Die Co-Expression von funktionellen Magen-Proteine ​​in dynamischen Magenerkrankungen und ihre klinische Bedeutung

Die Co-Expression von funktionellen Magen-Proteine ​​in dynamischen Magenerkrankungen und ihre klinische Bedeutung
Zusammenfassung
Hintergrund
Pepsinogen C (PGC) und mucin1 (MUC1) sind wichtige physiologisch funktionellen Magen-Proteine; Mucin2 (MUC2) ist ein "ektopische" funktionelles Protein in intestinale Metaplasie der Magenschleimhaut. Wir analysierten die Coexpression der oben erwähnten drei Proteine ​​in dynamischen Magenerkrankungen {oberflächliche Gastritis (SG) -atrophic Gastritis (AG) - Magenkrebs (GC)} sowie verschiedenen histologischen Typen von Magenkrebs zu finden, um molekulare Phänotypen von Magenkrebs und präkanzerösen Erkrankung und das Potenzial Ko-Funktion von PGC, MUC1 und MUC2 bei der Entstehung und Entwicklung von Magenkrebs zu erkunden.
Methoden
die SG-AG-GC-Sequenz war 57-57- 70 Fälle in diesem Fall-Kontroll-Studie, respectively. Verschiedene histologischen Typen von GC waren 28 Fälle von hoch und mäßig differenzierten aden ocarcinoma (HMDA), 30 von schlecht differenzierten Adenokarzinom (PDA) und 12 von muzinöse Adenokarzinom (MA) oder Siegelring-Karzinom (SRCC). . PGC, MUC1 und MUC2-Expression in situ in allen 184 Fällen festgestellt wurden mittels Immunhistochemie
Ergebnisse
Sowohl PGC und MUC1 hatte eine deutlich Ausdruck in GC verringert als in SG und AG (P
< 0,0001 und P
< 0,01); Während hatte MUC2 eine signifikant erhöhte Expression in AG als in SG und GC (P
< 0,0001). Sieben Phänotypen von PGC, MUC1 und MUC2 Co-Expression wurden in dem PGC + /MUC1 + /MUC2- Phänotyp in SG-Gruppe nahm von 94,7% (54/57) gefunden; PGC + /MUC1 + /MUC2 + und PGC- /MUC1 + /MUC2 + Phänotyp nahm 43,9% (25/57) und 52,6% (30/57) in AG; die Phänotypen in GC-Gruppe erschien variabel; außerordentlich, nahm PGC- /MUC1- /MUC2 + Phänotyp 100% (6/6) in MA oder SRCC Gruppe und hatte eine statistische Signifikanz im Vergleich zu anderen (P
< 0,05).
Schlussfolgerungen
Phänotypen PGC, MUC1 und MUC2 Co-Expression in dynamischen Magenerkrankungen sind variabel. In SG-Gruppe zeigte es immer PGC + /MUC1 + /MUC2- Phänotyp und AG-Gruppe zeigte zwei Phänotypen (PGC + /MUC1 + /MUC2 + und PGC- /MUC1 + /MUC2 +); die Phänotypen in GC-Gruppe erschien variabel, aber der Phänotyp von PGC- /MUC1- /MUC2 + kann ein prädiktiver Biomarker für die Diagnose von MA oder SRCC oder Unterscheidung histologischen MA oder SRCC von Rohr Adenokarzinom durch muzinöse Sekretion oder Siegelring Zelle gestreute Verteilung begleitet sein.
Schlüsselwörter Pepsinogen C (PGC) Mucin1 (MUC1) Mucin2 (MUC2) Immunhistochemie Magenkrebs Funktionelle Proteine ​​hintergrund und normale Funktion von Magen braucht zwei Arten von Materialien, die in erster Linie in der normalen Magensaft vorhanden sind. Sie sind Proteinkomponenten und kleine molekulare Materialien in Regulation beteiligt. Unter ihnen gehören nur Pepsinogen und Mucin zur Proteinkomponenten im Magensaft, die beide wichtige physiologisch funktionellen Magen-Proteine ​​sind. Pepsinogens wurden in Pepsin A (PGA) und Pepsinogen C (PGC) unterteilt, und letztere ist ein Vorläufer von humanem Pepsin C, die ein Verdauungsenzym ist [1]. Das Auftreten von PGC ist ein Signal nach und nach der Verdauung Reifung [2]. 1% der menschlichen PGC aus dem Magen in das periphere Blut und das Verhältnis von PGA und PGC in Serum nachgewiesen sezerniert war ein Biomarker für atrophische Gastritis (AG) oder Magenkrebs (GC) [3-5]. Mucin (MUC) ist eine Art Familie von Glykoprotein durch Schleimhautepithels sezerniert Funktionen Schutz, Schmierung und Feuchtigkeit für epithelialen Lumen besitzen, und 20 Arten von Mucinen hatte von MUC1 auf MUC21 identifiziert worden, bis jetzt [6]. MUC1 ist ein hoch polymorph membranassoziierten Mucin enthaltenden Kern Peptidkette und Glykoprotein-Seitenkette. MUC1 besitzt eine Schutzkapazität, die in Zusammensetzen der Barriere von "Schleim-Bicarbonat", und auch die Funktion in einer Zelle Signalisierungskapazität nimmt [7, 8]. Ihre Überexpression oder aberrant intrazelluläre Lokalisation ist in Krebszellen gefunden und ist mit Karzinomen [9-12] verbunden.
Außer den oben erwähnten physiologisch funktionellen Magen-Proteine, eine "ektopische" funktionelles Protein könnte MUC2 ausgedrückt werden, wenn die Magenschleimhaut aufgetreten intestinale Metaplasie. MUC2 ist auch ein hoch polymorph Mucin enthaltenden Kern Peptidkette und Glykoprotein-Seitenkette [13, 14]. In den normalen physiologischen Umständen drückt der MUC2-Protein in der Darmschleimhaut und ist in der normalen Magenschleimhaut nicht vorhanden. MUC2 könnte jedoch sein "ektopische" bei Magenschleimhaut unter pathogene Wirkung von externen Faktoren zum Ausdruck gebracht. Ob sie in der Antwort des Wirts auf diese externe pathogene Faktoren wie der Entzündung beteiligt ist [15] oder H. pylori
[16, 17] bleibt umstritten.
Als physiologisch funktionelle Magen-Proteine ​​und "ektopische" exprimierten Proteins , der Vereinigung der PGC, MUC1 und MUC2 allein und Magenerkrankungen hatten in der Vergangenheit [18-22] berichtet. Unser Team hatte auch in früheren Studie gezeigt, dass PGC Ausdruck eine enge Beziehung mit dem Grad der Bösartigkeit der Magenschleimhaut hatte [23], und wir fanden auch MUC1-Protein eine signifikante Unterexpression in GC im Vergleich zu Nicht-Krebs-Probanden hatten [24]. Darüber hinaus hatte MUC2 Ausdruck eine enge Beziehung mit atrophischer Gastritis [25]. Die Analyse dieser Proteine ​​in ein und derselben Gruppe von Fällen verschiedene Stadien der Tumorprogression darstellt war bisher noch nie berichtet worden, die einige neue Einblicke in die mögliche Funktion dieser Proteine ​​bereitgestellt werden, können, und auch in den möglichen molekularen Phänotypen von verschiedenen Magenerkrankungen .
in diesem Fall-Kontroll-Studie haben wir die Co-Expression von PGC, MUC1 und MUC2 in situ in der gleichen Gruppe der Fälle in der SG-AG-GC-Sequenz, sowie in verschiedenen histologischen Typen von GC untersucht in um molekulare Phänotypen von Magenkrebs und präkanzerösen Erkrankung zu finden und das Potenzial Co-Funktion von PGC, MUC1 und MUC2 bei der Entstehung und Entwicklung von Magenkrebs zu erkunden.
Methoden
Patienten
Dieses Forschungsprojekt genehmigt wurde von der Ethikkommission der China Medical University, und alle Magen-Gewebeproben von 184 Patienten wurden von Patienten mit Buchstaben von Zustimmung und Fragebogen der medizinischen Geschichte gesammelt, die in einem Gesundheits-Check-Programm durch Gastroskopie für Magenkrebs-Screening oder in Krankenhäusern beteiligt sich in Zhuanghe und Shenyang in der Provinz Liaoning in China zwischen 2002 und 2005 Patienten mit einer Vorgeschichte von anderen bösartigen Neubildungen oder anderen Magen-gutartigen Erkrankungen einschließlich Magen-Erosion, Magengeschwür-Erkrankungen, Magen-Polyp, und Adenome wurden ausgeschlossen. Die Biopsie-Proben aus den Gastroskopien wurden in Paraffin eingebetteten und durch Hämatoxylin und Eosin (HE) Färbeverfahren gefärbt; das Förderkriterium für alle Fälle ist die histologische Diagnose. Die Biopsieproben wurden von 70 GC-Patienten mit einem durchschnittlichen Alter von 59,13 ± 10,50 Jahre gesammelt alt von 34 bis 80 Jahre reichen. 57 Patienten mit oberflächlichen Gastritis (SG) und 57 Patienten mit atrophischen Gastritis (AG) hatte eine ähnliche Durchschnittsalter von 57,18 ± 11,74 und 57,88 ± 10,62 Jahre jeweils von 34 bis 79 Jahren bis hin alt. Die GC und SG hatten AG Gruppen kein statistisch signifikanter Unterschied in Bezug auf Geschlecht und Alterszusammensetzung (P
= 0,812 und P
= 0,593 bzw. Tabelle 1). Darüber hinaus klassifiziert wir Proben von 70 GC-Patienten nach WHO-Klassifikation (28 HMDA, PDA 30 und 12 MA oder SRCC). Die HMDA, PDA und MA oder SRCC Untergruppen zeigten keine statistischen Unterschiede in Geschlecht und Alterszusammensetzung (P
= 0,310 und P
= 0,141 bzw. Tabelle 1) .Tabelle 1 Die grundlegenden Meldungen der Objekte
Variability
SG
AG
GC
GC analysiert für PGC, MUC1 und MUC2 (n = 70)

HMDA
PDA
MA oder SRCC
n = 57
n = 57
n = 70
n = 28
n = 30
n = 12
Sex
männlich
36
38
48
20
22
6 Weiblich
21
19
22
8 8
6 P
= 0,812
P
= 0,310
Alter
Durchschnittliche
57.88 ± 10.62
57,18 ± 11,74
59.13 ± 10.50
61,54 ± 9,62
58,77 ± 11,05
54.42 ± 10.17
Bereich
42-79
34-79
34-80
42-80
35-80
34-71
P
= 0,593
P
= 0,141
Immunhistochemische Färbung zum Nachweis von PGC, MUC1 und MUC2-Protein-Expression in situ
Immunhistochemische Analyse wurde in 5 &mgr; m dicke Abschnitte von aufeinanderfolgend geschnittenen Proben in Formalin fixierten und in Paraffin eingebetteten Proben gemäß dem Verfahren, beschrieben von Byrd [24, 26 durchgeführt, ] mit leichten Modifikation. Kurz gesagt, wurden Gewebeschnitte entparaffiniert und rehydratisiert. Endogene Peroxidase wurde für 10 min unter Verwendung von 3% Wasserstoffperoxid in Methanol blockiert, und dann werden die Schnitte wurden mit phosphatgepufferter Salzlösung (PBS), pH 7,4, gewaschen. Die Schnitte wurden für 20 min bei Raumtemperatur mit nicht immunisierten Pferdeserum inkubiert und gewaschen, bevor sie mit einem spezifischen Antikörper über Nacht bei 4 ° C inkubiert wird. Dann wurden die Schnitte gewaschen und mit biotinylierten Sekundärantikörper (Ziege-anti-Maus-Antikörper, Maixin Inc., Fujian, China) und Streptavidin-Biotin-Peroxidase. Nach drei Waschungen mit PBS wurden die Schnitte mit 3,3'- Diaminobenzidin-tetrahydrochlorid visualisiert und mit Hämatoxylin gegengefärbt. Primäre Antikörper wurden mit PBS-Puffer als Negativkontrolle ersetzt. Die spezifischen Maus-Anti-Human-Antikörper wurden von NeoMarkers Inc. Fremont, USA (Human Milk Fat Globale-1, HMFG-1, gegen MUC1, 1: 200 Verdünnungen) erworben [27, 28] und Maixin Inc. Funjian, China (gegen MUC2, Klon Nr M53, 1: 100 Verdünnungen). Und Maus-Anti-Human-Antikörper gegen PGC (Klon Nr 2D5, 1: 500 Verdünnungen) wurde vom Clinical Laboratory Institute of Japanese präsentiert, freundlich. Immunhistochemischen Ergebnisse wurden durch HSCORE (histologische Score) [29] beurteilt. Die HSCORE wurde mit zwei Indizes in keinem Verhältnis (Pί) und Intensität (ί) berechnet. Der Anteil (Pί) wurde nach Berücksichtigung der Prozentsatz der positiven Zellen geschätzt. Die Intensität (ί) wurde als 0 (keine Färbung) beurteilt, 1+ (hellbraun-Färbung), 2+ (braune Färbung) oder 3+ (schwere braune Färbung). Die HSCORE wurde durch Addition der Anteil von Zellen abgeleiteten Intensität durch die Intensität der Färbung multipliziert Anfärbung. HSCORE
=
Σ
Pί
×
ί
Wo ί = 0, 1, 2, 3 und Pί variiert von 0,0 bis 1,0, die HSCOREs von einem Minimum von Null in Fällen reichte ohne Anfärbung auf höchstens 3,0 in Fällen, in denen alle Zellen mit maximaler Intensität gefärbt wurden. Wir beurteilt HSCORE > 0.0 als positiv, während HSCORE = 0,0 als negativ. Die HSCORE wurde von zwei unabhängigen Beobachtern bestimmt. Statistik
Nicht parametrischer Test und dem genauen Wahrscheinlichkeiten Fisher wurden verwendet, um den Unterschied von PGC, MUC1, MUC2-Expression in der SG-AG-GC-Sequenz und in verschiedenen histologischen Typen zu bestimmten von GC. χ 2-Test und dem genauen Wahrscheinlichkeiten Fisher wurden verwendet, um die Differenz der Co-Expression der drei Proteine ​​zu bestimmten. Der Rangsummentest und Spearman-Rangkorrelationsanalyse wurden verwendet, um die Korrelationen in verschiedenen Gruppen zu analysieren. Alle statistischen Analysen wurden mit SPSS (16.0) statistische Software (SPSS, Chicago, USA) durchgeführt. Alle statistischen Test war zweiseitigen Wahrscheinlichkeitstest und P
< 0,05 als statistisch signifikant betrachtet wurde
Ergebnisse

• Phase-I-Studie von neoadjuvante Radiochemotherapie mit S-1 plus Cisplatin alle zwei Wochen für fortgeschrittenem Magenkrebs-Patienten mit Lymphknotenmetastasen: -KOGC04-
• Magen-T-Zell-Lymphom mit hemophagocytic syndrome