Išraiška linija-1 endonukleazės variantu skrandžio vėžiu: jo asociacija su klinikos parametrus

Išraiška linija-1 endonukleazės variantu skrandžio vėžiu: jo asociacija su klinikos parametrų
Anotacija
fone
Long trumpo branduolinę elementas-1 (LINE-1 arba L1), labiausiai paplitęs ir tik autonomiškai veikia šeimos ne-lTR retrotransposons į žmogaus genomo, išreikštas ne tik embrioninės linijos, bet ir somatinių audinių. Ji prisideda prie genetinės nestabilumo, senėjimo, ir su amžiumi susijusių ligų, tokių kaip vėžys. Mūsų Ankstesnis tyrimas nustatė žmogaus skrandžio adenokarcinoma aktyvinama stenograma GCRG213, kuris pasidalino 88% homologiją žmogaus L1 seka ir jame spėjamą apsaugotą apurinic /apyrimidinic endonucleas1 domeną.
Metodai
imunohistocheminis buvo atliktas naudojant monokloninis pelės anti -žmogaus GCRG213 baltymų (GCRG213p) antikūnas, pagamintas mūsų laboratorijoje, ant audinio microarray pastatytas pavyzdžius nuo 175 skrandžio adenokarcinoma sirgusių pacientų. buvo įvertintas tarp GCRG213p saviraiškos ir pacientų klinikos parametrų koreliacija. GCRG213p išraiška skrandžio vėžio ląstelių linijų studijavo Imunoblotingo metodu analizę. L1 rengėjas metilinimas statusas skrandžio vėžio ląstelių buvo išbandytas naudojant metilinimo konkrečių PGR. BLASTP buvo naudojamas ne NCBI sprogimo serverio nustatyti GCRG213p seka bet kokių baltymų duomenų banko duomenų bazių išplanavimai.
Rezultatai
Dauguma pirminės skrandžio vėžio, metastazių limfmazgiuose ir skrandžio žarnyno Metaplasia liaukų parodė teigiamą GCRG213p reaktyvumas. Aukštos GCRG213p imunodažymu rezultatą pirminėje skrandžio vėžio buvo teigiamai koreliuoja su naviko diferenciacijos (gerai diferencijuota, p = 0,001), Lauren klasifikacija (žarnyno tipo, p < 0,05) ir pabaigoje amžiaus pradžios skrandžio adenokarcinoma (≥65 yrs; p < 0,05). GCRG213p išraiška neturi kartu su kitais klinikos parametrų, įskaitant išlikimą. Imunoblotingu analizė GCRG213p raiškos skrandžio vėžio ląstelių nurodė, kad GCRG213p lygis buvo aukštesnis skrandžio vėžio ląstelių linijų nei normaliu žmogaus skrandžio epitelio įamžino ląstelių linijos GES-1. Dalinis metilinimo L1 skrandžio vėžio ląstelių buvo patvirtinta metilinimo-specifinis PGR. BLASTP programa analizė parodė, kad GCRG213p peptidas pasidalino 83,0% derinimą su C-galo srities L1 endonukleazei (L1-LT). GCRG213p seka turi ir svarbius likučius, kurie sudaro konservatyvių bruožų L1-LT.
Išvados
GCRG213p galėtų būti L1-LT, funkcinio narys L1-EN šeimos variantas. Padidėjusi GCRG213p yra paplitusi tiek pirminės skrandžio vėžio ir limfmazgių metastazių. Šie duomenys pateikti įrodymus, somatinių L1 raiškos skrandžio vėžio ir galimų jos padarinių naviko forma.
Raktiniai žodžiai
Skrandžio vėžys Rimta trumpo atominės elementas-1 endonukleazinio GCRG213 baltymų audinio mikrogardeliq fone
Rimta trumpo branduolinę elementą -1 (linija-1 arba L1) yra labiausiai paplitęs ir tik autonomiškai aktyvus šeimos ne-lTR retrotransposons į žmogaus genomo ir apima apie 17% žmogaus genomo [1]. Didžioji dauguma iš maždaug 500,000 visų kopijų L1 į žmogaus genomo nėra pajėgi perkėlimo savo dėl įvairių mechanizmų, tokių kaip nukirpimai ir inaktyvuojančių mutacijų. Tačiau maždaug 80-100 pilnametražis, retrotransposition kompetentingos L1s (RC-L1s) dalyvauja tipiškas diploidinį žmogaus genomo ir nedidelis skaičius, vadinamas "karštas L1s" eksponuoti didelio retrotransposition efektyvumą [2].
Žmogaus RC-L1s yra apie 6,5 kb ir koduoti du baltymai (ORF1p ir ORF2p), kurių reikia retrotransposition [3]. ORF1p yra 40 kDa baltymas su RNR privalomas [4] ir nukleino rūgštis lydėti veikla [5]. ORF2p yra 150 kDa baltymas su endonukleazės (L1-LT) [6] ir atvirkštinės transkriptazės (L1-RT) [7] veikla. L1 elementas gali integruoti į kelių šimtų tūkstančių genomo vietose, esant laisvai apibrėžta konsensuso vietoje (5'-TTTT /AA-3 '), kuris yra suraižyti pagal L1-LT [8]. Priimančioji riboja tokių elementų plitimo transkripcijos ir po transkripcijos triukšmo slopinimo mechanizmus, sumažinti veiklą toleruojamos lygių [9].
L1 išreikštas ne tik lytinių linijų, bet ir somatinių audinių. Manoma, kad net mažas somatinių DNR žalą dėl L1 veiklos turi potencialo prisidėti prie genetinio nestabilumo, senėjimas ir su amžiumi susijusių ligų, tokių kaip vėžys [10, 11]. L1-ORF1 ir OFR2 buvo aktyvinama į piktybinių navikų, pavyzdžiui, krūties vėžio, kasos vėžio ir piktybinių lytinių ląstelių navikų, ir tt [12-14] įvairovė. L1 hipometilinimas buvo pastebėtas piktybinių navikų, tokių kaip galvos ir kaklo, stemplės ir skrandžio vėžio, veislės ir ikivėžinių pakitimų [15, 16]. Iš L1 hipometilinimą laipsnis taip pat buvo susijęs su daugiau pažengę ir mažiau prognozę [17, 18].
L1 sukeltos įtaka ląstelių nėra tikėtina, apribota tik iki galo aktyvių elementų. Net L1 elementai su trūkumais ORF1 kodavimo regionuose gali padaryti RNR kad sandūrų išreikšti funkcinį OFR2 su neigiamų pasekmių skaičiaus ląstelėje [19]. Daugelis audinių pagaminti išverčiamo sujungta OFR2 (SpORF2) stenogramą [20]. Susiraizgiusių L1 stenograma, kuri apima Integruojantis atvirkštinės transkriptazės seką OFR2 buvo nustatyta, kad būtinas žmogaus hepatomos ląstelių proliferaciją [21].
Mūsų ankstesniame tyrime [22] nustatė aktyvinama stenogramą, pavadintas skrandžio vėžys susijęs genas 213 (GCRG213) , žmogaus skrandžio adenokarcinoma. BLAST analizė GCRG213 seka nurodyta 88% homologiją su žmogaus LI ir atskleidė tariamą apsaugotą domeną, apurinic /apyrimidinic endonucleas1 (APE) į GCRG213-ORF. Mūsų naujausias paieška atnaujintos GenBank duomenų bazės rodo GCRG213-ORF yra L1-LT užkonservuoti domeną. Straipsnyje pateikiamas mūsų dabartinę tyrimą, kuris patvirtino GCRG213 baltymų (GCRG213p) išraišką skrandžio vėžio ląstelių linijų naudojant monokloninis pelės anti-GCRG213p antikūnas, pagamintas mūsų laboratorijoje (Geriatrijos institutas, Kinija PLA bendroji ligoninė, Pekinas, Kinija). Be to, imunohistocheminis (IHC) taikyti audinių microarray (TMA) įvertinti buvo naudojama GCRG213p išraišką skrandžio vėžio ir normalus skrandžio gleivinę. buvo atliekami tolesni tyrimai, kad pamatyti, jei yra kokių nors koreliacija tarp GCRG213p saviraiškos ir klinikos parametrų ir išlikimui.
metodai
Pacientų
Pacientai, kuriems buvo atlikta pašalintas skrandis skrandžio vėžio PLA General Hospital, Pekinas, Kinija nuo 1991 iki 2003 buvo laikomi kandidatus šiame tyrime. Mėginių ėmimo kriterijai buvo tokie: Lytis (vyrai ar moterys), amžius (20 metų ar vyresni); naujai diagnozuota (incidentas) skrandžio karcinoma be išankstinio gydymo; diagnozė histologiškai patvirtinta; parafine navikas, suporuotas aplinkinių ne navikinės skrandžio gleivinės audinių prieinama su karcinoma metastazavusio į limfmazgius, jei įmanoma; ir teigiamų tolesni rezultatai nuo TMA statybos metu. Kaip rezultatas, 175 atvejų buvo įdarbinti šiame tyrime, kurį sudaro 144 vyrų ir 31 moterų (27 ~ 84 metų, vidurkis = 58.58 metų). Tarp jų, šešiasdešimt septyni atvejai turi karcinomos kartu su limfmazgių metastazių ir šešiais atvejais formalinu fiksuotos, parafino-integruotas normalus skrandžio audiniai taip pat buvo gauti ne iš naviko pacientams, kurie buvo operuotos dėl gerybinių skrandžio ligų.
Demografinė , gyvensena ir klinikos duomenys nagrinėtų bylų buvo parodyta 1 lentelėje Visi navikai buvo klasifikuojamas ir pastatė pagal patikslintus gairėse pateiktas Tarptautinės Sąjungos nuo vėžio. Tolesnių buvo įvertinti savo naujausius sąlygas 2005 m konsultavimo jų bylos arba per telefono skambučius pacientams (arba jų šeimos nariams, arba šeimos gydytojų). buvo priimtas minimalus intervalas 18 mėnesių, o mediana tolesnių laikas pacientams, kurie vis dar buvo gyvas 2005 metų pabaigoje buvo 46 mėnesių (intervalas buvo nuo minimalaus 18 iki didžiausių 129 mėnesių). Išgyvenimo laikas buvo skaičiuojamas nuo operacijos dienos iki mirties dienos arba nuo tos dienos paskutinė žinoma alive.Table 1 klinikos parametrai skrandžio vėžiu sergantiems pacientams studijavo audinių microarray
N (%)
GCRG213p neigiamas
GCRG213p teigiamas
P vertę

Lytis
Vyras
144 (82.28%)
31
113
0,111
Moteris
31 (17.72%)
11
20
Amžius
< 65 metų
104 (59,43%)
31
73
0,029
≥65 metų
71 (40.57%)
11
60
Rūkymas
Taip
45 (27.27%)
7
38
0,278
Ne
120 (72,73%)
30
90
Alkoholio
Taip
28 (16.97%)
2
26
0.060
Nėra
137 (83,03%)
35
102
Šeimos istorija naviko
Taip
14 (8.43%)
2
12
0.639
Ne
152 (91,57%)
36
116
naviko vietą
širdies
48 (27.43%)
8
40
0.360
Kūno
37 (21.14%)
10
27
Ertmė
90 (51.43%)
24
66
naviko dydis (cm)
≤1
11 (6,29%)
3
8
0,506
1-3
42 (24,00%)
13
29
> 3
122 (69,71%)
26 96
Gylis invazijos
T1
46 (26.28%)
12
34
0.635
T2
21 (12.00%)
7
14
T3
33 (18.86%)
6
27
T4
75 (42.86%)
17
58
limfmazgius,
Taip
75 (42.86%)
16
59
0.592
Nėra
100 (57,14%)
26
74
laipsnio naviko diferenciacijos
Už Na
10 (5,71%)
0
10
0,001
Prižiūrėti
40 (22.86%)
4
36
Prastas
103 (58,86%)
27
76
Sygnet ląstelės
22 (12,57%)
11
11
Naviko etapas (TNM)
0
21 (12.00%)
3
18
0,217
Ia
14 (8,00%)
6
8
Ib
41 (23.43%)
10
31
II
60 (34,29%)
17
keitimas 43
IIIa
39 (22.28% )
6
33
Lauren klasifikacija
žarnyno tipo
153 (87,43%)
31
122
0,015
Difuzinė tipas
22 (12,57 %)
11
11
rezekcija marža
buvimas
6 (3,43%)
0
6 0,361
nebuvimas
169 (96.57% )
42
127
kraujagyslių invazija pervežimas buvimas
20 (11.43%)
5
15
0,911
nebuvimas
155 (88,57%)
37
118
būsena
gyvas
121 (71,18%)
30
91
0,483
miręs
49 (28.82%)
9
40
5 metų išgyvenamumas
< 5 yR
47 (43.93%)
12

0.871
>48; = 5 yr
60 (50.07%)
10
37
Leidimas buvo duotas per etikos komiteto PLA General Hospital, Pekinas, Kinija naudoti audinius ir šio projekto duomenis. Informuotas sutikimas buvo gautas iš pacientų.
Audinių mikrogardeliq statyba, GCRG213p imunohistocheminės dažymo ir vertinimą Viesbutis The audinių mikrogardelių (TMA) buvo pastatyti taip, kaip aprašyta anksčiau [23]. Iš pavyzdžių galima šeši audinio masyvo blokų buvo parengta, kurių kiekvienoje yra 30 atvejų navikas, normalus ir limfmazgių audinių jei galima.
Antigeno gavimas TMA skaidres ir formalino fiksuotas, parafino-embedded audinio skyriai vykdė spaudimą viryklė gydymas 10 min antigenui išėmimą iš tirpalo (10 mmol /l natrio citratas buferiu, kurio pH 6,0). Monokloninis pelės anti žmogaus GCRG213p antikūnas, kuris buvo pagamintas mūsų laboratorijoje [24], buvo įtraukta, esant 1 praskiesto 200 ir inkubuojami 2 val kambario temperatūroje. tada skaidres buvo inkubuojami 1 h vidurinio antikūno. EnVision komplektas (Dako, Carpinteria, Kalifornija, JAV), buvo naudojamas vizualizuoti antikūno jungimosi ir skaidres vėliau buvo counterstained hematoksilinu. PBS-tik dažymo mėginys buvo naudojamas kaip fono kontrolės.
Konkretus gelsvai rudos spalvos imunodažymu už GCRG213p buvo įsikūrusi tik citoplazmoje. Tai buvo įmuštas savarankiškai ir aklu būdu du tyrėjai (GJ ir XL). Inter-stebėtojas nesutarimai (apie 6% visų atvejų) buvo peržiūrėtas antrą kartą, po įtikinamų sprendimo abi stebėtojai. Oficialus atsakomają vėliau buvo atliktas vienas tyrėjas (WG). Dažymo intensyvumas buvo klasifikuojama kaip 0 pašalinti (nėra), 1 (silpnai), 2 (vidutinio) ir 3 (stiprus). buvo įmušė iš teigiamai dažytų ląstelių procentinis santykis, 0 (0% teigiamas), 1 (1-30%), 2 (31-60%), ir 3 (> 60%). Kombinuoti Vertinant dažymo intensyvumo ir pratęsimo buvo naudojamas įvertinti GCRG213p išraiška. Minimalus balas Sudėjus (intensyvumas + extension) buvo 0, o didžiausias buvo 6 [25]. Apskritai rezultatas ≥ 2 buvo laikoma GCRG213p teigiamas.
Imunoblotingu analizė
skrandžio vėžio ląstelių linijas, įskaitant SGC-7901, BGC-823 ir žmogaus normalią skrandžio epitelio įamžino ląstelių linijos GES-1 buvo kultūringas, surinko ir lizuoti su Ripa buferio ant ledo prieš atliekant Vakarų blotingo analizė. Baltymų koncentracija buvo aptikta Bradfordo metodu su BSA (Sigma-Aldrich), kaip standartą. Lygios kiekiai ląstelių ekstrakto (40 mikrogramų) buvo atliktas iki 8% SDS-PAGE ir perkelti į polivinilideno difluoridą membrana (Bio-Rad) antikūnų sugeriamojo. tada membrana buvo užblokuotas, inkubuojamas su pelės anti-GCRG213p antikūno (1: 500) 2 val kambario temperatūroje, o po to inkubacijos su krienų peroksidazės-konjuguoto antrinio antikūno už 1 val kambario temperatūroje. Signalas buvo ryškinamos su sustiprinto chemiluminescencja aptikimo reagentu. Pelė Anti-β-aktino antikūnas (1: 5000, Sigma). Buvo aptikta kartu kaip pakrovimo kontrolę
aptikimas metilinimo statuso Line-1 su JEP
patvirtinimo linijos-1 metilinimo statuso buvo atliekami naudojant metilinimas konkrečių PGR (JEP). Viso DNR SGC-7901, BGC-823, MGC803 ir GES-1 ląstelės buvo išgauta pagal DNR išskyrimo rinkinys instrukcijas. DNR buvo bisulfito modifikuotas taip, kaip aprašyta anksčiau [26] 16 val 50 ° C temperatūroje. Bisulfite konvertuojami DNR buvo PGR papildyta naudojant Taq polimerazės (Invitrogen, JAV). Gruntai buvo naudojamos [27]: Rīga, Linea: nemetilintas Line-1 į priekį gruntas, TGTGTGTGAGTTGAAGTAGGGT;
LINEb: nemetilintas Line-1 atvirkštinę gruntas, ACCCAATTTTCCAAATACAACCATCA;
LINEc: denatūruotas Line-1 į priekį gruntas, CGCGAGTCGAAGTAGGGC;
pamušalu: denatūruotu Line-1 atvirkštinę gruntas, ACCCGATTTTCCAAATACGACCG
PGR sąlygos. 4 ° C temperatūroje, 5 minutės; 94 ° C, 30s, 58 ° C, 45s, 72 ° C, 61s, 40 ciklų; 72 ° C, 10 min. Gautos PGR produktai buvo vizualizuota 2% agarozės gelyje. Denatūruotu DNR standartus iš Zymo tyrimų buvo naudojamas kaip teigiama kontrolė, dvigubai distiliuoto vandens, kaip neigiamos kontrolės
seka panašumas ir užkonservuoti domenas paieška
PSI-Aukštakrosnės buvo naudojamas ne NCBI sprogimo serverį [28] (paieška datą. 20 -osios 2012 m) nustatyti GCRG213p seka bet kokių baltymų duomenų bankas duomenų bazės, įskaitant visus ne nereikalingas GenBank CDS vertimai, PBP, SWISSPROT, PIR ir PRF išplanavimai. Ji buvo atliekama su standartiniu pradinio BLASTP paiešką.
Statistinė analizė
Chi-kvadrato testas arba Fišerio tikslusis tikimybė dirbo įvertinti ryšį tarp GCRG213p saviraiškos ir klinikos kintamųjų ryšį. Bendras išgyvenamumas buvo nagrinėjamas GCRG213p išraiškos su Kaplan-Meier kreivėmis. Visi P vertes buvo Dvipusis ir laikomi statistiškai reikšmingais, jei p < 0,05. Statistinė analizė atlikta naudojant SPSS 13.0 for Windows (SPSS Inc., Chicago, IL).
Rezultatai
GCRG213p ekspresijos modeliai normalų skrandžio gleivinės ir skrandžio adenokarcinoma pervežimas skiriasi GCRG213p dažymo buvo pastebėtas pirminių skrandžio adenokarcinomos, limfos mazgas metastazės navikai, ir ne navikinės skrandžio gleivinė (1 paveikslas). Be ne auglio skrandžio gleivinės nuo esopheageal-skrandžio jungties ir Ertmė srityje, diferencijuotų paviršiaus epitelyje ir gleivinės liaukų citoplazma parodė neigiamą dažymo, bet teigiamas GCRG213p dažymo buvo pastebėtas baziniuose membranos įprastų liaukų. 133 175 pirminių skrandžio adenokarcinomos, ir 51 67 auglių metastazavusio į limfmazgius parodė teigiamą GCRG213p reaktyvumas, kuris buvo įsikūrusi iš karcinoma ląstelių citoplazmoje. 1 pav GCRG213p išraiška žmogaus piktybinių ir nepiktybinių skrandžio gleivinę. Abu (a) Pirminis skrandžio adenokarcinoma (100 ×) ir (B), adenokarcinoma įsiveržė į limfmazgius (100 ×) parodė teigiamą GCRG213p stainging citoplazmoje; (A ") ir (B) parodė, kad didesnį padidinimą (400 ×) iš teritorijos (A) ir (B). (C) Jei ne-piktybinio skrandžio epitelyje, teigiamas dažymo buvo pastebėtas pamatinės membranos, bet ne citoplazmoje; GCRG213p reaktyvumas buvo aptiktas skrandžio žarnyno Metaplasia liaukų (pažymėtas rodykle) (100 ×) citoplazmoje; . (C ') parodė, kad didesnį padidinimą (400 ×) iš pakuotės ir (C) srityje
Pagal Lauren klasifikavimo, skrandžio vėžys yra padalinta į dvi histologinių tipų: žarnyno tipo ar difuzinis-tipo. Mes turime 153 žarnyno tipo bylas ir 22 difuzinis-Tye atvejus šiame tyrime. Tarp 153 žarnyno tipo atvejais 34 žarnyno metaplazija ir 28 intraepitelinei navikų mėginiai adjecent į Nustatyta vėžys. Amžius (metai, vidurkis ± SN) iš žarnyno tipo grupėje su žarnyno metaplazijos (59,67 ± 12.30) buvo vyresni nei difuzinis tipo grupe (51,05 ± 11.29) (p = 0,004). 31 iš 34 žarninės metaplazijos, ir 27 iš 28 mažo /didelio laipsnio intraepitelinei navikų parodė GCRG213p reaktyvumas. Dauguma teigiamų atvejų parodė, lengvo iki vidutinio dažymo (2 lentelė) .table 2 GCRG213 išraiška skrandžio audinio mėginiai
grupės

Taškų

GCRG213 išraiška
Bendras balas ‡
PR§ (%)
0-1
2-3
4-5

6
ne navikinės skrandžio epitelyje
112
112
0
0
0
0.00
Žarnų metaplazija
34
3
18
11
2
91.18 *
Mažo /aukštos kokybės intraepitelinei neoplazijai
28
1
17
10
0
96,43 *
adenokarcinoma be LNM †
100
26 50
21
3
74.00 *
adenokarcinoma su LNM
75
16
40
16
3
78.67 *
navikas metastazavęs į limfmazgius
67
16
42
8
1
76.12 *
† LNM
Limfmazgių metastazių; ‡ Bendras balas apskaičiuojamas taip (intensyvumo balas), taip pat (proc ląstelių teigiamas balas), kaip aprašyta metodus; §PR
Teigiamas norma
* Palyginus su ne auglio skrandžio gleivinę, p <.; 0,001.
Asociacija tarp GCRG213 saviraiškos ir klinikos pagal parametrus Viesbutis High GCRG213p imunodažymu partitūros pirminės skrandžio vėžio buvo teigiamai koreliuoja su naviko diferenciacijos (p = 0,001) (2 pav.) Tuo tarpu, GCRG213p išraiška koreliavo su Lauren klasifikacija (p < 0,05). Pozityvaus GCRG213p dažymo procentas amžiaus grupėje (> = 65 per metus) buvo didesnis nei, kad ne amžiaus grupėje (< 65 metus) (60/71 = 84,51% vs 73/104 = 70,19%, P. < 0,05). Tačiau GCRG213p išraiška nerastas būti susijęs su kitais klinikos parametrais, kaip išvardyta 1 lentelėje (p > 0,05). Per 67 pacientų, sergančių tiek pirminio naviko ir limfmazgių metastazių naviko egzempliorių, GCRG213p buvo teigiamas 51 limfmazgių metastazės egzempliorių ir 52 pirminio naviko egzempliorių (76,12%, palyginti su 77,61%), atitinkamai, kuris rodo, kad padidėjusi GCRG213p išraiška limfmazgių metastazavusiu navikas yra sutinkantis su GCRG213p raiškos pradinio skrandžio karcinoma. GCRG213p išraiška limfinių metastazių mazgas taip pat buvo susijęs su klasių naviko diferenciacijos (p = 0,015), bet ne su kitais klinikos parametrų (p > 0,05). 2 pav koreliacija GCRG213p imunodažymu partitūros pirminis navikas su naviko diferenciacijos. Bendras balas (OS) ir imunodažymu yra didesnis gerai diferencijuota vėžio nei kad prastos diferencijuoti (p = 0,001).
Ryšys GCRG213 išraiškos išlikimą
Tolesni informacijos buvo rasti 175 skrandžio vėžio pacientai už laikotarpius nuo 18 mėnesių iki 14 metų. Bendras išgyvenamumas yra tokie: 91.42% (1 metai), 78.28 %% (2 metų) 56.57% (3 metų) 39.43% (4 metų) ir 23.43% (5 metų). Išgyvenamumo mediana norma yra 41 mėnesių.
Remiantis GCRG213p raiškos pirminius navikus, nebuvo reikšmingo skirtumo išlikimo tarp pacientų GCRG213p neigiamas kategorijos palyginti su GCRG213 teigiamą kategorijos (x
2
= 2,072, p = 0,558). Be to, nėra koreliacijos tarp GCRG213p raiškos limfmazgių metastazių ir išlikimo (x
2
= 3,272, p = 0,195).
GCRG213p išraiška piktybinių ir normalių skrandžio gleivinės ląstelių linijas
Imunoblotingo tyrimai buvo atlikti skrandžio vėžio ląstelių, įskaitant SGC-7901, BGC-823 ir nepiktybinių skrandžio gleivinės ląstelių linijos GES-1, kad ir toliau būtų įteisinti diferencijuotą išraišką GCRG213p. buvo identifikuoti Baltymų juostos apie 35 kDa. Trys ląstelių linijos išbandyti išreiškė GCRG213p skirtinguose lygmenyse. GCRG213p lygis buvo didesnis vėžys ląstelių linijų nei GES-1 (3 pav.) Ši išvada atitinka su IHC rezultatas šioje studijoje, t.y. GCRG213p buvo rastas ekspresija skrandžio vėžio. Skaičius 3 imunoblotingu analizė visą ląstelių ekstrakto iš skrandžio piktybinių ir nepiktybinių-piktybinių ląstelių, naudojant anti-GCRG213p antikūną. Ląstelės išreikšti GCRG213p su baltymų juostų 35-kDa. 1: GES-1,2: SGC-7901; 3: BGC-823. Filtras buvo reprobed su anti-beta-aktino antikūnų kontroliuoti vienodo pakrovimo (apačioje grupė).
Metilinimas konkrečių PGR analizė Line-1
Metilinimas konkrečių PGR (MSP) analizė buvo atlikta skrandžio vėžio ląsteles ir ne-piktybinio skrandžio gleivinės ląstelių linija GES-1, tam, kad išbandyti L1 promotoriaus metilinimo būklės šių ląstelių linijų. Be skrandžio vėžio ląstelių linijų SGC-7901 ir BGC-823, taip pat studijavo skrandžio vėžio ląstelių linija MSV-823, pagal paskirtį teikti daugiau informacijos apie L1 metilinimo skrandžio vėžio ląstelių linijas. PGR produktai amlifikuoti denatūruotu konkrečių gruntams (MSPM) ir nedenatūruotą konkrečių gruntams (MSPU) buvo 116-bp ir 111 bp-atitinkamai. Be Ges-1 ląstelių, PGR produktas buvo papildyta su MSPM, bet ne su MSPU, tai rodo, kad L1 skatinančių GES-1 ląstelių patyrė visišką metilinimas; Be SGC-7901 ląstelių, BGC-823 ląstelių ir MSV-803 ląstelių, atitinkamos juostos gali būti papildytas tiek MSPM ir MSPU, rodo dalinį metilinimo (4 paveikslas). 4 pav Metilinimas konkrečių PGR (JEP) analizė LINE-1. Agarozės gelio elektroforezės MSP produktų. M: produktas papildyta denatūruotu specifinio grunto; U: produkto papildyta su nemetilintas specifinio grunto. PC: teigiamos kontrolės, žmogaus metilo DNR standartas; Plotis: du kartus distiliuotas vanduo kontrolė. Atkreipkite dėmesį, kad GES-1 pavyzdžiai tik parodo denatūruoti PGR produktus, o MSV-803, SGC-7901 ir BGC-823 mėginiai rodo abu denatūruoti ir nedenatūruotą PGR produktus.
Bioinformatikos identifikuoti GCRG213p kaip L1-EN šeimos nario
BLASTP programa analizė, kaip minėta pirmiau, buvo nustatyta, kad GCRG213p peptidas pasidalino 83,0% derinimą su C-terminalas regione L1-LT. Konservuoti Domeno paieška GCRG213p seka užkonservuoti Domenų bazėje NCBI hitai didelį egzonuklezės /endonukleazinio /fosfatazės (EEP) superšeimos, įskaitant endonukleazės domene ne LTR retrotransposon Line-1, egzonuklezės III (ExoIII) -kaip apurinic /apyrimidinic ( AP) endonukleazės tt
Tolesnė analizė naudojant BLASTP rodo, kad yra GCRG213p seka keletas likučiai, kurie yra svarbūs konservatyvią bruožų L1-LT, pavyzdžiui, spėjamas fosfato privalomą svetainėje [jonų privalomas svetainės] (Y115 /N145 /H230), spėjamas metalo privalomas svetainė [jonų jungimosi vietos] (D229) ir spėjamas katalizinis svetainė [aktyvus svetainė] (Y115 /D145 /N147 /D229 /H230) (5 pav.) 5 pav darna GCRG213p ir L1-LT. Raudona šrifto atstovauja aukštą sutarimo, mėlyna arba juoda šrifto atstovauja mažai sutarimo. GCRG213p esančius liekanos (pažymėtas rodykle), kurie yra svarbūs endonukleazės veiklos L1-en.
Diskusija
Akivaizdu, kad L1 retrotransposition įvykiai įvyko somatinių ir embrioninių ląstelių. Nepaisant to, kad pilnas ilgis L1 mRNR yra tikrai dominuojantis šaltinis L1 retrotransposition, endogeninė L1 OFR2 sudurti variantai su potencialiais biologinis tinkamumas yra rasta išreiškiami įvairiais somatinių audinių. Belancio tt [20] aptikta SpORF2 stenograma įvairiose suaugusio žmogaus audinių ir SpORF2 mRNR ekspresijos eksponuoja audinių specifinių variacijos. Taigi, L1 funkcija vargu ar bus apribota tik iki galo aktyvių elementų. SpORF2 pat galime pagaminti funkcinę OFR2 baltymų. Dauguma ne LTR retrotransposons yra APE tipo ne LTR retrotransposons [29]. Kristalinės struktūros analizė žmogaus L1-LT rodo, kad ji yra prototipas AP-kaip retrotransposon užkoduotas endonukleazių, kokį slapyvardį DNR su kintamu specifiškumo ir yra atsakingas už milijonų retrotransposon intarpai eukariotinių genomų [30]. Tiek APE1 ir L1-LT priklauso didelis EEP superfamily ta pačia baltymų pastoliai ir tas pačias katalizatoriaus liekanas.
Atsižvelgiant į tai, kad GCRG213p akcijos aukštos seka suderinimai su L1-LT, ir turi konservatyvios likučių, kurie yra labai svarbus L1 -LT fosfatas privalomas, metalo privalomas ir katalizinio aktyvumo, mes siūlome, kad GCRG213 yra sujungta L1-OFR2. GCRG213p galėtų būti funkcinis narys L1-EN šeimos, iš L1-LT variantas.
L1 raiškos navikuose buvo plačiai pristatyta [12-14]. Korinio ryšio endogeninis L1-RT iškyla kaip konstitutyviniu funkcinio komponento kancerogeniniam ląstelių, kuriose didelę proliferaciją ir mažai diferenciacijos statuso [31, 32]. Tačiau, yra keletas išsamių tyrimų L1-LT žmogaus naviko. Ergun tt naudojamas anti-L1-en antikūno aptikti L1-OFR2 suaugusiųjų žmogaus audinių, jie rado tvirtą ORF2p išraišką endotelio ląstelių kraujagyslių normalios žmogaus prostatos, šlapimo pūslės ir sėklidžių audinio, bet ne ORF2p išraiška buvo pastebėtas vėžinės ląstelės studijavo [33]. Oricchio tt [34] pranešė, kad stabilus L1 RNR interferencija gali sumažinti proliferaciją ir diferenciaciją skatina A-375 melanomos ląsteles. Jie taip pat pastebėjo L1-OFR2 baltymo sumažėjimas. Tačiau mokslininkai nenustatė, ar platinimo poveikis buvo nuo L1-LT ir /arba L1-RT. Iki šiol nėra ataskaitoje nustatyta apie L1-LT vaidmenį ląstelių proliferaciją ir diferenciaciją. Šiame tyrime mes dar kartą patvirtino, kad GCRG213p išraiška buvo padidėjusi skrandžio vėžiu, baltymų lygį, tiek ląstelių modelis ir audinio skyriai mokėsi, kuris yra suderinamas su mūsų ankstesnių studijų rezultatų iRNR lygio [22]. L1 pasitikrinti hipometilinimas į naviko audiniuose, įskaitant skrandžio vėžio [35] įvairovė. Shigaki tt [36] naudojama bisulfite-pyrosequencing technologiją kiekybiškai L1 metilinimo būklės rezekcijos skrandžio vėžio egzempliorių. Jie nustatė, kad pacientams buvo L1 hipometilinimas patyrė žymiai trumpesnį bendrą išgyvenamumą nei tie, su hypermethylation. Mes nustatėme, šiame tyrime, kad L1 buvo visiškai metilintas įprastu skrandžio gleivinės ląstelių linijos GES-1, bet buvo iš dalies metilinti skrandžio vėžio ląstelių linijų. Šie rezultatai koreliuoja su GCRG213p išraiška modelio skrandžio vėžio ląstelių linijų, todėl suteikia daugiau įrodymų apie iš GCRG213 peptido pobūdžio. Tačiau mes negalėjome nustatyti koreliaciją tarp GCRG213p saviraiškos ir išlikimo šiame tyrime. Intraepitelinės neoplazijos yra manoma, kad bus svarbiausias žingsnis piktybinės transformacijos skrandžio adenokarcinoma, padidėjusią GCRG213p šių liaukų reiškė galimą vaidmenį GCRG213p skrandžio onkogenezėje. Aukšto imunodažymu rezultatas GCRG213p gerai diferencijuota skrandžio vėžio nurodė, kad ji gali būti įtraukti į skrandžio vėžio diferenciacijos.
Nors lėtinis atrofinė gastritas Manoma, kad su amžiumi susijusį subjektą, žarnyno metaplazija buvo laikoma įrodymų atrofinį gastritu, nes specializuotos liaukos buvo pakeistas žarnyno kriptos, todėl žarnyno metaplazija buvo laikoma su amžiumi susijusių. Amžius vaidina svarbų veiksnį, reglamentuojantys skrandžio žarnyno metaplazijos plėtrą ir subjektai, kurių skrandžio žarnyno metaplazijos buvo žymiai senesnis nei be metaplazijos [37]. Žarnyno Metaplasia liaukos rodomas didelę GCRG213p imunodažymu šiame tyrime. Tuo tarpu, mes nustatėme, kad teigiamas norma GCRG213p skrandžio vėžio audinių amžiaus grupėje buvo didesnis nei, kad ne-metų amžiaus grupės. Tai gali taip pat reikšti, kad GCRG213p yra susijęs su skrandžio gleivinės senėjimo ir su amžiumi susijusių subjektų. Nėra tyrimas tarp L1 išraiškos ir amžių asociacijos šiuo metu, bet vidutiniškai L1 metilinimas nebuvo skirtis laikui bėgant [38, 39]. Manoma, kad nicking genominės DNR L1-LT gali sukelti ląstelių toksiškumą, kuris sukelia ląstelių ciklo suėmimo, apoptozės arba dėl senėjimo. Išraiška egzogeninė pilnametražis L1 ir SpORF2 normalus žmogaus fibroblastus, vėžio ląstelės ir suaugusiųjų kamieninės ląstelės buvo aptinkami DNR pažeidimus ir lėmė, kad senatvė panaši fenotipą [20]. Taigi, mes įtariame, kad sukaupta veikla GCRG213p, iš L1-LT variantui, gali kelti šaltinį su amžiumi susijusių ląstelių transformacijos, kuri galiausiai prisideda prie ląstelių senėjimo, arba priešingu, kad out-of-kontroliuojama (piktybinis) Visi autoriai skaityti ir patvirtino galutinį rankraštį.

• Alkoholio vartojimas ir rizikos skrandžio vėžiu: kohortos tyrime vyrų Kaunas, Lietuva, su iki 30 metų tolesnių up
• Indukcija chromosomų nestabilumo ir skrandžio vėžio keičiant išraiška modelio mitozės Checkpoint genų Pelių, Areca-veržle