Sintesi, identificazione e studi in vivo di tumore-agente mirato peptide doxorubicina (PDOX) per il trattamento di carcinosi peritoneale del cancro gastrico con efficacia simile ma ridotta tossicità

Sintesi, identificazione e studi in vivo di tumore-agente mirato peptide doxorubicina (PDOX) per il trattamento di carcinosi peritoneale del cancro gastrico con efficacia simile ma ridotta tossicità
Abstract
sfondo
Questo lavoro mira a sintetizzare un catepsina B ( CTSB) tumore-targeting peptide profarmaco doxorubicina (PDOX) e studiare in vivo l'efficacia e tossicità su un modello animale di carcinosi peritoneale gastrica (PC). -cleavable
Metodi
PDOX è stato sintetizzato con doxorubicina (DOX) inerenti alle un dipeptide CTSB-cleavable Ac-Phe-Lys e para-ammino-benzilossicarbonil (PABC) distanziale. modello di PC è stato istituito con iniezione di cellule VX2 tumorali nella gastrica sub-mucosa del 40 conigli, che poi sono stati randomizzati in 4 gruppi: il controllo (n = 10) senza trattamento, il HIPEC (n = 10) trattati con chirurgia citoriduttiva (CRS) più chemioterapia ipertermica intraperitoneale (HIPEC), il PDOX (n = 10) e la DOX (n = 10) sottoposti a chemioterapia sistemica con PDOX 50,0 mg /kg o DOX 5,0 mg /kg, rispettivamente, dopo CRS + HIPEC
. Risultati Aziende il sopravvivenza mediana globale (OS) sono stati 23,0 d (95% CI: 19.9 d - 26,1 d) nel Control, 41,0 d (36.9 d - 45,1 d) nella HIPEC, 65,0 d (44.1 d - 71,9 d) nel PDOX e 58,0 d (39,6 d - 54,4 d) nella DOX. Rispetto al controllo, il sistema operativo è stato esteso dal 70% nel HIPEC (p
< 0,001) e ulteriormente ampliato del 40% nel DOX (p = 0,029
) e del 58% nel PDOX (p =
0.021), e la gravità PC è stato diminuito nel HIPEC e ulteriormente diminuito nel PDOX e DOX. Animali che ricevono un trattamento DOX hanno mostrato tossicità ematologiche con marcata riduzione dei globuli bianchi e piastrine, così come tossicità cardiaca con aumenti significativi della creatin mb chinasi isoenzima, evidente miocardio coagulazione necrosi, significativa degenerazione nucleare, peri-nucleo mitocondri delezione, mitocondri-picnosi, e anormali dischi intercalari. Ma queste tossicità non erano evidenti nel PDOX.
Conclusioni
PDOX è un profarmaco del tumore targeting di nuova sintesi di DOX. Rispetto al DOX, PDOX ha un'efficacia simile, ma ridotto ematologiche e tossicità cardiaca nel trattamento di coniglio modello di PC gastrica.
Parole
peritoneale carcinosi la chirurgia del cancro gastrico peptide doxorubicina citoriduttiva chemioterapia ipertermica intraperitoneale Sfondo
GC è uno dei più neoplasie comuni in paesi in via di sviluppo, dove è al secondo posto in termini di tasso di incidenza e il terzo in termini di tasso di mortalità tra la popolazione maschile, e al quarto posto in termini di tasso di incidenza e mortalità tra la popolazione femminile, secondo la più recente globale statistiche [1, 2]. GC è anche la terza causa di mortalità per cancro in Cina [3], dove oltre il 70% del GC è già diventato clinico avanzato per il momento di esplorazione chirurgica, la resezione chirurgica così da solo non è più curativa [4].
PC in GC è stato a lungo considerato come entità clinica fatale. Essa è definita come l'impianto di cellule tumorali tutta la cavità peritoneale e caratterizzata dalla presenza di noduli tumorali di varia dimensione, numero e distribuzione sulla superficie peritoneale e ascite maligna, spesso conseguente morbilità locoregionale senza ampi metastasi sistemiche. I pazienti con PC gastrica affrontare un esito triste, con una sopravvivenza mediana di circa 6 mesi [5].
Non esiste un trattamento standard per i PC gastrica. Gli attuali trattamenti per tale PC sono chemioterapia sistemica, migliore cura di supporto e terapia palliativa. Per far fronte a questo problema, una nuova modalità di trattamento denominato CRS più HIPEC è stato sviluppato nel corso degli ultimi 3 decenni, prendendo i vantaggi di un intervento chirurgico per ridurre la massa tumorale visibile, e la chemioterapia ipertermica regionale per sradicare la micrometastasi [6]. Una crescente evidenza ha suggerito che la combinazione di CRS e HIPEC potrebbe portare beneficio di sopravvivenza per i pazienti selezionati con PC gastrica. Nel nostro precedente studio sperimentale [5], abbiamo anche dimostrato che CRS + HIPEC potrebbe effettivamente portare beneficio di sopravvivenza con sicurezza accettabile, fornendo prove a sostegno di questa strategia combinata per il trattamento di pazienti selezionati con il PC gastrica.
Durante lo sviluppo di PC, cellule GC secernono enzimi per facilitare le cellule tumorali semina e la colonizzazione sul peritoneo. CTSB è uno degli enzimi chiave in questo processo critico, over-espresso in GC e altri tumori [7-9] e attivamente coinvolto nell'invasione cancro [10-12]. D'altra parte, è estremamente basso espresso in cellule normali e inattivo o perde attività non appena viene disperso in mezzo acquoso distanti cellule [13]. Così CTSB è stato a lungo considerato come un bersaglio candidato nella terapia del cancro [14].
È stato stabilito nel processo MAGIC che il regime antracicline-contained è un chemioterapico utile per GC [15]. DOX è un tipico rappresentante di antracicline. Anche se DOX è un farmaco importante nella chemioterapia, i suoi tossicità sono evidenti, come ad esempio le tossicità cardiache e soppressione del midollo osseo. Per mantenere l'effetto terapeutico, riducendo gli effetti collaterali, Dubowchik et al [16-18] progettato un profarmaco intelligente di DOX, PDOX (Figura 1). In questo modificato DOX, Ac-Phe-Lys è un dipeptide specifico per CTSB, e PABC (para-aminobenzyloxycarbonyl) è un self-immolative spacer [16]. Il profarmaco è attivo quando c'è poca attività CTSB, per esempio tessuti normali e sangue periferico, evitando così gli effetti collaterali su tessuto normale. Durante l'invasione del cancro, attivato CTSB è finita espresso sulla membrana esterna delle cellule tumorali invasione [19, 20], che scinde dipeptide Ac-Phe-Lys al legame Lys-PABC [16]. Poi il PABC distanziale esposta può auto-idrolizzare su deacilazione [21] e molecole DOX liberi vengono rilasciati, con conseguente uccisione diretta delle cellule tumorali invasione [16]. Figura 1 PDOX struttura (indicato nella casella), sintesi chimica e meccanismo d'azione. PDOX stato sintetizzato con successo secondo il processo chimico 7-passo. La sua struttura chimica è Ac-Phe-Lys-PABC-Dox · HCl (mostrato nella scatola), e la formula molecolare è C52H60ClN5O16. PDOX contiene un dipeptide CTSB-cleavable Ac-Phe-Lys (doppie barre rosse) una PABC distanziale (barra rossa) e farmaco anti-cancro DOX. Quando PDOX raggiunge un'area CTSB-arricchito, come la parte anteriore invasione del cancro, il dipeptide Ac-Phe-Lys è scisso dal CTSB al legame Lys-PABC, esponendo il distanziatore PABC che viene poi idrolizzato spontaneamente (barra rossa), il rilascio gratuito DOX nella parte anteriore cancro invasione. Così PDOX possa esercitare citotossicità per invadere le cellule tumorali, proteggendo le cellule normali da eccessiva esposizione al farmaco, una strategia chiamata terapia mirata passiva. CTSB:. Catepsina B.
In questo studio, abbiamo sintetizzato il PDOX e ha valutato l'efficacia e la sicurezza di CRS + HIPEC con molecolare mirata PDOX regime terapeutico per il trattamento mirato di coniglio modello di PC gastrica
Risultati
Sintesi e l'identificazione di PDOX
PDOX stato sintetizzato con successo secondo il procedimento riportato in precedenza 7-step chimica (figura 1) [16-18].
PDOX (Ac-Phe-Lys-PABC-Dox · HCl) è stato un solido rosso in polvere con peso molecolare di 1.046,51 (MS: m /z calcolato per C 52H 60ClN 5O 16: 1046,52, trovato: 1046,50), purezza chimica del 99,1% (da HPLC) , struttura C 52H 60ClN 5O 16 (da entrambi H 1-NMR e C 13-NMR) (Figura 2) e il punto di 180 ° fusione C (decomposizione), che è stabile a -5 ° C a 0 ° C per 36-54 mesi, temperatura ambiente per 24 mesi, risolvibile in acqua, parzialmente risolvibile in metanolo ed etanolo. PDOX utilizzato in questo studio è stato memorizzato nella zona scura, asciutto a 4 ° C. Figura 2 identificazioni Struttura confermati da H 1 NMR (A) e C 13 NMR (B). costruzione
PC modello e le caratteristiche istopatologiche
modello Coniglio di PC gastrica è stata istituita in tutti gli animali (100%, 40/40). Su d 8 dopo cellule tumorali inoculazione, piccoli noduli tumorali duri e trasparenti sviluppati su grande omento, e cancro tipico ulcerosa circa 0,5-1,0 cm di diametro formano sul antro dello stomaco. Non è stata osservata ascite. Nessun PC evidente è stato trovato in altre regioni. Non ci sono state differenze nella gravità PC tra tutti i conigli. Questo potrebbe essere equivalente a stadio clinico I PC da criteri Gilly [22] (Figura 3a).
Tutti i campioni tumorali indagati hanno mostrato ampia invasivo crescita e la distruzione dei tessuti. I tumori, sulla grande curvatura gastrico, penetrato lo strato mucoso per formare ulcere. studio istopatologico ha mostrato nidi tumorali penetrano tutta la parete dello stomaco, con la tipica invasione nello strato muscolare e le ghiandole gastriche (figura 3b). Le cellule tumorali sono rotondi, ovali o morfologia atipica con molte figure mitotiche patologiche. C'erano anche cospicua infiltrazione di linfociti, plasmacellule e di altre cellule infiammatorie (Figura 3C). Apoptotiche e necrotiche cellule tumorali sono state osservate nella regione centrale dei noduli tumorali (Figura 3D). PC Tipica presentato come noduli tumorali sulla superficie del omento (Figura 3E) e intraperitoneale metastasi linfonodali con PC è stata osservata in post mortem esami patologici di conigli nel controllo sono stati anche osservati (Figura 3F).
Cancro ulcerosa tipica. La parete dello stomaco era completamente invasa dal tumore per creare ulcera cancro racchiuso da confluenti noduli sulla grande omento, formando un blocco grande tumore. La parete addominale e del diaframma sono stati completamente invase dal tumore. Molti noduli tumorali formati sulla parete intestinale, il mesentere e retroperitoneo. ascite sanguinosi potrebbero essere più di 100 ml. Tutte le caratteristiche sono simili alle caratteristiche clinico-patologiche del PC gastrica in pazienti (figura 3G). Figura 3 Le caratteristiche del modello di coniglio di PC gastrica e le micrografie HE macchiati. (A) L'immagine del primo modello di coniglio di PC gastrica dove noduli tumorali cospicue sparsi sul peritoneo e la grande curvatura dello stomaco; (B) Le foto di GC ulcerosa; (C & D) HE macchiato immagine al microscopio che mostra la crescita invasiva dei nidi di cellule tumorali infiltranti la parete gastrica (pannello C, 400 ×) e le cellule tumorali necrotiche nella zona di insufficiente apporto di sangue (pannello D, 400 ×); (E) noduli tumorali sulla superficie del omento (200 ×); (F) intraperitoneale metastasi linfonodali (200 ×); (G) post mortem esami patologici di un coniglio.
Sopravvivenza
animali è stato osservato per la registrazione del sistema operativo. Due conigli lunghi superstiti (uno in PDOX e un altro nel DOX, vivono più di 100 d) sono stati sacrificati il ​​giorno 100 da una iniezione dose eccessiva di 2% di sodio pentobarbital. La mediana (intervallo di confidenza 95%, IC) del sistema operativo è stato 23,0 d (19,9-26,1 d) nel Control, 41,0 D (36,9-45,1 d) nella HIPEC, 65,0 D (44,1-71,9 d) nella PDOX e 58,0 d (39,6-54,4 d) nel DOX. Rispetto al controllo, il sistema operativo è stato ampliato di almeno il 70% nel HIPEC (p
< 0,001, log rank test). Rispetto al HIPEC, il sistema operativo è stato ulteriormente ampliato del 40% nel DOX (p = 0,029
, log rank test) e del 58% nel PDOX (p = 0,021
, log rank test) (Figura 4A ). Figura 4 In effetti in vivo di PDOX sul modello di coniglio PC. (A) le curve di sopravvivenza di Kaplan-Meier per il controllo, HIPEC, PDOX e DOX; (B) variazioni del peso corporeo in questi gruppi.
Carico tumorale alla sopravvivenza endpoint
allo studio degli endpoint, il carico tumorale nel controllo è stato più pesante, con il peso del tumore di (137.51 ± 16.09) g, tumore cuscinetto rapporto (peso del tumore al peso corporeo) di (7,88 ± 0,85)%, ascite sanguinose (65.50 ± 33.45) ml, e il punteggio EPCI di (9.50 ± 2.17). Rispetto al controllo, la HIPEC aveva significativamente ridotto peso del tumore (76,50 ± 11.41) g (p = 0,007
) e il rapporto tumore-cuscinetto (3,94 ± 0,54)% (p = 0,001
), ma non il punteggio EPCI (9,50 ± 2,17)% (p = 0.420
) e ascite sanguinose [(29.16 ± 15.30) mL, p = 0,085
]. Rispetto al HIPEC, la gravità PC è stato ulteriormente diminuito sia nel PDOX e la DOX, con il punteggio EPCI (6,40 ± 2,07, p = 0,020
sia PDOX e DOX vs. HIPEC) e ascite sanguinose (0,00 mL, p
< 0.001 in PDOX e DOX vs. HIPEC); mentre non vi erano differenze significative nel peso del tumore [(65.30 ± 14.55) g, p = 0,552
, PDOX vs. HIPEC; (48.74 ± 16.31) g, p = 0,180
, DOX vs HIPEC)] e il rapporto tumore-cuscinetto [(2,91 ± 0,69)%, p = 0,552
, PDOX vs. HIPEC; (2.13 ± 0.78)%, p = 0,180
, DOX vs HIPEC]. Non ci sono state differenze significative nella massa tumorale tra la PDOX e la DOX (Tabella 1) punteggio .table 1 Il EPCI all'endpoint sopravvivenza in 4 gruppi di conigli [gamma (mediana)]
di controllo (n = 10)
HIPEC (n = 10)
PDOX (n = 10)
DOX (n = 10)
Il punteggio EPCI in diverse regioni
Regione I
0 ~ 3 (3)
0 ~ 3 (2)
0 ~ 3 (0)
0 ~ 3 (0)
Regione II
3 ~ 3 (3) Pagina 3 ~ 3 (3)
3 ~ 3 (3)
3 ~ 3 (3)
Regione III
1 ~ 3 (3)
0 ~ 3 (3)
0 ~ 3 (1)
0 ~ 3 (1)
Regione IV
0 ~ 3 (3)
0 ~ 3 (1)
0 ~ 3 (0)
0 ~ 3 (0)
ascite (ml) *
12,0 ~ 113,4 (56,0)
0.0 ~ 94.0 (18.1)
0.0 ~ 0.0 (0.0)
0.0 ~ 0.0 (0.0)
Il EPCI score§
7 ~ 13 (11)
5 ~ 12 (9) Pagina 3 ~ 9 (6)
3 ~ 9 (6)
* ascite: p = 0,323
, HIPEC vs. controllo; p
< 0.001, PDOX vs. HIPEC; p
< . 0.001, contro DOX HIPEC
punteggio § Il EPCI: p = 0,073
, HIPEC vs. controllo; p = 0,020
, PDOX vs. HIPEC; p = 0,020
, DOX vs. HIPEC; p = 0.474
, PDOX contro DOX.
cambiamenti del peso corporeo
Il peso del corpo di ogni animale è stato registrato ogni 4 d. Nessuna differenza significativa è stata trovata nel peso corporeo iniziale di 4 gruppi prima del trattamento. il peso corporeo perioperatoria è diminuito in tutti i gruppi a causa del digiuno durante la notte. Nel controllo, il peso del corpo recuperato una volta l'assunzione di cibo è stato ripreso, ma ancora una volta è diminuita progressivamente fino allo studio degli endpoint. Nei gruppi di trattamento 3, il peso corporeo post-operatoria è diminuito notevolmente dopo la costruzione del modello e al più basso 4 d dopo CRS + HIPEC, e poi rimasto ad un livello basso durante la fase post-operatoria fino a chemioterapia era stato completato. Il peso corporeo ha cominciato ad aumentare a d 44 nel HIPEC e d 56 sia nel PDOX e DOX, e gradualmente aumentata ad un livello superiore, che è stato collegato sia alla crescita tumorale dei conigli di tumore viventi e morte del fallimento conigli con minore peso corporeo. Da allora in poi, il peso corporeo è diminuito progressivamente fino a quando di nuovo l'endpoint studio sia nel PDOX e la DOX (Figura 4B).
Postmortem esami patologici
da momento della morte degli animali, informazioni dettagliate sugli esami patologici post-mortem è stato elencato nella tabella 2 .
Oltre a esami sistematici di tutte le sedi anatomiche per eventuali metastasi tumorali, particolare attenzione è stata posta metastasi polmonari ed epatiche. Come mostrato in figura 5, nel controllo, estese metastasi epatiche sono state osservate in 8 animali, ma senza metastasi polmonari erano evidenti in tutti gli animali, a causa dei comportamenti crescita molto aggressivi del tumore portato a breve OS in questo gruppo di animali (Figura 5 A2, B2). Nel HIPEC, come animali vivevano più a lungo a causa della CRS + HIPEC, un minor numero di metastasi epatiche sono state osservate in 4 animali, ma sono stati osservati molto molto più polmonare metastasi in 7 animali (Figura 5 A3, B3). Nel PDOX e DOX, gli animali hanno sviluppato molte meno metastasi in entrambi i fegato e polmoni, anche se il sistema operativo è stata ulteriormente migliorata notevolmente, perché gli animali hanno ricevuto non solo i CRS + HIPEC per controllare metastasi regionali locali ma anche chemioterapia sistemica per il controllo metastasi ematogene e metastasi linfatiche (Figura 5 A4, B4, A5, B5) .table 2 Risultati di post mortem studio patologico in 4 gruppi, espressi come% dei conigli
di controllo (n = 10)
HIPEC (n = 10)
PDOX (n = 10)
DOX (n = 10)
p 1
p 2

p 3
p 4
colite GC
100,0 100,0

100,0 100,0

NS NS

NS
NS
metastasi incisione
100,0
30,0
30,0
20,0
0.001
NS NS

NS
metastasi polmonari
0.0
70,0 30,0

30,0
0.001
NS NS

NS
metastasi della parete toracica
0.0
20,0
10,0
0.0
NS NS

NS NS

versamento pleurico
10,0
70,0
30,0
30,0
0.008
NS NS

NS
Virchow linfonodi metastasi
30,0
70,0
60,0
40,0
NS NS

NS NS

metastasi Pericardio
0.0
20,0
0.0
0.0
NS NS

NS NS

diaframma cancerose
100,0
70,0
20,0
20,0
NS
0,028 0,028

NS
Grande torta omento
100,0
80,0
40,0
50,0
NS NS

NS
NS
metastasi epatiche
metastasi 80,0
40,0
30,0
30,0
NS NS

NS NS

Milza
0.0
0.0
20.0
0.0
NS NS

NS NS

metastasi retroperitoneo
100,0
60,0
60,0
50,0
0,029
NS NS

NS
Sinistra metastasi renali
0.0
10,0
0.0
0.0
NS NS

NS NS

destra metastasi renali
0.0
0.0
0.0
0.0
NS NS

NS NS

Kidney capsula invasione
100,0
50,0
0.0
20,0
0,012 0,012

NS NS

Intestino semina parete
100,0
80,0
20,0
10.0
NS
0.009
0.002
NS
Mesentere semina
100,0
80,0
30,0
10,0
NS
0,028 0,002

NS
cancro parete addominale
100,0
60,0
30,0
0.0
0,029
NS
0.004
NS
pelvica semina
100,0
50.0
30,0
10,0
0,170
NS NS

NS
vescica rottura
0.0
0.0
20,0
10,0
NS NS

NS NS

urina ritenzione
50.0
50.0
30,0
10,0
NS NS

NS NS

By (χ Pagina 2) Test 2 lati chi-quadrato. p
1, HIPEC vs. controllo; p
2, PDOX vs. HIPEC; p
3, DOX vs. HIPEC; . P
4, PDOX vs DOX
NS:. Alcun significato
rispetto al controllo, la gravità del PC è stata significativamente ridotta nelle metastasi incisione, metastasi polmonari, versamento pleurico, metastasi retroperitoneali, capsula renale invasione, addominali cancro muro e semina pelvica nel HIPEC. Rispetto al HIPEC, la gravità del PC è stata significativamente ridotta nel diaframma cancerose, reni capsula invasione, parete intestinale semina e semina mesentere nel PDOX, e nel diaframma cancerose, semina parete intestinale, semina mesentere e il cancro della parete addominale in DOX. Non ci sono state differenze statisticamente significative tra il PDOX e DOX in metastasi sistemiche.
Figura 5 metastasi polmonari (pannello A) e metastasi epatiche (pannello B) in questo studio. (A1) (B1) ha mostrato numero esatto di metastasi polmonari ed epatiche in ogni coniglio dei 4 gruppi, rispettivamente; (A2 a A5) ha mostrato metastasi polmonari rappresentative nel controllo, la HIPEC, la PDOX e la DOX, rispettivamente; (B2 a B5) ha mostrato metastasi epatiche rappresentative nel controllo, la HIPEC, la PDOX e la DOX, rispettivamente; (A6) ha mostrato micrografie di metastasi polmonari nel HIPEC, caratterizzati da invasioni cancro, la soppressione del tessuto polmonare, tumore formazione di trombi intravascolari e cospicuo infiammatorio le cellule infiltrazione (A6-1, HE macchia, 200 ×) (A6-2, HE macchia, 400 ×). (B6) ha mostrato micrografie di metastasi epatiche nel controllo, caratterizzati da un'ampia distruzione dei tessuti del fegato, invadendo le cellule tumorali, cellule infiammatorie infiltrazione, ed emorragia nel tessuto epatico (B6-1, HE macchia, 100 ×) (B6-2, HE macchia , 200 ×).
profilo sangue periferico e grandi cambiamenti biochimica
ci sono state differenze nella conta delle cellule del sangue periferico di d 2, d 6 e d 14 tra i 4 gruppi, ma i globuli bianchi e le piastrine sono risultati significativamente diminuzione su d 36 dopo la chemioterapia sistemica nel DOX (p
< 0,05). Non ci sono state differenze tra le funzioni epatiche e renali in tutto l'esperimento tra i 4 gruppi. In termini di parametri di funzioni cardiache, non vi erano differenze di creatin-chinasi e creatina chinasi MB isoenzima su d 2, d 6 e D 14 tra i 4 gruppi, ma la creatina chinasi MB isoenzima era significativamente aumentata su d 36 dopo la chemioterapia sistemica nel DOX (p
< 0,05). Di particolare attenzione, 2 animali nella DOX con breve del sistema operativo del 47 d e 53 d avevano eccezionalmente elevato nel siero di creatina chinasi MB livelli di isoenzimi, 467.5 U /L e 656,4 U /L, rispettivamente (p
< 0,05) (Tabella 3) .table 3 esami di routine del sangue e risultati dei test biochimici in 4 gruppi di conigli [gamma (mediana)]
Gruppo
D2
D6
D14

D36 *
n
Valore
p
n
Valore
p

n
Valore
p
n
cellule
Valore
p
Blood Red ( T /L)
controllo 10
5,03-6,93 (6,26)
0,849 10
5,08-7,76 (6,07)
0,494 10
4.29 -6.32 (5,54)
0.382
0 -
0,203
HIPEC 10
5,13-7,58 (6,48) 10
4,66-7,15 (5,65 ) 10
3,54-7,30 (5,68) 7
4,28-7,36 (5,28)
PDOX 10
4,17-7,16 (5,94)
10
4,97-6,49 (5,61) 10
4,38-5,82 (5,05) 10
4,46-6,03 (5,47)
DOX 10
5,03-6,84 (6,09) 10
5,03-6,70 (5,88) 10
3,65-6,36 (5,08)
9
4,12-6,40 (4,94)
globuli bianchi (g /l)
controllo 10
5,3-9,6 (8,6)
0,785 10
4,5-14,1 (9.9)
0.446 10
6,0-10,3 (7.8 )
0,601
0 -
0.013
HIPEC 10
4,4-12,3 (7.4) 10
4,5-12,7 (9.3)
10
3,2-12,1 (10.7) 7
6,9-13,7 (7.5)
PDOX 10
5,9-13,2 (8.2) 10
6,1-12,5 (8.8) 10
4,6-14,4 (9.0) 10
4,9-11,1 (7.7)
DOX 10
3,6-10,5 (7.8)
10
4,7-12,2 (7.3) 10
4,6-12,5 (10.2)
9
3,9-6,4 (5,3)
piastrine (G /L)
di controllo
10
387-579 (480)
0,494 10
317-836 (555)
0.362 10
451-917 (657)
0,601
0 -
0.009
HIPEC 10
229-634 (373) 10
363-758 (408) 10
390- 709 (489) 7
262-598 (451)
PDOX 10
382-592 (456) 10
395-856 (493)
10
328-1002 (500) 10
201-532 (363)
DOX 10
330-647 (476) 10
363-878 (464) 10
390-939 (654)
9
115-319 (244)
alanina transaminasi (U /L)
controllo 10
31-52 (38)
0,463 10
34-54 (41)
0.525 10
21-54 (37)
0.245
0
-
0.838
HIPEC 10
24-47 (40) 10
21-62 (35) 10
31-66 (42)
7
30-59 (48)
PDOX 10
28-52 (40) 10
24-59 (37) 10
32 -55 (45)
9
25-79 (40)
DOX 10
29-59 (35) 10
30-59 (39)
10
34-61 (48) Pagina 8
26-76 (42)
aspartato transaminasi (U /L)
controllo 10
19-54 (35 )
0,895 10
30-52 (36)
0.525 10
37-58 (43)
0.309
0 -
0,473
HIPEC 10
23-59 (38) 10
11-55 (35) 10
27-78 (34)
7
25-50 (36)
PDOX 10
22-47 (37) 10
17-49 (39) 10
27-69 (36)
9
20-41 (30)
DOX 10
24-47 (37) 10
24-49 (30) 10
23-86 (36) Pagina 8
31-60 (39)
azoto ureico nel sangue (mmol /L)
controllo 10
4,40-5,80 (4,80)
0,206 10
4,51-10,44 (4,81)
0.525 10
3,29-9,82 (6,32)
0,185
0 -
0,473
HIPEC 10
3,70-8,14 (5,10) 10
3,57-11,04 (5.35) 10
4,32-9,29 (7,50) 7
5,25-8,67 (6,38)
PDOX 10
3,58-7,66 (5,82) 10
3,32-11,58 (6.68) 10
6,52-13,58 (7.63)
9
4,71-8,05 (5,35)
DOX 10
1,76-7,90 (5,01) 10
3,32-10,00 (5.59) 10
1,76-10,53 ( 7,80) Pagina 8
4,50-9,26 (6,27)
creatinina (mmol /L)
controllo 10
45,05-64,50 (60.50)
0,736
10
22,10-73,20 (55.00)
0,736 10
41,40-71,40 (50.25)
0,083
0 -
0.838
HIPEC
10
43,30-80,65 (57.35) 10
22,20-81,55 (46.97) 10
31,10-83,37 (52,96) 7
59,87-76,84 (66.51)
PDOX 10
42,80-75,80 (61.87) 10
22,13-86,25 (69.65) 10
45,30-75,80 (66.25)
9
44,38-79,56 (62.47)
DOX 10
22,30-69,30 (55.81) 10
27,28-75,90 (63.45) 10
42,38-73,76 (69.37) Pagina 8
47,72-78,64 (59.50)
creatina chinasi (U /L)
controllo 10
74,3-205,6 (131.6)
0.864 10
81,3-247,8 (147,9)
0,878 10
71,4-182,1 (138,9)
0,968
0 -
0,473
HIPEC 10
78,8-259,2 (137.8) 10
66,8-248,9 (145.3) 10
63,4-225,2 (141,8) 7
98,3-265,1 (153.0)
PDOX
10
87,9-194,2 (139,4) 10
69,9-256,1 (144.4) 10
70,0-240,8 (130,6)
9
109,2-251,5 (195,2)
DOX 10
98,3-256,1 (152.4) 10
56,4-250,2 (135,8) 10
80,5-261,2 (133,8) Pagina 8
101.1- 407,6 (228,1)
creatina chinasi MB isoenzima (U /L)
controllo 10
73,0-162,5 (129,8)
0.717 10
62,5-195,6 (127,2)
0,878 10
57,0-199,8 (119,8)
0,509
0 -
0,040
HIPEC 10
74,2-228,2 (137,3) 10
42,9-219,8 (129,7) 10
52,8-237,7 (146,5) 7
50,2-188,1 (126,1)
PDOX 10
59,2-228,1 (133.9) 10
42,5-197,7 (133.2) 10
74,9-241,5 (158,2)
9
58,9-209,8 (143,7)
DOX
10
94,3-207,7 (122.1) 10
53,9-202,3 (128,2) 10
94,3-238,6 (148,4) Pagina 8
106,2-656,5 (259,3 )
* Parte dei dati non è disponibile a causa di morte degli animali al momento impostato
da 2 lati test non parametrico
I globuli bianchi su D 36, il confronto tra i gruppi:.. p =
0.001, DOX vs. HIPEC; p = 1.000
, PDOX vs. HIPEC; p = 0,005
, PDOX vs. DOX; Le piastrine su D 36, il confronto tra i gruppi: p = 0.041
, DOX vs. HIPEC; p = 0,637
, PDOX vs. HIPEC; p = 0,070
, PDOX vs. DOX; La creatina chinasi MB isoenzima su D 36, il confronto tra i gruppi: p = 0,012
, DOX vs. HIPEC; p = 0,593
, PDOX vs. HIPEC; . P = 0,131
, PDOX vs. DOX
tossicità ematologiche con marcata riduzione dei globuli bianchi (p
< 0,05) e le piastrine (p
< 0,05), così come tossicità cardiache con aumenti significativi della creatin-chinasi MB isoenzima (p
< 0,05). sono stati osservati su d 36 dopo la chemioterapia sistemica nel DOX studi
dettagliate sulla tossicità miocardio
studi istopatologici sotto sia al microscopio elettronico a trasmissione e microscopio ottico non ha trovato tossicità miocardio nel controllo, la HIPEC e la PDOX, ma significativi cambiamenti istopatologici del miocardio sono stati trovati in tutti gli animali (100%, 10/10) nel DOX, tra cui la coagulazione la necrosi del miocardio con profonda citoplasma macchiate di rosso, e il karyopyknosis (Figura 6 C1, H1, P1, D1 frecce nere). microscopio elettronico a trasmissione hanno dimostrato che miocardio normale con i mitocondri abbondanti confezionati in giro nucleo normale nel controllo e HIPEC, ricchi normale, ma con mitocondri creste leggermente dilatati sparsi nucleo normale nel PDOX, mitocondri quasi assenti attorno al nucleo morfologicamente senile e degenerativa nella DOX. Inoltre, parziale miocardio-litico necrosi (freccia gialla) e mitocondri-picnosi via dal nucleo (freccia rossa) erano evidenti nel DOX anche. Linee complete, chiare e continue di normali dischi intercalari nel controllo, la HIPEC e la PDOX, ma oscure, perdendo e discontinui dischi intercalari sono stati trovati nella DOX (frecce bianche). Figura 6 micrografie leggeri e microscopio elettronico a trasmissione di coniglio miocardio. Pannello superiore (HE macchia, 400 ×), caratteristiche istopatologiche di routine di coniglio miocardio a sezione longitudinale (inserti in alto a destra, sezione sagittale), dove C1, H1 e P1 dimostrato pulite e trasparenti normali fibre miocardiche in array ordinato, ma D1 necrosi coagulativa del miocardio ha mostrato con profonda citoplasma macchiato di rosso e la karyopyknosis del miocardio. Pannello centrale superiore (10.000 ×), microscopio elettronico a trasmissione del miocardio concentrandosi sulle caratteristiche dei nuclei e mitocondri peri-nucleare, dove C2, H2 ha mostrato abbondanti mitocondri confezionato intorno nucleo normale, P2 mostrava mitocondri ricchi sparsi nucleo normale, ma D2 ha mostrato mitocondri quasi assenti intorno al nucleo morfologicamente senile e degenerative (stella gialla che mostrano nucleo allargato a causa di gonfiore e l'aggregazione eccentrica di eterocromatina e frecce verdi che mostrano cospicua contrazione verso l'interno della membrana nucleare). Inoltre, parziale miocardio-litico necrosi (freccia gialla) e mitocondri-picnosi via dal nucleo (freccia rossa) erano anche evidenti in DOX trattamento degli animali. Dopo la preparazione della pelle e la disinfezione, il tumore è stato asportato dal coniglio vettore e inserito in una soluzione gelida 0,9% di cloruro di sodio. La pelle addominale è stato pulito e disinfettato. La pelle addominale è stato pulito e disinfettato. Post Mortem esami patologici inclusi patologia grave come la dimensione del tumore e le distribuzioni; Due lati p
< Tutti gli autori hanno letto e approvato il manoscritto finale.

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