MYC, FBXW7 ir TP53 kopijuoti numerį svyravimus ir išraišką skrandžio vėžio

MYC, FBXW7 parsisiųsti ir TP53
kopijuoti numerį svyravimus ir išraišką skrandžio vėžys
tezės
Background pervežimas MYC dereguliavimo yra bendras renginys skrandžio kancerogenezėje, paprastai kaip genų amplifikacijos, TRANSLOKACIJA pasekmė arba posttranslational mechanizmai. FBXW7
yra p53 kontroliuojamų naviku slopintuvas, kad vaidina vaidmenį ląstelių ciklo išėjimo ir daugkartinio naudojimo reglamentavimo per MYC degradacija.
Metodai
Mes įvertinome Myc
, FBXW7
ir TP53
kopijos numeris, iRNR lygiui, ir baltymų ekspresija skrandžio vėžio ir suporuotas ne navikinių egzempliorių iš 33 pacientų, taip pat skrandžio adenokarcinoma ląstelių linijų. Taip pat nustatėme, invazijos potencialą skrandžio vėžio ląstelių linijų rezultatai.
MYC
amplifikacija buvo stebimas 51,5% skrandžio navikų mėginiuose. Išbraukus vieną kopiją FBXW7
ir TP53
buvo stebimas 45,5% ir 21,2% skrandžio auglių, atitinkamai. Myc
iRNR raiška buvo statistiškai reikšmingai didesnis navikų nei ne navikinių pavyzdžius. FBXW7 parsisiųsti ir TP53
iRNR raiška buvo žymiai mažesnė auglių nei suporuotas ne navikinių egzempliorių. Be to, nereguliuojama MYC parsisiųsti ir FBXW7
iRNR raiška buvo susijęs su limfmazgių metastazių ir naviko III-IV stadijos buvimas. Be to, MYC imunodažymu buvo dažniau pastebėti žarnyno tipo kaip difuzinis tipo skrandžio vėžio ir buvo susijęs su MYC pervežimas iRNR raiška. In vitro tyrimai parodė, kad padidėjo MYC ir sumažinta FBXW7 išraiška yra susijęs su daugiau invazinių fenotipas skrandžio vėžio ląstelių linijas. Šis rezultatas paskatino mus ištirti želatinazių MMP-2 ir MMP-9 abiejų ląstelių linijų veiklą. Abi želatinazių yra susintetintas daugiausia pagal stromos ląstelėse, o ne vėžinių ląstelių, ir ji buvo pasiūlyta, kad tiek prisidėti prie vėžio progresavimo. Mes nustatėme reikšmingą padidėjimą MMP-9 veiklos ACP02 palyginti su ACP03 ląsteles. Šie rezultatai patvirtino, kad ACP02 ląstelės turi didesnį invazija pajėgumus nei ACP03 ląsteles.
Išvada
Apibendrinant, FBXW7 ir MYC iRNR gali vaidinti svarbų vaidmenį agresyvaus biologinės elgsenos skrandžio vėžio ląsteles ir gali būti naudingas rodiklis prastos prognozės. Be to, MYC yra kandidatas taikiniu naujų gydymo nuo skrandžio vėžio.
Raktiniai žodžiai
Skrandžio vėžys MYC FBXW7 TP53 faktai
Skrandžio vėžys (GC) yra ketvirtoji dažniausia vėžio ir antroji pagrindinė priežastis, dėl vėžio mirties visame pasaulyje [1]. GC laikomas svarbia visuomenės sveikatos problema, ypač besivystančiose šalyse, įskaitant Brazilijos [2].
Esminis kancerogenezėje yra nekontroliuojamas ląstelių proliferacija atsiranda dėl pokyčių, skatinančių išraišką arba represijas ląstelės ciklo kontrolės genų kaupimąsi [3]. MYC
yra transkripcijos faktorius dalyvauja ląstelių ciklo reguliavimas ir ląstelių augimo sustojimas, paprastai nereguliuojamos į vėžio ir buvo aprašytas kaip pagrindinį elementą skrandžio kancerogenezėje [4, 5]. Keletas skirtingų tipų posttranslational modifikacijų MYC buvo aprašyti, įskaitant fosforilinimo, acetilinimo ir ubiquitination [6]. Ubikvitino-proteosomos sistema yra pagrindinis baltymų degradacija reguliavimo kelias dalyvauja ląstelių diferenciacijos ir augimo kontrolės [7]. FBXW7
koduoja F dėžutės baltymų subvienetą Skp1 /Cul1 /F-box komplekso (MMK) Ubikvitino ligazės sudėtinga. MMK FBXW7 skatina degradaciją teigiamų ląstelių ciklo reguliatorius genų, pavyzdžiui, cikloniniai E
Myc
, Notch
, ir birželis
produktų, per fosforilinimo priklausoma ubiquitination [8]. Tarp SCF FBXW7 substratų Myc yra ypač svarbus ląstelių ciklo išeiti, nes manoma, kad vaidinti svarbų vaidmenį nustatant, ar žinduolių ląstelės dalijasi, ar ne [9].
Nereguliuojamoje FBXW7
išraiška yra pagrindinė priežastis, apie kancerogeninio poveikio [10-12]. Praradimas FBXW7
išraiškos gali sukelti MYC raiškos ir buvo susijęs su blogos prognozės GC pacientų [13]. Tačiau Myc aktyvavimo FBXW7
praradimą sukelia aktyvavimo p53, kuri vaidina pagrindinį vaidmenį ląstelių atsaką į DNR pažeidimus ir nenormalus išraiška onkogenų reglamentą. Indukcija ląstelių ciklo areštas iki p53 leidžia DNR taisymo ar apoptozė indukcijos [14]. Taigi, kartu praradimas FBXW7
ir TP53
būtina sukelti genetinę nestabilumą ir tumorigenezei [11].
Šioje studijoje, mes ištirti Myc
, FBXW7
ir TP53
genų kopijų skaičiaus kitimas ir iRNR ir baltymų ekspresija GC pavyzdžių ir skrandžio adenokarcinoma ląstelių linijų. Taip pat buvo įvertintas galimas sąsajas tarp mūsų išvadas ir klinikos ypatumus ir /ar invazijos ir migracijos galimybes iš ląstelių linijų.
metodai
klinikinius mėginius
mėginiai buvo paimti iš 33 GC pacientams, kuriems buvo atlikta chirurginis gydymas tuo João de Barros Barreto universiteto ligoninė šmeižimo, Brazilija. Išpjaustytų naviko ir suporuoti ne navikiniai audinio mėginiai buvo nedelsiant išpjauti iš skrandžio ir užšaldyti skystame azote, kol RNR gavyba.
Klinikos ypatybes pacientų mėginių rodomi 1 lentelė GC mėginių buvo klasifikuojami pagal Lauren [15] , Visi GC mėginiai parodė, kad Helicobacter pylori
buvimą, o CagA virulentiškumo faktorius nulėmė PGR analizės karbamido parsisiųsti ir CagA
kaip aprašyta Clayton ir kt
. [16] ir Covacci ir kt.
[17], atitinkamai. Visi pacientai turėjo neigiamų istorijų poveikio arba chemoterapija ar radioterapija prieš operaciją, ir nebuvo jokių kitų bendraturčių įvykių diagnozuotų vėžio. Informuotas sutikimas su patvirtinimo etikos komisijos Federacinės universiteto Pará buvo obtained.Table 1 MYC, FBXW7 ir TP53 geno kopijų skaičiaus kitimas Myc ir p53 baltymo raiškos ir klinikos ypatumai 33 GC pacientų

CNV Myc

CNV FBXW7 pervežimas pervežimas pervežimas, CNV TP53 pervežimas pervežimas pervežimas IHC MYC pervežimas pervežimas IHC p53
2 egz (N = 16)

≥ 3 kopijos (n = 17)
P- vertė
2 egz (n = 18)
1 kopija (n = 15)
P- vertė
2 egz (n = 25)
1 kopija (n = 7)
p - vertė
P (n = 19)
N (N = 14)
P- vertė
P (N = 6)
N (N = 25)
P- vertė
Amžius (m) (vidurkis ± SN)
> 50 (65,3 ± 9.1)
7
12
0.166
12
7
0.304
15
3
0.393
10
4
0.310
5
9
0.094
≤50 (42,1 ± 8,2)
9
5
6 8
10
4 10
9
2
17
Lytis
Male
8
7
0.437
7
8
1.000
13
1
0.104
12
3
0.072
2
13
0.413
Female
8
10
8 12
10
5
13
6 8 10
Histopatologiniai
Intestinal
12
10
0.465
12
10
1.000
16
6
0.387
17
5
0.009*
6
16
0.378
Diffuse
4
7
6 5
9
1
3
8 1
10
Gylis naviko invazijos
T1
3
3
1.000
5
1
0.186
5
1
1.000
2
4
0.182
1
5
1.000
T2-T4
13
14
13
14
20
6
18
9
6
21
Limfmazgių metastazės
Absent
5
8
0.481
8
5
0.722
10
3
1.000
7
6
0.717
2
11
0.676
Present
11
9
10 10
15
13
7
5
15
4 etapas
I-II
8
10
0.732
12
6
0.170
14
3
0.678
12
6
0.493
3
15
0.674
III-IV
8
7
6
9
11
4
8
7
4
11
Myc IHC
Neigiama
5
8
0,481
7
6
1,000
11
2
0,671
Teigiamas
11
9
11
9
14
5
p53 IHC
Neigiama
14 12
0,398
14 12
1,000
21
4
0,157
teigiamas
2
5
4
3
4
3
* p
< 0,05; p teigiamas N:. neigiamas
ląstelių linijų
skrandžio adenokarcinoma ląstelių linijos ACP02 ir ACP03 [18] buvo auginamos visiškoje RPMI terpės (Invitrogen Corp, Karlovi Varai, CA, JAV) papildytas 10% vaisiaus galvijų serumo (FBS), 1% penicilinui /streptomicino, ir 1% kanamicino.
Kopijuoti skaičius variacijos (CNV)
DNR buvo išskirta naudojant DNAQiamp mini rinkinys (Qiagen, Hilden, Vokietija) pagal gamintojo instrukcijas. Dvipusis kiekybinė realaus laiko PGR (realaus laiko qPCR) buvo atliktas naudojant FAM /MGB žymėto TaqMan zondai MYC
(Hs01764918_cn), FBXW7
(Hs01362464_cn) arba TP53
(Hs06423639_cn) ir VIC /Tamra žymėto TaqMan CNV RNAse P
(.403.326) buvo naudojamas vidaus kontrolės. Visi realaus laiko qPCR reakcijos buvo atliktas keturiais egzemplioriais su gDNA pagal gamintojo protokolu, naudojant 7500 Greitas realiojo laiko PGR sistema (Life technologies ", Foster City, CA, JAV). Kopijos numeris kiekvieno mėginio buvo įvertintas CNV analizę, naudojant Kopijuoti Caller Software v1.0 (Life technologies "Foster City, CA, JAV). Žinomas žmogaus genomo DNR (Promega, Madisonas, JAV) buvo naudojamas kalibruojant.
Kiekybinis realaus laiko atvirkštinės transkriptazės PGR
RNR buvo išskirta su TRI reagento ® Sprendimas (Life Technologies Carlbad, CA, USA ) pagal gamintojo instrukcijas. RNR koncentracija ir kokybė buvo nustatoma naudojant NanoDrop spektrofotometru (Thermo Scientific, Wilmington, DE, USA) ir 1% agarozės gelius. Papildoma DNR (kDNR) buvo susintetintas naudojant didelės talpos kDNR Archyvas komplektas pagal gamintojo rekomendacijas (Life technologies "," Foster City, Kalifornija, JAV). Realaus laiko qPCR gruntai ir TaqMan zondai skirtos Myc
(Hs00153408_m1), FBXW7
(Hs00217794_m1) ir TP53
(Hs01034249_m1) buvo perkami kaip Bandymai-on-demand preparatų genų ekspresiją ((Life technologies ", . Fosteris Miestas, CA, JAV) Realaus laiko qPCR buvo atlikta naudojant "ABI PRISM 7500 sistemą (Life technologies", "Foster Miestas, CA, JAV) pagal gamintojo instrukcijas GAPDH
(NM_002046.3;. gyvenimas technologijos, JAV) buvo pasirinktas kaip vidaus kontrolės stebėsenos RNR įvestį ir atvirkštinės transkripcijos efektyvumą. Visos realaus laiko qPCR reakcijos tikslinių genų ir vidaus kontrolė buvo vykdoma trimis egzemplioriais ant tos pačios plokštelės. santykinis kiekybinis (RQ) genų išraiškos buvo apskaičiuojamas naudojant ΔΔCt metodas [19], kurioje ne neoplazminė mėginys buvo paskirta kaip ir kiekvieno prijungto auglio mėginį kalibratorių.
imunohistocheminis
imunohistocheminis analizes MYC ir p53 buvo atliktas formalinu fiksuotos, parafino-embedded chirurginių skyriuose. buvo naudojamas serijinių 3-mkm skyriai. Šilumos sukeltos antigenas paieška dirbo (mikroprocesorius kontroliuojamas slėgio Paskalis ® DakoCytomation, Carpinteria, CA, JAV). Universalus peroksidazės konjuguoto vidurinė antikūnų rinkinys (LSAB sistema, DakoCytomation, Carpinteria, Kalifornija, JAV), buvo naudojamas aptikti su diaminobenzidinas (DAB), kaip chromogeną. buvo naudojami šie pirminiai antikūnai: pele monokloninius antikūnus prieš MYC (skiedimo 1: 150; SC-40, Santa Cruz Biotechnologijos, Santa Krusas, Kalifornija, JAV ir klonuoti 9E10, Zymed ®, San Franciskas, CA, JAV) , FBXW7 (skiedimo 01:50, Abnova Corp Taipėjus, Taivanas) ir p53 (skiedimo 01:50; DakoCytomation, Carpinteria, Kalifornija, JAV). Teigiamas baltymo ekspresija buvo apibrėžtas kaip skaidrus, branduolinės dažymo daugiau nei 10% ląstelių.
Migracijos ir invazija tyrimas
migracijos ir invazija tyrimai buvo atliekami modifikuoto Boyden kameroje su filtro įdėklais (8-mkm porų), skirtų 12 duobučių plokštelės (BD biomokslų, San Jose, CA, JAV). Įvertinti invazija, filtrai buvo padengtas 10 pL Matrigel (10-13 mg /ml) (BD biomokslai, San Chosė, CA, USA), o ant ledo. Ląstelės (2 × 10 5) buvo padengtas į aukštutinį kambarį 1 ml RPMI be FBS. Apatinę kamerą buvo užpildyta su 1,5 ml RPMI su FBS. Po 48 h kultūra, ląstelės buvo fiksuojamas 4% paraformaldehido ir po nustatyto 0,2% violetinei 20% metanoliu. Ląstelės viršutinėje pusėje filtro, įskaitant ir tas, Matrigel, buvo pašalinta su medvilnės tamponu. Invazija ląstelės (ant apatinės pusės į filtrą) buvo fotografuojami ir suskaičiuoti. Eksperimentai buvo pakartotas tris kartus.
IMUNOFLUORESCENCIJOS
ląstelių išaugintus ant stiklo coverslips buvo nustatyti su 1% paraformaldehido tirpalo fosfato buferio druskų tirpalo (PBS) 10 min, po to membranos pralaidumu su 0,5% Triton X-100 (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, JAV) PBS 15 min ir užblokuotas su 1% galvijų serumo albumino (BSA) PBS. Ląstelės buvo tamsintas su pele antikūnų prieš MYC (skiesti 1:50; Zymed ®, JAV), p53 (skiesti 1:50; DakoCytomation, Carpinteria, Kalifornija, JAV), ir FBXW7 (skiesti 1:50; Abnova Corp. ., Taipei City, Taivanas). Pirminiai antikūnai buvo atskleista naudojant anti-pelės Alexa-568-konjuguoto vidurinį antikūnas (Invitrogen). Visi Inkubaci buvo atlikti 60 min, esant kambario temperatūrai. Branduoliai buvo tamsintas su DAPI į prailginti anti-išblukimo montavimo terpe (Invitrogen). Neigiami kontroliniai mėginiai buvo apdorojami kaip aprašyta aukščiau išskyrus tai, kad pirminiai antikūnai buvo praleista ir pakeisti vien PBS.
Vakarų pernašos
baltymų išskyrimo iš ląstelių buvo atliktas pagal standartines procedūras. Trumpai tariant, bendras baltymas išgaunamas iš ACP02 ir ACP03 ląstelių naudojant 50 mM Tris-HCl buferio, kuriame yra 100 mmol /l NaCl, 50 mm NaF, 1 mM NAVO 4, 0,5% NP-40, ir visiškai proteazės inhibitorius kokteilis (Roche " , Vokietija). Baltymų koncentracija buvo apskaičiuota naudojant Bradford tyrimą (Sigma-Aldrich). Apie 30 mikrogramų nuo bendros baltymų ekstrakto buvo pakrauta į 12% natrio dodecilsulfato-poliakrilamido gelio elektroforezės (SDS-PAGE) gelio ir elektroforezė. tada išspręsti baltymai buvo perduotas iš gelio ant nitroceliuliozės membranos. Membrana buvo užblokuotas su 5% Nonfat pieno tri-buferio druskų tirpalu, turinčiu 5% Tween (Sigma-Aldrich, Sant Louis, MO, USA), ir inkubuojami su pelių monokloninius anti-MYC (Santa Cruz Biotechnology), anti-FBXW7 (Abnova , Taipei City, Taivanas), anti-p53 (DakoCytomation, Carpinteria, Kalifornija, JAV), ir anti-β-aktino (Sigma-Aldrich, Sant Louis MO, JAV) antikūnai skiesti santykiu 1: 200, 1: 100, 1: 100, ir 1: 2000, atitinkamai. Vėliau, Membranos buvo inkubuojamos su 1: 5000 praskiedus krienų peroksidazės (HRP) konjuguoto avių antikūnų prieš pelės baltymus (Amersham Biosciences, Piscataway, NJ, JAV) 1 val kambario temperatūroje. Baltymai buvo regimos glaudesnio cheminės liuminescencijos.
Zymography
ACP02 ir ACP03 ląstelės (5 × 10 4 vienas) buvo padengtas ir leido laikytis ir skleisti mažiausiai 8 val. Prisitvirtinę ląstelės buvo tris kartus plaunamos PBS, ir kultūrinė terpė buvo pakeistas su terpėje 24 h serumo neturinčioje. Iš MMP2 ir MMP9 į sąlygoja vidutinio veikla buvo įvertinta zymography. Kondicionieriumi vidutinės buvo surinkti, koncentruotos (Microcon 30 K, "Merck Millipore", Darmstadt, Vokietija) ir resuspenduojamos SDS-PAGE pavyzdžių buferio (be beta-merkaptoetanolio). Likusios ląstelės buvo lizuoti ir baltymų koncentracija buvo apskaičiuota naudojant BCA tyrimą (Thermo Scientific Pierce, Rockford, IL, JAV). Pagal 1 mikrogramų baltymo viso iš kiekvienos apdorotų terpė buvo atskirta 10% poliakrilamido gelius, kurių sudėtyje yra 0,2% želatinos. Po to, kai elektroforezės geliai buvo išplautos 2,5% Triton X-100, 30 min, po to, ekvilibruotos 10 mM Tris (pH 8,0) ir inkubuojama 37 ° C temperatūroje 16-24 h vystymosi buferio, kurio sudėtyje yra 50 mM Tris (pH 8,0 ), 5 mm CaCl 2 ir 0,02% NaN 3. Geliai buvo tamsintas su 0,2% Coomassie mėlyna R250 (GE Amersham, Piscataway, NJ, JAV) ir destained su 1: 1 acto rūgštis /metanolio tirpalu. Eksperimentai buvo pakartotas tris kartus. Zymographic juostos, kurios rodo MMP veiklos, buvo kiekybiškai skenuojant Densitometry.
Statistines analizes Viesbutis The kintamųjų skirstinių normalumas buvo nustatomas naudojant Šapiro-Wilk testą. Asociacijos tarp MYC
, FBXW7
ir TP53
kopijų skaičiaus variacija, iRNR lygiui, baltymų ekspresiją, klinikos funkcijas ir ląstelių invazija ir migracijos galimybes buvo analizuojami naudojant chi kvadrato (χ 2) ir Mann-Whitney testas. Koreliacija tarp išraiškos įvairių tikslinių mRNR buvo nustatoma naudojant Spearman testą, kuriame nurodyta suma yra mažesnė nei 0,3 silpną koreliaciją, 0,3-0,7 nurodė vidutinio koreliaciją, ir reikšmės 0,7 nurodyta stiprią koreliaciją. Duomenys rodomi kaip vidurine o interkvartilinis diapazone; P vertės yra mažesnės nei 0,05 buvo laikomas reikšmingu.
rezultatai
skrandžio naviko pavyzdžiai parodė amplifikacija myc
ir ištrynimo FBXW7
ir TP53
Trys ar daugiau kopijų MYC
buvo rasta 51,5% (17/33) skrandžio naviko ląstelių. Priešingai, 45,5% (15/33), o 21,2% (7/33) skrandžio naviko ląstelių, kurių tik viena kopija FBXW7
ir TP53
, atitinkamai.
Tarp klinikos funkcijų ir MYC FBXW7
ir TP53
kopijos numeris yra apibendrinti 1 lentelėje Vienas skrandžio naviko, kad pateikta trimis egzemplioriais TP53
buvo pašalintas iš chi-kvadrato analize. Nenustatyta priklausomybės tarp kopijų skaičiaus kitimo genų studijavo ir klinikos funkcijų.
MYC
iRNR raiška buvo didesnė navikų nei ne navikinių egzempliorių, o FBXW7
ir TP53
iRNR raiška buvo mažesnė naviko pavyzdžiai
išraiškos lygį Myc
mRNR (2,01 ± 1,72 kartų kaitos) naviko audinių pavyzdžių buvo gerokai didesnis nei ne neoplastiniu audinio (p = 0,0002), o ekspresijos lygį FBXW7
iRNR (0,53 ± 0,40 kartų kaita) ir TP53
iRNR (0,84 ± 0,55 kartų kaita) naviko audinių pavyzdžių buvo gerokai mažesnis nei ne neoplastiniu audinio (p < 0,0001 ir p = 0,0011, atitinkamai). Neradome reikšmingą koreliaciją tarp MYC
, FBXW7
ir TP53
iRNR išraiškos (MYC
/FBXW7
iRNR R = -0,3464, p = 0,0562; MYC
/TP53
iRNR r = 0,0950, p = 0,6113; FBXW7
/TP53
iRNR R = -0,0745, p = 0,4747). Taigi, buvo aptiktas tik tendencija link koreliacija tarp priedą MYC padidėjimo pervežimas iRNR išraiškos ir į FBXW7
iRNR išraiškos sumažėjimas.
2 lentelė apibendrina tarp įvairių klinikos ypatumų ir MYC
RQ asociacijas , FBXW7
ir TP53
iRNR raiška navikas ir suporuoti ne navikiniai bandiniai. In MYC
iRNR lygio padidėjimas buvo susijęs su limfmazgių metastazių (p = 0,016) ir GC navikas III-IV stadijos (p = 0.036) buvimą. Ženkliai sumažinti FBXW7
iRNR lygio taip pat buvo susijęs su buvimas limfmazgių metastazių (p = 0,015) ir naviko III-IV stadijos (p = 0,008) .table 2 MYC, FBXW7 ir TP53 iRNR raiška lygiai ir klinikos veiksniai apie 33 skrandžio vėžiu sergantiems pacientams

N (%)
MYC
P- vertė
FBXW7

P- vertė
TP53
P- vertė
mediana ± IQR
mediana ± IQR
mediana ± IQR
Amžius (y) (vidurkis ± SN)
> 50 (65,3 ± 9,1)
19 (57,6%)
2.04 ± 1.35
0.8873
0,55 ± 0,37
0,9247
0,86 ± 0,62
0,7409
≤50 (42,1 ± 8,2)
14 (42,4%)
1.44 ± 4.88
0,53 ± 0,50
0,94 ± 1,65
Lytis
Male
15 (45,5%)
2.01 ± 1.01
0,4065
0,53 ± 0,22
0,6353
0,89 ± 0,58
0,8125
Moteris
18 (54,5%)
1,67 ± 2,03
0,56 ± 0,56
0,87 ± 0,69
histopatalogiją
žarnyno
22 (66,7%)
2,06 ± 0,99
0,3525
0,53 ± 0,16
0,1391
0,81 ± 0,78
0,3311
Difuzinė
11 (33,3%)
1,40 ± 2,32
0,77 ± 0,74
0,94 ± 0,38
Gylis naviko invazija
T1
6 (18,2%)
0,89 ± 0,47
0.0857
0,88 0,58
± 0,0678
0,85 ± 0,15
0.7069
T2 T4
27 (81,8%)
2.08 ± 1.42
0,53 ± 0,43
0,79
0,91 ± Limfmazgių metastazės
NEBŪTI
13 (39,4%)
0,98 ± 1,09
0,0225 *
0,68 ± 0,36
0,0238 *
0,84 ± 0,44
0,6121
Pateikite
20 (60,6%)
2.10 ± 2.20
0,46 ± 0,38
0,79
0,94 ± etapas
I-II
18 (54,5%)
1,39 ± 1,23
0.0362 *
0.57 ± 0.38
0.0380 *
0,83 ± 0,55
0,0892 †
III-IV
15 (45,5%)
2.41 ± 2.79
0,34 ± 0,45
0,96 ± 1,19
MYC IHC
teigiamą
20 (60,6%)
2.18 ± 1.59
0,0022 *
0,53 ± 0,32
0,4090
0,81 ± 0,57
0,1372
Neigiama
13 (39,4%)
0,89 ± 0,85
0,58 ± 0,53
0,99 ± 0,90
p53 IHC
teigiamą
7 (21,2%)
4.25 ± 6.53
0.0891
0,64 ± 0,68
0,9203
0.83
0,2937
1,06 ± Neigiama
26 (78,8%)
2,00 ± 1,44
0,55 ± 0,35
0,87 ± 0,60
* p
< 0,05; IQR:. Interkvartilinis asortimentas
atominės MYC baltymų dažymas yra susijusi su žarnyno tipo GC
Teigiamas dažymo branduolinės MYC ir p53 buvo rasta 64,5% (20/31) ir 19,4% (6/31) GC mėginių atitinkamai (1 paveikslas). Nėra pozityvumo už FBXW7 buvo rasta. 1 lentelė apibendrina klinikos ypatybes ir Myc ir p53 imunodažymu rezultatus. Išraiška MYC buvo dažnesnės žarnyno tipo kaip difuzinis tipo GC (p = 0,007). Be to, MYC imunodažymu buvo susijęs su padidėjusia MYC pervežimas iRNR lygio (p = 0,0022). Nenustatyta priklausomybės tarp p53 imunodažymu ir klinikos ypatumus, TP53
kopijų skaičiaus, ar TP53
iRNR išraiška. 1 pav Imunohistocheminis analizė MYC ir p53 baltymo raiška GC. (A) neigiama MYC imunodažymu į difuzinis tipo GC; (B), MYC imuninė pozityvumo ir žarnyno tipo GC; (C) Teigiamas p53 imunodažymu į difuzinis tipo GC; (D) P53 imuninės teigiamas, žarnyno tipo GC (Didinimas × 40).
Palyginimas ACP02 ir ACP03 ląstelių linijų
Abu ACP02 ir ACP03 ląstelių, kurių trys Myc
kopijas ir tik vienas FBXW7
kopiją , Iš TP53
kopijų skaičius buvo Nenustatyta tiek ląstelių linijų. Palyginti su mRNR ekspresijos ACP03 ląsteles, ACP02 ląstelės išreiškė aukštesnio lygio MYC
(1,34 karto) ir žemesnių lygių FBXW7
ir TP53
mRNR (0.62- ir 0,73 karto, atitinkamai).
Vakarų dėmė analizė parodė, kad MYC išraiška buvo reikšmingai didesnis ACP02 ląstelių nei ACP03 ląstelių (p = 0,048). Be to, FBXW7 išraiška buvo žymiai mažesnis ACP02 ląstelių nei ACP03 ląstelių (p = 0,049). Tačiau nebuvo reikšmingo skirtumo p53 išraiškos tarp ląstelių linijas (p = 0,077) (pav 2A-B),.
Imunofluorescentinis analizė abiejų baltymų parodė taškinės modelio ženklinimo, remti Vakarų dėmė rezultatus rodantis padidinti MYC ir sumažinti FBXW7 raiškos ACP02 ląstelių, lyginant su ACP03 (2 paveikslas). Matrigel invazija tyrimo rezultatai parodė, kad ACP02 ląstelės buvo labiau invazinės nei ACP03 ląstelių (p = 0,001). Migracijos tyrimo rezultatai parodė, kad mažiau ACP02 ląstelės migravo palyginti su ACP03 ląstelių (p = 0,0028) (pav 2C-D). 2 pav MYC, FBXW7 ir p53 raiška, migracija ir invazija gebėjimas ACP02 ir ACP03. (A) Grafikas Rodyti vidurkis ± SD myc, FBXW7 ir p53 baltymo raiškos ACP02 ir ACP03. Šie baltymai buvo standartizuoti beta aktino lygiu; (B) atstovas duomenis MYC, FBXW7 ir p53 baltymo raiškos; (C-D) Grafikai rodo vidurkis ± SN migracijos ir invazinių ląstelių trimis egzemplioriais analizė; (R) atstovas rezultatai MYC, FBXW7 ir p53 imr.rnofluorescencija
Tiek ACP02 ir ACP03 ląstelių pristatė keturis gelatinazė aktyvumas juostos:. MMP-9 latentinis (92 kDa), MMP-9 veikia (88 kDa), MMP-2 latentinis ( 72 kDa), ir MMP-2 aktyvus (66 kDa) (3 pav.) Neradome reikšmingų skirtumų MMP-9 latentinės (p = 0.9788), MMP-2 aktyvus (p = 0,7848), ir MMP-2 latentinis (p = 0,1678) tarp ACP02 ir ACP03 ląsteles. Tačiau buvo nustatyta, reikšmingų skirtumų tarp ACP02 ir ACP03 ląstelių atžvilgiu MMP-9 aktyvaus (p = 0.0182). 3 paveikslas atstovas želatina zymography analizę MMP-2 ir MMP-9 aktyvumą ACP02 ir ACP03. (A) Juostos, atitinkantys abiejų paslėptų ir aktyvių formų MMP-2 ir MMP-9 buvo pastebėtas ACP02 ir ACP03. Densitometric analizės duomenys yra iš juostų, atitinkančių slapto ir aktyvių formų MMP-2 (B) ir MMP-9 (C).
Aptarimas
Esant dabartinei tyrimo, mes nustatėme, kad MYC
mRNR išraiška buvo padidintas GC mėginių, palyginti su atitinkamomis ne neoplastiniq mėginius. Be to, mūsų žiniomis, tai pirmasis tyrimas, pranešti tarp padidėjusio MYC asociaciją
iRNR laisvę ir limfmazgių metastazių ir CG III-IV stadijos buvimas, stiprinant idėją, kad Myc
reguliavimo panaikinimas yra stiprus veiksnys piktybinių navikų GC.
Adams et al
. [20] ir Leder ir kt.
[21] parodė, kad Myc
iRNR raiška reguliavimo panaikinimas gali skatinti vėžio vystymąsi transgeninių pelių modelių. Į Myc
iRNR lygio žmogaus vėžio padidėjimas gali lemti tiek tiesioginių ir netiesioginių mechanizmų, kurie galėtų turėti keletą paaiškinimų. Pirma, Myc
amplifikacija yra labiausiai paplitusi mechanizmas Myc
dereguliavimo GC [5]. Šis mechanizmas veda prie padidėjusios gamybos onkogeninių produktų tokiais kiekiais, kurie viršija transkripcijos pajėgumą normalios dvigubo kopijavimo geno. Čia mes nustatėme tris ar daugiau Myc
genų kopijas 51,5% skrandžio navikų mėginių. Ankstesni tyrimai iš mūsų grupės taip pat parodė, kad MYC
amplifikacija arba trisomija chromosomos 8, ant kurių yra MYC
, veikė visų GC ištirti prekės pavyzdžiai iš asmenų Šiaurės Brazilija, taip pat kaip ir GC ląstelių linijų nustatytų Mūsų grupė nuo navikų Brazilijos pacientų [18, 22-27]. Iš MYC pervežimas amplifikacijos buvimas taip pat buvo pranešta plazmos mėginių iš asmenų su GC [28]. Tačiau nėra tiesioginio ryšio tarp Myc
kopijuoti skaičius variacijos ir iRNR raiška buvo aptiktas šio tyrimo.
Antra, į MYC padidėjimas
iRNR išraiškos gali atsirasti nuosekliai rekombinacija tarp imunoglobulino (Ig) lokuso ir Myc
onkogeno. Šis reiškinys dažnai aprašyta burkitt limfoma ir yra susijęs su ilgesniu pusinės eliminacijos Myc
mRNR paveiktose ląstelėse [29]. Anksčiau, mūsų tyrimų grupė pastebėjo, Myc
intarpai difuzinis tipo GC daugiausia į chromosomų, kurios yra susietas su genų imunoglobulinų (chromosomos 2, 14, ir 22) [26]. Taigi, TRANSLOKACIJA apimantys Myc
lokuso (8q24) į difuzinis tipo CG asmenims nuo Šiaurės Brazilijoje taip pat gali atspindėti į MYC padidinti
iRNR lygiu.
Imunohistocheminis (IHC) analizė atskleidė, kad MYC išraiška yra dažniau randamas žarnyno tipo GC nei išsklaidyti tipo GC egzempliorių. Šie pakitimai gali sukelti neįprastą MYC baltymų, kurie nėra pripažintos vienu iš antikūnų naudojami šiame tyrime. Be to, mes nustatėme ryšį tarp MYC pervežimas iRNR ekspresijos lygio ir MYC dažymo asociacija. Be to, posttranscriptional mechanizmai kontroliuoti Myc stabilumą [6, 30]. Myc
dereguliavimo buvo susijęs su nuostolių FBXW7
A haploinsufficient auglio slopinamojo geno. Apskritai, FBXW7
praradimas gali sukelti nuostolių heterozigotiškumo (LOH) ir mutacijos [30]. Nuostolis ne 4Q, The FBXW7
lokuso, yra pasikartojanti chromosomų pakitimai GC [31, 32], ir FBXW7
mutacijos buvo rasta 3.7-6% skrandžio navikų [12].
Šiame tyrime mes nustatėme tik vieną kopiją FBXW7
geno 45,16% skrandžio navikų mokėsi. Įdomu tai, kad FBXW7
iRNR raiška GC pavyzdžių yra gerokai sumažėjo, palyginti su atitinkamomis ne neoplastinį audinį. Be to, FBXW7
mRNR išraiška reguliavimą buvo susijęs su limfmazgių metastazių ir GC III-IV stadijos buvimas, kaip buvo pastebėta MYC
mRNR. Šie duomenys patvirtina, kad Yokobori El Al darbą.
[13], kuris taip pat parodė ryšį tarp riboto FBXW7
iRNR išraiška ir limfmazgių metastazių asociaciją, kuri prisideda prie piktybinio potencialo GC ląstelių ir rezultatų blogos prognozės. Be to, mes nustatėme, kad MYC
ir FBXW7
mRNR ekspresijos linkę būti atvirkščiai koreliuoja šiame tyrime.
Keletas tyrimų parodė, kad MYC
nukenksminti slopina auglių gyvūnų, o tai rodo, kad MYC
gali būti molekulinis taikiniu, vėžio gydymo [33-35]. Arba Soucek kt
. [36] siūloma, kad FBXW7 gali palengvinti "naviko ramybės terapija". Tokiu būdu, MYC skaidymas FBXW7 gali ne tik sukelti naviko ramybės būseną, bet taip pat gali turėti Priešnavikinio poveikį. Visi autoriai skaityti ir patvirtino galutinį rankraštį.

• Helicobacter pylori infekcija ir cirkuliuojančių ghrelin lygiai - sisteminis review
• "Paspartintos" reabilitacijos po skrandžio vėžio rezekcijos: patirtis su 80 cases