MYC, FBXW7 és TP53 kópiaszám variáció és a véleménynyilvánítás Gyomor- Cancer

MYC, FBXW7 katalógusa és TP53 katalógusa kópiaszám variáció és a véleménynyilvánítás gyomorrákban katalógusa Abstract Background katalógusa katalógusa MYC dereguláció gyakori esemény gyomor karcinogenezis, általában annak következtében, génamplifikáció, kromoszóma transzlokációk, vagy poszttranszlációs mechanizmusokat. FBXW7 katalógusa egy p53-vezérelt tumor szuppresszor, amely szerepet játszik a sejtciklus szabályozásában kilépés és visszatérés útján MYC lebomlását. Katalógusa Módszerek katalógusa értékeltük MYC katalógusa, FBXW7 katalógusa, és TP53
kópiaszám, mRNS szinteket, és fehérje expresszió gyomorrák és párosítva nem daganatos minták 33 beteg és a gyomor adenokarcinóma sejtvonalak. Azt is megállapítottuk, invazivitású a gyomor rákos sejtvonalak. Katalógusa Eredmények
MYC katalógusa erősítés volt megfigyelhető 51,5% -a gyomor tumor mintákban. Törlését egy példányt FBXW7 katalógusa és TP53 katalógusa volt megfigyelhető 45,5% és 21,2% a gyomor daganatok, ill. MYC
mRNS expressziója szignifikánsan magasabb volt a daganatok, mint a nem-neoplasztikus mintákon. FBXW7
és TP53
mRNS expressziója lényegesen kisebb volt a daganatok, mint a páros nem neopláziás példányok. Sőt, deregulált MYC
és FBXW7
mRNS expressziós járt jelenlétében nyirokcsomó-metasztázis és tumor stádium III-IV. Emellett MYC immunfestést gyakrabban figyeltek bél típusú, mint a diffúz típusú gyomorrák és társult MYC katalógusa mRNS expresszióját. In vitro vizsgálatok azt mutatták, hogy a fokozott MYC és csökkentett FBXW7 kifejezés társított több invazív fenotípust gyomor rákos sejtvonalak. Ez az eredmény arra ösztönzött bennünket, hogy vizsgálja meg a tevékenység a zselatinázok MMP-2 és MMP-9 mindkét sejtvonalban. Mindkét zselatinázok szintetizálódnak túlnyomórészt stromális sejtek helyett a rákos sejteket, és azt javasolták, hogy mind hozzájárulnak a rák progressziójának. Megfigyeltük jelentős növekedését MMP-9-aktivitás ACP02 képest ACP03 sejteket. Ezek az eredmények megerősítették, hogy ACP02 sejtek nagyobb inváziós képessége, mint ACP03 sejteket.
Következtetés
Összefoglalva, FBXW7 és MYC mRNS szerepet játszhat agresszív biológiai viselkedésének gyomor rákos sejteket, és hasznos lehet a mutatója a rossz prognózissal. Továbbá MYC egy kiszemelt új gyógymódok ellen gyomorrákban. Katalógusa Kulcsszavak katalógusa Gyomorrák MYC FBXW7 TP53 Háttér katalógusa gyomorrák (GC) a negyedik leggyakoribb daganat a második vezető daganatos halálok világszerte [1]. GC tekinthető jelentős népegészségügyi problémát jelent, különösen a fejlődő országokban, mint Brazília. [2]
egy alapvető szempontja carcinogenezis szabályozatlan sejtburjánzás eredő felhalmozódása változásokat, amelyek elősegítik a kifejezést, vagy az elnyomás, a sejtciklus-szabályozás gének [3]. MYC katalógusa egy transzkripciós faktor részt vesz a sejtciklus szabályozásában és a sejtek növekedési gátlás, amely általánosan szabályozatlan a rák és már le kulcseleme gyomor carcinogenesis [4, 5]. Számos különböző típusú poszttranszlációs módosításai MYC leírták, beleértve a foszforiláció, acetilezés és ubikvitinezés [6]. Az ubiquitin-proteaszóma rendszer a legfontosabb fehérje lebomlását szabályozó útvonal részt vesz a sejt differenciálódás és a növekedési kontroll [7]. FBXW7 katalógusa kódol egy F-box fehérje alegység a Skp1 /Cul1 /F-box komplex (SCF) ubiquitin ligáz összetett. SCF FBXW7 indukálja lebomlási termékeinek pozitív sejtciklus szabályozó gének, mint például a ciklin E
, MYC
Notch
, és június
keresztül foszforiláció-függő ubikvitinezés [8]. Közül SCF FBXW7 szubsztrátok, MYC különösen fontos a sejtciklus kilépési mert úgy gondolják, hogy szerepet játszik annak meghatározásában, hogy emlős sejtek osztódnak, vagy sem [9].
Szabályozatlan FBXW7
kifejezés az egyik fő oka carcinogenezis [10-12]. Elvesztése FBXW7 katalógusa kifejezés vezethet MYC overexpresszió és összefüggésbe hozták a rossz prognózissal GC betegeknél [13]. Azonban MYC aktiválás FBXW7
veszteség kiváltja aktiválását p53, amely kulcsszerepet játszik a szabályozásában celluláris válaszok DNS-károsodás és abnormális expressziója onkogének. Indukciója sejtciklus által p53 lehetővé teszi a DNS-javító vagy apoptózis indukció [14]. Így egyidejű elvesztése FBXW7 katalógusa és TP53 katalógusa ösztönzéséhez szükséges genetikai instabilitás és a tumorgenezis [11].
A jelen tanulmányban azt vizsgáltuk MYC katalógusa, FBXW7 katalógusa, és TP53
gén kópiaszám variáció és mRNS és fehérje expresszió GC minták és gyomor adenokarcinóma sejtvonalak. Lehetséges összefüggést észleltünk és klinikopatológiai jellemzők és /vagy invázió és migrációs képessége a sejtvonalak is értékelték. Katalógusa Módszerek
Klinikai minták katalógusa vettünk 33 GC átesett betegek műtéti kezelése a João de Barros Barreto Egyetemi Kórház Pará államban, Brazíliában. Boncolt tumor és párosítva nem neoplasztikus szövet mintákat azonnal kivágjuk a gyomor és folyékony nitrogénben lefagyasztottuk, míg RNS-extrakció.
Klinikopatológiai jellemzői a beteg minták az 1. táblázat mutatja a GC mintákat szerint osztályozott Lauren [15] . Minden GC mintát mutatta Helicobacter pylori jelenléte katalógusa, és a cagA virulencia faktor határoztuk meg PCR-analízissel karbamid
és cagA
által leírt Clayton és munkatársai katalógusa. [16] és Covacci et al.
[17], ill. Minden betegnél negatív múltbeli expozíció vagy kemoterápia vagy sugárkezelés a műtét előtt, és nem volt más együttes előfordulását diagnosztizált rák. Tájékozott beleegyezés jóváhagyásával az etikai bizottság a Federal University of Pará volt obtained.Table 1 MYC, FBXW7 és TP53 gén kópiaszám variáció, MYC és p53 fehérje expresszióját és klinikopatológiai jellemzők 33 GC betegek
CNV MYC
CNV FBXW7
CNV TP53
IHC MYC Matton IHC p53
2 példányban (n = 16) Matton ≥ 3 példányban (n = 17) Matton p-érték
2 példányban (n = 18) Matton 1 példány (n = 15) Matton p-érték
2 példányban (n = 25) Matton 1 példány (n = 7) Matton p - érték
P (n = 19) Matton N (n = 14) Matton p-érték
P (n = 6) Matton N (n = 25) Matton p-érték
Életkor (y) (átlag ± SD) hotelben > 50 (65,3 ± 9.1)
7
12
0.166
12
7
0.304
15
3
0.393
10
4
0.310
5
9
0.094
≤50 (42,1 ± 8,2) hotelben 9 katalógusa 5 katalógusa 6 katalógusa 8 katalógusa 10 katalógusa 4 katalógusa 10 katalógusa 9 katalógusa 2 | 17 katalógusa nemek
Male
8
7
0.437
7
8
1.000
13
1
0.104
12
3
0.072
2
13
0.413
Female
8
10
8 katalógusa 10 katalógusa 12 katalógusa 6 katalógusa 8 katalógusa 10 katalógusa 5 katalógusa 13 katalógusa Hisztopatológia
Intestinal
12
10
0.465
12
10
1.000
16
6
0.387
17
5
0.009*
6
16
0.378
Diffuse
4
7
6 katalógusa 5 katalógusa 9 katalógusa 1 katalógusa 3 katalógusa 8 katalógusa 1 katalógusa 10 katalógusa mélysége tumor invázió
T1
3
3
1.000
5
1
0.186
5
1
1.000
2
4
0.182
1
5
1.000
T2-T4
13
14
13 katalógusa 14 katalógusa 20 katalógusa 6 katalógusa 18 katalógusa 9 katalógusa 6 katalógusa 21 katalógusa nyirokcsomó metasztázis
Absent
5
8
0.481
8
5
0.722
10
3
1.000
7
6
0.717
2
11
0.676
Present
11
9
10 katalógusa 10 katalógusa 15 katalógusa 4 katalógusa 13
7 katalógusa 5 katalógusa 15 katalógusa Stage
I-II
8
10
0.732
12
6
0.170
14
3
0.678
12
6
0.493
3
15
0.674
III-IV
8
7
6 katalógusa 9 katalógusa 11
4 katalógusa 8 katalógusa 7 katalógusa 4 katalógusa 11
MYC IHC katalógusa Negatív katalógusa 5 katalógusa 8 katalógusa 0,481
7
6 katalógusa 1,000 katalógusa 11 katalógusa 2 | 0,671 katalógusa Pozitív katalógusa 11
9 katalógusa 11 katalógusa 9 katalógusa 14
5 katalógusa p53 IHC katalógusa Negatív katalógusa 14 katalógusa 12 katalógusa 0,398 katalógusa 14 katalógusa 12 katalógusa 1,000 katalógusa 21 katalógusa 4 katalógusa 0,157 katalógusa pozitív katalógusa 2 | 5 katalógusa 4 katalógusa 3 katalógusa 4 katalógusa 3 katalógusa * p katalógusa < 0,05; P = pozitív; N: negatív. katalógusa sejtvonalak
Gyomor adenocarcinoma sejtvonal ACP02 és ACP03 [18] sejteket komplett RPMI-tápközegben (Invitrogen Corp., Carlsbad, CA, USA), kiegészítve 10% magzati borjúszérummal (FBS), 1% penicillin /sztreptomicint és 1% kanamicin.
kópiaszám variáció (CNV) katalógusa DNS-t extraháltunk alkalmazásával DNAQiamp mini kit (Qiagen, Hilden, Németország), a gyártó utasításai szerint. Duplex kvantitatív valós idejű PCR (real-time qPCR) alkalmazásával hajtottuk végre a FAM /MGB-jelzett TaqMan próbák MYC katalógusa (Hs01764918_cn), FBXW7 katalógusa (Hs01362464_cn) vagy TP53 katalógusa (Hs06423639_cn), és VIC /TAMRA-jelzett TaqMan CNV RNáz P katalógusa (Ƹ3326) használtunk a belső kontrollként. Minden valós idejű qPCR reakciókat hajtottunk végre négy példányban a gDNS szerint a gyártó protokollt használja a 7500 Fast Real-Time PCR System (Life Technologies, Foster City, CA, USA). Kópiaszámának egyes minta becsültük CNV analízissel Copy hívófél Software v1.0 (Life Technologies, Foster City, CA, USA). Ismert humán genomiális DNS-t (Promega, Madison, USA) használtunk a kalibráláshoz.
Kvantitatív, valós idejű reverz transzkriptáz PCR
Az összes RNS-t extraháltuk, TRI-reagens alkalmazásával ® Solution (Life Technologies, Carlbad, CA, USA ) a gyártó utasításai szerint. RNS-koncentráció és a minőség segítségével határoztuk meg egy NanoDrop spektrofotométerrel (Thermo Scientific, Wilmington, DE, USA) és 1% -os agaróz gélen. Komplementer DNS (cDNS) alkalmazásával szintetizáltuk egy nagykapacitású cDNS Archive szerinti készlet a gyártó ajánlásai (Life Technologies, Foster City, CA, USA). Valós idejű qPCR primereket és TaqMan célzás MYC katalógusa (Hs00153408_m1), FBXW7 katalógusa (Hs00217794_m1), és TP53 katalógusa (Hs01034249_m1) vásároltuk, mint esszék-on-Demand Termékek Gene Expression ((Life Technologies, Foster City, CA, USA). Valós idejű qPCR végeztünk ABI Prism 7500 rendszer (Life Technologies, Foster City, CA, USA) alkalmazásával a gyártó utasításai szerint. GAPDH katalógusa (NM_002046.3; Life Technology, USA) választották egy belső kontroll monitorozására RNS bemeneti és reverz transzkripció hatékonyságát. Minden valós idejű qPCR reakciókat célgének és belső ellenőrzéseket háromszori ismétléssel végeztük, az ugyanazon a lemezen. a relatív mennyiségi (RQ) a génexpresszió alkalmazásával számítottuk ΔΔCt módszer [19], amelyben a nem-neoplasztikus mintát jelölték ki kalibrátor minden összekapcsolt tumor mintában.
Immunhisztokémia
immunhisztokémiai elemzések MYC és a p53 végeztük formalinnal fixált, paraffinba ágyazott sebészeti szakaszok. Soros 3-jim-es metszeteket használtunk. Hő okozta antigénfeltárást alkalmaztuk (mikroprocesszor-vezérelt nyomás Pascal ® DakoCytomation, Carpinteria, CA, USA). Egy univerzális peroxidáz-konjugált másodlagos antitesttel készlet (LSAB Rendszer, DakoCytomation, Carpinteria, CA, USA) használtunk detektálás diaminobenzidin (DAB), mint a kromogén. A következő primer antitesteket használtuk: egér monoklonális antitestek ellen irányulnak MYC (hígítás 1: 150; SC-40, Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA, USA és a klón 9E10, Zymed ®, San Francisco, CA, USA) , FBXW7 (1:50, Abnova Corp., Taipei City, Tajvan) és p53 (1:50; DakoCytomation, Carpinteria, CA, USA). Pozitív fehérje expresszióját úgy definiáltuk, mint tiszta nukleáris festődést több, mint 10% -a a sejteknek.
Migrációs és behatolás assay
migrációs és behatolás vizsgálatokban végeztük egy módosított Boyden-kamra szűrőbetétek (8-um pórusok) számára 12 lyukú lemezekre (BD Biosciences, San Jose, CA, USA). Annak megállapítására, invázió, szűrőket vontunk be 10 ul Matrigel (10-13 mg /ml) (BD Biosciences, San Jose, CA, USA), miközben jégen. A sejteket (2 × 10 5) szélesztettük a felső kamra 1 ml RPMI FBS nélküli. Az alsó kamra tele volt 1,5 ml RPMI-FBS. 48 óra eltelte után a kultúra, a sejteket fixáltuk 4% paraformaldehid és poszt-fixáltuk 0,2% kristályibolya 20% metanolos. A sejteket a felső oldalán a szűrő, beleértve azokat a matrigel, eltávolítottuk egy vattacsomót. Sejtek megtámadása (az alsó oldalán a szűrő) lefényképezzük és megszámoljuk. A kísérleteket három párhuzamosban hajtjuk végre.
Immunfluoreszcens
növesztett sejteket üveg fedőlemezen fixáltuk 1% paraformaldehidet tartalmazó foszfáttal pufferolt sóoldatban (PBS) 10 percig, majd permeabilizáltuk 0,5% Triton X-100 (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) PBS-ben 15 percig, és blokkoltuk 1% szarvasmarha-szérum-albumin (BSA) PBS-ben. A sejteket megfestettük egér elleni antitestekkel MYC (1:50 arányban hígítva; Zymed ®, USA), a p53 (1:50 arányban hígítva; DakoCytomation, Carpinteria, CA, USA), és FBXW7 (1:50 arányban hígítva; Abnova Corp ., Taipei City, Tajvan). Primer antitesteket feltárta egy anti-egér Alexa-568-konjugált másodlagos antitest (Invitrogen). Minden inkubálást végeztük 60 percig, szobahőmérsékleten. A magokat festettük DAPI a Meghosszabbítja anti-fade fedőoldattal (Invitrogen). Negatív kontroll mintákat a fent ismertetett eljárással, kivéve, hogy az elsődleges antitestet kihagytuk, és helyére csak PBS.
Western blot
Fehérje kivonással sejtekkel végeztük, standard eljárások szerint. Röviden, a teljes fehérje-t kivontuk ACP02 és ACP03 sejtekben 50 mM Tris-HCl pufferben, amely 100 mmol /l nátrium-klorid, 50 mM NaF, 1 mM NAVO 4, 0,5% NP-40, és a teljes proteáz inhibitor koktél (Roche , Németország). A fehérje-koncentrációt segítségével becsült Bradford vizsgálati eljárással (Sigma-Aldrich). Körülbelül 30 ug teljes fehérje extraktumot felvisszük egy 12% -os nátrium-dodecil-szulfát-poliakrilamid gél elektroforézissel (SDS-PAGE) gélen elektroforézist. Megoldott fehérjéket ezután a gélről nitrocellulóz membránra. A membránt blokkoltuk 5% -os zsírtalan tejjel Tris-pufferelt sóoldatban, amely 5% Tween (Sigma-Aldrich, Sant Louis, MO, USA), majd inkubáljuk egér monoklonális anti-myc (Santa Cruz Biotechnology), anti-FBXW7 (Abnova , Taipei City, Taiwan), anti-p53 (DakoCytomation, Carpinteria, CA, USA), és anti-β-aktin (Sigma-Aldrich, Sant Louis, MO, USA) antitesteket hígított 1: 200, 1: 100, 1: 100 és 1: 2,000, ill. Ezt követően a membránokat inkubáltuk 1: 5000 hígítású torma-peroxidázzal (HRP) konjugált birka anti-egér antitest (Amersham Biosciences, Piscataway, NJ, USA) 1 órán át szobahőmérsékleten keverjük. A proteineket láthatóvá fokozott kemilumineszcencia.
Zimográfia
ACP02 és ACP03 sejteket (5 x 10 4 mindegyik) szélesztünk, és hagytuk, hogy tartsák és terjedt legalább 8 órán át. A letapadt sejteket háromszor mostuk PBS-sel, és a tápközeget helyettesítettük szérummentes tápközeggel 24 órán át. A tevékenység a MMP2 és MMP9 a kondicionált táptalajt értékelték zimográfia. A kondicionált tápközeget összegyűjtjük, koncentráljuk (Microcon 30 K, Merck Millipore, Darmstadt, Németország), és újra szuszpendáljuk SDS-PAGE minta pufferben (anélkül, β-merkapto-etanol). A maradék sejteket lizáltuk, és a fehérje koncentráció alkalmazásával becsültük egy BCA vizsgálattal (Thermo Scientific Pierce, Rockford, IL, USA). Összesen 1 ug fehérje az egyes kondicionált tápközeget elválasztottuk 10% -os poliakrilamid gélen, amely 0,2% zselatin. Az elektroforézis után a géleket mossuk, 2,5% -os Triton X-100-on 30 percig, majd ekvilibráljuk 10 mM Tris (pH = 8,0), és inkubáljuk 37 ° C-on 16-24 órán át fejlesztés pufferben, amely 50 mM Tris (pH = 8,0 ), 5 mM CaCI 2, és 0,02% NaN 3. A géleket megfestettük 0,2% Coomassie blue R250 (GE Amersham, Piscataway, NJ, USA) és a festéket eltávolítjuk, 1: 1 ecetsav /metanol oldatot. A kísérleteket három párhuzamosban hajtjuk végre. Zymographic sávok, melyek jelzik az MMP aktivitás mennyiségileg pásztázó denzitometriának. Katalógusa Statisztikai elemzések katalógusa a normalitás változó eloszlás segítségével határoztuk meg a Shapiro-Wilk teszt. Egyesületek között MYC katalógusa, FBXW7 katalógusa, és TP53 katalógusa kópiaszám variáció, mRNS-szintje, fehérje expresszió, klinikopatológiai jellemzők, és a sejtek invázióját és migrációs képességét elemeztük a chi-négyzet (χ 2) és Mann-Whitney próba. Korreláció expressziója a különböző cél-mRNS-ek alkalmazásával meghatároztuk a Spearman-féle teszt, melynek értéke 0,3 alatt jelzett gyenge korreláció, 0,3-0,7 jelzett közepes korreláció, és az értékek a fenti 0.7 jelzett erős korreláció. Az adatok jelennek meg a medián és interkvartilis tartományban; p értékek 0,05-nél kisebb tekintettük szignifikánsnak. katalógusa eredménye
Gyomor daganatminták szaporodási myc katalógusa és törlését FBXW7 katalógusa és TP53 Matton Három vagy több példányban MYC katalógusa találtak 51,5% (17/33) a gyomor tumorsejteket. Ezzel szemben a 45,5% (15/33) és 21,2% (7/33) a gyomor tumor sejtek tartalma csak egy példányát FBXW7 katalógusa és TP53 katalógusa, ill.
Összefüggését klinikopatológiai jellemzők és MYC
, FBXW7 katalógusa, és TP53 katalógusa kópiaszám 1. táblázat foglalja össze egy gyomor tumor tartalmazó három példányban TP53 katalógusa kizárták a chi-négyzet analízis. Nem találtak összefüggést kópiaszám variáció a vizsgált gének klinikopatológiai jellemzői. Katalógusa MYC katalógusa mRNS expressziója magasabb volt a daganatok, mint a nem daganatos mintákban, míg FBXW7 katalógusa és TP53 katalógusa mRNS expressziója alacsonyabb volt a tumor minták
expressziós szintjének MYC katalógusa mRNS (2,01 ± 1,72-szeres változás) tumorszövetben mintákban szignifikánsan magasabb volt, mint a nem-daganatos szövet (p = 0,0002), míg az expressziós szintje FBXW7 katalógusa mRNS (0,53 ± 0,40-szeres változás), TP53 katalógusa mRNS (0,84 ± 0,55-szeres változás) a tumor szövetminta szignifikánsan alacsonyabb volt, mint a nem daganatos szövetek (p < 0,0001 és p = 0,0011-kal). Nem találtunk szignifikáns korrelációt MYC katalógusa, FBXW7 katalógusa, és TP53 katalógusa mRNS expresszióját (MYC katalógusa /FBXW7 katalógusa mRNS r = -0,3464, p = 0,0562; MYC katalógusa /TP53 katalógusa mRNS r = 0,0950, p = 0,6113; FBXW7 katalógusa /TP53 katalógusa mRNS r = -0,0745, p = 0,4747). Így csak egy hajlam közötti összefüggést növekedését MYC
mRNS expresszióját és csökken a FBXW7
mRNS expresszió volt kimutatható.
A 2. táblázat összefoglalja a szervezetek közötti különféle klinikopatológiai jellemzők és RQ myc katalógusa , FBXW7 katalógusa, és TP53 katalógusa mRNS expresszió tumor és párosítva nemneopláziás példányok. A növekedés MYC
mRNS-szint társul jelenlétében nyirokcsomó-metasztázis (p = 0,016), és a GC tumorstádium III-IV (p = 0,036). A jelentős csökkenés FBXW7
mRNS szintje is társult jelenlétében nyirokcsomó-metasztázis (p = 0,015) és a tumor stádium III-IV (p = 0,008) .table 2 MYC, FBXW7 és TP53 mRNS expressziós szintek és a klinikopatológiai tényezők 33 gyomorrákos betegek Matton n (%) Matton MYC
p-érték
FBXW7 Matton
p-érték
TP53
p-érték
medián ± IQR katalógusa medián ± IQR katalógusa medián ± IQR
Életkor (y) (átlag ± SD) hotelben > 50 (65,3 ± 9,1) hotelben 19 (57,6%) hotelben 2,04 ± 1,35 katalógusa 0,8873 katalógusa 0,55 ± 0,37
0,9247 katalógusa 0,86 ± 0,62 katalógusa 0,7409 katalógusa ≤50 (42,1 ± 8,2) hotelben 14 (42,4%) hotelben 1,44 ± 4,88 0,53 ± 0,50 katalógusa katalógusa 0,94 ± 1,65
Nem katalógusa Férfi katalógusa 15 (45,5%) hotelben 2,01 ± 1,01 katalógusa 0,4065 katalógusa 0,53 ± 0,22 katalógusa 0,6353 katalógusa 0,89 ± 0,58 katalógusa 0,8125 fiatal női
18 (54,5%) hotelben 1,67 ± 2,03 0,56 ± 0,56 katalógusa katalógusa 0,87 ± 0,69 katalógusa Kórszövettani katalógusa Bél katalógusa 22 (66,7%) hotelben 2,06 ± 0,99 katalógusa 0,3525
0,53 ± 0,16 katalógusa 0,1391 katalógusa 0,81 ± 0,78 katalógusa 0,3311 katalógusa Diffúz katalógusa 11 (33,3%) hotelben 1,40 ± 2,32 0,77 ± 0,74 katalógusa katalógusa 0,94 ± 0,38
mélysége tumor invázió katalógusa T1
6 (18.2%) hotelben 0,89 ± 0,47 katalógusa 0,0857 katalógusa 0,88 ± 0,58 katalógusa 0,0678 katalógusa 0,85 ± 0,15 katalógusa 0,7069
T2-T4 katalógusa 27 (81,8%) hotelben 2,08 ± 1,42 0,53 ± 0,43 katalógusa katalógusa 0,91 ± 0,79 katalógusa nyirokcsomó áttétek katalógusa Hiányzik katalógusa 13 (39,4%)
0,98 ± 1,09 katalógusa 0,0225 * katalógusa 0,68 ± 0,36 katalógusa 0,0238 * katalógusa 0,84 ± 0,44 katalógusa 0,6121 katalógusa Ajándékozza katalógusa 20 (60,6%) hotelben 2,10 ± 2,20
0,46 ± 0,38 0,94 ± 0,79 katalógusa katalógusa Stage katalógusa I-II
18 (54,5%) hotelben 1,39 ± 1,23 katalógusa 0,0362 * katalógusa 0,57 ± 0,38 katalógusa 0,0380 * katalógusa 0,83 ± 0,55 katalógusa 0,0892 † katalógusa III-IV
15 (45,5%) hotelben 2,41 ± 2,79 0,34 ± 0,45 katalógusa katalógusa 0,96 ± 1,19 katalógusa MYC IHC
Pozitív katalógusa 20 (60,6%) hotelben 2,18 ± 1,59 katalógusa 0,0022 * katalógusa 0,53 ± 0,32 katalógusa 0,4090 katalógusa 0,81 ± 0,57 katalógusa 0,1372 katalógusa Negatív katalógusa 13 (39,4%) hotelben 0,89 ± 0,85 0,58 ± 0,53 katalógusa katalógusa 0,99 ± 0,90 katalógusa p53 IHC
Pozitív katalógusa 7 (21.2%) hotelben 4,25 ± 6,53 katalógusa 0,0891
0,64 ± 0,68 katalógusa 0,9203 katalógusa 1,06 ± 0,83 katalógusa 0,2937 katalógusa Negatív katalógusa 26 (78,8%) hotelben 2,00 ± 1,44 0,55 ± 0,35 katalógusa katalógusa 0,87 ± 0,60
* p katalógusa < 0,05; IQR: interkvartilis tartomány. Katalógusa Nukleáris MYC protein festés társul bél típusú GC katalógusa Pozitív festés nukleáris MYC és p53 találtak 64,5% (20/31) és 19,4% (31/06) GC minták volt (1. ábra). Nem pozitivitást találtunk FBXW7. Az 1. táblázat összefoglalja a klinikopatológiai jellemzők és MYC és a p53 immunfestés eredményeit. Kifejeződése MYC gyakoribb volt bél típusú, mint a diffúz típusú GC (p = 0,007). Továbbá, MYC immunfestést társított fokozott MYC
mRNS szintje (p = 0,0022). Nem találtak összefüggést a p53 immunhisztokémiai klinikopatológiai jellemzők, TP53 katalógusa kópiaszám, vagy TP53 katalógusa mRNS expresszióját. 1. ábra immunhisztokémiai vizsgálatát MYC és a p53 fehérje expressziót GC. (A) Negatív MYC immunfestést diffúz típusú GC; (B) MYC immunrendszer pozitivitás intesztinális típusú GC; (C) Pozitív p53 immunfestés diffúz típusú GC; (D) p53 immun pozitivitás bél típusú GC (nagyítás × 40). Katalógusa összehasonlítása ACP02 és ACP03 sejtvonalak
Mind ACP02 és ACP03 sejteket tartalmazott három MYC katalógusa példányban, és csak egy FBXW7 katalógusa másolat . Száma TP53 katalógusa példányban volt meghatározatlan mindkét sejtvonalban. Összehasonlítva a mRNS expressziójának ACP03 sejtekben, ACP02 sejtek expresszálták a magasabb szintű MYC katalógusa (1,34-szeres) és alacsonyabb FBXW7
és a TP53
mRNS (0.62- és 0,73-szeresére).
Western-blot analízissel azt mutatta, hogy MYC expressziója szignifikánsan magasabb volt ACP02 sejtekben, mint ACP03 sejtek (p = 0,048). Sőt, FBXW7 expressziója szignifikánsan alacsonyabb volt ACP02 sejtekben, mint ACP03 sejtek (p = 0,049). Azonban nem volt szignifikáns különbség a p53-expresszió között a sejtvonalak (p = 0,077) (2A ábra-B).
Immunfluorescence analízis mindkét fehérje mutatott pontszerű mintát a címkézés, támogatja a Western-blot eredményeket mutató növekedése MYC és csökkentése FBXW7 expresszió ACP02 sejtekben összehasonlítva ACP03 (2. ábra). Matrigel inváziós vizsgálat eredményei azt mutatták, hogy ACP02 sejtek több invazív, mint ACP03 sejtek (p = 0,001). Migrációs vizsgálati eredmények azt mutatták, hogy kevesebb ACP02 migrált sejteket összehasonlítva ACP03 sejtek (p = 0,0028) (ábra 2C-D). 2. ábra MYC, FBXW7 és p53 expresszió, migrációs és behatolás képesség ACP02 és ACP03. (A) Graph megjelenítése átlag ± SD myc, FBXW7 és a p53 fehérje expressziót ACP02 és ACP03. Ezek a fehérjék normalizáltuk a szintje béta aktin; (B) A reprezentatív adatokat az MYC, FBXW7 és p53 fehérje expresszióját; (C-D) grafikonok azt mutatják, átlag ± SD migráció és invazív sejtek háromszori ismétlésben assay; (E) A reprezentatív eredményeket az MYC, FBXW7 és a p53 immunfluoreszcencia.
Mind ACP02 és ACP03 sejtek bemutatott négy zselatináz aktivitás sávok: MMP-9 látens (92 kDa), MMP-9 aktív (88 kDa), MMP-2 látens ( 72 kDa), és az MMP-2 aktív (66 kDa) (3. ábra). Nem találtunk szignifikáns különbségeket az MMP-9 látens (p = 0,9788), MMP-2 aktív (p = 0,7848), és az MMP-2 látens (p = 0,1678) között ACP02 és ACP03 sejteket. Ugyanakkor jelentős találtak különbséget ACP02 és ACP03 sejtek tekintetében MMP-9 aktív (p = 0,0182). 3. ábra Reprezentatív zselatin zimográfiával elemzése MMP-2 és MMP-9-aktivitás ACP02 és ACP03. (A) megfelelő sávok mindkét látens és aktív formáit az MMP-2 és MMP-9 volt megfigyelhető ACP02 és ACP03. Denzitometriás elemzések a megfelelő sávok látens és aktív formáit MMP-2 (B) és MMP-9 (C).
Megbeszélés
A jelenlegi vizsgálat során azt tapasztaltuk, hogy a MYC
mRNS expresszió fokozott GC mintákban képest megfelelő nem-neoplasztikus mintákon. Amellett, hogy a mi ismereteink szerint ez az első tanulmány, amely összefüggést a fokozott MYC katalógusa mRNS expresszióját és a jelenléte nyirokcsomó metasztázis és CG szakasz III-IV, megerősítve azt az elképzelést, hogy a MYC katalógusa dereguláció erős tényezője malignus GC.
Adams és munkatársai katalógusa. [20] és Leder és mtsai.
[21] kimutatták, hogy a MYC
mRNS expressziós dereguláció elősegítheti a rák kifejlődését transzgenikus egér modellek. A növekedés MYC katalógusa mRNS szintje a humán rákos származhat közvetlen és közvetett mechanizmusok, amelyek több magyarázat. Először is, MYC
amplifikáció a leggyakoribb mechanizmusa MYC katalógusa dereguláció GC [5]. Ez a mechanizmus vezet fokozott termelése onkogén termékek mennyisége, amely meghaladja a transzkripciós kapacitás a szokásos dupla példányt gént. Itt azt tapasztaltuk, három vagy több MYC katalógusa gén példányban 51,5% -a gyomor tumorok példányok. Korábbi tanulmányok a mi csoport is kimutatta, hogy MYC
amplifikáció vagy triszómia kromoszóma 8, amelyen MYC
található, jelen volt minden GC mintát vizsgált egyének Észak-Brazíliában, valamint a GC sejtvonalak által létrehozott mi csoport daganatokat brazil beteg [18, 22-27]. A jelenléte MYC katalógusa amplifikációs is beszámoltak a plazma mintákban egyének GC [28]. Azonban nincs közvetlen összefüggés a MYC
kópiaszám variáció és az mRNS expresszió kimutatható volt a jelen tanulmányban.
Másodszor, a növekedés a MYC
mRNS expresszió eredhetnek következetes közötti rekombinációt az immunglobulin (lg) locus és MYC katalógusa onkogén. Ez a jelenség gyakran leírt Burkitt-limfóma, és együtt jár egy hosszabb felezési MYC katalógusa mRNS érintett sejtek [29]. Korábban, a kutatási csoport megfigyelt MYC
betoldást diffúz típusú GC főként a kromoszómákba, amely leképezett gének immunglobulinok (kromoszómák 2., 14., és 22.) [26]. Így kromoszóma transzlokációk bevonásával MYC katalógusa locus (8q24) a diffúz típusú CG egyének Észak Brazília azt is tükrözik növekedését MYC katalógusa mRNS szintjén. Katalógusa immunhisztokémia (IHC) analízis kimutatta, hogy MYC kifejezés gyakrabban találtak bél típusú GC mint diffúz típusú GC példányok. Ezek a változások vezethet rendellenes MYC protein, amely nem ismeri fel sem az ellenanyagok használhatók a jelen tanulmányban. Továbbá megfigyeltük közötti társulás MYC katalógusa mRNS expressziós szintjét és a MYC festéssel. Továbbá, poszttranszkripciós mechanizmusok szabályozására MYC stabilitás [6, 30]. MYC
dereguláció összefüggésbe hozták elvesztésével FBXW7 katalógusa, egy haploinsufficient tumorszuppresszor gén. Általában FBXW7 katalógusa veszteséget okozhat veszteséget heterozigótaság (LOH) és mutációs [30]. A veszteség 4Q a FBXW7
lókusz, visszatérő kromoszomális változások GC [31, 32], és FBXW7
mutációkat találtak 3,7-6% a gyomorsav daganatok [12].
a jelen tanulmányban megfigyelt egyetlen példányát FBXW7 katalógusa gén 45,16% a gyomor tumorok vizsgálták. Érdekes, FBXW7
mRNS expressziójának GC minták jelentősen csökkent, összehasonlítva a megfelelő nem-neoplasztikus szövetet. Ezen túlmenően, FBXW7
mRNS expressziós dereguláció járt jelenlétében nyirokcsomó-metasztázis és GC szakaszban a III-IV, amint is megfigyelhető volt a MYC
mRNS-t. Ezek az eredmények alátámasztják a munkáját Yokobori el al.
[13], amely azt is kimutatta közötti társulás csökkentett FBXW7 katalógusa mRNS expresszió és a nyirokcsomó-áttétek, amely hozzájárul a malignus potenciálját GC sejtek és az eredmények a rossz prognózist. Sőt, megfigyeltük, hogy a kifejezés a MYC
és FBXW7
mRNS jellemzően az fordítottan arányos a jelen tanulmányban.
Több tanulmány kimutatta, hogy a MYC
inaktiválása gátolja tumorok állatokban, ami arra utal, hogy a MYC
lehet egy molekuláris célpont a rák kezelésében [33-35]. Alternatív Soucek munkatársai katalógusa. [36] javasolta, hogy FBXW7 elősegítheti "tumor nyugalmi állapot terápia". Így MYC lebomlást FBXW7 nemcsak indukálja állapotban tumor nyugalmi de azt is, hogy egy anti-tumor hatását. Minden szerző elolvasta és jóváhagyta a végleges kéziratot. Katalógusa

• Helicobacter pylori fertőzés és a keringő ghrelin szintje - Egy szisztematikus áttekintés
• A "gyorsított" rehabilitáció után gyomorrák resectio: tapasztalat 80 egymást követő esetben