A ko-expressziója funkcionális gyomor fehérjék dinamikus gyomor betegségek és a klinikai jelentősége

A ko-expressziója funkcionális gyomor fehérjék dinamikus gyomor betegségek és a klinikai jelentősége
Abstract
alapon
Pepszinogén C (PGC) és mucin1 (MUC1) fontos fiziológiailag funkcionális gyomor- fehérjék; Mucin2 (MUC2) egy "méhen" funkcionális fehérje intestinalis metaplasia a gyomor nyálkahártyáját. Elemeztük a ko-expressziója a fent említett három fehérjék dinamikus gyomor betegségek {felszínes gastritis (SG) -atrophic gastritis (AG) - gyomorrák (GC)}, valamint a különböző szövettani típusú gyomorrák annak érdekében, hogy megtalálják molekuláris fenotípus gyomorrák és rákmegelőző betegségek és tovább vizsgálja a lehetséges együttműködés függvénye PGC MUC1 és MUC2 előfordulásának és a gyomorrák kialakulásával. katalógusa módszerek
SG-AG-GC szekvencia 57-57- 70 esetben ebben az eset-kontroll vizsgálat, ill. Különböző szövettani típusú GC volt 28 esetben magas szinten és mérsékelten differenciált Aden ocarcinoma (HMDA), 30. gyengén differenciált adenocarcinoma (PDA) és 12. mucinosus adenocarcinoma (MA) vagy pecsétgyűrű sejtes karcinóma (SRCC). PGC, MUC1 és MUC2 expresszió in situ találtak mind a 184 esetben immunhisztokémiai.
Eredménye
Mind PGC és MUC1 szignifikánsan csökkent expressziót GC mint SG és az AG (p
< 0,0001 és P
< 0,01); Míg MUC2 volt szignifikáns növekedés kifejezést AG, mint SG és GC (P katalógusa < 0,0001). Hét fenotípus PGC MUC1 és MUC2 koexpresszáltatása találtak, amelyek PGC + /MUC1 + /MUC2- fenotípus került 94,7% (54/57) az SG-csoport; PGC + /MUC1 + /MUC2 + és PGC- /MUC1 + /MUC2 + fenotípus került 43,9% (25/57) és 52,6% (30/57) az AG; A fenotípusok GC csoport megjelent változó; Rendkívül, PGC- /MUC1- /MUC2 + fenotípus volt 100% (06/06) MA vagy SRCC csoport, és volt egy statisztikai szignifikancia többihez képest (P katalógusa < 0,05). Következtetések katalógusa katalógusa fenotípus PGC MUC1 és MUC2 együttes expressziójának dinamikus gyomorbetegségek változó. SG csoportban mindig mutatott PGC + /MUC1 + /MUC2- fenotípus és AG csoport mutatta két fenotípus (PGC + /MUC1 + /MUC2 + és PGC- /MUC1 + /MUC2 +); A fenotípusok GC csoport megjelent változtatható, de a fenotípus PGC- /MUC1- /MUC2 + lehet prediktív biomarker diagnosztizálására MA vagy SRCC, vagy megkülönböztető szövettani MA vagy SRCC csöszerüen adenocarcinoma kíséri mucinosus váladék vagy pecsétgyűrű sejtes szétszórt forgalmazás.
Kulcsszavak katalógusa Pepszinogén C (PGC) Mucin1 (MUC1) Mucin2 (MUC2) immunhisztokémiai gyomorrák funkcionális fehérjék Háttér katalógusa normál funkciója gyomor szüksége kétféle anyagból, amely elsősorban létezik normális gyomornedv. Ezek fehérje komponensek és a kis molekulatömegű anyagok résztvevő szabályozás. Ezek közül csak a pepszinogén és mucin tartoznak fehérje komponenseket a gyomornedvben, amelyek egyaránt fontos fiziológiailag funkcionális gyomor fehérjéket. Pepsinogens osztottuk pepszinogén A (PGA) és pepszinogén C (PGC) és az utóbbi egy prekurzor humán pepszin C, ami egy emésztő enzim [1]. A megjelenése PGC egy jel fokozatosan lejáró emésztőrendszer működését [2]. 1% humán PGC a gyomorból szekretálódott perifériás vérben, és az arány a PGA és PGC kimutatható a szérum volt egy biomarker atrófiás gasztritisz (AG) vagy gyomorrák (GC) [3-5]. Mucin (FRA) egyfajta glikoprotein család kiválasztódik a hámszövet nyálkahártyáján rendelkező funkciói védelmet, kenést és hidratálás az epiteliális lumen, és 20 féle nyál már azonosították MUC1 a MUC21 mostanáig [6]. MUC1 egy erősen polimorf membrán-asszociált mucin tartalmazó mag peptidlánc és glikoprotein oldallánc. MUC1 rendelkezik védelmi kapacitását, amely részt vesz alkotó gát "nyálka-hidrogén-karbonát", és funkciókat sejtjeiölésben kapacitás [7, 8]. A túlzott expressziója vagy az aberráns intracelluláris lokalizációja található rákos sejtek, és a kapcsolódó karcinómák [9-12].
Kivételével a fent említett fiziológiailag funkcionális gyomor fehérjéket, egy "ektopikus" funkcionális fehérje, MUC2 fejezhető, amikor a gyomor nyálkahártya történt intestinalis metaplasia. MUC2 is erősen polimorf mucin tartalmazó mag peptidlánc és glikoprotein oldallánc [13, 14]. A normál fiziológiai körülmények között a MUC2 fehérje kifejezi a bél nyálkahártyáján, és hiányzik a normál gyomor nyálkahártyáját. Azonban MUC2 lehetne "méhen" kifejezett gyomornyálkahártya alatt patogén külső tényezők hatására. Függetlenül attól, hogy részt vesz a válasz a fogadó e külső kóroki tényezők, mint például a gyulladás [15], illetve a H. pylori katalógusa [16, 17] továbbra is ellentmondásos.
Ahogy fiziológiailag gyomor fehérjék és a "méhen" expresszált fehérje az egyesület a PGC, MUC1 és MUC2 egyedül és gyomorbetegségek már jelentettek az elmúlt [18-22]. Csapatunk is bizonyította a korábbi tanulmányt, amely PGC kifejezés volt a szoros kapcsolatot a mértéke rosszindulatú daganat a gyomor nyálkahártyáját [23], és azt is megállapította, MUC1 fehérje volt jelentős underexpression GC képest nem rákos alanyok [24]. Emellett MUC2 kifejezés volt a szoros kapcsolatot sorvadásos gyomorhurut [25]. Elemzése azonban ezek a fehérjék egy azonos csoportban az esetek képviselő különböző szakaszaiban a rák progressziójának soha nem számoltak be mostanáig, amely lehet nyújtott néhány új betekintést a lehetséges funkciója ezen fehérjék, valamint a lehetséges molekuláris fenotípusok különböző gyomor betegségek .
Ebben az eset-kontroll tanulmányban azt vizsgáltuk koexpresszáltatása PGC MUC1 és MUC2 in situ az azonos csoportba az esetek az SG-AG-GC-szekvencia, valamint a különböző szövettani típusú GC annak érdekében, hogy megtalálják a molekuláris fenotípus gyomorrák és rákmegelőző betegségek és tovább vizsgálja a lehetséges együttműködés függvénye PGC MUC1 és MUC2 előfordulásának és a gyomorrák kialakulásával. katalógusa módszerek katalógusa Betegek katalógusa Ez a kutatási projekt jóváhagyott az Etikai Bizottság a kínai Orvostudományi Egyetem, és az egész gyomor szövetmintából 184 beteget gyűjtött beteg írásos beleegyezését és kérdőíve kórtörténet, akik részt vettek egy egészségügyi ellenőrző program gasztroszkópia gyomorrák szűrés vagy kórházakban található Zhuanghe és Shenyang Liaoning tartomány Kínában 2002 és 2005 között a kórtörténetben egyéb rosszindulatú daganatok vagy más gyomor jóindulatú betegségek, beleértve a gyomor erózió, gyomorfekély betegség, gyomor-polip, és adenomák kizárták. A biopsziás mintákat a gasztroszkópiák arra paraffinba ágyazott és festettük hematoxilin-eozin (HE) festés módszerrel; A jogosultsági kritérium minden esetben szövettani diagnózis. A biopsziás mintákat gyűjtöttünk 70 GC betegek átlagéletkora 59,13 ± 10,50 év közötti 34-80 év. 57 beteg felületes gastritis (SG) és 57 beteg sorvadásos gyomorhurut (AG) volt egy hasonló átlagos életkora 57,18 ± 11,74 és 57,88 ± 10,62 év volt, kezdve 34-79 éves. A GC és az SG, AG csoportban nem volt statisztikai különbség a nemek és kor szerinti összetétele (P = 0,812 katalógusa és P katalógusa = 0,593, illetve 1. táblázat). Továbbá, mi osztályozott minták 70 GC szerinti betegek WHO klasszifikáció (28 HMDA 30 PDA és 12 MA vagy SRCC). A HMDA, PDA MA vagy SRCC alcsoportok nem mutatott statisztikailag szignifikáns különbséget a nemek és kor szerinti összetételére (P = 0,310 katalógusa és P katalógusa = 0,141, illetve az 1. táblázatot) .table 1 Az alapvető üzenet a tárgyak katalógusa változékonyság Matton SG Matton AG Matton GC Matton GC elemezni PGC MUC1 és MUC2 (n = 70)

HMDA Matton PDA Matton MA vagy SRCC Matton n = 57 katalógusa n = 57 katalógusa n = 70 katalógusa n = 28 katalógusa n = 30 katalógusa n = 12 katalógusa szex katalógusa Férfi katalógusa 36 katalógusa 38 katalógusa 48 katalógusa 20 katalógusa 22 katalógusa 6 katalógusa Nő katalógusa 21 katalógusa 19 katalógusa 22 katalógusa 8 katalógusa 8 katalógusa 6 katalógusa P katalógusa = 0,812 katalógusa P katalógusa = 0,310 katalógusa Age katalógusa átlagos katalógusa 57,88 ± 10,62 katalógusa 57,18 ± 11,74 katalógusa 59,13 ± 10,50 katalógusa 61,54 ± 9,62 58,77 ± 11,05 katalógusa katalógusa 54,42 ± 10,17 katalógusa tartomány katalógusa 42-79 katalógusa 34-79 katalógusa 34-80 katalógusa 42-80 katalógusa 35-80 katalógusa 34-71 katalógusa P katalógusa = 0,593 katalógusa P katalógusa = 0,141 katalógusa immunhisztokémiai detektálására PGC, MUC1 és MUC2 fehérje expresszióját in situ
immunhisztokémiai elemzést végeztünk az 5-um vastag metszeteket egymás után szeletelt mintákat formalinnal fixált és paraffinba ágyazott mintákat szerint által leírt módszer Byrd [24, 26 ] enyhe módosításával. Röviden, a szöveti metszeteket paraffint és rehidratált. Az endogén peroxidáz blokkoltuk 3% -os hidrogén-peroxid metanolban 10 percig, majd a metszeteket kimostuk foszfáttal pufferolt sóoldattal (PBS), pH = 7,4. A metszeteket nem immunizált lószérumot, 20 percig szobahőmérsékleten, és mostuk, mielőtt inkubálunk egy specifikus antitest egy éjszakán át 4 ° C hőmérsékleten. Ezután a metszeteket mostuk és inkubáltuk biotinilált másodlagos antitestet (kecske anti-egér antitest, Maixin Inc., Fujian, Kína) és a sztreptavidin-biotin-peroxidáz. Három mosás után PBS-sel, a metszeteket láthatóvá 3,3'- diaminobenzidin tetra-hidrokloridot és ellenfestjük hematoxilin. Primer antitesteket helyettesítettük PBS-pufferben, mint negatív kontrollt. A specifikus egér anti-humán antitesteket vásárolt Neomarkers Inc. Fremont, USA (emberi tejben lévő zsír Global-1, HMFG-1, ellen MUC1, 1: 200 hígításban) [27, 28] és Maixin Inc. Funjian, Kína (szemben MUC2 klón No. M53, 1: 100 hígításban). És egér anti-humán ellenanyag ellen PGC (klón No. 2D5, 1: 500 hígításban) mutatta klinikai laboratóriumi Intézet japán, kedves. Immunhisztokémiai eredmények ítélte HSCORE (szövettani pontszám) [29]. A HSCORE számítottuk ki két indexek aránya (Pί) és intenzitása (ί). Az arány (Pί) becsültük után, figyelembe véve a pozitív sejtek százalékában. Az intenzitás (ί) ítélték 0 (nincs festés), 1+ (világosbarna festés), 2+ (barna elszíneződés) vagy 3+ (nehéz barna festés). A HSCORE származik összegzésével aránya sejtek festődés intenzitása szorozva a festődés intenzitása. HSCORE katalógusa = katalógusa Σ katalógusa Pί katalógusa × katalógusa ί katalógusa Amennyiben ί = 0, 1, 2, 3 és Pί változik 0,0-1,0, a HSCOREs között mozgott legalább nulla esetekben nincs festés, maximum 3,0 azokban az esetekben, amelyekben az összes sejteket megfestettük maximális intenzitással. Ítéltük HSCORE > 0.0 pozitívnak, míg HSCORE = 0,0, mint negatív. A HSCORE határoztuk meg két független megfigyelők. Katalógusa Statisztika katalógusa nem paraméteres teszttel és Fisher-féle egzakt valószínűségek használták meghatározásához az különbsége PGC MUC1, MUC2 kifejezés az SG-AG-GC szekvencia és a különböző szövettani típusú GC. χ 2 teszt és a Fisher-valószínűségek használták meghatározásához az eltérés a koexpresszáltatása a három fehérje. A rank-sum tesztet és Spearman korreláció analízis segítségével elemeztük az összefüggéseket a különböző csoportokban. Minden statisztikai elemzést az SPSS (16.0) statisztikai program (SPSS, Chicago, USA). Az összes statisztikai teszt két oldalsó valószínűségi tesztet és a P katalógusa < 0,05 értéket tekintettük statisztikailag szignifikánsnak. Katalógusa Eredmények katalógusa kifejezése PGC MUC1, MUC2 GC és rákmegelőző betegségek csoportok
PGC kifejezése találtak citoplazmájában gyomornyálkahártya-sejtek (1a ábra). MUC1 expresszióját találtuk a citoplazmában és /vagy a membrán a gyomornyálkahártya sejtek (1 E. ábra). MUC2 fehérjét színezett citoplazmájában kehelysejtet (ábra 1J). 1. ábra A kifejezés a PGC, MUC1, MUC2 fehérjék különböző gyomornyálkahártya szövetekben (× 200). A. erős pozitív expresszióját PGC a gyomornyálkahártya felszíni gastritis (SG) csoport; B. Pozitív expressziója PGC a atrófiás gasztritisz (AG) csoport, egy kevés negatív kifejezés; C. negatív kifejezése PGC a közepesen differenciált adenocarcinoma (MDA) csoport; D. negatív kifejezése PGC a pecsétgyűrű sejtes karcinóma (SRCC) csoport. E. erős pozitív kifejeződése MUC1 az SG-csoport; F. pozitív kifejezése MUC1 az AG-csoport; G. pozitív kifejezése MUC1 a rosszul differenciált adenocarcinoma (PDA) csoport; H. negatív kifejezése MUC1 a SRCC csoport; I. negatív kifejezése MUC2 az SG-csoport; J. erős pozitív kifejeződése MUC2 az AG-csoport; K. pozitív kifejezése MUC2 PDA-csoport; L. erős pozitív kifejeződése MUC2 a mucinosus adenocarcinoma csoportban. A nyíl, amely minden eszközzel a sejtek kóros elváltozásokat.
A kifejezés jelentése a három fehérje különböző gyomor betegség csoportokat vizsgáltuk immunhisztokémiai analízis. PGC és MUC1 fehérje expressziója A GC-csoport szignifikánsan alacsonyabb volt, mint az SG és AG csoportban (p
< 0,05). MUC2 fehérje expresszió a GC-csoport szignifikánsan alacsonyabb volt, mint az AG csoport (p
< 0,001), de a kifejezés a SG csoport alacsonyabb volt, mint a GC-csoportban (p
< 0,001). Az összefüggés a PGC, MUC1 és MUC2 fehérje expresszió SG-AG-GC szekvencia elemezték ill. Találtunk voltak korrelációkat a három fehérje, és a betegség szekvencia (P katalógusa < 0,01); PGC és MUC1 mutatott negatív korrelációt az SG-AG-GC szekvencia (korrelációs együtthatók r = -0,770, r = -0,210, illetve P katalógusa < 0,001, P = 0,004 katalógusa -kal). MUC2 jelzett pozitív korrelációt az SG-AG-GC szekvencia (korrelációs együttható r = 0,260, P katalógusa < 0,001). Továbbá, a WHO szerint a szövettani osztályozás, a GC-csoport osztották magas és moderált adenokarcinóma (HMDA), gyengén differenciált adenocarcinoma (PDA), mucinosus adenocarcinoma vagy pecsétgyűrű sejtes karcinóma csoport (MA vagy SRCC) csoportokban. Azt találtuk, hogy MUC1 fehérje MA vagy SRCC csoportban szignifikánsan alacsonyabb, mint a HMDA és PDA csoportok (P katalógusa < 0,001, 2. táblázat), és MUC2 MA vagy SRCC csoportban szignifikánsan magasabb volt, mint a PDA-csoportban (p
= 0,013, 2. táblázat), de a PGC protein nem volt szignifikáns különbség a GC group.Table 2 gyakorisága PGC, MUC1 és MUC2 fehérje expresszió gyomor betegségek
Staining pontszám
SG Matton AG Matton GC Matton GC (n = 70) Matton
HMDA katalógusa
PDA Matton MA vagy SRCC
n = 57 Matton n = 57 Matton n = 70 Matton n = 28 Matton n = 30 Matton n = 12 Matton PGC katalógusa 2.0-3.0
19(33.3)
2(3.5)
0(0.0)
0(0.0)
0(0.0)
0(0.0)
1.0-1.9
29(50.9)
14(24.6)
0(0.0)
0(0.0)
0(0.0)
0(0.0)
0.1-0.9
9(15.8)
13(22.8)
0(0.0)
0(0.0)
0(0.0)
0(0.0)
0
0(0.0)
28(49.1)
70(100.0)
28(100.0)
30(100.0)
12(100.0)
P katalógusa 1 Matton < 0,0001 katalógusa < 0,0001 -
P katalógusa 2 Matton 1,000 katalógusa 1.000 -
MUC1 katalógusa 2.0-3.0
24(42.1)
29(50.9)
21(30.4)
12(42.9)
9(31.0)
0(0.0)
1.0-1.9
19(33.3)
19(33.3)
15(21.7)
8(28.6)
6(20.7)
1(8.3)
0.1-0.9
13(22.8)
9(15.8)
23(33.3)
7(25.0)
12(41.4)
4(33.0)
0
1(1.8)
0(0.0)
10(14.5)
1(3.6)
2(6.9)
7(58.3)
P katalógusa 3 Matton 0.012 katalógusa 0,0003 -
P katalógusa 4 Matton < 0,0001 0,0004 katalógusa -
MUC2
2.0-3.0
2(3.5)
46(80.7)
12(17.1)
6(21.4)
2(6.7)
4(33.3)
1.0-1.9
0(0.0)
6(10.5)
8(11.4)
3(10.7)
2(6.7)
3(25.0)
0.1-0.9
0(0.0)
3(5.3)
19(27.1)
9(32.1)
8(26.7)
2(16.7)
0
55(96.5)
2(3.5)
31(44.3)
10(35.7)
18(60.0)
3(25.0)
P katalógusa 5 Matton < 0,0001 katalógusa < 0,0001 -
P katalógusa 6 Matton 0,273 katalógusa 0,013 -
P katalógusa 7 Matton < 0,0001 katalógusa < 0,0001 -
P katalógusa 8 Matton < 0,0001 katalógusa < 0,0001 katalógusa - www.Booked.hu P katalógusa 9 Matton < 0,0001 katalógusa 0,001
- Megjegyzés: a statisztikai analízis használt paraméteres tesztek és a Fisher-tesztet. P katalógusa 1 katalógusa, P
3 katalógusa, P
5 katalógusa jelenti a jelentősége, mint a GC-csoport. P katalógusa 2

• Az I. fázisú vizsgálatban a neoadjuváns kemoradioterápia S-1 + kéthetente ciszplatin előrehaladott gyomorrák betegek nyirokcsomómetastasis: -KOGC04-
• Gyomor T-sejtes lymphoma társított hemofagocitikus syndrome