Um estudo de caso-controle sobre o efeito da apolipoproteína E genótipos sobre o risco de câncer de estômago e progression

Um estudo de caso-controle sobre o efeito da apolipoproteína E genótipos sobre o risco de câncer gástrico e progressão da arte abstracta
Fundo
apolipoproteína E ( ApoE) é uma proteína multifuncional que joga um papel chave tanto no metabolismo do colesterol e triglicéridos, e na reparação de tecidos e inflamação. O gene de ApoE
(19q13.2) tem três isoformas principais codificados por ε2, ε3 e e4 alelos com o alelo ε4 associada com hipercolesterolemia e o alelo ε2 com o efeito oposto. Uma relação inversa entre os níveis de colesterol e câncer gástrico (CG) foi relatado anteriormente, embora a relação entre a apoE
genótipos e GC não foi explorado até agora.
Métodos
Cento e cinquenta e seis câncer gástrico casos e 444 controles hospitalares foram genotipados para apoE polimorfismo (ε2, ε3, alelos e4). A relação entre GC e fatores de risco putativos foi medida usando as proporções ajustadas odds (OR) e seus intervalos de confiança de 95% (IC) de análise de regressão logística. A análise da interação gene-ambiente foi realizada. O efeito dos genótipos da ApoE sobre a sobrevivência da GC foi explorada por uma análise de Kaplan-Meier e modelo de regressão de riscos proporcionais de Cox.
Resultados
Assuntos portadores de, pelo menos, um apoE
alelo ε2 ter uma redução significativa de 60% do risco GC (OR = 0,40, 95% CI: 0,19-0,84) em comparação com homozigotos ε3. Não houve interação significativa surgiram entre o ε4 ou alelo ε2 e exposições ambientais, nem ε2 ou e4 alelos afetados os tempos de sobrevivência mediana, mesmo após correção para idade, sexo e estádio.
Conclusões
Nossos relatórios de estudo para a primeira vez que um efeito protetor do alelo ε2 contra o GC, que pode ser parcialmente atribuído às propriedades antioxidantes mais elevados de ε2 em comparação com os ε3 ou e4 alelos. Dado o tamanho da amostra do estudo, mais estudos são necessários para confirmar nossos achados.
Palavras-chave
gástrica câncer de apolipoproteína Epidemiologia Genética Polimorfismo E interação gene-ambiente fundo
apolipoproteína E (ApoE) é uma pequena glicoproteína que desempenha um importante função na depuração do sangue de partículas ricas em colesterol, conhecido como lipoproteínas remanescentes [1]. Para além do seu papel bem reconhecido no metabolismo lipídico, ApoE foi mostrado para ser envolvido em vários processos patofisiológicos, incluindo antioxidante e as actividades imunes, bem como um efeito de modulação da angiogénese, crescimento de células tumorais e metástases indução [2]. O gene estrutural (19q13.2) para apoE
é polimórfica com dois polimorfismos de nucleótidos simples (SNP) dentro da região de codificação resultando em três alelos diferentes (ε2, ε3, e4) e seis genótipos (apoE
três homozigotos e4 /ε4, ε3 /ε3 e ε2 /ε2, e três heterozigotos ε4 /ε3, ε3 /ε2, ε4 /ε2), mostrando as capacidades de ligação ao receptor cada diferentes [3, 4]. Uma meta-análise relatou uma relação quase linear entre a apoE
genótipos e os níveis de colesterol total e LDL sérico (LDL-C), quando os seis genótipos são ordenados da seguinte forma: ε2 /ε2, ε2 /ε3, ε2 /ε4, ε3 /ε3, ε3 /ε4, ε4 /ε4 [5]. De um modo geral, em comparação com os indivíduos com o alelo ε3, níveis de colesterol total e LDL-C tendem a ser menor para aqueles com o alelo ε2 e maior para as transportadoras e4 [6]. Nas últimas duas décadas, estudos transversais e prospectivos têm relatado que os níveis de colesterol baixo de soro estão associados com maior risco não cardiovascular, especialmente o risco de câncer [7-10], assim, indivíduos com níveis de colesterol total séricos baixos são mais propensos a sofrem de câncer. Até à data, a razão exata para tal constatação ainda permanece obscuro. explicações diferentes pode ser dada como: (i) esta associação pode, teoricamente, reflectir um papel causal directa do colesterol na etiologia do cancro, ou seja, devido (ii) a alguns factores de confusão que causam de baixo colesterol e cancro, ou (iii) a ' causalidade reversa ", como baixos níveis de colesterol pode ser simplesmente o efeito de câncer e não a causa [11].
Para responder plenamente a questão de saber se existe uma relação causal entre baixo nível de colesterol e câncer, uma abordagem epidemiológica alternativa chamado" mendeliana randomização "pode ​​ser utilizado para ultrapassar o problema de causalidade reversa e confusão. De acordo com esta abordagem, uma variação genética (por exemplo, apoE
) que serve como um proxy robusto para uma exposição ambiental modificável (por exemplo, nível de colesterol no soro) pode ser utilizado, a fim de fazer inferências causais sobre uma doença [12]. Benn et ai. [13] demonstraram recentemente que a baixa LDL-C foram robustamente associada com o câncer em um grande estudo de coorte dinamarquês, enquanto uma redução no LDL causada por SNPs, incluindo apo E
, não era. Ao adotar a abordagem mendeliana Randomization, Benn concluíram que seus resultados estão de acordo com aqueles surgiu a partir de uma coorte de indivíduos idosos tratados com pravastatina [14] e do Atherosclerosis Risk in Communities estudo de coorte [15], todos sugerindo baixa LDL são provavelmente devido para a fase pré-clínica e câncer de per se
não causam câncer.
o papel da apoE
genótipos sobre câncer gástrico (GC) etiologia não foi exlpored até agora, como Benn et al. [13] considerado todo o cancro gastrointestinal, sem foco específico em GC. Até à data, quatro estudos de coorte [10, 16-18] explorou a relação entre o nível de colesterol no soro e o desenvolvimento de GC. Entre eles, dois estudos japoneses de coorte [10, 18] e um estudo sueco [16] relatou que os níveis de colesterol séricos baixos são fatores de risco independentes para o desenvolvimento de câncer gástrico, especialmente o histotipo intestinal. Nenhuma associação, no entanto, foi relatado em um estudo de coorte finlandesa grande [17]. Uma vez que a questão de saber se hypocholesterolemia é um fator predisponente para GC ou um estágio pré-clínico da GC não foi totalmente resolvido, o nosso estudo de caso-controle de base hospitalar visa superar este problema, olhando diretamente para a relação entre a apoE
genótipos e GC, bem como a sua interacção com potenciais modificadores de efeito.

resultados características gerais da população do estudo, incluindo 156 casos de GC e 444 controles são apresentados na Tabela 1. o consumo de álcool foi associado com um risco aumentado GC com RUP de 1,84 (IC 95% = 1,10-3,07) e 3,29 (IC 95% = 1,36-7,98) para os bebedores moderados e pesados, respectivamente. Um risco GC quase dobrou (OR = 1,95, 95% CI: 1,06-3,60) foi detectada entre indivíduos fumadores mais de 25 anos-maço. Além disso, a história familiar do cancro gástrico resultou para ser associada a um aumento do risco de GC (OR IC = 3,14, 95%: 1,17-8,44; Tabela 1). A Tabela 2 mostra a distribuição das seis apo
genótipos E entre os casos e controles GC, com o genótipo ε3 /ε2 sendo menos freqüentemente representado em casos (9,87%) do que nos controles (15,67%). A Tabela 1 odds ratio (95 CI%) para câncer gástrico de acordo com variáveis ​​selecionadas e sua distribuição de frequência entre 156 casos de câncer gástrico e 444 controles

cases

Controls
OR (IC 95%) †

n (%)
n (%)
Idade (média ± SD)
67,05 ± 11,33
59,04 ± 16,00
O sexo masculino
82 (53,2)
261 (58,8)
0,50 (0,30-0,83)
bebedores de álcool
0-6 g /dia
60 (40,5)
251 (57,6)
1 *
7-29 g /dia
71 (48,0)
163 (37,4)
1,84 (1.10- 3.07) Art > = 30 g /dia
17 (11,5)
22 (5.0)
3,29 (1.36- 7.98)
Tabagismo
Nunca
78 (50,7)
238 (54,2)
1 *
Já 76 (49,3)
201 (45,8)
1,51 (0.94- 2.45)
anos-maço de tabagismo
0
74 (51,7)
245 (57,0)
1 *
1-25
31 (21,7)
111 (25,8)
1,40 (0.78- 2.50) Art > 25
38 (26,6)
74 (17,2)
1,95 (1.06- 3,60)
O consumo de frutas e vegetais
alta ‡
41 (27,5)
116 (27,2)
1 *
Baixa
108 (72,5)
310 (72,8)
1,18 (0.70- 1,98)
carne grelhada
Baixa ^
106 (75,7)
314 (81,1 )
1 *
alta
34 (24,3)
73 (18,9)
1,25 (0.72- 2.15)
atividade física
Qualquer
29 (18,6)
93 (20,9)
1 *
Nenhum
127 (81,4)
351 (79,1)
0,81 (0.45- 1.45)
A história familiar de câncer de
Não
87 (62,2)
291 (71,2)
1 *
A história familiar de câncer gástrico
10 (7,1)
14 (3.4)
3,14 (1.17- 8.44)
A história familiar de outro câncer
43 (30,7)
104 (25,4)
1,09 (0.66- 1.81)
ApoE freqüência do alelo
ε3
130 (85,5)
322 (80,1)
ε2
8 (5.3)
39 (9,7)
ε4
14 (9,2)
41 (10,2)
† OR ajustado por idade, sexo , consumo de álcool (como variável contínua), packyears do tabagismo, o consumo de carne grelhada e história familiares de câncer.
* categoria de referência.
‡ pelo menos três porções de frutas e legumes por dia.
^ inferior a quatro vezes /mês.
Tabela 2 Distribuição da ApoE polimorfismo entre os casos de câncer gástrico e controles
cases ‡
Controls ^
Todos os casos
intestinal (n = 79)
difusa (n = 57)
n (%)
n (%)
OR (95% CI) †
OR (IC 95%) †
OR (IC 95%) †
ε3 /ε3
109 (71,71)
253 (62,94)
1 *
1 *
1 *
ε3 /ε2
15 (9,87)
63 (15,67)
0,43 (0,21 -0,91)
0,34 (0,13 - 0,92)
0,57 (0,23 - 1,40)
ε3 /ε4
27 (17,76)
75 (18.66)
0,70 (0,37 - 1,30)
0,75 (0,35 - 1,60)
0,64 (0,27-1,47)
ε2 /ε2
0 (0.00)
5 (1,24)
NC
NC
NC
ε2 /ε4
1 (0,66)
5 (1,24)
1,25 (0,10-15,10)
2,54 (0,21-31,17)
NC
ε4 /ε4
0 (0.00)
1 (0,25)
NC
NC
NC
ε3 /ε2 ou 15 (12.10) ε2 /ε2
68 (21,18)
0,40 (0,19-0,84)
0,31 (,11-,83)
0,53 (0,21-1,30)
ε3 /ε4 ou ε4 /ε4
27 (19,85)
76 (23,10)
0,68 (0,36-1,26)
0,71 (0,34-1,53)
0,62 (0,27-1,43).
‡ a apolipoproteína genótipo foi medida em 152 casos
^ apolipoproteína genótipo foi medida em 402 controles
† OR ajustadas por idade,. .. gênero, consumo de álcool (como variável contínua), packyears do tabagismo, o consumo de carne grelhada e história familiar de câncer gástrico
* categoria de referência
NC: não calculável devido a alguns muitos valores
Frequência de apoE.
genótipos respeitado o equilíbrio de Hardy-Weinberg (HWE) no grupo controle (p
-valor > 0,05, dados não apresentados). A partir da análise multivariada, os indivíduos com pelo menos um apoE
alelo ε2 teve uma significativa de 60% menor risco de GC (OR = 0,40, 95% CI: 0,19-0,84) quando comparados com aqueles homozigotos para o tipo selvagem (ε3 /ε3) (Tabela 2). Quando os resultados foram estratificados de acordo com a histologia do tumor, a associação significativa entre apoE
portadores do alelo ε2 e cancro gástrico pareceu ser limitada ao tipo intestinal, com um OR de 0,31 (95% CI: 0,11-0,83; Tabela 2). controles de qualidade mostraram 100% de concordância entre Restriction Fragment Length Polymorphism método (RFLP) e sequenciamento de DNA.
Os resultados da análise interação gene-ambiente são apresentados na Tabela 3. interacção Não estatisticamente significativa emergiu entre a ε4 ou alelo ε2 (p-
valor para a interação > 0,05), sexo, idade, consumo de álcool ou de frutas e legumes intake.Table 3 interações entre os genótipos apoE e selecionadas as variáveis ​​demográficas e estilo de vida sobre o risco GC
variáveis ​​

Cases
Controles
Quaisquer e2
Cases
Controles
Qualquer e4

OR (IC 95%) †
OR (IC 95%) †
Sexo
Feminino, e3 /e3
51 ( 34.69)
96 (65,31)
1 *
51 (34.69)
96 (65,31)
1 *
Feminino, variante
8 (27.59)
21 (72,41)
0,58 (0,20-1,65)
12 (24,00)
38 (76.00)
0,55 (0,23-1,32)
Masculino, e3 /e3
57 (26.64)
157 (73,36)
0,48 (,27-0,88)
57 (26.64)
157 (73,36)
0,49 (0,27-0,89)
Masculino, variante
7 (12.96)
47 (8704)
0,49 (0,11-2,18)
14 (26.92)
38 (73,08)
1,52 (0,44-5,27)
valor P para interação °
0,347
0,660
Age Art < 60 anos, e3 /e3
25 (17,73)
116 (82,27)
1 *
25 (17,73)
116 (82,27)
1 * Art < 60 anos, variante página 4 (12,50)
28 (87,50)
0,35 (0,07-1,68 )
7 (21.21)
26 (78,79)
0,70 (0,18-2,66)
≥60 anos, e3 /e3
84 (38.01)
137 (61,99 )
2,85 (1,53-5,28)
84 (38.01)
137 (61,99)
2,84 (1,54-5,26)
≥60 anos, variante
11 (21,57)
40 (78,43)
1,24 (0,21-7,26)
20 (28,57)
50 (71,43)
0,97 (0,21-4,36)
valor P para interação
0,807
0,964
álcool potável
Nunca, e3 /e3
45 (24,06)
142 (75,94)
1 *
45 (24,06)
142 (75,94)
1 *
Nunca, variante
5 (12.50)
35 (87,50)
0,29 (0,08-1,04)
12 (18,18)
54 ( 81,82)
0,62 (0,28-1,37)
Ever, e3 /e3
64 (36,57)
111 (63,43)
1,59 (0,88-2,86)
64 ( 36,57)
111 (63,43)
1,46 (0,81-2,62)
Ever, variante
10 (23.26)
33 (76,74)
1,78 (0,37-8,50)
15 (40,54)
22 (59,46)
1,28 (0,35-4,66)
valor P para interação
0,468
0,707
Tabagismo
Nunca, e3 /e3
54 (29,03)
132 (70,97)
1 *
54 (29,03)
132 (70,97)
1 *
Nunca, variante
8 (20,51)
31 (79,49)
0,48 (0,18-1,28)
13 (20.00)
52 (80,00)
0,53 (0,23-1,23)
Ever, e3 /e3
54 (31,40)
118 (68,60)
1,41 (0,80-2,50)
54 (31,40)
118 (68,60)
1,39 (0,79-2,45 )
Ever, variante
7 (16.28)
36 (83,72)
0,68 (0,15-2,98)
13 (36.11)
23 (63,89)
1,98 (0,59 - 6,73) valor P Compra de interação
0,609
0,271
O consumo de frutas e vegetais
Baixo, e3 /e3
28 (29.47)
67 (70,53)
1 *
28 (29.47)
67 (70,53)
1 *
Baixo, variante Página 2 (9,09)
20 (90,91)
0,14 (0,02 - 0,87)
9 (32,14)
19 (67,86)
0,84 (0,28-2,49)
alta, e3 /e3
78 (31.08)
173 (68,92)
1,17 (0,61-2,23)
78 (31.08)
173 (68,92)
1,12 (0,59-2,13) ​​
alta, variante
11 (19.30)
46 (80,70)
2,83 (0,38-21,05)
16 (22,86)
54 (77,14)
0,62 (0,16-2,37)
valor P para interação
0,309
0,487
† OR ajustado por idade, sexo, consumo de álcool (como variável contínua), packyears do tabagismo, o consumo de carne grelhada e história familiares de câncer gástrico.
* categoria de referência.
° pelo teste da razão de verossimilhança.
tempo de sobrevida média de gastrectomia foi de 19 meses sem diferenças estatísticas significativas para apoE
portadores ε2 ou ε4 alelos (p-valor
de log-rank test > 0,05), mesmo quando a análise foi restrita a 1 ano e 2 anos após a intervenção cirúrgica (dados não mostrados). A análise de regressão de Cox mostrou nenhuma diferença significativa de acordo com apoE
após ajuste para idade, sexo e estádio, mesmo após a estratificação por histotipo câncer.
Discussão
Nosso estudo de 156 casos de câncer gástrico e 444 hospital de caso-controle controles baseados avaliou pela primeira vez o efeito da apoE
genótipos e suas interações com fatores demográficos e de estilo de vida selecionados no risco de câncer gástrico entre uma população italiana. De acordo com os nossos resultados, a apoE
alelo ε2 está associado com uma 60% estatisticamente significativa diminuição do risco de GC, quando comparado com o tipo selvagem ε3 alelo. Este efeito protector foi particularmente forte para o histotipo intestinal. Não nos foi possível, no entanto, para detectar interações significativas entre apoE
alelos e fatores de estilo de vida. Além disso, apoE
genótipos não parecem influenciar o tempo de sobrevivência após a intervenção cirúrgica, mesmo quando a análise foi restrita aos histotipos tumorais específicas.
Antes de interpretar nossos resultados, algumas limitações do estudo devem ser levadas em conta. Em primeiro lugar, na base da prevalência da apoE
alelos na nossa população de controlo, este estudo tem a priori
90% de potência para detectar um OR de 0,40 para o efeito do alelo apoE
ε2 (em nível de significância de 5%). tamanho da amostra do estudo limita a possibilidade de detectar as interações estatisticamente significativas gene-ambiente, no entanto, é preciso aumentar o tamanho da amostra, a fim de confirmar nossos resultados. Em segundo lugar, os dados sobre os níveis de colesterol no soro não se encontram disponíveis na nossa população do estudo, embora a sua utilidade será limitada, tendo em conta o facto de tais níveis são afectadas pelo cancro em si.
O efeito de apoE
genótipos já tenha sido anteriormente investigado em relação a mama, colorretal, trato biliar, próstata, câncer de cabeça e pescoço, e doenças malignas hematológicas [19-24], com resultados conflitantes. Um estudo randomização mendeliana publicado recentemente abordou a questão não resolvida sobre o papel causal de colesterol no etiologia do câncer, examinando se alguns SNPs incluindo apoE
, todos ligados a ao longo da vida plasma reduziu o LDL-C, são causalmente relacionada com um risco aumentado de câncer entre dois grandes estudos dinamarqueses população em geral [13]. Os resultados mostram uma relação inversa entre a incidência de câncer ou os níveis de mortalidade e de colesterol, enquanto nenhum efeito foi demonstrado para a apoE
alelos. Mesmo com algumas limitações sobre a coorte selecionados, os autores concluem que há uma substancial falta de efeito causal do colesterol no risco de câncer incluindo câncer gastrointestinal. Por conseguinte, a aparente contradição entre os resultados relativos níveis de colesterol no plasma e o risco de cancro em relação a apo E
, pode ser indicativo de uma fase pré-clínica do cancro envolvendo o aumento da absorção de colesterol a partir do sangue para o crescimento e proliferação celular, reduzindo assim colesterolemia antes do diagnóstico de câncer clínico.
Como para o câncer de estômago, dois estudos de coorte japoneses [10, 18] e um estudo de coorte sueco [16] relataram uma forte associação inversa entre os níveis séricos de colesterol e risco de câncer gástrico. estudos japoneses, no entanto, encontrou a associação muito menos forte após a exclusão dos casos incidentes de 3 anos iniciais e casos avançados, sugerindo o desenvolvimento de câncer de estômago em si tende a diminuir os níveis de colesterol total. Para superar os problemas relacionados para reverter a causalidade ou a confusão por fatores de estilo de vida, decidimos esclarecer o papel dos níveis de colesterol no risco GC usando uma abordagem de randomização mendeliana, designadamente estudar diretamente o efeito da apoE
genótipos em uma grande série dos casos GC italianos e controles. Nossos resultados mostram um aumento estatisticamente significativo de 60% menor risco de GC associado ao alelo ε2.
Desde portadores ε2 ter um colesterolemia soro mais baixos do que os transportadores não ε2, a nossa descoberta contradiz o relatado anteriormente observação de que os níveis de colesterol séricos baixos aumentam o risco GC [10, 16, 18]. ApoE, no entanto, tem muitas outras funções Para além da sua função bem conhecida no metabolismo dos lípidos, que estão potencialmente envolvidos no risco de cancro, uma vez que está envolvida na reparação de tecidos, da resposta inflamatória e imune, crescimento celular e angiogénese [2], e mostra antioxidante propriedades [25]. De importância, a proteína ApoE tem certas propriedades antioxidantes, com a diminuição da actividade anti-oxidante no ε2 >fim; ε3 > alelos e4 [25]. Mesmo que os mecanismos moleculares responsáveis ​​pelas propriedades antioxidantes da apoE
ainda não está esclarecida, uma série de estudos examinaram os mecanismos através dos quais apoE
genótipos podem afetar os mediadores dependentes do estado oxidativo ou biomarcadores de estresse oxidativo [26 -28]. ApoE
indivíduos ε2-carrier fumadores, que estão expostos à nicotina, uma importante fonte de estresse oxidativo, têm uma capacidade antioxidante total quase 30% maior em comparação com apoE
ε3-portadores, medidas como a capacidade para inibir a peroxidase formação mediada das 2,2-azino-bis-3-ethylbensthiazoline-6-sulfónico (ABTS +) radical, enquanto apoE
sujeitos e4 mostram um aumento de 30% oxidada de LDL [26]. o stress oxidativo é
dada por um desequilíbrio entre o aumento da produção de espécies reactivas de oxigénio e uma redução significativa na capacidade de funções anti-oxidantes. A produção de peróxidos e radicais livres associada com alterações no estado redox normal dos tecidos pode induzir efeitos tóxicos incluindo lesões oxidativas do ADN que, juntamente com hipoxia e acidose, pode ser significativamente envolvida na patogénese de GC, uma vez que pode ser considerada a causa como bem como a consequência da progressão do tumor [29, 30]. Algumas evidências mostram uma ampla magnitude do estresse oxidativo em casos de GC se comparado com indivíduos saudáveis, como demonstrado por níveis elevados de produtos de peroxidação lipídica e esgotamento de antioxidantes enzimáticos e não enzimáticos [31, 32]. Tendo em conta todos estes resultados, os resultados do nosso estudo, que relata um efeito protetor da apoE
alelo ε2 em GC, pode ser explicado pelas melhores propriedades antioxidantes do alelo ε2 em comparação com os ε3 ou e4 alelos, e este prova pode ser especialmente verdadeiro para GC, cuja patogênese é fortemente afetada pelo estresse oxidativo relacionado ao tabagismo [33]. Se o nosso modelo é válido, seria de esperar uma interacção entre apoE
estatuto alelo ε2 e tabagismo, no entanto o poder limitado da nossa análise da interação pode ter obscurecido ele.
Conclusões
Em conclusão, nosso estudo prevê a tempo primeira evidência de um efeito protector possível do alelo ε2 contra o GC. Mais estudos são necessários para confirmar nossos resultados e descobrir se o efeito protetor é mediado através de nível de colesterol reduzido ou melhores propriedades antioxidantes.
Métodos
População do estudo
foram selecionados Os sujeitos do estudo de acordo com um estudo caso-controle estudar design como descrito anteriormente [34-36]. Resumidamente, os casos eram pacientes de adenocarcinoma gástrico primários consecutivos, com confirmação histológica, que foi submetido a uma gastrectomia curativa no hospital de ensino "A. Gemelli", durante o período de 2002-2010. Os controlos foram seleccionados a partir de pacientes isentos de cancro, tendo uma ampla gama de diagnósticos, admitido no mesmo hospital durante o período de tempo idêntico. Online em detalhes mais estreitos, de cerca de 50% da nossa população de controlo é feito de dadores de sangue, enquanto a outra metade é feito de pacientes submetidos a intervenções cirúrgicas como colecistectomia laparoscópica ou apendicite ou hérnia inguinal e uma porção menor de pacientes afetados por doenças crônicas como hipertensão ou doença pulmonar obstrutiva crônica (DPOC) submetidos periódica de check-up.
Todos os indivíduos foram caucasianos nascido em Itália. O tamanho amostra foi composta por 156 casos e 444 controles, com uma taxa de participação de 98% entre os casos e 93% entre os controles. De acordo com a classificação de Lauren, a maioria (58,1%) dos casos de câncer gástrico foram intestinal [37]. Os tumores foram localizados no antro (44,5%), no corpus (14,8%), no antro /Corpus (21,1%), na cárdia (3,1%), tocos (5,5%), na fundum (1,6% ), na cárdia /Corpus (6,3%) e todo o estômago (3,1%). Com base nos atypisms citológicas e de arquitectura, bem como os relatórios histopatológicos [38], os tumores dos pacientes foram classificados em conformidade: 70,0% mal diferenciados (G3), 27,6% moderadamente diferenciado (G2), 3,4% bem diferenciado (G1 ), enquanto 51,7% foram encenadas I-II e 48,3% encenado III-IV.
consentimento informado escrito foi obtido de todos os sujeitos do estudo, após o que cada sujeito forneceram uma amostra de sangue venoso, que foi recolhido em tubos revestidos com EDTA. Este estudo foi realizado de acordo com a Declaração de Helsinki e foi aprovado pelo comitê de ética da Universidade Católica do Sagrado Coração.
Genotipagem
DNA foi extraído de linfócitos do sangue periférico, e genotipagem de apoE
foi realizada usando Restriction Fragment Length Polymorphism (RFLP). Resumidamente, 20 ng de ADN genómico amplificado utilizando iniciadores de oligonucleótidos 5'-TCC AAG CTG GAG CAG GCG GCG CA-3 'e 5'-GCC CCG GCC TGG TAC ACT GCC A-3'. As reacções foram desnaturados durante 3 minutos a 95 ° C, seguido por 35 ciclos de duas etapas consistindo em 10 segundos a 95 ° C, em seguida 10 segundos a 66 ° C. Após os ciclos foram completados uma extensão final de 5 minutos a 95 ° C, foi realizada. Uma alíquota de 10 uL de cada produto de RFLP foi digerido com 5 L de Afl III
e uma alíquota de 10 ul separada foi digerido com 5 L de Hae II
. Ambos apoE
ε2 e apoE
alelos ε3 foram cortados com Afl
III para produzir produtos de 50 e 168 pb, enquanto o apoE
alelo ε4 permanece sem cortes em 218 pb. Usando Hae
II, ambos apoE
ε3and apoE e4 alelos produzir produtos de 23 e 195 pb, enquanto o apoE
alelo ε2 permanece sem cortes em 218 pb. Os seis genótipos possíveis foram atribuídos por análise dos padrões produzidos pela digestão de restrição. Tal como para os controlos de qualidade, 5% das amostras também foram sequenciados, com amostras de DNA padrão para cada genótipo apoE
enviado por Seripa et ai. [39].
Coleta de Dados
Casos e controles foram entrevistados por médicos treinados através de um questionário estruturado para coletar informações sobre dados demográficos, tabagismo, histórico de beber, hábitos alimentares, atividade física e história familiar de cancro com uma foco especial no câncer gástrico. Os participantes foram convidados a concentrar-se sobre o ano anterior ao diagnóstico (para controles do ano anterior à data da entrevista) ao responder a perguntas sobre hábitos de vida. tabagismo foi categorizada como nunca e sempre-fumantes (incluindo tanto os fumantes atuais e antigos). Maços-anos foram calculados como anos fumavam multiplicado pelo número atual (ou o número anterior, para aqueles que tinham parado) de cigarros fumados por dia, dividido por 20.
O consumo de frutas e hortaliças foi classificado como alta se pelo menos três porções de frutas e legumes foram consumidos diariamente, enquanto a ingestão de carne grelhada foi definida como baixa se o consumo foi inferior a 4 vezes /mês. história familiar de câncer referido pais, irmãos e filhos. Os dados relativos à infecção prévia Helicobacter pylori
estavam disponíveis apenas para os casos de câncer gástrico. A taxa de resposta para a conclusão da entrevista foi de 92% para os casos e 97% dos controles, com exceção dos dados relativos à ingestão de carne grelhada (desconhecida em 10% dos casos e 12,8% dos controles) ea história familiar de câncer (desconhecido na 10% dos casos e 8% dos controles).
análise estatística
A relação entre câncer gástrico e fatores de risco putativos foram medidos pelas razões ajustadas de chances (OR) e seu intervalo de confiança de 95% (CI) derivados de logística A análise de regressão utilizando o software STATA (versão 10.0). Possíveis fatores de risco foram consideradas variáveis ​​de confusão se a adição de que a variável do modelo alterado o ou de 10% ou mais, e uma vez que um confundidor de qualquer efeito principal estimado foi identificado, foi mantida em todos os modelos. Com base nestes critérios, controlados por idade, sexo, consumo de álcool e carne grelhada, o consumo de cigarros (maços-anos) e história familiar de câncer gástrico. A χ 2-teste de Hardy-Weinberg (HWE) para os três apoE
alelos foi realizada entre os controles. De modo a examinar se o efeito dos polimorfismos seleccionados foi modificado por algumas exposições ambientais, uma análise de regressão logística foi realizada estratificada, para ajustar as variáveis ​​de confusão previamente identificados. Uma análise de interacção gene-ambiente foi realizada utilizando os portadores do homozigoto de tipo selvagem genótipo (ε3 /ε3 relacionados com a apoE
isoforma ε3) como o grupo de referência. Nesta análise, os genótipos foram classificados da seguinte forma: a presença de pelo menos um apoE
alelo ε2 ou a presença de pelo menos um apoE
alelo ε4 (o genótipo ε2 /ε4 não foi incluído em qualquer categoria), proporcionando a . outros dois apoE
isoformas (apo e
2 e apo e
4)
Nesta análise, a idade foi categorizada binomial (< 60 e ≥ 60 anos), tabagismo foi considerado como nunca /nunca fumaram cigarros e consumo de álcool como bebedores /não-bebedores (este último incluindo indivíduos cujo consumo de álcool era inferior a 7 g /dia). A fim de testar a interação entre duas variáveis ​​de exposição, foi utilizado o teste da razão de verossimilhança, com os homozigotos-genótipo selvagem (ε3 /ε3) e não expostos às variáveis ​​de interesse usado como grupo de referência.
Geral curvas de sobrevivência foram calculados pelo método de produto limite de Kaplan-Meier a partir da data do diagnóstico até à morte. Se um paciente não estava morto, a sobrevivência foi censurado na época da última visita. O teste de log rank foi utilizado para avaliar diferenças entre os subgrupos. O risco de morte relacionada com isoformas da ApoE foi estimada pelo modelo de riscos proporcionais de Cox. taxas de risco (HR) foram ajustados para idade, sexo e estádio, com o genótipo tipo selvagem (ε3 /ε3) como grupo de referência. Além disso, as análises foram estratificadas de acordo com histotipo câncer (intestinal /difuso)
fonte de apoio
Sem apoio financeiro a ser declarado
abreviações
OR:..
Odds ratio

• consistência imunohistoquímica entre tumores primários e metástases em linfonodos de neuroendócrino gástrica carcinoma
• Alterações de E-caderina e β-catenina em câncer gástrico