La co-expresión de proteínas gástricos funcionales en las enfermedades gástricas dinámicos y su importancia clínica

La co-expresión de proteínas gástricos funcionales en enfermedades gástricas dinámicas y su significado clínico
Resumen Antecedentes

pepsinógeno C (PGC) y mucin1 (MUC1) son importantes proteínas gástricas fisiológicamente funcionales; Mucin2 (MUC2) es una proteína "ectópico" funcional en la metaplasia intestinal de la mucosa gástrica. Hemos analizado la co-expresión de los antes mencionados tres proteínas en enfermedades gástricas dinámicas {gastritis superficial (SG) gastritis -atrophic (AG) - El cáncer gástrico (CG)}, así como diferentes tipos histológicos de cáncer gástrico con el fin de encontrar fenotipos moleculares de cáncer gástrico y la enfermedad precancerosa y más en explorar el potencial de co-función del PGC, MUC1 y MUC2 en la aparición y desarrollo del cáncer gástrico.
Métodos comentario el secuencia de SG-AG-GC fue 57-57- 70 casos de este estudio de casos y controles, respectivamente. Los diferentes tipos histológicos de GC se registraron 28 casos de ocarcinoma aden altamente y moderadamente diferenciado (HMDA), 30 de adenocarcinoma pobremente diferenciado (PDA) y el 12 de adenocarcinoma mucinoso (MA) o carcinoma de células en anillo de sello (SRCC). . PGC, MUC1 y MUC2 expresión in situ se detectaron en los 184 casos mediante inmunohistoquímica
: Resultados de la Tanto PGC y MUC1 tuvieron una disminución significativa en la expresión de GC que en SG y AG (P Hotel < 0,0001 y P
< 0,01, respectivamente); Mientras MUC2 tenían un aumento significativo en la expresión AG con relación al GS y GC (P Hotel < 0,0001). Se encontraron siete fenotipos de PGC, MUC1 y MUC2 co-expresión en la que PGC + /+ MUC1 /fenotipo MUC2- tomó el 94,7% (54/57) en el grupo SG; PGC + /MUC1 + /+ y MUC2 PGC- /MUC1 + /+ fenotipo MUC2 tomaron 43,9% (25/57) y 52,6% (30/57) en la AG; los fenotipos en el grupo GC aparecieron variables; extraordinariamente, PGC- /MUC1- /MUC2 + fenotipo tomó 100% (6/6) en MA o SRCC grupo y tenía una significación estadística en comparación con los demás (P Hotel < 0,05). Conclusiones

fenotipos de PGC, MUC1 y MUC2 co-expresión en las enfermedades gástricas son variables dinámicas. En el grupo SG siempre mostró PGC + /+ MUC1 /fenotipo MUC2- y el grupo AG mostró dos fenotipos (PGC + /MUC1 + /+ y MUC2 PGC- /MUC1 + /+ MUC2); los fenotipos en el grupo GC aparecieron variable, pero el fenotipo de PGC- /MUC1- /MUC2 + pueden ser un biomarcador predictivo para el diagnóstico de MA o SRCC, o distinguir MA histológica o SRCC de adenocarcinoma tubular acompañada de secreción mucinosa o distribución dispersa de células en anillo de sello.
Palabras clave
pepsinógeno C (PGC) Mucin1 (MUC1) Mucin2 (MUC2) cáncer gástrico inmunohistoquímica proteínas funcionales Antecedentes
función normal del estómago necesita dos tipos de materiales que existen principalmente en el jugo gástrico normal. Son componentes proteicos y materiales moleculares pequeños que participan en la regulación. Entre ellos, sólo pepsinógeno y mucina pertenecen a componentes de la proteína en el jugo gástrico, que son importantes proteínas gástricas fisiológicamente funcionales. Pepsinógenos se dividieron en pepsinógeno A (PGA) y pepsinógeno C (PGC), y el último es un precursor de la pepsina C humana, que es una enzima digestiva [1]. La aparición de PGC es una señal de maduración gradual de la función digestiva [2]. 1% de PGC humana desde el estómago se secreta en la sangre periférica y la relación de PGA y PGC detectado en el suero era un biomarcador para la gastritis atrófica (AG) o cáncer gástrico (GC) [3-5]. La mucina (MUC) es una especie de glicoproteína secretada por epitelio de la mucosa que posee funciones de protección, la lubricación e hidratación de lúmenes epiteliales de la familia, y 20 tipos de mucinas se ha identificado a partir de MUC1 a MUC21 hasta ahora [6]. MUC1 es una mucina que contiene la cadena de péptido del núcleo y de la glicoproteína de cadena lateral asociada a la membrana altamente polimórficos. MUC1 posee una capacidad protectora que participa en la composición de la barrera de "moco-bicarbonato", y también funciona en una capacidad de señalización celular [7, 8]. Su sobreexpresión o localización intracelular aberrante se encuentran en las células cancerosas y se asocia con carcinomas [9-12].
Excepto las proteínas gástricas fisiológicamente funcionales mencionados anteriormente, una proteína funcional "ectópico", MUC2 podría expresarse cuando la mucosa gástrica ocurrido metaplasia intestinal. MUC2 es también una mucina altamente polimórficos que contiene la cadena de péptido central y cadena lateral glicoproteína [13, 14]. En las circunstancias fisiológicas normales, la proteína MUC2 expresa en la mucosa intestinal y está ausente en la mucosa gástrica normal. Sin embargo, MUC2 podría ser "ectópico" expresado en la mucosa gástrica bajo efecto patogénico de factores externos. Tanto si se participa en la respuesta del huésped a estos factores patógenos externos tales como la inflamación [15] o H. pylori
[16, 17] sigue siendo controvertido.
Proteínas gástricas Como fisiológicamente funcionales y "ectópico" expresaron proteínas , la asociación de PGC, MUC1 y MUC2 única y enfermedades gástricas se había informado en el pasado [18-22]. Nuestro equipo también había demostrado en estudios previos que la expresión de PGC tenía una estrecha relación con el grado de malignidad de la mucosa gástrica [23], y también se encuentra la proteína MUC1 tuvo una disminución en la expresión significativa de GC en comparación con sujetos que no tienen cáncer [24]. Además, la expresión MUC2 tenía una estrecha relación con la gastritis atrófica [25]. Sin embargo, nunca se ha informado de análisis de estas proteínas en un mismo grupo de casos que representan diferentes etapas de la progresión del cáncer hasta ahora, lo que puede proporcionado nuevos puntos de vista en la posible función de estas proteínas, y también en los posibles fenotipos moleculares de diferentes enfermedades gástricas .
en este estudio de casos y controles, se determinó la co-expresión de PGC, MUC1 y MUC2 in situ en el mismo grupo de casos en la secuencia SG-AG-GC, así como en diferentes tipos histológicos de GC en para encontrar fenotipos moleculares de cáncer gástrico y la enfermedad precancerosa y más en explorar el potencial de co-función del PGC, MUC1 y MUC2 en la aparición y desarrollo del cáncer gástrico.
Métodos
fue aprobado pacientes
Este proyecto de investigación por el Comité ético de la Universidad médica de china, y todas las muestras de tejido gástrico de 184 pacientes se obtuvieron de pacientes con cartas de consentimiento y cuestionario del historial médico que participaron en un programa de control de salud por gastroscopia para el cribado de cáncer gástrico o en hospitales situados en Zhuanghe y Shenyang de la provincia de Liaoning en china entre 2002 y 2005. Los pacientes con antecedentes de otras neoplasias malignas u otras enfermedades benignas gástricos como la erosión gástrica, enfermedades de úlcera péptica, pólipos gástricos y los adenomas fueron excluidos. Las muestras de biopsia de las endoscopias fueron embebidos en parafina y teñidas por hematoxilina y eosina método de tinción (HE); el criterio de elegibilidad para todos los casos es el diagnóstico histológico. Las muestras de biopsias se obtuvieron de 70 pacientes con cáncer gástrico con una edad media de 59,13 ± 10,50 años que van desde 34 a 80 años de edad. 57 pacientes con gastritis superficial (SG) y 57 pacientes con gastritis atrófica (AG) tenían una edad media de 57,18 ± similar de 11,74 y 57,88 ± 10,62 años, respectivamente, que van desde 34 a 79 años de edad. La GC y SG, grupos AG tenían ninguna diferencia estadística en cuanto a la composición de género y la edad (p = 0,812
y P = 0,593
, respectivamente, Tabla 1). Por otra parte, se clasificaron las muestras de 70 pacientes con cáncer gástrico según la clasificación de la OMS (28 HMDA, 30 PDA y 12 mA o SRCC). Los HMDA, PDA y MA o SRCC subgrupos mostraron ninguna diferencia estadística en el género y la composición de la edad (p = 0,310
y P = 0,141
, respectivamente, Tabla 1) .Tabla 1 Los mensajes básicos de los objetos
variabilidad
SG
AG
GC
GC analiza para PGC, MUC1 y MUC2 (n = 70)

HMDA
PDA
MA o SRCC
n = 57 n = 57

n = 70
n = 28 n = 30

n = 12 Sexo seguro
Hombre
36
38
48
20
22 página 6
Mujer
21 página 19
22 página 8 página 8 página 6
P = 0,812

P = 0,310

Edad

promedio 57,88 ± 10,62 57,18 ± 11,74

59.13 ± 10.50 61.54 ± 9.62

58.77 ± 11.05 54.42 ± 10.17

Rango
42-79
34-79 34-80

42-80
35-80 34-71

P = 0,593

P = 0,141

La tinción inmunohistoquímica para la detección de PGC, MUC1 y MUC2 expresión de la proteína in situ
el análisis inmunohistoquímico se realizó en secciones de 5 micras de espesor de las muestras en rodajas de forma secuencial fijado con formalina y embebidos en parafina las muestras de acuerdo con el método descrito por Byrd [24, 26 ] con ligeras modificaciones. Brevemente, las secciones de tejido fueron deparaffinized y rehidratada. peroxidasa endógena fue bloqueada con 3% de peróxido de hidrógeno en metanol durante 10 min y después las secciones se lavaron con solución salina tamponada con fosfato (PBS), pH 7,4. Las secciones se incubaron con suero de caballo no inmunizado durante 20 minutos a temperatura ambiente y se lavaron antes de incubarse con un anticuerpo específico durante la noche a 4 ° C. A continuación, las secciones se lavaron y se incubaron con (anticuerpo de cabra anti-ratón, Maixin Inc., Fujian, China) anticuerpos secundarios biotinilados y estreptavidina-peroxidasa de biotina. Después de tres lavados con PBS, las secciones se visualizaron con 3,3 'diaminobencidina tetra-clorhidrato y de contraste con hematoxilina. Los anticuerpos primarios fueron sustituidos con tampón de PBS como control negativo. Los anticuerpos anti-humanos específicos de ratón se adquirieron de Neomarkers Inc. Fremont, EE.UU. (Human Milk Fat-1 Global, HMFG-1, contra MUC1, 1: 200 diluciones) [27, 28] y Maixin Inc. Funjian, China (contra MUC2, clon No. M53, 1: 100 diluciones). Y el anticuerpo de ratón anti-humano contra PGC (clon Nº 2D5, 1: 500 diluciones) fue presentado por el Instituto Clínico Laboratorio de japoneses, amablemente. resultados inmunohistoquímicos fueron juzgados por HSCORE (puntuación histológica) [29]. El HSCORE se calculó utilizando dos índices de proporción (Pί) y la intensidad (ί). La proporción (Pί) se estimó después de tomar en cuenta el porcentaje de células positivas. La intensidad (ί) fue juzgado como 0 (sin manchas), 1+ (tinción marrón claro), 2+ (tinción marrón), o 3+ (tinción marrón oscuro). El HSCORE se deriva sumando la proporción de células con tinción intensidad multiplicada por la intensidad de la tinción. HSCORE
=
Σ
Pί
×
ί
Dónde ί = 0, 1, 2, 3 y Pί varía de 0.0 a 1.0, los HSCOREs osciló entre un mínimo de cero en los casos con tinción no a un máximo de 3,0 en los casos en los que todas las células se tiñeron con intensidad máxima. Juzgamos HSCORE > 0.0 como positiva, mientras que HSCORE = 0.0 como negativo. El HSCORE fue determinada por dos observadores independientes. Estadísticas
prueba no paramétrica y las probabilidades exacta de Fisher se utilizaron para determinar la diferencia de expresión de PGC, MUC1, MUC2 en la secuencia SG-AG-GC y en diferentes tipos histológicos de GC. χ 2 test y las probabilidades exacta de Fisher se utilizaron para determinar la diferencia de la co-expresión de las tres proteínas. La suma de rangos y el análisis de correlación de Spearman se utilizaron para analizar las correlaciones en los diferentes grupos. Todo el análisis estadístico se realizó con el programa SPSS (16.0) programa de software estadístico (SPSS, Chicago, EE.UU.). Toda la prueba estadística fue de dos caras prueba de probabilidad y P Hotel < 0,05 fue considerado estadísticamente significativo
Resultados
La expresión de PGC, MUC1, MUC2 en grupos GC y las enfermedades precancerosas
La expresión de PGC. se encontró en el citoplasma de las células de la mucosa gástrica (Figura 1A). MUC1 expresión se encontró en el citoplasma y /o membrana de las células de la mucosa gástrica (Figura 1E). proteína MUC2 era de color en el citoplasma de las células caliciformes (Figura 1J). Figura 1 La expresión de proteínas PGC, MUC1, MUC2 en diferentes tejidos de la mucosa gástrica (× 200). A. fuerte expresión positiva de PGC en la mucosa gástrica de grupo superficial gastritis (SG); B. expresión positiva de PGC en el grupo de gastritis atrófica (AG), unos pocos expresión negativa; C. expresión negativa de PGC en el grupo de adenocarcinoma moderadamente diferenciado (MDA); D. expresión negativa de PGC en el grupo de carcinoma de células en anillo de sello (SRCC). E. fuerte expresión positiva de MUC1 en el grupo SG; F. expresión positiva de MUC1 en el grupo AG; G. expresión positiva de MUC1 en el grupo pobremente diferenciadas adenocarcinoma (PDA); H. expresión negativa de MUC1 en el grupo SRCC; I. expresión negativa de MUC2 en el grupo SG; J. fuerte expresión positiva de MUC2 en el grupo AG; K. expresión positiva de MUC2 en el grupo de PDA; L. fuerte expresión positiva de MUC2 en el grupo de adenocarcinoma mucinoso. La flecha todo significa que las células de los cambios patológicos. México La frecuencia de expresión de las tres proteínas en diferentes grupos de enfermedades gástricas se examinó mediante análisis inmunohistoquímico. PGC y MUC1 expresión de proteínas en el grupo GC fue significativamente menor que la de la SG y grupos AG (P
< 0,05). expresión de la proteína MUC2 en el grupo GC fue significativamente menor que en el grupo AG (P
< 0,001), pero la expresión de grupo SG fue menor que en el grupo GC (P
< 0,001). La correlación de la expresión de la proteína PGC, MUC1 y MUC2 con la secuencia SG-AG-GC se analizó respectivamente. Nos encontramos que había correlaciones entre estas tres proteínas y la secuencia de la enfermedad (P Hotel < 0,01); PGC y MUC1 mostraron correlaciones negativas con la secuencia de SG-AG-GC (coeficientes de correlación fueron r = -0,770, r = -0,210, respectivamente; P
< 0,001, P = 0,004
, respectivamente). MUC2 indica correlación positiva con la secuencia de SG-AG-GC (coeficiente de correlación fue de r = 0,260, P
< 0,001). Por otra parte, según la OMS clasificación histológica, el grupo se dividió en GC adenocarcinoma de alto y moderado (HMDA), mal diferenciadas adenocarcinoma (PDA), adenocarcinoma mucinoso o grupo carcinoma de células en anillo de sello (MA o SRCC) grupos. Se encontró que la proteína MUC1 en MA o SRCC grupo era significativamente menor que en los grupos de HMDA y PDA (P
< 0,001, Tabla 2), y MUC2 en MA o SRCC grupo fue significativamente mayor que en los grupos de PDA (P = 0,013
, Tabla 2), pero la proteína PGC no tenían ninguna diferencia significativa en la GC group.Table 2 Frecuencia de PGC, MUC1 y MUC2 expresión de proteínas en enfermedades gástricas
puntuación de tinción
SG
AG
GC
GC (n = 70) guía empresas
HMDA

PDA
MA o SRCC
n = 57
n = 57
n = 70
n = 28
n = 30
n = 12
PGC
2.0-3.0
19(33.3)
2(3.5)
0(0.0)
0(0.0)
0(0.0)
0(0.0)
1.0-1.9
29(50.9)
14(24.6)
0(0.0)
0(0.0)
0(0.0)
0(0.0)
0.1-0.9
9(15.8)
13(22.8)
0(0.0)
0(0.0)
0(0.0)
0(0.0)
0
0(0.0)
28(49.1)
70(100.0)
28(100.0)
30(100.0)
12(100.0)
P
1
< 0,0001 Hotel < 0,0001
- P página 2
1.000
1.000 -
MUC1
2.0-3.0
24(42.1)
29(50.9)
21(30.4)
12(42.9)
9(31.0)
0(0.0)
1.0-1.9
19(33.3)
19(33.3)
15(21.7)
8(28.6)
6(20.7)
1(8.3)
0.1-0.9
13(22.8)
9(15.8)
23(33.3)
7(25.0)
12(41.4)
4(33.0)
0
1(1.8)
0(0.0)
10(14.5)
1(3.6)
2(6.9)
7(58.3)
P página 3
0,012 0,0003

- P página 4
< 0,0001 0,0004
-
MUC2
2.0-3.0
2(3.5)
46(80.7)
12(17.1)
6(21.4)
2(6.7)
4(33.3)
1.0-1.9
0(0.0)
6(10.5)
8(11.4)
3(10.7)
2(6.7)
3(25.0)
0.1-0.9
0(0.0)
3(5.3)
19(27.1)
9(32.1)
8(26.7)
2(16.7)
0
55(96.5)
2(3.5)
31(44.3)
10(35.7)
18(60.0)
3(25.0)
P página 5
< 0,0001 Hotel < 0,0001
- P página 6
0,273 0,013
-
P página 7
< 0,0001 Hotel < 0,0001
- P página 8
< 0,0001 Hotel < 0,0001
-
P página 9
< 0,0001
0,001
- Nota: El análisis estadístico utilizado pruebas no paramétricas y la prueba exacta de Fisher. P
1

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