27 ein prototypisches Tumorsuppressorgen ist [1-3]. Jedoch hat eine neue Studie gezeigt, dass, während in einigen Fällen p27 den Zellzyklus hemmt, in anderen Fällen das Fortschreiten zu der nächsten Phase des Zellzyklus fördern [23]. Es wurde berichtet, dass entweder ein Verlust oder eine niedrige Expression von p27 mit Tumorprogression oder Prognose der Patienten korreliert ist [24, 25]. Im Gegensatz zu anderen Studien konnten wir zeigen, dass niedrige Expression (Reduktion) von p27 eine sehr niedrige Frequenz in unserer Serie von Magenkrebs hatte. Nach den vorliegenden Erkenntnissen reduziert p27 Ausdruck eine untergeordnete Rolle bei der Entwicklung von differenzierten Art Magenkrebs spielt.
Dagegen die Überexpression von p27 gefunden wurde häufig im Darm Phänotyp im Vergleich zu den anderen 2 Phänotypen, obwohl der Unterschied zwischen ihnen hat keinen statistisch signifikanten Niveau erreichen. Ob diese Überexpression von p27 mit Zellzyklushemmung oder Zellzyklusprogression assoziiert ist nicht bekannt, obwohl verschiedene Ausführungen vorgeschlagen. Erste ist, dass p27, die zur Unterdrückung des Zellzyklus in Tumorzellen resultiert aus einem negativen Feedback-Mechanismus überexprimiert wird. Umgekehrt wird eine zweite Erklärung, dass die Überexpression von p27 positiv mit dem Fortschreiten des Zellzyklus der Tumorzellen assoziiert ist; das heißt, p27 wirkt als onkogene Faktor [23]. Darüber hinaus hat eine aktuelle Studie, dass die Expression von p27 dargestellt durch Expression Skp2 reguliert wird, die eine Ubiquitin-Ligase-Untereinheit von p27 ist [26]. Nach diesem Bericht wird die Expression von p27 invers mit Skp2 Expression korreliert.
Cyclin D1-Überexpression zeigte nur eine geringe Frequenz in der frühen Phase der Magen differenzierte Art Krebs (27/190, 14,2%). Obwohl jedoch die Unterschiede keinen signifikanten Niveau erreicht hatte, war die Häufigkeit von Cyclin D1-Überexpression höher im Magen-Phänotyp als in den Darm und gemischte Phänotypen. Cyclin D1 wurde zuvor in mehreren Serien von Magenkrebsarten untersucht, mit einer berichteten Frequenz von 20 ~ 56% der Überexpression berichtet wird [27-29], die sich von unseren Ergebnissen. Als mögliche Ursache für diese Unterschiede von Cyclin D1-Überexpression, obwohl früh differenziert artigen Krebserkrankungen, mit Ausnahme von Magen Phänotyp, keine Erhöhung von Cyclin D1 die, wenn sich der Tumor entwickelt hat, müssen die Tumorzellen eine hohe Cyclin D1 für Tumorprogression. Dies deutet darauf hin, dass Cyclin D1-Überexpression mit der Prognose der Patienten in Magenkrebs korreliert ist [28].
Überexpression von Cyclin A war auch häufiger in der Magen-und gemischten Phänotypen im Vergleich mit dem Darm-Phänotyp. Dies legt nahe, dass Überexpression von Cyclin A eine wichtige Rolle in der Tumorgenese von Magen- und gemischten Phänotypen spielt. So wird in Magenkrebs, den Erwerb von Magen-Mucin Expression kann mit Cyclin A-Überexpression in Verbindung gebracht werden, die dann hohe Tumorproliferation führt. Darüber hinaus wurde Cyclin A eng mit der Prognose der Patienten oder Tumoraggressivität assoziiert [8, 9]. Dies kann darauf hindeuten, dass eine Überexpression Cyclin sowohl Tumorentstehung und Progression in etwa die Hälfte der Magenkarzinome differenzierte-Typ. In der vorliegenden Studie, Cyclin E Überexpression zeigten niedrige Frequenzen in den drei Phänotypen
zusammenhängt. Im Gegensatz dazu haben frühere Studien gezeigt, dass Cyclin E-Überexpression gezeigt mit einer schlechten Prognose korreliert war [4, 10], obwohl kontras Ergebnisse wurden vorgeschlagen [30]. Die vorliegenden Ergebnisse zeigen, dass Cyclin E Überexpression keine wesentliche Rolle in der frühen tumorigenesis differenzierter-Typ Magenkrebs spielt. Darüber hinaus stellt die Überexpression von Cyclin E das Fortschreiten von Magenkrebs in erster Linie fördern kann. Diese Ergebnisse legen nahe, dass die hohe Proliferations des Magen Phänotyp kann durch die Überexpression von Cyclin D1 und /oder Cyclin A charakterisiert werden, und daß die gemischte Phänotyp assoziiert mit einer Überexpression Cyclin.
Es ist bekannt, dass β-Catenin-Expression upregulates den Zellzyklus und spielt eine zentrale Rolle bei der Signal Wnt [14, 15]. In der vorliegenden Studie ist es interessant, β-Catenin Ausdruck zu beachten, dass häufig in den frühen differenzierten Typ Magenkrebs beobachtet wurde, die wir untersucht. Es ist bereits akzeptiert, dass β-Catenin Ausdruck für Dickdarm-Adenom Entwicklung entscheidend ist [31, 32]. Die vorliegenden Ergebnisse und früheren Studien bezüglich kolorektalem Adenom zeigen, dass β-Catenin-Expression eine gemeinsame Veränderung in der frühen Entwicklung von Magen-Darm-Tumoren sein kann [31]. Dies könnte durch die Ergebnisse erklärt werden, die in Magenkrebs, Gen-Promotoren mit dem Wnt-Signalweg verbunden sind stark methyliert [32-34], die von β-Catenin-Expression in der Kernakkumulation führt.
Schlussfolgerungen
Zusammenfassung, schlagen wir vor, dass die zelluläre Mucin Phänotypen von intramukosalen differenzierte-Typ Adenokarzinomen des Magens auf verschiedenen Zellzyklus-bezogene Veränderungen abhängig sind, und dass die klinisch-pathologischen Befunde ergeben sich aus verschiedenen Wegen basierend auf Muzinexpression: Magen-, Darm- und gemischte Phänotypen . 4 stellt ein neuartiges Modell für Karzinogenese intramuköse differenzierten Adenokarzinomen Typ, die auf ihrer Mucin Phänotypen beruht. Basierend auf Abnormalitäten der Zellzyklus-verwandten Proteinen, overexpressions von p53 und Cyclin A Magenkrebs Phänotyp charakterisieren, während die Überexpression von p27 kann mit der Entwicklung von intestinalen Phänotyps Krebs in Verbindung gebracht werden.

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