A co-expressão de proteínas funcionais gástricas em doenças gástricas dinâmicos e o seu significado clínico

A co-expressão de proteínas funcionais gástricas em doenças gástricas dinâmicos e o seu significado clínico
Resumo
fundo
Pepsinogênio C (PGC) e Mucina1 (MUC1) são proteínas gástricas fisiologicamente funcionais importantes; Mucin2 (MUC2) é uma proteína funcional "ectópica" em metaplasia intestinal da mucosa gástrica. Analisou-se a co-expressão das acima mencionadas três proteínas em doenças gástricas dinâmicas {gastrite superficial (SG) gastrite -atrophic (AG) - cancro gástrico (GC)}, bem como diferentes tipos histológicos de cancro gástrico, a fim de encontrar fenótipos moleculares do câncer gástrico e doenças pré-cancerosas e mais explorar a co-função potencial do PGC, MUC1 e MUC2 na ocorrência e desenvolvimento de câncer gástrico.
Métodos
a sequência SG-AG-GC foi 57-57- 70 casos neste estudo caso-controle, respectivamente. Diferentes tipos histológicos de GC foram 28 casos de alta e moderadamente diferenciado ocarcinoma aden (HMD), 30 de adenocarcinoma pouco diferenciado (PDA) e 12 de adenocarcinoma mucinoso (MA) ou carcinoma de células anel de sinete (SRCC). . PGC, expressão MUC1 e MUC2 in situ foram detectados em todos os 184 casos usando imunohistoquímica
Resultados
Ambos PGC e MUC1 teve uma diminuição significativa expressão em GC do que em SG e AG (P Art < 0,0001 e P
< 0,01, respectivamente); Enquanto MUC2 tinha uma expressão aumento significativo na AG do que nos grupos GE e GC (P Art < 0,0001). Sete fenótipos de PGC, MUC1 e co-expressão MUC2 foram encontrados em que PGC + /MUC1 + /MUC2- fenótipo levou 94,7% (54/57) no grupo SG; PGC + /MUC1 + /MUC2 + e PGC- /MUC1 + /MUC2 + fenótipo levou 43,9% (25/57) e 52,6% (30/57) em AG; os fenótipos em grupo GC apareceu variável; extraordinariamente, PGC- /MUC1- /MUC2 + fenótipo assumiu 100% (6/6) no grupo MA ou SRCC e tinha uma significância estatística em comparação com os outros (P Art < 0,05).
Conclusões
fenótipos de PGC, MUC1 e co-expressão MUC2 em doenças gástricas dinâmicas são variáveis. No grupo SG ele sempre mostrou PGC + /MUC1 + /fenótipo MUC2- eo grupo AG mostrou dois fenótipos (PGC + /MUC1 + /MUC2 + e PGC- /MUC1 + /MUC2 +); os fenótipos no grupo GC apareceu variável, mas o fenótipo de PGC- /MUC1- /MUC2 + pode ser um biomarcador preditivo para o diagnóstico de MA ou SRCC, ou distinguindo MA histológica ou SRCC de adenocarcinoma tubular acompanhada de secreção mucinoso ou distribuição espalhados células em anel de sinete.
Palavras-chave
Pepsinogen C (PGC) Mucina1 (MUC1) Mucin2 (MUC2) câncer gástrico imunohistoquímica proteínas funcionais fundo
função normal do estômago precisa de dois tipos de materiais que existem principalmente em suco gástrico normal. Eles são componentes proteicos e materiais moleculares pequenos que participam na regulação. Entre eles, apenas a pepsinogénios e mucina pertencem a componentes de proteínas no suco gástrico, que são ambos proteínas gástricas fisiologicamente funcionais importantes. Pepsinogênios foram divididos em pepsinogénios A (PGA) e pepsinogénios C (PGC), e o último é um precursor de pepsina C humana, que é uma enzima digestiva [1]. O aparecimento de PGC é um sinal de amadurecimento gradual da função digestiva [2]. 1% de PGC humana a partir do estômago foi segregada para o sangue periférico e o rácio de PGA e PGC detectado no soro era um biomarcador para a gastrite atrófica (AG) ou cancro gástrico (GC) [3-5]. A mucina (MUC) é um tipo de glicoproteína secretada pela família epitélio da mucosa possuindo funções de protecção, de lubrificação e de hidratação para lúmens epiteliais, e 20 tipos de mucinas tinham sido identificadas a partir de MUC1 para MUC21 até agora [6]. MUC1 é uma cadeia lateral contendo mucina cadeia peptídica núcleo e glicoproteína associada a membrana altamente polimórficos. MUC1 possui uma capacidade de protecção, que participa em compor a barreira de "muco-bicarbonato", e também funciona em uma capacidade de sinalização celular [7, 8]. A sua sobre-expressão ou localização intracelular aberrante é encontrada em células cancerosas e está associada com carcinomas [9-12].
Excepto as proteínas gástricas fisiologicamente funcionais acima mencionados, uma proteína funcional "ectópica", MUC2 poderia ser expressa quando a mucosa gástrica ocorreu a metaplasia intestinal. MUC2 é também uma mucina altamente polimórficos contendo cadeia peptídica principal e cadeia lateral glicoproteína [13, 14]. Nas circunstâncias fisiológicas normais, a proteína MUC2 expressa na mucosa intestinal e está ausente na mucosa gástrica normal. No entanto, poderia ser MUC2 "ectópica" expresso na mucosa gástrica sob efeito patogénico de factores externos. Quer se trate participa na resposta do hospedeiro a esses fatores patogênicos externos, tais como a inflamação [15] ou H. pylori
[16, 17] continua a ser controversa.
Proteínas gástricas Como fisiologicamente funcionais e "ectópica" expressa a proteína , a associação de PGC, MUC1 e MUC2 única e doenças gástricas havia sido relatado no passado [18-22]. Nossa equipe também tinha demonstrado em estudo anterior que a expressão PGC tinha uma estreita relação com o grau de malignidade da mucosa gástrica [23], e nós também descobriram proteína MUC1 teve uma subexpressão significativa no GC em comparação com indivíduos não-cancerosas [24]. Além disso, a expressão MUC2 teve uma relação estreita com gastrite atrófica [25]. No entanto, a análise destas proteínas em um mesmo grupo de casos que representam diferentes fases da progressão de cancro nunca tinha sido relatada até agora, o que pode fornecida alguma nova visão em a possível função destas proteínas, e também na possível fenótipos moleculares de doenças gástricas diferentes .
neste estudo de controlo de caso, investigou-se a co-expressão de PGC, MUC1 e MUC2 in situ no mesmo grupo de casos na sequência SG-AG-CG, bem como em diferentes tipos histológicos de GC em a fim de encontrar fenótipos moleculares do câncer gástrico e doenças pré-cancerosas e mais explorar a co-função potencial do PGC, MUC1 e MUC2 na ocorrência e desenvolvimento de câncer gástrico.
Métodos
pacientes
Este projeto de pesquisa foi aprovado pelo Comitê de Ética da Universidade Medical China, e todas as amostras de tecido gástrico de 184 pacientes foram coletadas de pacientes com cartas de consentimento e questionário da história médica que participaram de um programa de verificação de saúde por gastroscopia para o rastreio do cancro gástrico ou em hospitais localizados em Zhuanghe e Shenyang Província de Liaoning, na China entre 2002 e 2005. Os pacientes com história de outras neoplasias malignas ou outras doenças benignas gástricos, incluindo erosão gástrica, doenças de úlcera péptica, pólipo gástrico e adenomas foram excluídos. As amostras de biópsia dos gastroscopias foram incluídos em parafina e corados por hematoxilina e método de eosina (HE); o critério de elegibilidade para todos os casos é o diagnóstico histológico. Os espécimes de biópsia foram coletados de 70 pacientes do GC com idade média de 59,13 ± 10,50 anos, variando de 34 a 80 anos de idade. 57 pacientes com gastrite superficial (SG) e 57 pacientes com gastrite atrófica (AG) tinham uma idade média semelhante de 57,18 ± 11,74 e 57,88 ± 10,62 anos, respectivamente, variando de 34 a 79 anos de idade. A GC e SG, grupos AG não apresentaram diferença estatística em termos de composição sexo e idade (P
= 0,812 e P = 0,593
, respectivamente, Tabela 1). Além disso, classificadas amostras de 70 pacientes do GC de acordo com a classificação da OMS (28 HMDA, 30 PDA e 12 MA ou SRCC). Os HMD, PDA e MA ou SRCC subgrupos não mostrou diferença estatística em gênero e composição etária (P
= 0,310 e P = 0,141
, respectivamente, Tabela 1) .table 1 As mensagens básicas dos objetos
variabilidade
SG
AG
GC
GC analisadas para PGC, MUC1 e MUC2 (n = 70)

HMDA
PDA
MA ou SRCC
n = 57
n = 57
n = 70
n = 28
n = 30
n = 12 Sexo seguro
Masculino
36
38
48
20
22
6
feminino
21
19
22
8
8
6
P
= 0,812
P
= 0,310
idade
média
57,88 ± 10,62
57,18 ± 11,74
59,13 ± 10,50
61,54 ± 9,62
58,77 ± 11,05
54,42 ± 10,17
Faixa
42-79
34-79
34-80
42-80
35-80
34-71
P
= 0,593
P
= 0,141
coloração imuno-histoquímica para a detecção de PGC, MUC1 e MUC2 expressão de proteínas in situ
análise imuno-histoquímica foi realizada em secções de 5 um de espessura a partir de amostras sequencialmente cortados de espécimes embebidos em parafina e de acordo com o método descrito por Byrd [24, 26 fixados em formalina ] com ligeira modificação. Resumidamente, as secções de tecido foram desparafinadas e reidratadas. A peroxidase endógena foi bloqueada utilizando 3% de peróxido de hidrogénio em metanol durante 10 min e, em seguida, as secções foram lavadas com solução salina tamponada com fosfato (PBS), pH 7,4. As secções foram incubadas com soro de cavalo não imunizados durante 20 min à temperatura ambiente e lavada antes de ser incubada com um anticorpo específico durante a noite a 4 ° C. Em seguida, as secções foram lavadas e incubadas com (anticorpo de cabra anti-ratinho, Maixin Inc., Fujian, China) anticorpos secundários biotinilados e estreptavidina-peroxidase de biotina. Após três lavagens com PBS, as secções foram visualizados com 3,3'- diaminobenzidina tetra-cloridrato e contrastadas com hematoxilina. Os anticorpos primários foram substituídos com tampão de PBS como um controlo negativo. Os anticorpos anti-humanos de ratinho específico foram adquiridos a Neomarkers Inc. de Fremont, EUA (Humana Gordura do Leite global-1, HMFG-1, contra MUC1, diluições de 1: 200) [27, 28] e Maixin Funjian Inc., China (contra MUC2, clone No. M53, 1: 100 diluições). E anticorpo de rato anti-humana contra PGC (clone No. 2D5, 1: 500 diluições) foi apresentado pelo Clinical Laboratory Institute of Japanese, gentilmente. imunofenotipagem foram julgados por algoritmo HSCORE (escore histológico) [29]. O algoritmo HSCORE foi calculado usando dois índices de proporção (Pί) e intensidade (ί). A proporção (Pί) foi estimada após a tomada em conta a percentagem de células positivas. A intensidade (ί) foi julgado como 0 (sem coloração), 1+ (coloração marrom claro), 2+ (coloração marrom) ou 3+ (coloração marrom pesado). O algoritmo HSCORE foi obtido pela soma da proporção de células coradas intensidade multiplicada pela intensidade da coloração. algoritmo HSCORE
=
Σ
Pί
×
ί
Onde ί = 0, 1, 2, 3 e Pί varia de 0.0 a 1.0, os HSCOREs variou de um mínimo de zero nos casos sem coloração a um máximo de 3,0, em casos em que todas as células foram coradas com uma intensidade máxima. Julgamos algoritmo HSCORE > 0.0 como positiva, enquanto algoritmo HSCORE = 0,0 como negativo. O algoritmo HSCORE foi determinada por dois observadores independentes. Estatísticas
teste não paramétrico e probabilidades exato de Fisher foram usados ​​para determinar a diferença de expressão PGC, MUC1, MUC2 na sequência SG-AG-GC e em diferentes tipos histológicos de GC. χ 2 de teste e probabilidades exato de Fisher foram usados ​​para determinar a diferença da co-expressão das três proteínas. O teste de soma classificação e análise de correlação de Spearman foram utilizados para analisar as correlações em diferentes grupos. Toda a análise estatística foi realizada usando SPSS (16.0) estatística programa de software (SPSS, Chicago, EUA). Todo o teste estatístico foi teste de probabilidade de dois lados e P Art < 0,05 foi considerado estatisticamente significante
Resultados
A expressão de PGC, MUC1, MUC2 em grupos GC e doenças pré-cancerosas
expressão PGC. foi encontrada no citoplasma de células da mucosa gástrica (Figura 1A). expressão MUC-1 foi encontrada no citoplasma e /ou membrana das células da mucosa gástrica (Figura 1E). MUC2 proteína foi colorido no citoplasma das células caliciformes (Figura 1J). Figura 1 A expressão de proteínas PGC, MUC1, MUC2 em diferentes tecidos da mucosa gástrica (× 200). expressão positiva forte A. de PGC na mucosa gástrica do grupo gastrite superficial (SG); B. expressão positiva de PGC no grupo gastrite atrófica (AG), uma expressão negativa poucos; expressão negativa C. de PGC no grupo moderadamente diferenciado adenocarcinoma (MDA); expressão negativa D. de PGC no grupo carcinoma anel de sinete (SRCC). E. forte expressão positiva da proteína MUC1 no grupo SG; F. expressão positiva da proteína MUC1 no grupo AG; G. expressão positiva da proteína MUC1 no grupo mal adenocarcinoma diferenciado (PDA); H. expressão negativa de MUC1 no grupo SRCC; I. expressão negativa de MUC2 no grupo SG; J. forte expressão positiva da MUC2 no grupo AG; K. expressão positiva da MUC2 no grupo PDA; L. forte expressão positiva da MUC2 no grupo adenocarcinoma mucinoso. A seta todos os meios as células de alterações patológicas.
A frequência de expressão das três proteínas em diferentes grupos de doenças gástricas foi examinado por análise imuno-histoquímica. PGC e MUC1 expressão de proteínas no grupo GC foi significativamente menor do que no SG e grupos AG (P Art < 0,05). a expressão da proteína MUC2 no grupo GC foi significativamente mais baixa do que no grupo de AG (P
< 0,001), mas a expressão do grupo GE foi menor do que no grupo GC (P
< 0,001). A correlação da expressão da proteína PGC, MUC1 e MUC2 com a sequência de SG-AG-GC foi analisada respectivamente. Descobrimos que havia correlações entre estas três proteínas e a sequência de doença (P Art < 0,01); PGC e MUC1 apresentou correlações negativas com a sequência de SG-AG-GC (coeficientes de correlação foram r = -0,770, r = -0,210, respectivamente; P Art < 0,001, P
= 0,004, respectivamente). MUC2 indicado correlação positiva com a sequência de SG-AG-GC (coeficiente de correlação foi de r = 0.260, P
< 0,001). Além disso, segundo a OMS classificação histológica, o grupo GC foi dividida em alta e moderadas adenocarcinoma (HMD), mal adenocarcinoma diferenciado (PDA), adenocarcinoma mucinoso ou grupo carcinoma anel de sinete (MA ou SRCC) grupos. Descobrimos que a proteína MUC1 em grupo MA ou SRCC foi significativamente mais baixa do que nos grupos de HMDA e PDA (P
< 0,001, Tabela 2), e no grupo MUC2 MA ou SRCC foi significativamente mais elevada do que nos grupos de PDA (P
= 0,013, Tabela 2), mas a proteína PGC não teve diferença significativa no GC group.Table 2 Frequência de PGC, a expressão da proteína MUC1 e MUC2 em doenças gástricas
marcar coloração
SG
AG
GC
GC (n = 70)

HMDA

PDA
MA ou SRCC
n = 57
n = 57
n = 70
n
= 28
n = 30
n = 12
PGC
2.0-3.0
19(33.3)
2(3.5)
0(0.0)
0(0.0)
0(0.0)
0(0.0)
1.0-1.9
29(50.9)
14(24.6)
0(0.0)
0(0.0)
0(0.0)
0(0.0)
0.1-0.9
9(15.8)
13(22.8)
0(0.0)
0(0.0)
0(0.0)
0(0.0)
0
0(0.0)
28(49.1)
70(100.0)
28(100.0)
30(100.0)
12(100.0)
P
1
< 0,0001 Art < 0,0001
- P Página 2
1.000
1.000
- MUC1
2.0-3.0
24(42.1)
29(50.9)
21(30.4)
12(42.9)
9(31.0)
0(0.0)
1.0-1.9
19(33.3)
19(33.3)
15(21.7)
8(28.6)
6(20.7)
1(8.3)
0.1-0.9
13(22.8)
9(15.8)
23(33.3)
7(25.0)
12(41.4)
4(33.0)
0
1(1.8)
0(0.0)
10(14.5)
1(3.6)
2(6.9)
7(58.3)
P Sims 3
0,012
0,0003
- P página 4
< 0,0001 0,0004

- MUC2
2.0-3.0
2(3.5)
46(80.7)
12(17.1)
6(21.4)
2(6.7)
4(33.3)
1.0-1.9
0(0.0)
6(10.5)
8(11.4)
3(10.7)
2(6.7)
3(25.0)
0.1-0.9
0(0.0)
3(5.3)
19(27.1)
9(32.1)
8(26.7)
2(16.7)
0
55(96.5)
2(3.5)
31(44.3)
10(35.7)
18(60.0)
3(25.0)
P
5
< 0,0001 Art < 0,0001
- P
6
0,273
0,013
- P
7
< 0,0001 Art < 0,0001
- P
8
< 0,0001 Art < 0,0001
-
P
9
< 0,0001
0,001
- Nota: A análise estatística utilizados testes não paramétricos e teste exato de Fisher. P
1
, P
3
, P
5
significa o significado em comparação com o grupo GC, respectivamente. P Página 2
, P 4
, P
6
significa o significado em comparação com MA ou grupo SRCC, respectivamente. P
7
significa o significado em comparação com o grupo HMDA; P
8
significa o significado em comparação com o grupo de PDA; P
9
significa o significado em comparação com MA ou grupo SRCC.
O fenótipo de PGC, MUC1, MUC2 co-expressão em GC e grupos de doenças pré-cancerosas
As características do PGC, MUC1 co-expressão , as proteínas foram analisadas MUC2. Encontramos o fenótipo de PGC + /MUC1 + /MUC2- representaram 94,7% (54/57) no grupo SG; PGC + /MUC1 + /MUC2 + e PGC- /MUC1 + /MUC2 + fenótipo foi responsável por 43,9% (25/57) e 52,6% (30/57) no grupo AG, respectivamente. Os fenótipos no grupo GC apareceu variável, entre eles, todos os casos foram fenótipo PGC-, em que a maioria eram indivíduos com fenótipo de PGC- /MUC1 + /MUC2 + ou PGC- /MUC1 + /MUC2- (33 ou 26 casos, foram responsáveis ​​por 47,1% e 37,1% respectivamente, tal como mostrado na Figura 2 CA ou DF). Além disso, os casos de GC foram classificados de acordo com os tipos histológicos, verificou-se que 100% (6/6) no grupo de MA ou SRCC foram o fenótipo de PGC- /MUC1- /MUC2 + (Figura 2 GI), grupo outros fenótipos na MA ou grupo SRCC foram significativamente mais baixos em comparação com a de PGC- /MUC1- /+ MUC2 grupo fenótipo (P
< 0,05, Quadro 3). Figura 2 O fenótipo de PGC /MUC1 /MUC2 co-expressão nas mesmas alterações patológicas (× 200). A. A expressão negativa de PGC no grupo adenocarcinoma moderadamente diferenciado (MDA). B. A expressão da proteína MUC1 positivo no grupo MDA. C. A expressão positiva de MUC2 no grupo MDA. D. A expressão negativa de PGC no grupo mal adenocarcinoma diferenciado (PDA). E. A expressão da proteína MUC1 positivo no grupo PDA. F. A expressão negativa de MUC2 no grupo PDA. G. A expressão negativa de PGC no grupo carcinoma anel de sinete (SRCC). H. A expressão negativa de MUC1 no grupo SRCC. I. A expressão positiva de MUC2 no grupo SRCC. A cada três figuras em uma composição horizontal eram todos do mesmo indivíduo. A seta todos os meios as células de alterações patológicas.
Tabela 3 fenótipo diferente da concordância da expressão da proteína PGC, MUC1 e MUC2 em doenças gástricas
Fatores
n
gástrica Different doenças
tipo histológico diferente do GC
PGC
MUC1
MUC2
SG (n = 57 )
AG (n = 57)
GC (n = 70)
HMD (n = 28)
PDA (n = 30)
MA ou SRCC (n = 12)
P
* Portal Imobiliário - Restaurant -
- 5 Restaurant -
- 5 (100,0)
1 (20,0) Sims 3 (60,0)
1 (20,0)
0.015 viajantes -
- +
6 Restaurant -
- 6 (100,0) Restaurant -
- 6 (100,0) Restaurant -
- + Restaurant -
27
- 1 (3,7)
26 (96,3)
9 (34,6)
15 (57,7) Página 2 (7,7) Art < 0,0001
-
+
+
63
- 30 (47,6)
33 (52,4)
18 (54,8)
12 (38,7) Sims 3 ( 6.5) Art < 0,0001
+ Restaurant -
- 1

• Estudo de Fase I quimioradioterapia neoadjuvante com S-1 mais cisplatina quinzenal para pacientes com câncer gástrico avançado com metástases linfonodais: -KOGC04-
• linfoma de célula T gástrica associada com linfoma de células T gástrica syndrome