BRCAA1 monokloninis antikūnas konjuguoto liuminescencines magnetinių nanodalelių in vivo tikslingai magnetofluorescent vaizdo skrandžio cancer

BRCAA1 monokloninis antikūnas konjuguoto liuminescencines magnetinių nanodalelių in vivo
skirta magnetofluorescent vaizdavimo skrandžio vėžio
tezės
Background pervežimas Skrandžio vėžys yra 2-oji dažniausiai vėžys Kinijoje, ir vis dar yra antra labiausiai paplitusi priežastis, dėl vėžio susijusių mirčių pasaulyje. Kaip atpažinti ankstyvus skrandžio vėžio ląsteles vis dar yra didelis iššūkis ankstyvos diagnostikos ir terapijos pacientams, sergantiems skrandžio vėžiu. Šis tyrimas yra skirtas plėtoti vienos rūšies daugiafunkcines nanoprobes in vivo
skirta magnetofluorescent vaizdavimo skrandžio vėžio.
Metodai
BRCAA1 monokloninis antikūnas buvo parengta, buvo naudojamas kaip pirmą antikūnų dažyti 50 porų egzempliorių skrandžio Vėžys ir kontroliuoti normalus skrandžio gleivinės audinius, bei konjuguota su liuminescencinėmis magnetinių nanodalelių su 50 nm skersmens, Gaunami BRCAA1 konjuguoto fluorescencinės magnetiniai nanoprobes buvo būdingas perdavimo elektroniniu mikroskopu ir fotoliuminescencine spektrometrija, kaip-parengti nanoprobes buvo inkubuojami su skrandžio vėžys MGC803 ląstelių, ir buvo švirkščiamas į peles modelio pakrautas su skrandžio vėžiu, 5 mm skersmens per uodegos venos, tada buvo nufotografuota fluorescencijos optinis vaizdo ir magnetinio rezonanso tomografijos, buvo tiriamas jų biologinį pasiskirstymą. Audinių gabaliukai buvo pastebėtas fluorescencinės mikroskopijos ir svarbūs organai, pavyzdžiui, širdies, plaučių, inkstų, smegenų ir kepenų buvo analizuojami hematoksilinu ir eozinas (He) dėmių metodu.
Rezultatai
BRCAA1 monokloninis antikūnas buvo sėkmingai parengta, BRCAA1 baltymų eksponuojami per saviraiškos 64% skrandžio vėžio audiniuose, nėra kontrolės normaliomis skrandžio gleivinės audinių išraiška, egzistuoja statistinis skirtumas tarp dviejų grupių (p
< 0,01). BRCAA1 konjuguoto fluorescencinė magnetinio nanoprobes eksponatas labai mažai toksiškumas, mažesnė magnetinė intensyvumas ir mažesnis fluorescencinė intensyvumas su piko-mėlyna pamainą nei gryno FMNPs, gali būti patenka endocitozės būdu skrandžio vėžio MGC803 ląsteles, gali nukreipti in vivo
skrandžio vėžio audiniuose pakrauti pelių, ir gali būti naudojamas vaizdo skrandžio vėžio audiniuose fluorescencinio vaizdo ir magnetinio rezonanso tomografijos ir daugiausia platinama vietos skrandžio vėžio audiniuose per 12 h po injekcijos. JE dėmių analizė parodė, kad nėra akivaizdžių nuostolių nepastebėta svarbius organus.
Išvadas Viesbutis The aukštos kokybės BRCAA1 monokloninių antikūnų konjuguoto fluorescencinės magnetinių nanodalelių gali nukreipti in vivo
skrandžio vėžio ląstelės, gali būti naudojami vienu metu magnetofluorescent vaizdavimo, ir gali turėti didelį potencialą programų, tokių kaip dvejopo modelio vaizdavimo ir vietos šilumos terapija ankstyvos skrandžio vėžio artimiausioje ateityje.
faktai
skrandžio vėžys, kai buvo antra labiausiai paplitusi vėžio žodžio [1]. Iki šiol JAV, skrandžio piktybinių navikų šiuo metu yra 14. Dažniausiai vėžys, ir 2-oji Dažniausiai vėžys Kinijoje [2, 3]. Skrandžio vėžys yra dar antra labiausiai paplitusi priežastis, dėl vėžio susijusių mirčių pasaulyje, ir vis dar sunku išgydyti, nes dauguma pacientų, esančių su progresavusia liga. Todėl, kaip atpažinti, sekti ar nužudyti ankstyvą skrandžio vėžio ląsteles yra labai raktas ankstyvos diagnostikos ir terapijos pacientams, sergantiems skrandžio vėžiu.
Iki šiol ieško biologinių žymenų glaudžiai susijęs su skrandžio vėžiu tebėra svarbus uždavinys. Nuo 1998 metų mes buvo teisiamas sukurti išankstinio skrandžio vėžys anksto perspėjimo sistemą [4], ir tikimės, kad naudoti šią anksto perspėjimo sistemą, aptikti ankstyvus skrandžio vėžio ląsteles pripažinti pacientams su ankstyvos skrandžio vėžio. Nors buvo nustatyti kai kurie skirtingai išreikštais genai, susiję su ankstyva skrandžio vėžio [5, 6], niekas genas gali būti patvirtinta, kad specifinis biologinis skrandžio vėžio. Todėl, siekiant atpažinti ankstyvus skrandžio vėžio ląsteles, mes pasirinkti tik potencialius biologinius žymenis, susijusius su skrandžio vėžiu, ir sujungti nanodaleles ir molekulinės vaizdavimo technika, pabandykite rasti in vivo
anksti skrandžio vėžio ląstelių in vivo pervežimas naviko skirta vaizdo , Mūsų ankstesniame darbe, mes tikrinami iš ir klonuojami BRCAA1 genas (krūties vėžio antigeno 1 geną) nuo krūties vėžio ląstelių linija MCF-7cells [AF208045, taip pat vadinamas ARID4B (AT-turtingas interaktyvus domenų, kurių sudėtyje yra baltymų 4B)], ir nustatė jos antigenas epitopas peptidas SSKKQKRSHK [7, 8]. Mes taip pat parengė BRCAA1 polikloninį antikūnus, ir pastebėjo, kad BRCAA1 baltymų eksponuojami per išraiška beveik 65% klinikinių mėginių skrandžio vėžio audiniuose [9-11]. Mes taip pat pastebėjo, kad BRCAA1 antigenas yra per išreikštas skrandžio vėžio ląstelių linijų, pavyzdžiui, MKN-1, MKN-74, SGC-7901, Kato-III ir MGC803 ląstelės. Todėl mes prognozuojame, kad BRCAA1 baltymas gali būti vienas potencialus nukreipimas molekulė in vivo
skrandžio vėžio ląstelės.
Pastaraisiais metais molekulinės vizualizavimo technologijos, pagrįstos įvairių funkcinių nanoprobes padarėme didelę pažangą. Pavyzdžiui, nanodalelės, pavyzdžiui, kvantinių taškų, magnetinių nanodalelių ir aukso nanorods ir tt buvo naudojamas, molekulinis vaizdų gavimas [12-19]. Iki šiol kelios mažos gyvūnų vaizdavimo technologijos buvo sukurtos, pavyzdžiui, optinio vaizdo (OI) iš švytėjimą (BLI), fluorescencija (FLI) ir intravital mikroskopijos (IVM), mikro-PET, MRT ir KT [20-26]. Tarp visų šių technologijų, kaip pagerinti savo erdvinę skiriamąją gebą ir audinių gylį jautrumas yra didelis iššūkis. Iki šiol in vivo
navikų audiniuose, su daugiau nei 1 cm skersmens, gali būti lengvai atpažįstami pagal KT, MRT, PET ir Bioluminescence vaizdavimo, navikai yra mažesnė arba lygi 5 mm skersmens labai sunku rasti klinikinių pacientų. Mūsų ankstesnėse ataskaitose, fotosensibilizatoriaus konjuguoto magnetinės nanodalelės buvo sėkmingai naudojamas in vivo pervežimas vienu metu magnetofluorescent vaizdo ir taikymas terapijoje [27]. Tačiau orientacija gebėjimas nanoprobes buvo labai priklausoma nuo magnetinių nanodalelių. Mes taip pat parengė daugiafunkcinį ribonucleazės-A-konjuguoto CdTe kvantinį tašką grupių nanosystem sinchroniniam vėžio vaizdo ir terapijos [28], orientacija į gebėjimas, kaip paruošti nanoprobes priklauso nuo RGD peptido. Kai kurie tyrimai rodo, kad HER-2 baltymas pasižymi nenormalus ekspresiją 6-35% skrandžio vėžio audinių [29, 30], ir buvo naudojamas kaip terapinio taikinio klinikinių pacientams, sergantiems skrandžio vėžio [31], todėl, HER-2 baltymų priklauso puikus potencialas vaizdavimo ir gydymas skrandžio vėžio. Tačiau iki šiol nė ataskaita rodo, kad tikslingiau vaizdo ir terapija in vivo pervežimas skrandžio vėžiu yra pagrįstas biologinių žymenų, susijusių su skrandžio vėžiu.
Pastaraisiais metais mes valdomai parengė silicio dengtos kvantinius taškus ir super Paramagnetinis nanodalelių kompozitai (FMNPs) su stipriais fluorescencinės signalų ir puikių magnetinių savybių, ir kurie naudojami jų biologinių ženklinimo, stebėjimo kamienines ląsteles, bio-atskirti, orientacija vaizdo ir hipertermija navikų [29-32], taip pat pastebėta, kad paruošti nanodalelės savo gerą biologinį suderinamumą ir stabilumą [33-38].
šiame darbe mes visiškai naudotis FMNPs ir BRCAA1 antigeno, paruošto monokloniniai antikūnai prieš BRCAA1 baltymų, ir paruošti BRCAA1 monokloninių antikūnų konjuguoto fluorescencinės magnetinių nanoprobes privalumų (BRCAA1- FMNPs), dirba nuogi pelių modelis pakrautas su skrandžio vėžiu, 5 mm skersmens ir Ivis vaizdavimo sistemos ir magnetinio rezonanso tomografijos, tyrė, kaip paruošti nanoprobes galimybes neinvazinis in vivo
skirta dvigubą modalinį vaizdavimo skrandžio vėžio. Rezultatai rodo, kad kaip-paruoštos nanoprobes gali būti naudojamas in vivo
dvejopo modelio vaizdavimo skrandžio vėžio, ir gali turėti didelį potencialą programas, kaip antai dvejopo modelio vaizdavimo ir vietos šilumos terapijos pradžioje skrandžio vėžio artimiausioje ateityje.
rezultatai ir jų aptarimas
apibūdinimas anti-BRCAA1 monokloninis antikūnas
Kaip parodyta 1 lentelėje, mes sėkmingai gavo du teigiamus klonas ląstelių linijos S-200-5 ir S-335-5, jų titrai buvo skirtingi, pagaliau mes išrinkome anti-BRCAA1 monokloninių antikūnų nuo S 200-5 ląstelių linijos kaip pirmą antikūnų dažyti skrandžio vėžio audiniuose ir kontrolės audiniai. Mes nustatėme, kad BRCAA1 baltymų eksponuojami per saviraiškos 64% skrandžio vėžio audiniuose, nėra normalu kontrolės skrandžio gleivinės audinių išraiška, kaip parodyta 1 paveiksle, egzistuoja statistinis skirtumas tarp dviejų grupės (p
< 0,01). Šis rezultatas yra beveik identiškas mūsų ankstesnėje ataskaitoje [4, 9-11], kuri labai rekomenduojame, kad BRCAA1 antigenas gali būti pasirinktas kaip potencialų taikinį didžiąją skrandžio vėžio, jei kaip paruošti nanoprobes gali pripažinti 64% pacientams su ankstyvos stadijos skrandžio vėžiu sergantiems tai bus labai naudinga diagnozės ir gydymo klinikinių skrandžio vėžys patients.Table 1 titrai BRCAA1 monokloninius antikūnus ascito skystyje sukeltos hibridomos klonas Cells ELISA

antikūnų titras *
klonas
BRCAA1 (C) -OVA **
BRCAA1 (C) -BSA **
BSA **
OVA **
S 200-5
1.024.000
1.024.000
< 1000
< 1,000
S-335- 5
128.000
512.000
< 1000
< 1000
* iš ascitas abipusis skystis, praskiestas pirmasis skiesti ascito skystyje buvo 1:. 1000
** antigenai buvo padengtas ELISA plokštelės.
1 paveikslas išraiška BRCAA1 baltymų skrandžio vėžio audiniuose ir normalu kontrolės skrandžio gleivinės audiniuose. A: skrandžio vėžio audiniuose, × 100; B: normalūs kontrolės audiniai, × 50.
rengimas ir apibūdinimas BRCAA1- FMNPs nanoprobes
Kaip parodyta 2A pav, paruošti FMNPs buvo sudarytas iš silicio dioksido suvynioti CdTe ir magnetinių nanodalelių, jų dydis buvo 50 nm, arba todėl skersmuo. Kaip parodyta 2D paveiksle, po FMNPs buvo konjuguoto anti-BRCAA1 antikūnų, kaip paruošti nanoprobes "fotoliuminescencija (PL) intensyvumas buvo mažesnis nei FMNPs, eksponuoti kairėje pereiti 40 nm, kuris turėjo sumažinti poliarizacijos norma aplinkinių molekulių, ir todėl į Stokes'o poslinkio sumažėjimo, pagaliau todėl mėlyna pakeisti tai, emisijos spektrų. Panašiai, magnetinis intensyvumas, kaip paruošti nanoprobes taip pat buvo mažesnis nei FMNPs. 2 pav apibūdinimas anti-BRCAA1-FMNPs nanoprobes. A: HR-SER nuotrauka FMNPs; B: Magnetinė nuosavybė anti-BRCAA1-FMNPs nanoprobes; C: Zeta-potencialas FMNPs su amino grupės, COOH, Si-O grupę; D:. PL spektrų FMNPs jungiasi su ir be BRCAA1 antikūnų
Rengiant BRCAA1-FMNPs nanoprobes žinoma, mes nustatėme, kad paviršius Funkcjonalizacja FMNPs buvo labai svarbus konjugato kovos su BRCAA1 antikūnių FMNPs per kovalentinis obligacijų. Kaip parodyta 2C paveiksle, įvairių funkcinių grupių FMNPs turi skirtingus Zeta potencialo vertybes. FMNPs turėjo neigiamą Si-O-grupę, jų zeta potencialą vertė buvo -34,05 mV, tai FMNPs su amino grupės turėjo teigiamą zeta potencialą vertę 24.80 mV, FMNPs su karboksilo grupės turėjo neigiamą zeta potencialą vertę -30.50 mV. Mes nustatėme, kad karboksilo grupes dėl FMNPs, konjuguotą su anti-BRCAA1 antikūnas lengviau nei amino grupių dėl FMNPs paviršiaus paviršiaus. Kaip parodyta 2 lentelėje, vidutinis mova norma anti-BRCAA1 antikūnių FMNPs-COOH buvo 80,28% .table 2 Jungtis norma matavimas FMNPs anti-BRCAA1 antikūnų

bendrą jų koncentraciją anti-BRCAA1 antikūnų (ng /pl)
kovos su BRCAA1 antikūnų likutinės reakcijos mišinio (ng /pl) koncentracija
movos dydžio (%)

1
1000.0
197.3
80.27
2
1000.0
191.2
80.88
3
1000.0
203.0
79.70
Kaip paruošti nanoprobes dėl in vitro
skirta skrandžio vėžio ląstelės
Nukreipimas gebėjimas, kaip paruošti nanoprobes in vitro
stebėjo fluorescencijos mikroskopu ir apskaičiuotų FACSCalibur Flow citometre. Kaip parodyta 3 paveiksle, FMNPs atsitiktinai disperguoti vidinis iš citoplazmos, ir anti-BRCAA1-FMNPs nanoprobes egzistavo aplink Branduolėlis. Abu FMNPs ir paruošti BRCAA1-FMNPs nanoprobes gali įeiti į MGC803 ląstelių citoplazmoje po 4 h inkubacijos su MGC803 ląsteles, kaip nurodyta 4a paveiksle, FMNPs gali ženklinti 25.23% MGC803 ląsteles, The lieka 74.77% ląstelės negalėjo būti paženklinti. Kaip nurodyta 4B paveiksle, 45.92% MGC803 ląstelės galėtų būti ženklinamas nurodant BRCAA1-FMNPs nanoprobes. Kai FMNPs ir anti-BRCAA1-FMNPs nanoprobes buvo atitinkamai inkubuojami su MGC803 ląstelių ir žmogaus fibroblastus ląstelių 0,5 val, mes nustatėme anti-BRCAA1-FMNPs nanoprobes prisiimtų MGC803 ląstelių daug, keletas nanoprobes prisiėmė žmogaus fibroblastus ląstelių, mažai FMNPs galėtų sudaryti MGC803 ląstelių ir žmogaus fibroblastus ląstelių, kurios labai rekomenduojame, kad prieš BRCAA1-FMNPs nanoprobes gali nukreipti MGC803 ląsteles konkrečiai. Magnetinis rezonansas ir MGC803 ląstelių ir žmogaus fibroblastus ląstelių inkubuojami su anti-BRCAA1-FMNPs 4 h buvo parodyta 5 paveiksle, MGC803 ląstelės eksponuojami stiprų magnetinį signalą nei žmogaus fibroblastus ląstelių (HDF), kurie taip pat parodė, kad paruošti nanoprobes gali nukreipti MGC803 ląstelės konkrečiai. 3 pav in vitro fluorescencijos vaizdai MGC 803 po gydomi FMNPs ir FMNPs-BRCAA1 nanodalelių (Didinimo = × 200). Į viršų vaizdų grupė iliustruoja FMNPs atsitiktinai paskirstyti į citoplazmą, apačioje grupė vaizdų eksponuojami FMNPs-BRCAA1 disperguoti maždaug Branduolėlis ir buvo gerai orientacija galimybę į MGC803.
4 pav FACSCalibur Flow citometre analizės MGC803 pažymėtą FMNPs ir FMNPs-BRCAA1. A: MGC803 gydomi 50 mikrogramų /ml FMNPs 24 val eksponuojami 25,23% ląstelių buvo paženklinti FMNPs. B: MGC803 gydomi 50 g /mL FMNPs-BRCAA1 už 24 val iliustruoja iki 45.92% ląstelės buvo paženklinti su FMNPs-BRCAA1
5 paveikslas MR iš MGC803 ląstelių ir HDF ląsteles.. A: MGC803 ląstelės su anti-BRCAA1-FMNPs. B: HDF ląstelės su anti-BRCAA1-FMNPs. C:. MGC803 ląstelių tik FMNPs
Kaip paruošti nanoprobes Fluorescuojančių vaizdavimo in vivo
skrandžio vėžio ląstelės
įvertinti naviko tikslines savybes prieš BRCAA1-FMNPs nanoprobes, nuogas pelėmis modelių pakrautas su MGC- 803 skrandžio vėžio ląstelės buvo parengta ir prižiūrima pagal neinvaziniu būdu 12 valandų naudojant Ivis fluorescencija vaizdo gavimo sistema.
pagal stebėjimas realiu laiku fluorescencijos intensyvumą visam kūnui, navikas nukreipimą pobūdis anti-BRCAA1- FMNPs zondas buvo lengvai nustatoma nuogas pelių pakrautas su skrandžio vėžiu MGC803 ląsteles. Kaip parodyta 6a paveikslas, visa gyvūnai gaminami liuminescencines signalus per 30 min po injekcijos nanoprobes, poodinių navikų audiniuose gali būti aiškiai apibrėžtas iš aplinkinių fono audinio nuo 1 h ir 12 h po injekcijos, su didžiausia kontrastas, tuo pačiu 6 val po injekcijos. Stiprus fluorescencijos signalas dar buvo aptinkama naviko svetainėje 6 val po injekcijos, kuri nurodė, kad kovos su BRCAA1-FMNPs nanoprobes buvo pirmenybė sukaupta navikų audiniuose. Iš tiesų, remiantis 6b pav rezultatus, tuo didesnė vėžinių kad fonas santykis (PKR) vertės labai siūlė, kad paruošti nanoprobes pirmenybė sukaupta navikų audiniuose, palyginti su įprastais kontrolės audiniuose. Tai buvo patvirtinta fluorescencijos vaizdai, kurie parodė, kad fluorescencijos signalas kaip paruošti nanoprobes į auglio vietą buvo stipriausias tarp visų pelių organuose, kaip parodyta 6C pav. Be to, po 12 h po injekcijos anti-BRCAA1-FMNPs nanoprobes, fluorescencija intensyvumas naviko vis dar buvo pastebėta aiškiai, o Paruoštų nanoprobes įprastomis organų įsisavinimas nebuvo akivaizdus. Šie duomenys labai rekomenduojame, kad paruošti nanoprobes galima nukreipti itin efektyviai navikų audiniuose viduje nuogas pelių pakrautas su skrandžio vėžiu. Mes taip pat pastebėjo, kad tie nanoprobes į visą pelės organizme beveik visiškai išnyko 12 h po injekcijos, mes taip pat aptiko nanoprobes išėjo iš Tulžies pūslė sistemos (duomenų nerodomas), laikas priklauso nuo Tulžies pūslė klirensas nanoprobes labai rekomenduojame, kad paruošti nanoprobes negali likti viduje nuogas pelėms ilgesnį laiką, todėl, kaip paruošti nanoprobes savo gerą biologinį saugumą. 6 pav in vivo fluorescencijos vaizdai naviko kaupimo ir pasiskirstymo audiniuose už FMNPs-BRCAA1 nanodalelių MGC803 žmogaus skrandžio naviko guolio athymic nuogas pelių. A in vivo
fluorescencijos vaizdai athymic nuogas pelių. MGC803 žmogaus skrandžio navikas buvo gautas po injekcijos FMNPs-BRCAA1 nanodalelių skirtingu laiko momentu. Navikas vieta yra nurodyta su rodykle. A-1: 0 H, A-2: 0,5 val, A-3: 1 val, A-4: 3 val, A-5: 6 H, A-6: 12 val. B PKR [Audinių fono (raumenų) ratio] vertę. PKR vertė buvo nustatoma taip: PKR = (naviko signalo fono signalą) /(fono signalo). C ex vivo
fluorescencijos vaizdai išpjaustytų organų ir auglio pelių MGC803 žmogaus skrandžio naviko paaukojo 12 h po injekcijos FMNPs-BRCAA1 nanodalelių. Fluorescencijos vaizdai išpjaustytų organų ir naviko buvo gauti naudojant fluorescencijos vizualizavimo būdą su 630 nm emisijos filtru. D biologinio pasiskirstymo anti- BRCAA1-FMNPs pelėms po injekcijos į veną. Keletas laiko taškai po injekcijos, geležies sumos audinių mėginių buvo įvertintas ICP masių spektrometrijos (n = 3).
Patologinė analizė naviko ir svarbūs organai
in vitro
vertinimas pašalintų pagrindines audiniuose, įskaitant kepenų, plaučių , blužnies, inkstų ir širdies, taip pat navikas, parodė, kad anti-BRCAA1-FMNPs zondai buvo daugiausia iki-Jį atliko naviko audinių, kurie eksponuojamų ar stipria fluorescencija signalus, kaip parodyta 7 paveiksle, kadangi kiti audiniuose, įskaitant kepenų , plaučių, blužnis ir širdies iki-paėmė kovos su BRCAA1-FMNPs nanoprobes labai mažai, o furtherly rodo, kad paruošti BRCAA1-FMNPs nanoprobes gali nukreipti skrandžio vėžio audiniuose. Mes taip pat naudojamas HE dažymo patikrinti visus organus, jokių akivaizdžių nuostolių nepastebėta svarbių organų [žr papildomą failą 1]. Pav 7 rezultatas iš IMUNOFLUORESCENCIJOS analizė. A naviko audinio. B kepenų. (Didinimas = × 200).
Kaip paruošti nanoprobes dėl MR ir nuogas pelių pakrautas su skrandžio vėžiu
in vivo
MR buvo atliktas nuogas pelių pakrautas su oda skrandžio vėžiu, 12 h po injekcijos , Reprezentacinės vaizdai T2 žemėlapiai buvo parodyta 8 paveiksle, po injekcijos į nanoprobes, reikšmingai pasikeitė signalo intensyvumo buvo pastebėtas kai kurių auglių regionuose rodo, kad egzistavo kaupimo navikų svetainėje nanoprobes kaip parodyta 8B pav, nes rodykle parodė. Kaip kontrolės, po to, kai pelės modelis su skrandžio vėžio buvo suleistas FMNPs 12 valandų, pelės buvo atliktas magnetinio rezonanso vizualizavimui, kuris neparodė intensyvų signalą auglio srities (8A pav). 8 pav MRT vaizdas pelių. A FMNPs be mova BRCAA1 B, FMNPs kartu su BRCAA1
potencialo mechanizmo orientacija vaizdavimo
Pastaraisiais metais molekulinės vizualizavimo technologijos buvo naudojamos realaus laiko ir neinvaziniai in vivo
navikų audiniuose, vaizdavimo [39-43]. Pavyzdžiui, kvantinių taškų dėl savo unikalių savybių švytinčiais, buvo naudojami biologinių ženklinimo ir fluorescencinio vaizdavimo [11-13, 33, 43], tačiau kvantiniai taškai "toksiškumas ribotas jų taikymas žmogaus organizmui, kiek tam tikrą saugų dydžiui taškai yra kuriama. Magnetiniai nanodalelės taip pat buvo naudojamas kaip kontrasto reagentu skirtos magnetinio rezonanso vizualizavimui [15, 33, 36]. Tuo pačiu metu, derinys iš dviejų vaizdo gavimo būdus suteikia privalumai ir to, nei naudojant vieną metodą, kuris sudarytų sąlygas išsamią informaciją apie naviko lokalizacijos, aplinkos, ir statusą.
Šiame tyrime, mes suprojektuoti ir paruošti įeina nauji vaizdavimo zondą, kuris buvo sudarytas iš silicio-suvynioti kvantinių taškų ir magnetinių nanodalelių su didinant jų biologinio suderinamumo tikslą. Mūsų rezultatai rodo, kad paruošti silicio suvynioti kvantiniai taškai ir magnetinės nanodalelės yra labai stabilus, ir savo stiprių fluorescencinės signalai ir magnetinio intensyvumas. Naudojant stiprius liuminescencines signalus, kaip paruošti nanoprobes, mes sėkmingai gavo fluorescencinė vaizdus in vivo
skrandžio vėžio audiniuose su 5 mm skersmens nuogas pelėmis modelį. Naudojant stiprius magnetinius signalus, kaip paruošti nanoprobes, mes taip pat sėkmingai gautas MR vaizdus in vivo
skrandžio vėžio audiniuose su 5 mm skersmens nuogas pelėmis modelį. Palyginti su ankstesnėmis ataskaitomis, didesnis dydis navikų audiniuose (> 5 mm) gali būti lengvai Nuimti naudojant fluorescencinės vaizdo ir MRT vaizdus, ​​kaip, priešingai, mūsų rezultatai parodė, kad, kaip paruošti nanoprobes gali aptikti mažesnius dydžio navikų audiniuose (mažiau 5 mm skersmens), kuri labai pagerino aptikimo metodą jautrumą. Mūsų rezultatas taip pat yra pirmas kartas, pranešti apie dvejopo modalinį orientuojant vaizdavimo in vivo
skrandžio vėžio audiniuose.
Kaip nukreipti in vivo
skrandžio vėžio audiniuose taip pat problema, kurį galima ginčyti. Iki šiol buvo pranešta jokių konkrečių skrandžio vėžio biologinius žymenis. Nors HER-2 baltymas buvo patvirtinta, kad turi teigiamą ekspresiją 6-35% skrandžio vėžio audinių [28-31], HER-2 baltymų, taip pat eksponuoja virš-išraišką daugelyje navikų audiniuose, pavyzdžiui, krūties vėžio, plaučių vėžio, gaubtinės žarnos vėžio, ir tt, todėl HER-2 turi būti ne specifinis biologinis skrandžio vėžio. Mūsų rezultatai parodė, kad BRCAA1 antigenas yra tik per išreikšta 64% arba tiek skrandžio vėžio audiniuose klinikinių chirurgijos pacientų, mes taip pat patvirtino, kad BRCAA1 antigenas yra per išreiškė kai skrandžio vėžio ląstelių linijų, pavyzdžiui, MKN-1 MKN-74 , Tarybos generalinis sekretoriatas-7901, Kato-III ir MGC803 [6-9]. Mes naudojome MGC803 ląsteles parengti nuogas pelių modelį pakrautas su skrandžio vėžiu, ir sėkmingai pastebėjo, kad, kaip paruošti nanoprobes pirmenybė sukaupta navikų audiniuose, palyginti su įprastų kontrolės audiniuose, kaip po įpurškimo laikas padidėja. Mes taip pat pastebėjo, kad įpurškiamas nanoprobes į visą kūną eksponuojami priklauso nuo laiko tarpą ir fluorescencinės signalai palaipsniui sumažėjo, nes laikui dėl kepenų Tulžies pūslė išsiskyrimo sistemos ir inkstų aiškumo ir kaip paruošti nanoprobes. Keli ataskaitos parodė, kad inkstų tik aiškūs nanodalelės 5 nm skersmens, mūsų tyrime, mes nustatėme, kad paruošti nanoprobes su 50 nm skersmens, taip pat galima padengti per 12 val. Ši betono mechanizmas vyksta.
Nanoprobe biosaugumo taip pat yra svarbi problema [44], kuris nusprendžia prašymo perspektyva, kaip paruošti nanoprobes. Mūsų rezultatai visiškai parodė, kad kaip-parengti nanoprobes nebuvo pažeisti svarbius organus, įskaitant kepenų, inkstų, širdies, plaučių, ir tt, taip pat nebuvo eksponuoti ilgalaikis esančių svarbių organų, kurie labai rekomenduojame, kad paruošti nanoprobes savo gerą biologinį suderinamumą ir turi didelį potencialą programas, kaip antai dviguba modelio vaizdavimo ir pasirinktinio terapijos pradžioje skrandžio vėžio.
Išvada
Mes sėkmingai parengė naujus anti-BRCAA1-FMNPs nanoprobes, kurie gali būti naudojami in vivo pervežimas dviejų transporto rūšių vaizdo pavyzdžiui, fluorescencinio vaizdo ir magnetinio rezonanso tomografijos ir nuosavas žinutę akivaizdžiai konkrečią taikymo galimybę link skrandžio vėžio audiniuose su 5 mm skersmens metu 0,5 h ir 12 h po injekcijos, ir savo gerą biologinį suderinamumą. Tai turėtų būti pirmasis pranešimas. AS-paruošti daugiafunkciniai nanoprobes taip pat gali būti naudojamas hipertermijos terapijos skrandžio vėžio pagal in vitro
kintamosios magnetinio lauko švitinimo, ir turi didelį potencialą programų, tokių kaip vienu metu vaizdo ir nukreipti gydymui klinikinės skrandžio vėžio artimiausioje ateityje.
medžiagos ir metodai
paruošimas anti-BRCAA1 monokloniniai antikūnai
gyvūnų eksperimentai buvo atliekami pagal gairių gyvūnų priežiūrai ir naudojimui komiteto Šanchajaus Jiao Tong universiteto. Monokloniniai antikūnai buvo parengtas prieš išgryninto sulieto baltymo BRCAA1. BALB /c pelių patelių 4-6 savaičių amžiaus, buvo įsigytas iš Šanchajaus LB laboratorinių gyvūnų Co Ltd, Kinijos mokslų akademija (Šanchajus, Kinija). Pelės buvo imunizuojamos, injekciją į pilvą su 50 mikrogramų išgryninto BRCAA1 baltymą, kuris buvo emulsuoto su tokio paties tūrio Freund'o adjuvante. Kiti trys injekcijos buvo administruojamos naudojant neišsamią adjuvantu kas dvi savaites. Tris dienas po paskutinės injekcijos, blužnies ląstelės pelių buvo surinktos ir kondensuotas su Sp 2/0 pelės mielomos ląstelių linija. Po to, kai 10-14 dienų, kad kultūrų supernatantų, buvo tikrinami su ELISA bandymas, kurio kieta fazė buvo padengta su rekombinantinio BRCAA1 baltymų (2 mikrogramai /ml), naudojamų imunizacijai. Be atrankos procesą, monokloniniai antikūnai jungiasi su kreidinio BRCAA1 baltymų buvo pasirinktas. Iki dvigubai apriboti praskiedimą teigiami kolonijos subklonuoti. Ascitic skysčiai buvo nuimta nuo pelių gruntuotas su 0,5 ml injekciją į pilvą iš pristano ir tada švirkšti 10 6 hibridomos ląstelių. Klasės ir poklasis kiekvieno mAb buvo nustatoma naudojant pelės monokloninis izotipų komplektas (Hy kultas Biotechnologijos BV, Nyderlandai). Į mAb buvo išvalytas nuo pelės asketiškų skysčių naudojant baltymas G Sefarozę 4FF (Pharmacia, Upsala, Švedija) stulpelį pagal gamintojo nurodymus pašalinti komponentus, kurie gali trukdyti biopanning eksperimentams. Antikūnų Titrai buvo nustatyti ELISA metodus [45]. Galiausiai vienas iš paruoštų kovos su BRCAA1 monokloninių antikūnų buvo naudojamas kaip pirmą antikūnų dažyti 50 egzempliorių skrandžio vėžio ir kontroliuoti skrandžio gleivinės audinius, kurie buvo surinkti iš Changzheng ligoninės ir Nr.1 ​​Žmonės ligoninės Šanchajuje ir nustatytus patologinį tyrimą.
parengimas ir Paviršiaus Funkcjonalizacja FMNPs
rengimo Fe 3O 4 nanodalelės buvo grindžiama bendru kritulių juodųjų ir geležies jonų sprendimų (1: 2 molinis santykis) [46-49]. CdTe Nanokristalai buvo susintetinti taip pagal mūsų ankstesniame pranešime: CdCl 2 (5 mmol) buvo ištirpinta 110 ml vandens, ir 12 mmol TGA maišant buvo pridėta, o po to pH sureguliavimą iki 11 įlašinus 1 M NaOH tirpalo. Sumaišytas tirpalas buvo dedamas į trijų kaklu kolbą deaeruotame iki N 2 burbuliuoja 30 min. Maišant, 2,5 mmol deguonies neturinčiomis NaHTe tirpalo buvo suleista į trijų-kaklu kolbą, kuri buvo šviežiai paruošto iš Telūro miltelių ir NaBH 4 (moliniu norma 1: 2) vandenyje, esant 0 ° C temperatūroje. Gautas tirpalas buvo apie 4 mg /ml, ir 3,5 nm, skersmuo produktas spinduliuojamą daugiausia apie 630 nm bangos ilgiui. Liuminescencinės magnetinės nanodalelės (FMNPs) buvo parengta naudojant atvirkštinio mikroemulsija požiūris. Prieš sujungimą FMNPs su BRCAA1, mes pirmą kartą funkcionalizuotas paviršiaus funkcinę grupę, kaip FMNPs kaip karboksilo grupe. 95 ml etanolio ir 2 ml 3-aminopropiltrietoksisilanas (APS) buvo pridėta, kad susidarytų mišinio tirpalas ir leidžiama reaguoti kambario temperatūroje 24 val. Aminosilano modifikuotas FMNPs buvo atskirti nuolatinio magneto ir buvo plaunamas dejonizuoto vandens tris kartus. Tada išsklaidytos į FMNPs-NH 2 100 ml dimetilformamido (DMF), papildomas pernelyg gintaro rūgšties anhidrido, kad susidarytų mišinio tirpalas ir reaguoti kambario temperatūroje 24 val. Karboksilo modifikuoti FMNPs buvo atskirtos nuolatinio magneto ir vėl plauti dejonizuotu vandeniu tris kartus.
Paruošimas ir apibūdinimas BRCAA1 antikūnų konjuguoto FMNPs
mes naudojome dviejų etapų procesą gauti stabilų kovos su BRCAA1-FMNPs Vertimai [ ,,,0],48, 49]. 1,5 mg FMNPs-COOH tirpalas buvo disperguoti 2 ml pH7 PBS buferyje, ir buvo ultra garsu 10 min. Tada mes maišyti 1 ml šviežio 400 mM EDC ir 100 mM NHSS pH 6,0 ŠMM buferio ir pasukti jį kambario temperatūroje 15 min. Po to, kai šis, gautas tirpalas buvo atskirta magnetinio lauko, ir 1 mg /ml BRCAA1 monokloninis antikūnas buvo pridėta į aukščiau, mišinį, maišomas tamsioje vietoje 2 val. Pašalinti nemokamą BRCAA1, likutinis Reakcijos mišinys buvo atskirta magnetinio lauko, ir kieta likusių plautas su 1 ml PBS buferio tris kartus. Pagaliau, 1 ml 0,05% Tween-20 /PBS buvo įtraukta į BRCAA1-FMNPs konjugacijos ir galutinio biologinių konjugacijos buvo laikomas 4 ° C temperatūroje. Kai mes naudojamas, tai BRCAA1-FMNPs konjugacijos turėtų būti atskiestas PBS /0,05% Tween-20. Tada mes panaudojome nano Drop įrenginį kiekybiškai prikabinimo norma BRCAA1 antikūnų su FMNPs-COOH. Prieš mova reakciją, mes matuojamas bendrą koncentraciją BRCAA1 antikūnų. Po mova reakciją, mes matuojamas BRCAA1 antikūnų koncentracija likutinės reakcijos mišinio ir apskaičiuojamos prikabinimo tarifu pagal lygtį: Rīga, mova (%) = (1-koncentracija BRCAA1 antikūnų likutinės reakcijos mišinio /Bendra koncentracija BRCAA1 antikūnų) × 100.
kaip paruošti nanoprobes ir gryno FMNPs buvo būdingas perdavimo elektroniniu mikroskopu ir fotoliuminescencine (pl) spektrometrijos ir Zeta galimo analizatoriumi.
nanoprobes in vitro
orientacija vaizdo skrandžio vėžio ląstelių
skrandžio vėžio ląstelių linija MGC803 ląstelės su over-išreikšta BRCAA1 baltymų buvo naudojami kaip tikslinių ląstelių, žmogaus fibroblastų ląstelės be išreikšta BRCAA1 baltymų buvo naudojamas kaip kontrolės, buvo kultūringas ir surinkti, o tada buvo gydomi 50 mikrogramai /ml BRCAA1-FMNPs nanoprobes ir kultūringas drėgmėje, 5% CO 2 subalansuotą oro inkubatoriuje temperatūra 37 ° C temperatūroje iki 4 h, tuo tarpu MGC803 ir žmogaus fibroblastų ląstelės buvo gydomi FMNPs kaip kontrolinės grupės. Po to, ląstelės buvo praplautos PBS tris kartus, ir tada tvirtinama ląsteles su 2,5% glutaraldehido tirpalu 30 min. Dėl branduolinės counterstaining, MGC803 buvo inkubuojami su 1 mm Hoechst 33258 PBS 5 min. Ląstelės buvo stebimas fluorescencijos mikroskopu (Nikon TS100-F) ir nufotografuota GE HDX 3.0t MR priemonę įrengta ParaVision 3.0 programinės įrangos.
Mes taip pat naudojamas srauto citometre įvertinti skrandžio vėžio ląstelių taikymo gebėjimas BRCAA1- FMNPs nanoprobes.

• Giliai sekos skrandžio karcinoma atskleidžia somatinės mutacijos svarbios asmeninį medicinoje
• BariSurg bandymus: Rankovės skrandžio pašalinimas palyginti Roux-en-Y skrandžio aplinkkelio nutukusių pacientų, sergančių KMI 35-60 kg /m2 - multi-centras atsitiktinės atrankos kantrūs ir st…