Ausdrock vun enger Variant LINN-1 endonuclease zu gastric Kriibs: seng Associatioun mat clinicopathological parameters

Ausdrock vun enger Variant LINN-1 endonuclease zu gastric Kriibs: seng Associatioun mat clinicopathological Parameteren VerfÜgung méiglech VerfÜgung Background VerfÜgung Long john.b nuklear element- 1 (LINN-1 oder L1), déi räich an nëmmen eegestänneg aktiv Famill vun net-LTR retrotransposons vun der mënschlecher Nepgen, ausgedréckt, net nëmmen am meeschten Linnen awer och zu somatic Stoffer. Et dréit zu genetesch Instabilitéit, Alterungsprozess, an Alter-Zesummenhang Krankheeten, wéi Kriibs. Eis virdrun Etude am mënschleche gastric adenocarcinoma identifizéiert eng upregulated ët GCRG213, déi 88% homology mat mënschlechen L1 Haaptrei gedeelt an enthale engem putative conserved apurinic /apyrimidinic endonucleas1 Domän. VerfÜgung Method VerfÜgung Immunohistochemistry war mat engem monoclonal Maus anti duerchgefouert -human GCRG213 FAQ (GCRG213p) antibody vun eisem Laboratoire produzéiert, op Otemschwieregkeeten microarray mat uplanzen aus 175 gastric adenocarcinoma Patienten gebaut. D'Korrelatioun tëscht GCRG213p Ausdrock an Patient clinicopathological Parameteren war bewäert. GCRG213p Ausdrock vun gastric Kriibs Zell goufe mat Western blotting Analyse studéiert. L1 Promoteur methylation Status vun gastric Kriibs Zellen war mat methylation-spezifesch Hinnen alleguer getest. BLASTP um NCBI Blast Server benotzt gouf GCRG213p Haaptrei un all Alignementer an der Protein Data Bank Datenbanken. VerfÜgung Resultater VerfÜgung meescht Primärschoul gastric Kriibs, lymph Node Investitiounen an gastric intestinal metaplasia Glands zougedréckt positive GCRG213p immunoreactivity z'identifizéieren. Héich GCRG213p an der Primärschoul gastric Kriibs immunostaining stoung positiv mat entholl dat soll (och ënnerscheet, p = 0.001), Lauren d'Klassifikatioun (intestinal Typ, p &Si besteet; 0,05) an engem spéiden Alter gezu vun gastric adenocarcinoma (≥65 erwaat; p &Si besteet; 0,05). GCRG213p Ausdrock huet kee Veräin mat anere clinicopathological Parameteren, dorënner Iwwerliewensfro. Western blotting Analyse vun GCRG213p Ausdrock vun gastric Kriibs Zellen uginn dass GCRG213p Niveau war héich an gastric Kriibs Zell Linnen ewéi am mënschleche normal gastric epithelium och Zell Linn GES-1. Deelweis methylation vun L1 zu gastric Kriibs Zellen war vun methylation-spezifesch Hinnen alleguer confirméiert. BLASTP Programm Analyse Teamchef GCRG213p peptide 83,0% Formatioun mat der C-Uschloss Regioun vun L1 endonuclease (L1-EN) gedeelt. leie GCRG213p Haaptrei de wichteg Reschter datt d'conserved Charakteristike vun L1-EN zesummenzestellen. VerfÜgung Konklusiounen VerfÜgung GCRG213p kéint eng Variant vun L1-EN, eng funktionell Member vun L1-EN Famill gin. Overexpression vun GCRG213p ass am primären gastric Kriibs an lymph Node Metastasen gemeinsam. Dës Conclusiounen noweisen vun somatic L1 Ausdrock vun gastric Kriibs, a seng Konsequenzen an der Form vun entholl. VerfÜgung Schlësselwieder VerfÜgung Gastric carcinoma Long nuklear Element-1 endonuclease GCRG213 FAQ Ray microarray Background VerfÜgung Long john.b nuklear Element john.b -1 (LINN-1 oder L1) ass déi räich an nëmmen eegestänneg aktiv Famill vun net-LTR retrotransposons vun der mënschlecher Nepgen a ronn 17% vun der Mënschheet Nepgen besteet [1]. D'Majoriteit vun de ronn 500.000 total Kopië vun L1 zu der mënschlecher Nepgen sinn net kapabel Mossnamen op hir eegen wéinst verschidde Mechanismen wéi truncations an inactivating kennen. Mä, eng geschate 80-100 voll-Längt, retrotransposition zoustännegen L1s (RC-L1s) sinn an engem typesch behënnerte Mënsch Nepgen, an eng kleng Zuel, als "waarm L1s" Collectioun héich retrotransposition efficiencies [2]. VerfÜgung Mënscherechter RC-L1s sinn ongeféier 6,5 kB a gerannt zwee Proteinen (ORF1p an ORF2p) fir retrotransposition néideg [3]. ORF1p ass en 40-kDa FAQ mat RNS bindend [4] an Nukleinsaier chaperone Aktivitéiten [5]. ORF2p ass eng 150-kDa FAQ mat endonuclease (L1-EN) [6] an ëmgedréint transcriptase (L1-RT) [7] Aktivitéiten. L1 Element an honnertdausend Frankräich Plazen intégréieren kann, op eng legislativ definéiert Konsens Site (5'-TTTT /AA-3 "), déi vum L1-EN nicked ass [8]. De Provider Limite der Verbreedung vun esou Elementer vun transcriptional an Post-transcriptional silencing Mechanismen déi Aktivitéit zu tolerable Niveau reduzéieren [9]. VerfÜgung L1 net nëmmen am meeschten Linnen ausgedréckt, mä och zu somatic Stoffer. Et gëtt ugeholl, datt och nidderegen Niveau vun somatic DNA Schued wéinst L1 Aktivitéit d'Potential hun fir genetesch Instabilitéit, Alterungsprozess, an Alter-Zesummenhang Krankheeten, wéi Kriibs [10, 11] ze bedeelegen. L1-ORF1 an ORF2 sech zu enger Rei vu malignancies, wéi Broscht Kriibs, pancreatic Kriibs an malignant meeschten Zell erhéijen, etc. [12-14] upregulated. L1 hypomethylation war an enger Rei vu malignancies wéi Kapp an den Hals, esophageal an Mo. Cancers, an zu premalignant lesions [15, 16] observéiert. Den Ofschloss vun L1 hypomethylation war och mat engem méi fortgeschratt Etapp an aarmen hätt [17, 18]. VerfÜgung L1-entschlof Afloss ze Zellen assoziéiert ass net wahrscheinlech limitéiert nëmmen zu voll aktiv Elementer. Och L1 Elementer mat futtisse ORF1 coding Regiounen kéint eng RNS maachen, datt eng funktionell ORF2 mat enger Zuel vun negativ Konsequenzen fir d'Zell [19] zu auszedrécken splices. Vill Stoffer produzéiere translatable spliced ​​ORF2 (SpORF2) ët [20]. A spliced ​​L1 ët déi integrant ëmgedréint transcriptase Haaptrei vun ORF2 ëmfaasst, gouf fonnt fir Mënscherechter hepatoma Zell Prolifératioun [21] essentiel gin. Eis virdrun Etude VerfÜgung [22] eng upregulated ët, benannt gastric Kriibs Zesummenhang Gentherapie 213 (GCRG213) identifizéiert mënschlechen gastric adenocarcinoma,. Héichuewen Analyse vun GCRG213 Haaptrei uginn 88% homology mat mënschlechen LI an Teamchef eng putative conserved Domän, apurinic /apyrimidinic endonucleas1 (APE), an GCRG213-ORF. Eis läscht Sich vun der aktualiséiert GenBank Datebank weist GCRG213-ORF enthält eng L1-EN Domain conserved. Dëse Pabeier Rapporten eis heiteg studéieren, datt d'GCRG213 FAQ (GCRG213p) Ausdrock vun gastric Kriibs Zell Linnen andems monoclonal Maus anti-GCRG213p antibody produzéiert an eiser Labo (Geriatric Institut, China Pla Generalsekretär Klinik, Peking, China) confirméiert huet. Ausserdeem, immunohistochemistry (IHC) applizéiert op Otemschwieregkeeten microarray (TMA) benotzt gouf GCRG213p Ausdrock vun gastric Kriibs an normal gastric mucosa ze diskutéieren. Weider analyséiert goufen standing ze gesinn, wann et keng Korrelatioun tëscht GCRG213p Ausdrock an clinicopathological Parameteren ass a Survival. VerfÜgung Method VerfÜgung kennen VerfÜgung kennen déi gastrectomy fir gastric Kriibs zu Pla allgemenge Spidol mécht, Peking, China vun 1991 bis 2003 sech Kandidate fir dës Etude considéréiert. Déi probéieren Critèren sech wéi follegt zesummen: Geschlecht (Männercher oder Weibchen), Alter (20 Joer oder méi al); nei (Zwëschefall) gastric carcinoma festgestallte ouni prealabel behandelen; Diagnos histologically confirméiert; paraffin Ënnerbewosstsinn entholl, vläit Ëmfeld Net-tumoral gastric mucosa Stoffer sinn, mat carcinomas metastatic zu lymph Node wa méiglech; a positiv Suivi Resultater bei der Zäit vun TMA Bau. Als Resultat, waren 175 Fäll vun dëser Etude, mat 144 Männer an 31 Fraen (27 ~ 84 Joer, mengen = 58,58 Joer) rekrutéiert. Ënnert hinnen, siechzeg siwe Fäll hunn carcinomas mat lymph Node Metastasen begleet, a sechs Fäll vun formalin-fix, paraffin-Ënnerbewosstsinn normal goufen gastric Stoffer och aus Net-entholl Patiente kritt dee wéinst benign gastric Krankheeten verdanken op sech. VerfÜgung versichen laut der iwwerschafft Richtlinnen vun der International Union géint Cancer ofgestëmmt, Liewensstil an clinicopathological Daten fir d'Prouf Fäll goufen an Table 1. All erhéijen ausseet an däichter gewisen. De Suivi huet hir läscht Konditioune vun 2005 ze evaluéieren vun hire Fall Dokumenter Consultatioun oder duerch Telefonen fir Patienten (oder hir Famill, oder Famill gestallt). E Minimum vu nolauschterer vun 18 Méint gedauert, an d'Steiren Suivi Zäit fir Patienten, déi duerch d'Enn vun 2005 war Liefzäite goufen 46 Méint (der Rei war vun der minimum 18 bis maximal 129 Méint). Survival Zäit aus dem Datum vun Agrëff an den Datum vum Doud oder den Datum lescht bekannt alive.Table 1 Clinicopathological Parameter vun gastric Kriibs Patienten berechent war an Otemschwieregkeeten microarray studéiert
N (%)
GCRG213p negativ
GCRG213p positive P Wäert
Geschlecht VerfÜgung Männlech VerfÜgung 144 (82.28%)
31 VerfÜgung 113 VerfÜgung 0,111
Weiblech VerfÜgung 31 (17.72%) VerfÜgung 11 zu 20 VerfÜgung Alter VerfÜgung &Si besteet; 65 Joer zu 104 (59.43%) 31.
73 VerfÜgung 0,029
≥65 Joer VerfÜgung 71 (40.57%) VerfÜgung 11 zu 60 VerfÜgung fëmmen VerfÜgung Jo VerfÜgung 45 (27.27%) VerfÜgung 7 VerfÜgung 38 VerfÜgung 0,278
Nee VerfÜgung 120 (72.73%) VerfÜgung 30 zu 90 VerfÜgung Knappheet VerfÜgung Jo VerfÜgung 28 (16.97%) VerfÜgung 2 VerfÜgung 26 VerfÜgung 0,060 VerfÜgung Nee VerfÜgung 137 (83.03%) VerfÜgung 35 VerfÜgung 102 VerfÜgung Family Geschicht vun entholl VerfÜgung Jo VerfÜgung 14 (8.43%) VerfÜgung 2 VerfÜgung 12 VerfÜgung 0,639
zu 152 (91.57%) VerfÜgung 36 VerfÜgung 116 VerfÜgung entholl Standuert VerfÜgung härzwierksam VerfÜgung 48 (27.43%) VerfÜgung 8 VerfÜgung 40 VerfÜgung 0,360 VerfÜgung Body VerfÜgung 37 (21.14%) VerfÜgung 10 zu 27 VerfÜgung Antrum VerfÜgung 90 (51.43%) VerfÜgung 24 zu 66 VerfÜgung entholl Gréisst (cm) VerfÜgung ≤1 VerfÜgung 11 (6.29%) VerfÜgung 3 VerfÜgung 8 VerfÜgung 0,506 VerfÜgung 1-3 VerfÜgung 42 (24.00%) VerfÜgung 13 zu 29 VerfÜgung > 3
(69.71%) VerfÜgung 26 zu 96 VerfÜgung Déift vun Invasioun VerfÜgung T1 VerfÜgung 46 (26.28%) VerfÜgung 12 zu 34 VerfÜgung 0,635 VerfÜgung T2
(12.00%) VerfÜgung 7 VerfÜgung 14 VerfÜgung T3 VerfÜgung 33 (18.86%) VerfÜgung 6 VerfÜgung 27 zu 75 VerfÜgung T4 (42.86%) VerfÜgung 17 VerfÜgung 58 VerfÜgung Lymph Node Bedeelegung VerfÜgung Jo VerfÜgung 75 (42.86%) 16
59 VerfÜgung 0,592 VerfÜgung Nee VerfÜgung 100 (57.14%) 26 VerfÜgung VerfÜgung 74 VerfÜgung Héichwäertege vun entholl dat VerfÜgung Ma VerfÜgung 10 (5.71%) VerfÜgung 0 VerfÜgung 10 VerfÜgung 0,001 VerfÜgung Mëttelméisseg VerfÜgung 40 (22.86%) VerfÜgung 4 VerfÜgung 36 VerfÜgung Poor VerfÜgung 103 (58.86%) VerfÜgung 27 zu 76 VerfÜgung Signet Ring Zell VerfÜgung 22 (12.57%) VerfÜgung 11 zu 11 VerfÜgung klinescher Etapp (TNM) VerfÜgung 0 VerfÜgung 21 (12.00%) VerfÜgung 3 VerfÜgung 18 VerfÜgung 0,217 VerfÜgung IA VerfÜgung 14 (8.00%) VerfÜgung 6 VerfÜgung 8
Ib VerfÜgung 41 (23.43%) VerfÜgung 10 zu 31 VerfÜgung II VerfÜgung 60 (34.29%) VerfÜgung 17 zu 43 VerfÜgung IIIa VerfÜgung 39 (22.28% ) VerfÜgung 6 VerfÜgung 33 VerfÜgung Lauren d'Klassifikatioun VerfÜgung Intestinal Typ VerfÜgung 153 (87.43%) VerfÜgung 31 VerfÜgung 122 VerfÜgung 0,015 VerfÜgung Firwat Typ VerfÜgung 22 (12.57 %) VerfÜgung 11 zu 11 VerfÜgung Resection Spillraum VerfÜgung Präsenz VerfÜgung 6 (3.43%) VerfÜgung 0 VerfÜgung 6 VerfÜgung 0,361 VerfÜgung Feele VerfÜgung 169 (96.57% VerfÜgung) 20 zu 42 VerfÜgung 127 VerfÜgung Microvascular Invasioun VerfÜgung Präsenz (11.43%) VerfÜgung 5 zur VerfÜgung 15 VerfÜgung 0,911 VerfÜgung Feele VerfÜgung 155 (88.57%) VerfÜgung 37 VerfÜgung 118 VerfÜgung Status VerfÜgung lieweg VerfÜgung 121 (71.18%) VerfÜgung 30 zu 91 VerfÜgung 0,483 VerfÜgung dout VerfÜgung 49 (28.82%)
9 bis 40 VerfÜgung 5 Joer Iwwerliewe VerfÜgung &Si besteet; 5 TNT VerfÜgung 47 (43.93%) VerfÜgung 12 zu 48 VerfÜgung 0,871 VerfÜgung > = 5 TNT VerfÜgung 60 (50.07%) VerfÜgung 10 zu 37 VerfÜgung Erlaabnes vun den ethesch Comité vun de Pla Generalsekretär Klinik, Peking, China gouf de Otemschwieregkeeten an d'Donnéeë fir dëse Projet ze benotzen. Awëllegung war och vun de Patienten. VerfÜgung Ray microarray Bau, GCRG213p immunohistochemical staining a Foussgänger VerfÜgung D'Otemschwieregkeeten microarrays (TMAs) kritt huet virdrun ëmschriwwen gebaut [23]. Vun der demolege, huet sechs Otemschwieregkeeten vill Stécker virbereet, all mat 30 Fäll mat entholl, normal an lymph Node Stoffer wann disponibel. VerfÜgung Antigen retrieval vun TMA drënner, an formalin-fix, paraffin-Ënnerbewosstsinn Otemschwieregkeeten Rubriken sech duerch Drock gesuergt Buschtawenzopp Behandlung fir 10 min an engem antigen retrieval Léisung (10 mmol /L Natrium citrate Prellbock, pH 6.0). Monoclonal Maus anti Mënsch GCRG213p antibody, déi an eisem Laboratoire produzéiert gouf [24], war bei enger dilution vun 1 notéiert: 200 a fir 2 HR bei Raumtemperatur incubated. D'drënner waren duerno fir 1 h am Secondaire antibody incubated. An Stellt Kit (Dako, Carpinteria, CA, USA) war fréier mat hematoxylin ze visualiséieren antibody bindend, an drënner waren dono counterstained. A PBS-eenzeg war staining Prouf als Hannergrond Kontroll benotzt. VerfÜgung Spezifësch giel-brong immunostaining fir GCRG213p exklusiv am Zytoplasma etabléiert huet. Et war onofhängeg an zu engem blinded Manéier vun zwee Enquêteuren (GJ an XL) Faarwen. Den inter-Observatoire Meenungsverschiddenheeten (ronn 6% vum ganzen Fäll) huet fir eng zweete Kéier iwwerschafft, vun engem mer eis Uerteel vum souwuel Observateuren gefollegt. Formell ukomm gouf vun engem Enquêteur (WG) duerchgefouert. D'staining Intensitéit war den 0 (feelen), 1 (schwaach) kategoriséiert, 2 (moderéiert), an 3 (staark). De Prozentsaz vun positif Kierchefënster Zellen war den 0 (0% positiv) Faarwen, 1 (1-30%), 2 (31-60%), an 3 (> 60%). Kombinéiert vun staining Intensitéit Fliessband Annex benotzt gouf GCRG213p Ausdrock ze diskutéieren. De Minimum stoung wann do (Intensitéit + Endung) war 0 a maximal war 6 [25]. Allgemeng Virsprong vun ≥2 war gehale GCRG213p positiv. VerfÜgung Western blotting Analyse VerfÜgung Gastric Kriibs Zell Linnen dorënner SGC-7901, BGC-823 a mënschlech normal gastric epithelium och Zell Linn GES-1 waren cultured, mat der gesammelt an lysed Ripa op Äis gefiermt virun ze Western blotting Analys ënnerworf ginn. D'FAQ Konzentratioun war vun der Bradford Method mat BSA (Fläch-Aldrich) als Standard fonnt. Gläich Montanten vun Zell Extrait (40 μg) waren zu 8% SDS-PAGE ënnerworf an zu polyvinylidene difluoride Membran (Bio-Rad) fir antibody blotting transferéiert. D'Membran ass dann mat der Maus antibody anti-GCRG213p incubated blockéiert, (1: 500) fir 2 HR bei Raumtemperatur, gefollegt vun incubation mat engem horseradish peroxidase-conjugated Secondaire antibody fir 1 HR bei Raumtemperatur. D'Signal huet mat enger verstäerkter chemiluminescence erkennen reagent visualized. D'Maus anti-β-actin antibody (1: 5.000, Fläch). War gläichzäiteg als Luede Kontroll fonnt VerfÜgung Detektioun vun methylation Status vun LINN-1 mat MSP VerfÜgung Validatioun vun LINN-1 methylation Zoustand war mat duerchgefouert methylation-spezifesch Hinnen alleguer (MSP). Total DNA vun SGC-7901, BGC-823, MGC803 an GES-1 Zellen war no der Taktik vum DNA Extraktioun Kit ofgebaut. Den DNA war bisulfite geännert wéi bei 50 ° C fir 16 HR virdrun [26] beschriwwen. Bisulfite-ëmgerechent DNA war Hinnen alleguer-Kick mat Taq polymerase (Invitrogen, USA). Primers benotzt goufen [27]: VerfÜgung Klengt: unmethylated LINN-1 vir primer, TGTGTGTGAGTTGAAGTAGGGT; VerfÜgung LINEb: unmethylated LINN-1 ëmgedréint primer, ACCCAATTTTCCAAATACAACCATCA; VerfÜgung LINEc: methylated LINN-1 vir primer, CGCGAGTCGAAGTAGGGC;
géinteneen: methylated LINN-1 ëmgedréint primer, ACCCGATTTTCCAAATACGACCG VerfÜgung Hinnen alleguer amplification ware:. 4 ° C, 5 min; 94 ° C, 30s, 58 ° C, 45s, 72 ° C, 61s, 40 Zykle; 72 ° C, 10 min. Déi doraus resultéierend Hinnen alleguer Produiten waren op engem 2% agarose gelies visualized. . Methylated DNA Bestëmmungen aus Zymo Research sech als positiv Kontroll, duebel destilléiert Waasser als negativ Kontroll VerfÜgung liichtkraaftarm Ähnlechkeet an conserved Domain Sich VerfÜgung keng Gefor-Blast benotzt gouf um NCBI Blast Server benotzt [28] (Sich Datum: 20 September Januar 2012) GCRG213p Haaptrei un all Alignementer an der Protein Data Bank Datenbanken och all nët-iwwerflësseg GenBank Disken Iwwersetzungen, PDB, SwissProt, PIR an PRF z'identifizéieren. Et war mat engem Standard initial BLASTP Sich gesuergt. VerfÜgung statistique Analyse VerfÜgung Chi-Feld Test oder Fisher war genau Probabilitéit der Relatioun tëscht GCRG213p Ausdrock an clinicopathological Verännerlechen diskutéieren agestallt. Allgemeng Survival war vun GCRG213p Ausdrock mat Kaplan-Meier Kéiren iwwerpréift. All p Wäerter waren zwee eesäitegen a statistesch relevant wann p &Si besteet considéréiert; 0,05. Statistesch Analyse Leeschtung war mat SPSS 13,0 fir Windows (SPSS Galaxy Chicago, IL). VerfÜgung Resultater VerfÜgung GCRG213p Ausdrock Musteren an normal gastric mucosa an gastric adenocarcinoma VerfÜgung z'ënnerscheedde GCRG213p staining war an alleréischter gastric adenocarcinomas observéiert, lymph Node Metastasen erhéijen, an Net-tumoral gastric mucosa (Dorënner 1). An d'Net-tumoral gastric mucosa aus esopheageal-gastric menaarbecht an antrum Géigend, awer d'Zytoplasma vun ënnerscheet Uewerfläch epithelia an mucosal Glands negativ staining, mä positiv GCRG213p staining war an der basal Membran vun der normal Glands observéiert. 133 vun 175 Primärschoul gastric adenocarcinomas, an 51 vun 67 erhéijen metastatic zu lymph Node zougedréckt positive GCRG213p immunoreactivity, déi an der Zytoplasma vun der carcinoma Zellen etabléiert huet. Figur 1 GCRG213p Ausdrock vun mënschlecher malignant an Net-malignant gastric mucosa. Béid (A) Primärschoul gastric adenocarcinoma (100 ×) an (B) adenocarcinoma an der lymph Node eruewert (100 ×) zougedréckt positive GCRG213p an der Zytoplasma stainging; (A) an (B) Gewise héijer Vergréisserung (400 ×) aus der Géigend vun (A) an (B). (C) An der Net-malignant gastric epithelia, positiv staining war an der basal Membran observéiert awer net zu der Zytoplasma; GCRG213p immunoreactivity war an der Zytoplasma vun gastric intestinal metaplasia Glands (arrowed) (100 ×) fonnt; . (C) Gewise héijer Vergréisserung (400 ×) aus der Géigend an (C) VerfÜgung Laut dem Lauren klasséieren, ass gastric Kriibs devided an zwee histological Zorte: intestinal-Typ oder diffusen-Typ. Mir hunn 153 intestinal-Typ Fäll an 22 diffusen-tye Fäll vun dëser Etude. Vun der 153 intestinal-Typ Fäll, 34. intestinal metaplasia an 28 intraepithelial neoplasia Echantillon adjecent fir de Kriibs identifizéiert goufen. Den Alter (Joer, mengen ± Fils) vun der intestinal-Typ Grupp mat intestinal metaplasia (59.67 ± 12.30) ass méi al wéi d'diffusen-Typ Grupp (51.05 ± 11.29) (p = 0.004). 31 vun 34 intestinal metaplasia, an 27 vun 28 nidderegen /high- Schouljoer intraepithelial neoplasia zougedréckt GCRG213p immunoreactivity. Déi meescht vun de positiven Fäll zougedréckt a mëll ze moderéiert staining (Table 2) .Table 2 GCRG213 Ausdrock vun gastric Otemschwieregkeeten Echantillon VerfÜgung Groups
Number
GCRG213 Ausdrock
Allgemengen stoung ‡
PR§ (%)

0-1
2-3
4-5 VerfÜgung
6
Net-tumoral gastric epithelia VerfÜgung 112 zu 112 VerfÜgung 0 VerfÜgung 0 VerfÜgung 0 VerfÜgung 0.00 VerfÜgung Intestinal metaplasia VerfÜgung 34
3 VerfÜgung 18 zu 11 VerfÜgung 2 VerfÜgung 91,18 * VerfÜgung nidderegen /héich-Schouljoer VerfÜgung intraepithelial neoplasia 28 VerfÜgung 1 VerfÜgung 17 zu 10 VerfÜgung 0 VerfÜgung 96,43 * VerfÜgung adenocarcinoma ouni LNM † VerfÜgung 100 VerfÜgung 26 zu 50 zu 21 VerfÜgung 3 VerfÜgung 74,00 * VerfÜgung adenocarcinoma mat LNM VerfÜgung 75
16 zu 40 zu 16 VerfÜgung 3 VerfÜgung 78,67 * VerfÜgung entholl metastatic zu lymph Node VerfÜgung 67 zu 16 zu 42 VerfÜgung 8 VerfÜgung 1 VerfÜgung 76,12 * VerfÜgung † LNM VerfÜgung Lymph Node Metastasen; ‡ Allgemengen stoung berechent als (Intensitéit stoung) plus (Prozent Zellen positive stoung) wéi zu Methoden beschriwwen; §PR VerfÜgung Positiv Taux VerfÜgung * Verglach mat Net-tumoral gastric mucosa, p &Si besteet. 0,001. VerfÜgung Association tëscht GCRG213 Ausdrock an High GCRG213p immunostaining stoung VerfÜgung clinicopathological Parameteren an der Primärschoul war gastric Kriibs positiv mat entholl dat (p = 0,001) (Dorënner 2) soll. Mëttlerweil, war GCRG213p Ausdrock mat Lauren d'Klassifikatioun (p &Si besteet; 0,05) soll. De Prozentsaz vun positive GCRG213p staining am Alter Grupp (> = 65 TNT) war méi héich wéi déi vun den Net-Alter Grupp (&Si besteet; 65 TNT) (60/71 = 84.51% vs. 73/104 = 70.19%, p &Si besteet; 0,05). Allerdéngs war GCRG213p Ausdrock net déi ze ginn, verbonne mat anere clinicopathological Parameteren wéi opgezielt an Table 1 (; 0,05 p >) fonnt. An der 67 Patiente souwuel mat der Primärschoul entholl an lymph Node metastatic entholl uplanzen, war GCRG213p positiv zu 51 lymph Node Metastasen uplanzen an 52 Primärschoul entholl uplanzen (76.12% géint 77,61%), respektiv, wat déi Ausdrock vun lymph Node metastatic nik GCRG213p ugëtt entholl ass mat GCRG213p Ausdrock am primäre gastric carcinoma concordant. GCRG213p Ausdrock vun lymph Node Investitiounen war och mat hierer vun entholl dat (p = 0.015), mä net mat aneren clinicopathological Parameteren (; 0,05 p >) assoziéiert. Figur 2 Korrelatioun vun GCRG213p immunostaining stoung an der Primärschoul gastric Kriibs mat entholl dat. Allgemeng Punktzuel (OS) vun immunostaining ass an d'Gutt-ënnerscheet Kriibs méi héich wéi déi vun den aarme-ënnerscheet (p = 0.001). VerfÜgung Relatioun vun GCRG213 Ausdrock mat Iwwerliewe VerfÜgung Follow-up Informatiounen war sinn op 175 gastric Kriibs Perioden Patienten fir vun 18 Méint bis 14 Joer variéieren. Allgemeng Survival Tauxe si wéi follegt zesummen: 91,42% (1 Joer), 78,28 %% (2 Joer), 56,57% (3 Joer), 39,43% (4 Joer), an 23,43% (5 Joer). D'Steiren Iwwerliewe Taux 41 Méint ass. VerfÜgung Baséierend op GCRG213p Ausdrock am primäre erhéijen, gouf et keen groussen Ënnerscheed zu Iwwerliewe tëscht Patienten am GCRG213p negativ Kategorie Verglach mat der GCRG213 positive Kategorie (X VerfÜgung 2
= 2,072, p = 0.558). Den Zerfall, war tëscht GCRG213p Ausdrock vun lymph Node Metastasen an Iwwerliewe (X VerfÜgung 2 VerfÜgung = 3,272, p = 0.195). VerfÜgung GCRG213p Ausdrock vun malignant an normal gastric mucosal Zell Linnen keng Korrelatioun observéiert
Western blotting assays sech op gastric Kriibs Zellen dorënner SGC-7901, BGC-823 an net-malignant gastric mucosal Zell Linn GES-1, fir standing fir weider der Ënnerscheed Ausdrock vun GCRG213p validéieren. Protein Gruppen vun ongeféier 35 kDa sech identifizéiert. Dräi Zell Linnen getest ausgedréckt GCRG213p op verschidden Niveauen. GCRG213p Niveau méi héich an de Kriibs Zell Linnen ewéi zu GES-1 (Dorënner 3) fonnt. Dëst brengt Mätscher mat der IHC Resultat vun dëser Etude confirméiert, i.e., war GCRG213p zu gastric Kriibs overexpressed fonnt. Figur 3 Western blotting Analyse vum ganze Zell Extrait aus gastric malignant an Net-malignant Zellen mat anti-GCRG213p antibody. Zellen ausdrécklech mat FAQ Bands vum 35-kDa GCRG213p. 1: GES-1,2: SGC-7901; 3: BGC-823. D'filter war reprobed mat anti-β-actin antibody fir gläich Luede ze kontrolléieren (ënnen Rot). VerfÜgung Methylation-spezifesch Hinnen alleguer Analyse vun LINN-1 VerfÜgung Methylation-spezifesch Hinnen alleguer (MSP) analyséiert goufen op gastric Kriibs Zellen gesuergt an net-malignant gastric mucosal Zell Linn GES-1, fir d'L1 Promoteur methylation Status vun dëse Zell Zeilen ze testen. Ausser gastric Kriibs Zell Linnen SGC-7901 an BGC-823, mir och gastric Kriibs Zell Linn MGC-823 studéiert, fir Zweck vu méi Informatiounen iwwer L1 methylation zu gastric Kriibs Zell Linnen suergt. D'Hinnen alleguer Produiten Kick mat methylated-spezifesch primers (MSPM) an unmethylated-spezifesch primers (MSPU) goufen 116-BP an 111-BP, bzw.. An GES-1 Zellen, war Hinnen alleguer Produit mat MSPM Implikatioune verstärkt, mee net mat MSPU suggeréiert datt L1 Promoteuren an GES-1 Zellen mécht komplett methylation; An SGC-7901 Zellen, BGC-823 Zellen an MGC-803 Zellen, kann den entspriechende Bands mat béiden MSPM an MSPU, duerops partiell methylation (Dorënner 4) Kick gin. Figur 4 Methylation-spezifesch Hinnen alleguer (MSP) Analyse vun LINN-1. Agarose gelies electrophoresis vun MSP Produiten. M: Produit Kick mat methylated-spezifesch primer; U: Produit mat unmethylated-spezifesch primer Kick. PC: positiver Kontroll, Mënsch methylated DNA Standard; W: duebel destilléiert Waasser Kontroll. Bedenkt datt d'GES-1 Echantillon zougestanen methylated Hinnen alleguer Produite weisen, während déi MGC-803, SGC-7901 an BGC-823 Echantillon weisen souwuel methylated an unmethylated Hinnen alleguer Produiten. VerfÜgung Bioinformatic Identifikatioun vun GCRG213p als Member vun L1-EN Famill VerfÜgung BLASTP Programm Analyse, wéi uewen ernimmt, Teamchef GCRG213p peptide 83,0% Formatioun mat der C-Uschloss Regioun vun L1-EN gedeelt. Conserved Domain Search vun GCRG213p Haaptrei am Conserved Domain Datebank vun NCBI Hits der grousser exonuclease /endonuclease /phosphatase (EEP) superfamily, dorënner endonuclease Domän vun der Net-LTR retrotransposon LINN-1, exonuclease III (ExoIII) -like apurinic /apyrimidinic ( AP) endonucleases, etc. VerfÜgung Weider Analyse BLASTP benotzt beweist, datt et zu GCRG213p Haaptrei sinn e puer Reschter déi fir de conserved Charakteristike vun L1-EN wichteg sinn, wéi putative phosphate bindend Site [ioun bindend Site] (Y115 /N145 /H230), putative Metal bindend Site [ioun bindend Site] (D229) an putative Katalysator Site [aktiv Site] (Y115 /D145 /N147 /D229 /H230) (Dorënner 5). Figur 5 Formatioun vun GCRG213p an L1-EN. Red Schrëftgréisst duerstellt héich Konsens, blo oder schwaarz Schrëftgréisst duerstellt niddereg Konsens. GCRG213p enthale Reschter (arrowed) déi fir de endonuclease Aktivitéit vun L1-EN. VerfÜgung Diskussioun wichteg sinn VerfÜgung et kloer ass dass L1 retrotransposition Evenementer zu somatic an meeschten Zellen Priedegt hunn. Trotz der Tatsaach, datt voll Längt L1 mRNAs sécherlech déi dominant Quell vun L1 retrotransposition, Varianten endogenous L1 ORF2 splice mat Potential biologescher Relevanz sinn an verschidden somatic Stoffer ausgedréckt fonnt. Belancio etc. [20] fonnt SpORF2 ët an verschiddenen erwuessene Mënsch Stoffer an den Ausdrock vun SpORF2 mRNA geet Otemschwieregkeeten-spezifesch Variant. Soumat ass L1 Funktioun onwahrscheinlech nëmmen zu voll aktiv Elementer limitéiert ginn. D'SpORF2 kann och funktionell ORF2 FAQ produzéieren. Déi meescht Net-LTR retrotransposons sinn APE-Typ Net-LTR retrotransposons [29]. D'glaskloer Struktur Analysë vun der mënschlecher L1-EN weisen, datt et e Prototyp fir AP-wëll retrotransposon encoded endonucleases, déi Nick DNA mat ofwiesselnd Spezifizitéit ass an si responsabel fir Millioune vu retrotransposon insertions zu eukaryotic genomes [30]. Béid APE1 an L1-EN gehéieren zu de grousse EEP superfamily datt d'selwecht FAQ scaffold an der selwechter Katalysator Reschter deelt. VerfÜgung der Tatsaach Sou dass GCRG213p deelt héich leien Alignementer mat L1-EN, an conserved Reschter leie wat fir L1 entscheedende sinn -EN phosphate bindend, Metall bindend an Katalysator Aktivitéit, proposéieren mir dass GCRG213 engem spliced ​​L1-ORF2 ass. GCRG213p kéint eng funktionell Member vun L1-EN Famill, eng Variant vun L1-EN ginn. VerfÜgung D'overexpression vun L1 zu erhéijen dicht presentéiert gouf [12-14]. D'bewosst endogenous L1-RT schielt wéi engem konstitutive funktionell Komponent an tumorigenic Zellen duerch eng héich Prolifératioun an engem niddregen dat Status charakteriséiert [31, 32]. Mä et sinn puer Détailer Ëmfroen vun L1-EN zu Mënsch entholl. Ergun etc. benotzt anti-L1-EN antibody d'L1-ORF2 am Erwuessenen Mënsch Stoffer ze erkennen, se fonnt gouf staark ORF2p Ausdrock vun endothelial Zellen vun Blutt Offshore zu normal mënschlech Aarbecht, Duerchfall Infektioun BBC a testicular Otemschwieregkeeten, mä kee ORF2p Ausdrock observéiert an de Kriibs Zellen studéiert [33]. etc. Oricchio [34] gemellt dass stabil L1 RNS Amëschen Prolifératioun reduzéiert konnt a förderen, dat am A-375 melanoma Zellen. Si observéiert och eng Reduktioun vun L1-ORF2 FAQ. Mä d'Fuerscher hunn net Kloeren ob d'Prolifératioun Auswierkunge goufen aus L1-EN an /oder L1-RT. Fir Datum, et ass kee Rapport iwwer d'Roll vun L1-EN op Zell Prolifératioun an dat fonnt. An dëser Etude, reconfirmed mir dass GCRG213p Ausdrock vun gastric Kriibs bei FAQ nik war, souwuel an der Zell Modell an der Otemschwieregkeeten Rubriken studéiert, déi mat eiser leschter Etude Resultater um mRNA Niveau konsequent ass [22]. L1 hi hypomethylation zu enger Rei vun entholl Stoffer, dorënner gastric Kriibs [35]. Shigaki etc. [36] benotzt bisulfite-pyrosequencing Technologie L1 methylation Status vun resected gastric Kriibs uplanzen an ofgedonkelt. Si fonnt dass Patienten L1 hypomethylation mécht erfuerene vill méi kuerz globale Iwwerliewe wéi déi mat hypermethylation. Mir hunn an dëser Etude, déi L1 zu normal misst methylated war gastric mucosa Zell Linn GES-1, mee war an gastric Kriibs Zell Linnen deelweis methylated. Dës Resultater vergläichen mat der GCRG213p Ausdrock Muster an gastric Kriibs Zell Linnen, also, déi méi Beweiser iwwer d'Natur vun der GCRG213 peptide. Allerdéngs kéint mer net eng Korrelatioun tëscht GCRG213p Ausdrock an Iwwerliewe vun dëser Etude z'identifizéieren. Intraepithelial neoplasia gegleeft ass eng wichteg Etapp vun malignant Transformatioun vun gastric adenocarcinoma gin, overexpression vun GCRG213p an dës Glands am gastric oncogenesis e Potential Roll vun GCRG213p implizit. Déi héich immunostaining Virsprong vun GCRG213p zu gutt-ënnerscheet gastric Kriibs uginn, dass et zu gastric Kriibs dat Équipe kéint ginn. VerfÜgung Iwwerdeems chronescher atrophic gastritis gegleeft ass en Alter-Zesummenhang Entitéiten, intestinal metaplasia gin war Beweiser vun atrophic gastritis Betruecht, well spezialiséiert Glands Équipe vun intestinal crypts, sou intestinal metaplasia ersat gouf den Alter-Zesummenhang considéréiert gouf. Alter spillt eng wichteg Roll an der Entwécklung vun gastric intestinal metaplasia letzebuergescht, an Themen mat gastric intestinal metaplasia sech vill méi al wéi déi ouni metaplasia [37]. Intestinal metaplasia Glands ugewisen extensiv GCRG213p immunostaining vun dëser Etude. Mëttlerweil, observéiert mir datt de positiven Taux vun GCRG213p zu gastric Kriibs Stoffer am Alter Grupp wéi déi méi héich ass an d'Net-Alter Grupp. Dës kéinten datt GCRG213p zou ass mat gastric mucosa Alterungsprozess an Alter-Zesummenhang gouffen assoziéiert. Et ass keen Studium op der Associatioun tëscht L1 Ausdrock an Alter am Moment, mä Duerchschnëtt L1 methylation hutt variéieren net méi Zäit [38, 39]. Et gëtt ugeholl, datt duerch d'L1-EN vu Frankräich DNA nicking Zell toxicity induce kann, déi zu Zell Zyklus verhaft, apoptosis oder senescence Resultater. Ausdrock vun exogenous voll-Längt L1 a SpORF2 am normale Mënsch Här iwert mech selwer, Kriibs Zellen an erwuessener Stammzellen muss Magnéitfeld DNA Schued gefouert an schéinen der senescence-wëll phenotype [20]. Sou, Verdächtege mir dat ganzt Aktivitéit vun GCRG213p, eng Variant vun L1-EN, eng potentiell Quell fir Alter-Zesummenhang bewosst Transformatioun vertriede kënnen, déi schlussendlech zu der Zell senescence dréit, oder oppositely, fir en aus-ze-kontrolléiert haten (malignant) All Auteuren liesen an guttgeheescht der Finale mëttelalterlech Handschrëft. VerfÜgung

• Alkohol Konsum a Gefor vun gastric Kriibs: en Kohort Etude vun Männer zu Kaunas, Litauen, mat bis zu 30 Joer Suivi
• Schulung vun chromosome Onstabilitéit an Mo. Kriibs vun der Ausdrock Muster vun mitotic Bomm Genen am Mais bis areca-nut ausgesat Wou muss ech