Síntese, identificação e estudos in vivo de doxorrubicina péptido do agente de metas de tumor (PDOX) para tratar carcinomatose peritoneal do câncer gástrico com eficácia semelhante, mas reduzida toxicidade

Síntese, identificação e estudos in vivo de doxorrubicina péptido do agente de metas de tumor (PDOX) para tratar carcinomatose peritoneal do câncer gástrico com eficácia semelhante, mas toxicidade reduzida da arte abstracta
Fundo
Este trabalho teve como objetivo sintetizar uma catepsina B ( CTSB) doxorrubicina peptídeo pró-fármaco (PDOX-alvo tumorais) e estudar a eficácia in vivo e toxicidades em um modelo animal de carcinomatose peritoneal gástrica (PC).
Métodos cliváveis ​​
PDOX foi sintetizado utilizando doxorrubicina (DOX) Relativos às um dipéptido CTSB clivável Ac-Phe-Lys e um para-amino-benziloxicarbonilo (PABC) espaçador. modelo de PC foi estabelecida através da injecção de células de tumor VX2 na sub-mucosa gástrica de 40 coelhos, que, em seguida, foram divididos aleatoriamente em 4 grupos: Controlo (n = 10), sem tratamento, o QIPHTO (n = 10) que recebem a cirurgia citorredutora (CRS) mais quimioterapia intraperitoneal hipertérmica (QIPHTO), o PDOX (n = 10) e a DOX (n = 10) que recebem quimioterapia sistémica com PDOX 50,0 mg /kg de DOX ou de 5,0 mg /kg, respectivamente, após a CRS + HIPEC.
Resultado
a mediana sobrevivência global (oS) foram 23,0 d (95% CI: 19,9 d - 26,1 d) no controle, 41,0 d (36,9 d - 45,1 d) na HIPEC, 65,0 d (44,1 d - 71,9 d) na PDOX e 58,0 d (39,6 d - 54,4 d) no DOX. Comparado com o controle, o sistema operacional foi ampliada em 70% no HIPEC (p Art < 0,001) e mais ampliada em 40% no DOX (p
= 0,029) e em 58% na PDOX (p =
0,021), e a gravidade da PC foi diminuída na QIPHTO e ainda mais reduzida na PDOX e DOX. Os animais que receberam tratamento de DOX mostrou toxicidade hematológica com acentuada redução dos glóbulos brancos e plaquetas, assim como toxicidades cardíacas com aumentos significativos na creatina isoenzima MB quinase, miocárdio coagulação necrose evidente, degeneração nuclear significativa, peri-núcleo eliminação mitocôndrias, mitocôndrias-picnose, e discos intercalados anormais. Mas essas toxicidades não eram evidentes no PDOX.
Conclusões
PDOX é um pró-fármaco de metas de tumor recentemente sintetizado de DOX. Em comparação com DOX, PDOX tem eficácia semelhante, mas hematológica reduzida e toxicidades cardíacas no tratamento de modelo de coelho de PC gástrico.
Palavras-chave
carcinomatose peritoneal cirurgia gástrica câncer Peptide doxorrubicina Cytoreductive Hyperthermic quimioterapia intraperitoneal fundo
GC é um dos mais malignidades comuns nos países em desenvolvimento, onde ocupa o segundo lugar em termos de taxa de incidência eo terceiro em termos de taxa de mortalidade entre a população masculina, e ocupa o quarto lugar em termos de taxa de incidência e taxa de mortalidade entre a população feminina, de acordo com o mais recente mundial estatísticas [1, 2]. GC também é a terceira principal causa de mortalidade por câncer na China [3], onde mais de 70% do GC já se tornou clinicamente avançado no momento da exploração cirúrgica, assim, a ressecção cirúrgica si só já não é curativa [4].
PC em GC tem sido considerada como uma entidade clínica fatal. É definida como a implantação de células tumorais por toda a cavidade peritoneal, e caracterizada pela presença de nódulos de tumores de vários tamanhos, o número e distribuição sobre a superfície peritoneal, bem como ascite maligna, frequentemente resultando em morbidade locorregional sem metástases sistémicas mais amplas. Pacientes com PC gástrica enfrentar um resultado sombrio, com uma sobrevida média de cerca de 6 meses [5].
Não há tratamento padrão para PC gástrico. Os tratamentos atuais para tais PC são a quimioterapia sistêmica, melhores cuidados de suporte e terapia paliativa. A fim de resolver este problema, uma nova modalidade de tratamento chamada CRS mais HIPEC tem sido desenvolvido ao longo dos últimos 3 décadas, tendo vantagens da cirurgia para reduzir a carga tumoral visível, e quimioterapia hyperthermic regional para erradicar a micrometástases [6]. Evidências crescentes sugerem que a combinação de CRS e HIPEC poderia trazer benefício de sobrevivência para pacientes selecionados com PC gástrico. Em nosso estudo experimental anterior [5], nós também provaram que CRS + HIPEC poderia realmente trazer benefício de sobrevivência com segurança aceitável, fornecendo provas para apoiar esta estratégia combinada para o tratamento de pacientes selecionados com PC gástrico.
Durante o desenvolvimento do PC, GC células secretam enzimas para facilitar a células cancerosas sementeira e colonização no peritoneu. CTSB é uma das enzimas chave neste processo crítico, sobre-expresso em GC, bem como outros tipos de cancro [7-9] e activamente envolvidas na invasão do cancro [10-12]. Por outro lado, é extremamente baixo expressa em células normais e inactivo ou perde actividade, logo que se encontra disperso no meio aquoso para longe das células [13]. Assim CTSB tem sido considerada como um alvo candidato na terapia do cancro [14].
Foi estabelecido no teste mágicas que o regime contido-antraciclina é uma quimioterapia útil para GC [15]. DOX é um típico representante das antraciclinas. Embora DOX é uma droga importante na quimioterapia, as suas toxicidades são evidentes, tais como toxicidades cardíacas e supressão da medula óssea. Para manter o efeito terapêutico, reduzindo os efeitos secundários, Dubowchik et ai [16-18] concebido um pró-fármaco inteligente de DOX, PDOX (Figura 1). Neste DOX modificado, Ac-Phe-Lys é um dipéptido específico para CTSB, e PABC (para-aminobenziloxicarbonilo) é um espaçador auto-imolativa [16]. A pró-droga é inactiva quando há pouca actividade CTSB, tais como tecidos normais e de sangue periférico, evitando assim os efeitos colaterais sobre o tecido normal. Durante a invasão do cancro, CTSB activado é sobre-expressa na membrana exterior das células cancerosas invasoras [19, 20], o que cliva o dipéptido Ac-Phe-Lys na ligação Lis-PABC [16]. Em seguida, o espaçador pode PABC exposta auto-hidrolisar mediante desacilação [21] e moléculas de DOX livres são libertados, o que resulta em morte directa das células cancerosas invasoras [16]. Figura 1 estrutura PDOX (mostrado na caixa), a síntese química e mecanismo de ação. PDOX foi sintetizado com sucesso de acordo com o processo químico de 7 passos. A sua estrutura química é Ac-Phe-Lys-PABC-Dox-HCl (mostrado na caixa), e a fórmula molecular é C52H60ClN5O16. PDOX contém um dipéptido CTSB clivável Ac-Phe-Lys (barras vermelhas duplas) PABC um espaçador (corte vermelho) e drogas anti-cancro da DOX. Quando PDOX atinge a área CTSB-enriquecida tal como a frente de invasão do cancro, o dipéptido Ac-Phe-Lys é clivada por CTSB na ligação Lis-PABC, expondo o espaçador PABC que é então hidrolisado espontaneamente (corte vermelho), libertando livre DOX na frente de invasão câncer. Assim PDOX poderia exercer citotoxicidade para invadir as células cancerosas ao mesmo tempo proteger as células normais da exposição excessivo de drogas, uma estratégia chamada de terapia-alvo passivo. CTSB:. Catepsina B.
Neste estudo, sintetizamos o PDOX e avaliaram a eficácia e segurança do CRS + HIPEC com alvo molecular PDOX regime terapêutico para o tratamento alvo de modelo de coelho de PC gástrica
Resultados
Síntese e identificação de PDOX
PDOX foi sintetizado com sucesso de acordo com o processo relatado anteriormente 7-passo químico (Figura 1) [16-18].
PDOX (Ac-Phe-Lys-PABC-Dox-HCl) era um pó sólido de cor vermelha com o peso molecular de 1046,51 (MS: m /z calculada para C 52H 60ClN 5O 16: 1046,52, encontrado: 1046,50), pureza química de 99,1% (por HPLC) , a estrutura de C 52H 60ClN 5O 16 (por ambos H 1-RMN e C 13-RMN) (Figura 2) e ponto de 180 ° de fusão C (decomposição), que é estável à temperatura de -5 ° C a 0 ° C, durante 36-54 meses, temperatura ambiente, durante 24 meses, solúvel em água, parcialmente solúvel em metanol e etanol. PDOX utilizada neste estudo foi armazenado na área escura, seco a 4 ° C. Figura 2 identificações estrutura confirmada por H 1 -RMN (A) e 13 C-RMN (B). construção
PC modelo e características histopatológicas
modelo Coelho do PC gástrico foi estabelecida em todos os animais (100%, 40/40). No d 8 depois da inoculação do tumor de células, tumorais, nódulos duros e transparentes pequenas desenvolvidos no omento maior, e cancro ulcerativa típico cerca de 0,5-1,0 cm de diâmetro formada no antro do estômago. Não foi observada ascite. No PC óbvia foi encontrado em outras regiões. Não houve diferenças na gravidade PC entre todos os coelhos. Este poderia ser equivalente ao estágio clínico I PC por critérios Gilly [22] (Figura 3A).
Todas as amostras de tumores investigados apresentaram extensa invasiva crescimento e destruição tecidual. Os tumores, na curvatura maior do antro gástrico, penetrou na camada da mucosa para formar úlceras. O estudo histopatológico mostrou ninhos tumorais penetrantes toda a parede do estômago, com invasão típica para a camada muscular e as glândulas gástricas (Figura 3B). As células tumorais são redondos, ovais ou morfologia atípica, com muitas figuras de mitose patológicas. Havia também visível infiltração de linfócitos, células plasmáticas e outras células inflamatórias (Figura 3C). Apoptóticas e células tumorais necróticas foram observadas na região central dos nódulos de tumor (Figura 3D). PC típico apresentado como nódulos tumorais na superfície do omento (Figura 3E) e de metástases linfáticas, intraperitoneal também foram observados (Figura 3F).
Câncer ulcerativa típica com PC foi observada em post mortem exames patológicos de coelhos no controle. A parede do estômago foi totalmente invadida pelo tumor para criar úlcera câncer envolto por confluentes nódulos no omento maior, formando um bloco tumor grande. A parede abdominal e diafragma foram totalmente invadida pelo tumor. Muitos nódulos tumorais formados na parede do intestino, do mesentério e retroperitôneo. Sangrentos ascite pode ser mais de 100 mL. Todas as características são semelhantes às características clinicopatológicas de PC gástrico em pacientes (Figura 3G). Figura 3 As características do modelo de coelho de PC gástrico e as micrografias HE manchadas. (A) A imagem do modelo de coelho precoce de PC gástrica, onde nódulos tumorais conspícuos espalhadas no peritônio e da curvatura maior do estômago; (B) as fotos de GC ulcerativa; (C & D) corado com HE imagem ao microscópio mostra o crescimento invasivo de ninhos de células tumorais que se infiltram na parede gástrica (painel C, 400 ×) e células tumorais necróticas na área do fornecimento insuficiente de sangue (Painel D, 400 ×); (E) nódulos de tumor na superfície do omento (200 ×); (F) de metástases linfáticas, intraperitoneal (200 ×); (G) post mortem exames patológicos de um coelho.
Survival
animal foi observado para gravar OS. Dois coelhos sobreviventes (longas uma na outra e PDOX na DOX, vivendo mais de 100 d) foram submetidos a eutanásia no dia 100 de uma injecção por overdose de pentobarbital de sódio a 2%. A mediana (intervalo de confiança de 95%, CI) OS foi de 23,0 d (19,9-26,1 d) no controle, 41,0 d (36,9-45,1 d) na HIPEC, 65,0 d (44,1-71,9 d) na PDOX e 58,0 d (39,6-54,4 d) no DOX. Comparado com o controle, o sistema operacional foi ampliada de pelo menos 70% no HIPEC (p Art < 0,001, log-rank test). Comparado com o HIPEC, a OS foi ainda ampliada em 40% no DOX (p = 0,029
, teste logarítmico) e em 58% na PDOX (p = 0,021
, teste logarítmico) (Figura 4A ). Figura 4 efeitos in vivo de PDOX no modelo de PC coelho. (A) curvas de sobrevida de Kaplan-Meier para o controle, HIPEC, PDOX e DOX; (B) as modificações do peso do corpo para esses grupos. Carga tumoral
no ponto final sobrevivência
No final do estudo, a carga tumoral no controle era mais pesado, com o peso do tumor de (137,51 ± 16,09) g, portador de tumor rácio (o peso do tumor ao peso corporal) de (7,88 ± 0,85)%, ascite sangrentos de (65,50 ± 33,45) mL, e pontuação EPCI de (9,50 ± 2,17). Comparado com o controle, o HIPEC tinha reduzido significativamente o peso do tumor (76,50 ± 11,41) g (p = 0,007
) ea relação tumor-rolamento (3,94 ± 0,54)% (p = 0,001
), mas não pontuação EPCI (9,50 ± 2,17)% (p = 0,420
) e ascite sangrentos [(29,16 ± 15,30) ml, p = 0,085
]. Comparado com o HIPEC, PC gravidade foi ainda mais reduzida, tanto no PDOX eo DOX, com pontuação de EPCI (6,40 ± 2,07, p = 0,020
tanto PDOX e DOX vs. HIPEC) e ascite sangrentas (0,00 mL, p
< 0,001 em PDOX e DOX vs. HIPEC); enquanto não houve diferenças significativas no peso do tumor [(65,30 ± 14,55) g, p = 0,552
, PDOX vs. HIPEC; (48,74 ± 16,31) g, p = 0,180
, DOX vs QIPHTO)] e portador de tumor rácio [(2,91 ± 0,69)%, p = 0,552
, PDOX vs QIPHTO; (2,13 ± 0,78)%, p = 0,180
, DOX vs. HIPEC]. Não houve diferenças significativas na carga tumoral entre o PDOX eo DOX (Tabela 1) pontuação .table 1 O EPCI no endpoint de sobrevivência em 4 grupos de coelhos [range (mediana)]
Controle (n = 10)
HIPEC (n = 10)
PDOX (n = 10)
DOX (n = 10)
A pontuação EPCI em diferentes regiões
Região I
0 ~ 3 (3)
0 ~ 3 (2)
0 ~ 3 (0)
0 ~ 3 (0) e região II Sims 3 ~ 3 (3) Sims 3 ~ 3 (3) Sims 3 ~ 3 (3) Sims 3 ~ 3 (3)
Região III
1 ~ 3 (3)
0 ~ 3 (3)
0 ~ 3 (1)
0 ~ 3 (1)
Região IV
0 ~ 3 (3)
0 ~ 3 (1)
0 ~ 3 (0)
0 ~ 3 (0)
ascite (mL) *
12,0 ~ 113,4 (56,0)
0,0 ~ 94,0 (18,1)
0.0 ~ 0.0 (0.0)
0.0 ~ 0.0 (0.0)
O EPCI score§
7 ~ 13 (11)
5 ~ 12 (9) Sims 3 ~ 9 (6) Sims 3 ~ 9 (6)
* A ascite: p
= 0,323, HIPEC vs. Controle; p Art < 0.001, PDOX vs. HIPEC; p Art < . 0.001, DOX vs. HIPEC
pontuação § O EPCI: p
= 0,073, HIPEC vs. Controle; p = 0,020
, PDOX vs. HIPEC; p = 0,020
, DOX vs. HIPEC; p = 0,474
, PDOX vs. DOX.
alterações de peso corporal
O peso corporal de cada animal foi registrada a cada 4 d. Não foram encontradas diferenças significativas no peso corporal inicial de 4 grupos antes do tratamento. Perioperatório peso corporal diminuiu em todos os grupos por causa do jejum durante a noite. No controle, o peso corporal recuperou uma vez a ingestão de alimentos foi retomada, mas novamente diminuiu progressivamente até o final do estudo. Nos 3 grupos de tratamento, pós-operatório de peso corporal diminuiu consideravelmente após a construção do modelo e para o menor 4 d após CRS + HIPEC, e depois se hospedaram em um nível baixo durante a fase de pós-operatório até a quimioterapia tinha sido concluída. O peso corporal começou a aumentar em d 44 na QIPHTO e d 56, tanto no PDOX e a DOX, e aumentou gradualmente a um nível mais elevado, o qual estava relacionada com o crescimento do tumor dos coelhos portadores de tumor de vida e morte da falha coelhos com menor peso corporal. Depois disso, o peso corporal diminuiu progressivamente novamente até o final do estudo em ambos os PDOX eo DOX (Figura 4B).
Exames patológicos postmortem
Até o momento da morte do animal, informações detalhadas sobre exames patológicos postmortem foi listado na Tabela 2 .
Além de exames sistemáticos de todos os locais anatômicos para possíveis metástases do câncer, foi dada particular atenção às metástases hepáticas e pulmonares. Como mostrado na Figura 5, no Controlo, extensas metástases hepáticas foram observadas em 8 animais, mas sem metástases pulmonares foram evidentes em todos os animais, por causa dos comportamentos de crescimento muito agressivos do tumor levou a curto SO neste grupo de animais (figura 5 A2, B2). No HIPEC, como animais viveram muito mais tempo por causa de CRS + HIPEC, menos metástases hepáticas foram observadas em 4 animais, mas consideravelmente muito mais pulmonar metástases foram observadas em 7 animais (Figura 5 A3, B3). No PDOX e DOX, animais desenvolveram muito menos metástases em ambos os fígados e pulmões, embora o OS foi melhorado notavelmente, porque os animais receberam não só CRS + HIPEC para controlar metástases regionais locais, mas também a quimioterapia sistêmica para controlar metástases hematogênicas e metástases linfáticas (Figura 5 A4, B4, A5, B5) .table 2 resultados de post mortem estudo patológico em 4 grupos, expressa como% de coelhos
Controle (n = 10)
HIPEC (n = 10)
PDOX (n = 10)
DOX (n = 10)
p 1
p 2

p 3
p 4
ulcerativa GC
100,0
100,0
100,0
100,0
NS
NS
NS
NS
metástases incisão
100,0
30,0
30,0
20,0
0,001
NS
NS
NS
metástases pulmonares
0,0
70,0
30,0
30,0
0,001
NS
NS
NS
metástases da parede torácica
0,0
20,0
10,0
0,0
NS
NS
NS
NS
derrame pleural
10,0
70,0
30,0
30,0
0,008
NS
NS
NS nodos linfáticos
Virchow metástases
30,0
70,0
60,0
40,0
NS
NS
NS
NS
metástases Pericárdio
0.0
20,0
0,0
0,0
NS
NS
NS
NS
Cancerous diafragma
100,0
70,0
20,0
20,0
NS
0,028
0,028
NS
Maior bolo omento
100,0
80,0
40,0
50,0
NS
NS
NS
NS
metástases hepáticas
metástases 80,0
40,0
30,0
30,0
NS
NS
NS
NS
baço
0,0
0.0
20,0
0,0
NS
NS
NS
NS
metástases retroperitônio
100,0
60,0
60,0
50,0
0,029
NS
NS
NS
metástases renal esquerda
0,0
10,0
0,0
0,0
NS
NS
NS
NS
metástases renal direita
0,0
0,0
0,0
0,0
NS
NS
NS
NS
rim cápsula invasão
100,0
50,0
0,0
20,0
0,012
0,012
NS
NS
Intestino semeadura parede
100,0
80,0
20,0
10,0
NS
0,009
0,002
NS
Mesentery semeadura
100,0
80,0
30,0
10,0
NS
0,028
0,002
NS
abdominal câncer de parede
100,0
60,0
30,0
0,0
0,029
NS
0,004
NS
semeadura pélvica
100,0
50,0
30,0
10,0
ruptura 0,170
NS
NS
NS
bexiga
0,0
0,0
20,0
10,0
NS
NS
NS
NS
retenção urinária
50,0
50,0
30,0
10,0
NS
NS
NS
NS
por (χ
2) teste de 2 lados do qui-quadrado. p
1, HIPEC vs. Controle; p
2, PDOX vs. HIPEC; p Sims 3, DOX vs. HIPEC; . P página 4, PDOX vs. DOX
NS:. Nenhum significado
Comparado com o controle, PC severidade foi significativamente reduzida em metástases de incisão, metástases pulmonares, derrame pleural, metástases retroperitoneais, invasão cápsula renal, abdominais câncer de parede e semeadura pélvico no HIPEC. Comparado com o QIPHTO, a gravidade da PC foi significativamente reduzida no diafragma canceroso, a invasão da cápsula do rim, intestino sementeira sementeira parede e mesentério na PDOX, e no diafragma canceroso, a semeadura da parede do intestino, a semeadura mesentério e cancro da parede abdominal no DOX. Não houve diferenças estatísticas entre o PDOX e DOX em metástases sistêmicas.
Figura 5 metástases pulmonares (painel A) e metástases hepáticas (painel B) neste estudo. (A1) (B1) mostrou número exacto de metástases no pulmão e no fígado de coelho cada um dos 4 grupos, respectivamente; (A2 a A5) mostrou metástases pulmonares representativas do Controle, a HIPEC, o PDOX eo DOX, respectivamente; (B2 a B5) mostrou metástases hepáticas representativas do Controle, a HIPEC, o PDOX eo DOX, respectivamente; (A6) mostrou micrografias de metástases pulmonares no HIPEC, caracterizada pela invasão de câncer, a supressão do tecido pulmonar, formação de trombos tumor intravascular e evidente infiltração de células inflamatórias (A6-1, HE mancha, 200 ×) (A6-2, HE, 400 ×). (B6) mostrou micrografias de metástases hepáticas no controle, caracterizada por extensa destruição do tecido do fígado, invadindo as células cancerosas, infiltração de células inflamatórias, e hemorragia no tecido hepático (B6-1, HE, 100 x) (B6-2, HE , 200 ×). perfil de sangue periférico e as principais alterações bioquímicas
Não houve diferenças nas contagens de células do sangue periférico em d 2, d 6 e d 14 entre os 4 grupos, mas os glóbulos brancos e plaquetas foram significativamente diminuiu em d 36 após a quimioterapia sistêmica no DOX (p Art < 0,05). Não houve diferenças nas funções hepáticas e renais durante o experimento entre os 4 grupos. Em termos de parâmetros de funções cardíacas, não houve diferenças na creatina quinase e creatina quinase isoenzima MB de d 2, d 6 e d 14 entre os 4 grupos, mas creatina quinase mb isoenzima foi significativamente aumentada em d 36 após a quimioterapia sistêmica no DOX (p
< 0,05). De particular atenção, 2 animais no DOX com curto SO de 47 e d 53 d tinha excepcionalmente superior séricos de creatina cinase MB níveis de isoenzimas, 467,5 U /L e 656,4 U /L, respectivamente (p
< 0,05) (Tabela 3) .table 3 testes de rotina de sangue e resultados de testes bioquímicos em 4 grupos de coelhos [range (mediana)]
Grupo
D2
D6
D14

D36 *
n
Valor
p
n
Valor
p

n
Valor
p
n
células
Valor
p
vermelhas do sangue ( T /L)
Controle
10
5,03-6,93 (6,26)
0,849
10
5,08-7,76 (6,07)
0,494
10
4,29 -6,32 (5,54)
0,382
0
- 0,203
HIPEC
10
5,13-7,58 (6,48)
10
4,66-7,15 (5,65 )
10
3,54-7,30 (5,68)
7
4,28-7,36 (5,28)
PDOX
10
4,17-7,16 (5,94)
10
4,97-6,49 (5,61)
10
4,38-5,82 (5,05)
10
4,46-6,03 (5,47)
DOX
10
5,03-6,84 (6,09)
10
5,03-6,70 (5,88)
10
3,65-6,36 (5,08)
9
4,12-6,40 (4,94)
células brancas do sangue (g /l)
Controle
10
5,3-9,6 (8,6)
0,785
10
4,5-14,1 (9,9)
0,446
10
6,0-10,3 (7.8 )
0,601
0
- 0,013
HIPEC
10
4,4-12,3 (7,4)
10
4,5-12,7 (9.3)
10
3,2-12,1 (10,7)
7
6,9-13,7 (7,5)
PDOX
10
5,9-13,2 (8.2)
10
6,1-12,5 (8,8)
10
4,6-14,4 (9,0)
10
4,9-11,1 (7,7)
DOX
10
3,6-10,5 (7,8)
10
4,7-12,2 (7,3)
10
4,6-12,5 (10,2)
9
3,9-6,4 (5,3)
plaquetas (G /L)
Controle
10
387-579 (480)
0,494
10
317-836 (555)
0,362
10
451-917 (657)
0,601
0
- 0,009
HIPEC
10
229-634 (373)
10
363-758 (408)
10
390- 709 (489)
7
262-598 (451)
PDOX
10
382-592 (456)
10
395-856 (493)
10
328-1002 (500)
10
201-532 (363)
DOX
10
330-647 (476)
10
363-878 (464)
10
390-939 (654)
9
115-319 (244)
alanina transaminase (U /L)
Controle
10
31-52 (38)
0,463
10
34-54 (41)
0,525
10
21-54 (37)
0,245
0
-
0,838
HIPEC
10
24-47 (40)
10
21-62 (35)
10
31-66 (42)
7
30-59 (48)
PDOX
10
28-52 (40)
10
24-59 (37)
10
32 -55 (45)
9
25-79 (40)
DOX
10
29-59 (35)
10
30-59 (39)
10
34-61 (48)
8
26-76 (42)
aspartato transaminase (U /L)
Controle
10
19-54 (35 )
0,895
10
30-52 (36)
0,525
10
37-58 (43)
0,309
0
- 0,473
HIPEC
10
23-59 (38)
10
11-55 (35)
10
27-78 (34)
7
25-50 (36)
PDOX
10
22-47 (37)
10
17-49 (39)
10
27-69 (36)
9
20-41 (30)
DOX
10
24-47 (37)
10
24-49 (30)
10
23-86 (36)
8
31-60 (39)
uréia (mmol /L)
Controle
10
4,40-5,80 (4,80)
0,206
10
4,51-10,44 (4,81)
0,525
10
3,29-9,82 (6,32)
0,185
0
- 0,473
HIPEC
10
3,70-8,14 (5,10)
10
3,57-11,04 (5,35)
10
4,32-9,29 (7,50)
7
5,25-8,67 (6,38)
PDOX
10
3,58-7,66 (5,82)
10
3,32-11,58 (6,68)
10
6,52-13,58 (7,63)
9
4,71-8,05 (5,35)
DOX
10
1,76-7,90 (5,01)
10
3,32-10,00 (5,59)
10
1,76-10,53 ( 7,80)
8
4,50-9,26 (6,27)
creatinina (mmol /L)
Controle
10
45,05-64,50 (60.50)
0,736
10
22,10-73,20 (55.00)
0,736
10
41,40-71,40 (50,25)
0,083
0
- 0,838
HIPEC
10
43,30-80,65 (57.35)
10
22,20-81,55 (46,97)
10
31,10-83,37 (52,96)
7
59,87-76,84 (66,51)
PDOX
10
42,80-75,80 (61,87)
10
22,13-86,25 (69.65)
10
45,30-75,80 (66,25)
9
44,38-79,56 (62,47)
DOX
10
22,30-69,30 (55,81)
10
27,28-75,90 (63,45)
10
42,38-73,76 (69.37)
8
47,72-78,64 (59.50)
creatina quinase (U /L)
Controle
10
74,3-205,6 (131,6)
0,864
10
81,3-247,8 (147,9)
0,878
10
71,4-182,1 (138,9)
0,968
0
- 0,473
HIPEC
10
78,8-259,2 (137,8)
10
66,8-248,9 (145,3)
10
63,4-225,2 (141,8)
7
98,3-265,1 (153,0)
PDOX
10
87,9-194,2 (139,4)
10
69,9-256,1 (144,4)
10
70,0-240,8 (130,6)
9
109,2-251,5 (195,2)
DOX
10
98,3-256,1 (152,4)
10
56,4-250,2 (135,8)
10
80,5-261,2 (133,8)
8
101.1- 407,6 (228,1)
creatina quinase isoenzima MB (U /L)
Controle
10
73,0-162,5 (129,8)
0,717
10
62,5-195,6 (127,2)
0,878
10
57,0-199,8 (119,8)
0,509
0
- 0.040
HIPEC
10
74,2-228,2 (137,3)
10
42,9-219,8 (129,7)
10
52,8-237,7 (146,5)
7
50,2-188,1 (126,1)
PDOX
10
59,2-228,1 (133,9)
10
42,5-197,7 (133,2)
10
74,9-241,5 (158,2)
9
58,9-209,8 (143,7)
DOX
10
94,3-207,7 (122,1)
10
53,9-202,3 (128,2)
10
94,3-238,6 (148,4)
8
106,2-656,5 (259,3 )
* Parte dos dados não está disponível por causa da morte do animal no momento set Online por 2 lados teste não paramétrico
glóbulos brancos em D 36, a comparação entre os grupos:.. p =
0.001, DOX vs. HIPEC; p = 1,000
, PDOX vs. HIPEC; p = 0,005
, PDOX vs. DOX; Plaquetas em D 36, a comparação entre os grupos: p = 0,041
, DOX vs. HIPEC; p = 0,637
, PDOX vs. HIPEC; p = 0,070
, PDOX vs. DOX; Creatina quinase isoenzima MB em D 36, a comparação entre os grupos: p = 0,012
, DOX vs. HIPEC; p = 0,593
, PDOX vs. HIPEC; . P = 0,131
, PDOX vs. DOX
toxicidades hematológicas com diminuição acentuada dos glóbulos brancos (p Art < 0,05) e plaquetas (p
< 0,05), bem como as toxicidades cardíacas com aumentos significativos na creatina quinase isoenzima MB (p
< 0,05). foram observados em d 36 após a quimioterapia sistêmica no DOX estudos
detalhadas sobre toxicidades miocárdio
estudos histopatológicos, tanto ao abrigo da luz do microscópio e microscópio eletrônico de transmissão não foram encontrados efeitos tóxicos do miocárdio no controle, o HIPEC eo PDOX, mas alterações histopatológicas significativas de miocárdio foram encontradas em todos os animais (100%, 10/10) no DOX, incluindo necrose de coagulação do miocárdio com profunda citoplasma manchado de vermelho, e o cariopicnose (Figura 6 C1, H1, P1, D1 setas pretas). micrografias de transmissão de elétrons mostrou que miocárdio normal com mitocôndrias abundantes embalados em torno do núcleo normal no Controle e HIPEC, ricos normal, mas com mitocôndrias cristas ligeiramente dilatados espalhados núcleo normal no PDOX, mitocôndrias quase ausentes em torno do núcleo morfologicamente senil e degenerativa no DOX. Além disso, miocárdio lítico parcial necrose (seta amarela) e mitocôndria-picnose longe do núcleo (seta vermelha) também ficaram evidentes no DOX. linhas completas, claras e contínuas de discos intercalados normais no controle, o HIPEC eo PDOX, mas discos intercalados obscuros, perdendo e descontínuos foram encontrados no DOX (setas brancas). Figura 6 micrografias de luz e micrografias de transmissão de elétrons de miocárdio coelho. Painel superior (coloração HE, 400 ×), exame histopatológico de rotina do miocárdio coelho a seção longitudinal (inserções no canto superior direito, corte sagital), onde C1, H1 e P1 demonstrou fibras miocárdicas normais limpas e claras em matrizes ordenadas, mas D1 necrose de coagulação mostrou do miocárdio com citoplasma manchado vermelho escuro eo cariopicnose do miocárdio. painel central superior (10.000 ×), micrografias de transmissão de elétrons do miocárdio focando as características de núcleos e mitocôndrias peri-nuclear, onde C2, H2 apresentaram mitocôndrias abundantes embalado em torno do núcleo normal, P2 mostrou mitocôndrias ricos espalhados núcleo normal, mas D2 mostrou mitocôndrias quase ausentes em torno do núcleo morfologicamente senil e degenerativa (estrela amarela mostrando núcleo aumentado devido ao inchaço ea agregação excêntrica da heterocromatina, e setas verdes que mostram contração interior visível da membrana nuclear). Além disso, miocárdio lítico parcial necrose (seta amarela) e mitocôndria-picnose longe do núcleo (seta vermelha) também eram evidentes em DOX animais tratados. Todos os autores leram e aprovaram o manuscrito final.

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