BRCAA1 monoklonális antitest konjugált fluoreszkáló mágneses nanorészecskék in vivo célzott magnetofluorescent képalkotó gyomor- cancer

BRCAA1 monoklonális antitest konjugált fluoreszkáló mágneses nanorészecskék in vivo katalógusa célzott magnetofluorescent képalkotó gyomorrák katalógusa Abstract Background katalógusa katalógusa gyomorrák 2th leggyakoribb rák Kínában, és még mindig a második leggyakoribb oka a rák okozta halál a világon. Hogyan lehet felismerni a korai gyomorrák sejtek továbbra is nagy kihívást jelent a korai diagnózis és terápia gyomorrákos betegeknél. A tanulmány célja, hogy fejlesszék az egyik fajta multifunkcionális Nanoprobes in vivo
célzott magnetofluorescent képalkotó gyomorrák.
Módszerek
BRCAA1 monoklonális antitestet készítettünk, alkalmaztunk első ellenanyag festésére 50 pár példányai gyomor rák és vezérlés normál gyomor nyálkahártyával és a konjugált fluoreszkáló mágneses nanorészecskék 50 nm átmérőjű, a kapott BRCAA1-konjugált fluoreszkáló mágneses Nanoprobes jellemezte transzmissziós elektronmikroszkópiával és fotolumineszcencia spektrometria, mint előállított Nanoprobes inkubáltuk gyomorrák MGC803 sejteket, és injektáltuk egerekbe modell megrakott gyomorrákos 5 mm átmérőjű farokvénába, majd arra leképezett fluoreszcens optikai képalkotó és mágneses rezonanciás képalkotás, azok biológiai eloszlását vizsgáltuk. A szövet szeleteket észleltek fluoreszcens mikroszkóppal, a létfontosságú szerveket, például a szív, tüdő, vese, agy és máj elemeztük hematoxilin-eozin (HE) folt módszerrel.
Eredménye
BRCAA1 monoklonális antitest sikeresen elő, BRCAA1 protein mutatott túlzott expresszió az 64% gyomorrák szövetek, nincs expresszió a kontroll normál gyomor nyálkahártyával létezik statisztikai különbség a két csoport között (p
< 0,01). A BRCAA1 konjugált fluoreszkáló mágneses Nanoprobes mutatnak nagyon alacsony toxicitás, alacsony mágneses intenzitású és alsó fluoreszcens intenzitás csúcs-blue-shift, mint a tiszta FMNPs lehetne bekebelezett a gyomorrák MGC803 sejtek célozhatja in vivo katalógusa gyomorrák szövetek betöltött az egerek, és fel lehetne használni a kép gyomorrák szövetekben fluoreszcens képalkotó és mágneses rezonanciás képalkotás, és elsősorban szét helyi gyomorrák szöveteket 12 órán belül az injektálás után. HE elemzés azt mutatta, hogy nincs nyilvánvaló károkat észleltek fontos szervek.
Következtetések katalógusa A nagy teljesítményű BRCAA1 monoklonális antitest konjugált fluoreszkáló mágneses nanorészecskék célozhatja in vivo
gyomorrák-sejtek, lehet használni az egyidejű magnetofluorescent képalkotó, és nagy potenciállal alkalmazások, mint például a kettős modell képalkotás és a helyi hő terápia korai gyomorrák a közeljövőben. katalógusa Háttér katalógusa gyomorrák egykor a második leggyakoribb ráktípus a szót [1]. Naprakész, az Egyesült Államokban, a gyomor rosszindulatú daganat jelenleg a 14. leggyakoribb rák, és 2th leggyakoribb rák Kínában [2, 3]. Gyomorrák még mindig a második leggyakoribb oka a rák okozta halál a világon, és továbbra is nehéz gyógyítani, mert a legtöbb betegnél a betegség előrehaladott. Ezért, hogyan lehet felismerni, sáv, vagy megöli a korai gyomorrák sejtek nagyon fontos a korai diagnózis és terápia gyomorrákos betegeknél.
Naprakész, keres biomarkerek szorosan kapcsolódó gyomorrák továbbra is fontos feladat. 1998 óta, mi már régen megpróbált létrehozni egy korai gyomorrák előre figyelmeztető rendszer [4], és remélem, hogy ezt a pre-előrejelző rendszer észleli a korai gyomorrák sejtek felismerik a betegek korai gyomorrák. Bár néhány eltérően expresszált gének összefüggésbe a korai gyomorrák azonosítottak [5, 6], senki gén lehet megerősíteni, hogy egyedi biomarker a gyomorrák. Ezért, annak érdekében, hogy ismerjék a korai gyomorrák sejtek, csak válassza ki a potenciális biomarkerek kapcsolatos gyomorrák, és összekapcsolják a nanorészecskék és molekuláris képalkotó eljárások, meg kell találnia az in vivo katalógusa korai gyomorrák sejtek in vivo tumor katalógusa célzott képalkotó . A mi korábbi munka, mi árnyékolt ki és klónozzuk BRCAA1 gén (emlőrák összefüggő antigén 1 gént) emlőrák sejtvonal MCF-7cells [AF208045, más néven ARID4B (AT-gazdag interaktív domént tartalmazó fehérje 4B)], és azonosította az antigén epitóp peptid SSKKQKRSHK [7, 8]. Mi is előállíthatjuk BRCAA1 poliklonális antitest, és megfigyelhető, hogy a BRCAA1 protein mutatott túlzott expresszió csaknem 65% klinikai minták a gyomorrák a szövetekben [9-11]. Azt is megfigyeltük, hogy BRCAA1 antigén túlzott kifejezett gyomor rákos sejtvonalak, mint például MKN-1, MKN-74, SGC-7901, KATO-III és MGC803 sejteket. Ezért azt jósolják, hogy BRCAA1 fehérje lehet egy potenciális célba juttató molekula in vivo katalógusa gyomor rákos sejteket. Katalógusa Az utóbbi években a molekuláris képalkotási technológiák alapján multifunkcionális Nanoprobes jelentős előrehaladást ért. Például, a nanorészecskék, mint kvantum pontok, mágneses nanorészecskék és arany nanorudakat, stb már használt molekuláris képalkotás [12-19]. Eddig több kis állat képalkotó technológiák kerültek kifejlesztésre, mint például az optikai képalkotás (oi) a biolumineszcencia (BLI), fluoreszcencia (FLI) és intravitális mikroszkópia (IVM), a mikro-PET, MRI és CT [20-26]. Között ezeket a technológiákat, hogyan lehetne javítani a térbeli felbontást és a szöveti mélységet érzékenység egy nagy kihívás. Eddig az in vivo
tumorszövetekben több mint 1 cm átmérőjű lehet könnyen azonosítani CT, MRI, PET és biolumineszcencia képalkotás, daganatok kevesebb vagy egyenlő, mint 5 mm átmérőjű nagyon nehéz találhatók klinikai betegeknél. Korábbi jelentések szerint a fényérzékenyítő konjugált mágneses nanorészecskék sikeresen alkalmazott in vivo katalógusa egyidejű magnetofluorescent képalkotás és célzás terápia [27]. Azonban a célzási képessége Nanoprobes volt nagymértékben függ a mágneses nanorészecskék. Készítettünk egy multifunkcionális ribonukleáz-A-konjugált CdTe kvantumpont klaszter nanosystem szinkron rák képalkotás és terápia [28], a célzási képessége, mint felkészült Nanoprobes függ RGD peptid. Egyes tanulmányok azt mutatják, hogy a HER-2-fehérje mutat rendellenes expresszió 6-35% gyomorrák szövetekben [29, 30], és már használják, mint a terápiás célpont klinikai betegek gyomorrák [31], ezért a HER-2-fehérje tulajdonában nagy potenciállal képalkotás és terápia a gyomorrák. Ugyanakkor naprakész, nincs jelentés azt mutatja, hogy a célzott képalkotás és terápia in vivo katalógusa gyomorrák alapul biomarkerek kapcsolatos gyomorrákban.
Az elmúlt években, mi ellenőrizhetően készített szilícium-dioxiddal bevont kvantumpontok és szuper-paramágneses nanorészecske kompozitok (FMNPs) erős fluoreszcens jelet, és a kiváló mágneses tulajdonságok, és használták őket a bio-címkézés, követés őssejtek, bio-elválasztás, célzás képalkotás és hipertermia daganatok [29-32], azt is megfigyelték, hogy a felkészült nanorészecskék saját jó biokompatibilitás és stabilitás [33-38].
Ebben a tanulmányban, akkor teljes mértékben használja az előnyeit FMNPs és BRCAA1 antigén, előkészített elleni monoklonális antitest BRCAA1 fehérje, és kész BRCAA1 monoklonális antitest konjugált fluoreszkáló mágneses Nanoprobes (BRCAA1- FMNPs) alkalmazott csupasz egerek modell megrakott gyomorrákos 5 mm átmérőjű és IVIS képalkotó rendszer és a mágneses rezonancia vizsgálat, vizsgálták a megvalósíthatóságát, mint felkészült Nanoprobes nem invazív in vivo katalógusa célzott kettős modális képalkotó gyomorrák. Az eredmények azt mutatják, hogy előkészített Nanoprobes lehet használni in vivo
kettős modell képalkotó gyomorrák, és lehet, hogy nagy potenciállal alkalmazások, mint például a kettős modell képalkotási és helyi termikus terápia korai gyomorrák a közeljövőben.
Eredmények és megbeszélés
jellemzése anti-BRCAA1 monoklonális antitest
Mint az 1. táblázatban látható, sikeresen nyert két pozitív klón sejtvonal S-200-5 és S-335-5, a titerek különbözőek voltak, végül kiválasztottuk az anti-BRCAA1 monoklonális antitest az S-200-5 sejtvonal, mint az első ellenanyag festésére gyomorrák szövetek és kontroll szövetekben. Azt találtuk, hogy BRCAA1 protein mutatott túlzott expresszió az 64% gyomorrák szövetek, nincs expresszió normál kontroll gyomor nyálkahártyával, amint az 1. ábrán látható, fennáll statisztikai különbség a két csoportban (p
< 0,01). Ez az eredmény szinte megegyezik az előző jelentés [4, 9-11], amely erősen azt sugallják, hogy BRCAA1 antigén lehet választani, mint potenciális célpont a legtöbb gyomorrák, ha a felkészült Nanoprobes ismerhetnek 64% betegek korai gyomorrák, ez nagyon hasznos lesz a diagnózis és terápia klinikai gyomorrák patients.Table 1 titerei BRCAA1 monoklonális antitestek in ascites folyadék által kiváltott Hybridoma Clone sejteket ELISA katalógusa katalógusa antitest titer * Matton Clone Matton BRCAA1 (C) -OVA ** Matton BRCAA1 (C) -BSA ** Matton BSA ** Matton OVA ** Matton S-200-5 katalógusa 1024000 katalógusa 1024000 katalógusa < 1,000 katalógusa < 1,000 katalógusa S-335- 5 katalógusa 128000 katalógusa 512000 katalógusa < 1,000 katalógusa < 1,000 katalógusa * a kölcsönös aszcitesz folyadék hígítás az első hígítás aszcitesz folyadék 1: 1000. katalógusa ** az antigének vonunk be ELISA lemezt.
1. ábra kifejezése BRCAA1 fehérje gyomorrák szövetek és normál kontroll gyomor nyálkahártyával. A: gyomorrák szövetekben × 100; B: normál kontroll szövetekben, × 50.
előállítása és jellemzése BRCAA1- FMNPs Nanoprobes
Amint az a 2A ábra, előkészített FMNPs arra álló szilícium-dioxid-becsomagolt CdTe és mágneses nanorészecskék, méretük voltak 50 nm, vagy úgy átmérő. Ábrán látható a 2D, miután FMNPs konjugált anti-BRCAA1 ellenanyag, amint előállított Nanoprobes 'fotolumineszcencia (PL) intenzitású volt alacsonyabb, mint a FMNPs, mutató balra-shift 40 nm volt, ami miatt csökkenhet a polarizációs arány a környező molekulák, és így a csökkenés Stokes elmozdulás, végül, miáltal kék váltás az emissziós spektrum. Hasonlóképpen, mágneses intenzitású, mint felkészült Nanoprobes is kisebb volt FMNPs. 2. ábra jellemzése anti-BRCAA1-FMNPs Nanoprobes. A: HR-TEM képe FMNPs; B: A mágneses tulajdonsága anti-BRCAA1-FMNPs Nanoprobes; C: zéta-potenciál a FMNPs amino-csoport, COOH, Si-O-csoport; D: PL spektrumai FMNPs konjugált és anélkül BRCAA1 antitest.
Elkészítése során BRCAA1-FMNPs Nanoprobes, azt találtuk, hogy a felszíni funkcionalizálása FMNPs nagyon kulcs konjugálására anti-BRCAA1 antitest FMNPs keresztül kovalens kötés. Amint a 2c ábrán látható, a különböző funkcionális csoportok FMNPs különböző zéta-potenciál értékeket. FMNPs negatív Si-O-csoport, a zéta-potenciál értéke -34,05 mV, a FMNPs amino-csoport pozitív zéta-potenciál értéke 24,80 mV FMNPs karboxil csoport negatív zéta-potenciál értéke -30,50 mV. Megfigyeltük, hogy karboxilcsoportokat a felszínen FMNPs konjugált anti-BRCAA1 ellenanyag könnyebb, mint aminocsoportokkal felületén FMNPs. Amint a 2. táblázatban látható, az átlagos kapcsolási sebesség anti-BRCAA1 antitest FMNPs-COOH volt 80,28% .table 2 kapcsolódási sebessége mérésének FMNPs-anti-BRCAA1 ellenanyag

teljes koncentrációja az anti-BRCAA1 antitest (ng /pl)
koncentrációját anti-BRCAA1 antitest maradék reakcióelegyet (ng /pl)
kapcsolódási sebessége (%)

1
1000.0
197.3
80.27
2
1000.0
191.2
80.88
3
1000.0
203.0
79.70
Mivel felkészült Nanoprobes in vitro katalógusa célzott gyomorrák sejtek
célzás képessége, mint felkészült Nanoprobes in vitro katalógusa észleltek fluoreszcens mikroszkóp és kiszámított FACSCaliburon Flow citométer. Amint a 3. ábrán látható, FMNPs véletlenszerűen diszpergálva a belső a citoplazma, és az anti-BRCAA1-FMNPs Nanoprobes létezett körül nukleoláris. Mindkét FMNPs és elkészített BRCAA1-FMNPs Nanoprobes beléphet a citoplazmájába MGC803 sejtek 4 óra elteltével inkubálás MGC803 sejtekkel, amint a 4A ábrán látható, FMNPs lehetne címkézni 25,23% MGC803 sejtek, a továbbra is 74,77% sejteket nem lehetett címkézni. Ahogyan a 4b ábrán látható, 45,92% MGC803 sejtek kell címkézni a BRCAA1-FMNPs Nanoprobes. Amikor FMNPs és anti-BRCAA1-FMNPs Nanoprobes inkubálunk a MGC803 sejtek és humán fibroblaszt sejteket 0,5 órán megfigyeltük a sok anti-BRCAA1-FMNPs Nanoprobes lépett MGC803 sejtek, kevés Nanoprobes lépett humán fibroblaszt-sejtek, kevés FMNPs tudott lép MGC803 sejtek és humán fibroblaszt sejtek, amelyek erősen azt sugallják, hogy az anti-BRCAA1-FMNPs Nanoprobes célozhatja MGC803 sejtek specifikusan. A mágneses rezonancián alapuló képalkotás MGC803 sejtek és humán fibroblaszt sejteket inkubáltuk anti-BRCAA1-FMNPs 4 órán kerültek az 5. ábrán látható, MGC803 sejteket mutatott erős mágneses jelet, mint a humán fibroblaszt-sejtek (HDF), ami szintén azt mutatták, hogy az elkészített Nanoprobes célozhat MGC803 sejtek specifikusan. 3. ábra In vitro fluoreszcencia képek MGC 803 után kezeljük FMNPs és FMNPs-BRCAA1 nanorészecskék (Nagyítás = × 200). A felső képek csoportját illusztrált FMNPs random osztja a citoplazmában, az alsó képek csoportját kiállított FMNPs-BRCAA1 szétszórt körül nukleolus és azt is célozza képes a MGC803.
4. ábra FACSCalibur áramlási citométer elemzése MGC803 jelölt FMNPs és FMNPs-BRCAA1. A: a MGC803 kezeljük 50 ng /ml FMNPs 24 órán mutatott 25,23% sejt jelöltünk FMNPs. B: a MGC803 kezeljük 50 ng /ml FMNPs-BRCAA1 24 órán illusztrált akár 45,92% sejt jelöltük FMNPs-BRCAA1.
5. ábra MR képalkotás MGC803 sejtek és HDF sejteket. A: MGC803 sejteket anti-BRCAA1-FMNPs. B: HDF-sejtek anti-BRCAA1-FMNPs. C: MGC803 sejtek csak FMNPs.
Ahogy felkészült Nanoprobes fluoreszcens képalkotó in vivo katalógusa gyomorrák sejtek
Értékelni daganat célzott tulajdonságai anti-BRCAA1-FMNPs Nanoprobes szőrtelen egerek modellek megrakott MGC- 803 gyomorrák sejteket állítottunk elő és ellenőrizni alatt egy nem invazív módon 12 órán használatával IVIS fluoreszcens képalkotó rendszer.
a valós idejű fluoreszcens intenzitás az egész testben, a tumor-célzási jellegét az anti-BRCAA1- FMNPs próbát könnyen meghatározni a csupasz egerekben megrakott gyomorrák MGC803 sejteket. Amint a 6a ábrán látható, az egész állatok, fluoreszcens jelek számított 30 percen belül az injektálás után a Nanoprobes, a szubkután tumor szövetek lehetne világosan körülhatárolt a környező háttér szövet között 1 óra és 12 óra az injektálás után, és a maximális kontraszt előforduló 6 órával a befecskendezés. Erős fluoreszcens jelet még mindig kimutatható a tumor helyén a 6 órával a befecskendezés, ami azt jelezte, hogy az anti-BRCAA1-FMNPs Nanoprobes arra preferenciálisan halmozódott fel a tumor szövetekben. Valóban eredményei alapján a 6B ábrán a magasabb tumor háttér arány (TBR) érték nagyon javasolt, hogy az előkészített Nanoprobes preferenciálisan felhalmozott tumor szövetekben, mint a normális kontroll szövetekben. Ezt megerősítette fluoreszcencia képek, ami azt mutatta, hogy a fluoreszcencia jel AS-előkészített Nanoprobes a tumor helyén volt a legerősebb között egerek szerveinek ábra a 6C. Ezen felül, miután 12 óra post-injekció anti-BRCAA1-FMNPs Nanoprobes, fluoreszcencia intenzitás a tumor még mindig megfigyelhető világosan, míg a felvételét előkészített Nanoprobes normál szervekben nem volt nyilvánvaló. Ezek az adatok arra utalnak, hogy nagyon felkészült Nanoprobes célozhat nagyon hatékonyan daganatos szövetek belsejében nude egerekben megrakott gyomorrákban. Azt is megfigyeltük, hogy azok Nanoprobes az egész egér test szinte teljesen eltűnt a 12 órával a befecskendezés, mi is kimutatható a Nanoprobes kilépett ki a epehólyag rendszer (az adatokat nem mutatjuk be), az idő-függő epehólyag clearance Nanoprobes erősen azt sugallják, hogy a -Kenőolaj Nanoprobes nem bent nude egerekben hosszabb ideig, így, ahogy felkészült Nanoprobes saját jó biológiai biztonsági. 6. ábra In vivo fluoreszcens képek tumor felhalmozódása és szöveti eloszlás FMNPs-BRCAA1 nanorészecskék MGC803 emberi gyomorban tumorral athymikus egerekben. A, In vivo katalógusa fluoreszcens képek a csecsemőmirigy nélküli csupasz egerek. MGC803 emberi gyomor tumor után kapott injekciót FMNPs-BRCAA1 nanorészecskéket különböző időpontokban. A tumor helye van megadva egy nyíllal. A-1: 0 H, A-2: 0,5 H, A-3: 1 H, A-4: 3 H, A-5: 6 H, A-6: 12 óra. B, TBR [Tissue a háttér (izom) arány] értéket. A KAR értéket a következőképpen határozzuk meg: TBR = (Tumor jel-háttér jel) /(háttér jel). C, Ex vivo katalógusa fluoreszcens képek a boncolt szervek és a tumor hordozó egerek MGC803 emberi gyomor tumor feláldozni után 12 órával az injekció FMNPs-BRCAA1 nanorészecskék. A fluoreszcencia képek a boncolt szervek és a tumor kaptuk meg, fluoreszcens képalkotó technika egy 630 nm-es emissziós szűrővel. D, biológiai eloszlása ​​anti- BRCAA1-FMNPs egerekben intravénás injekció után. Több időpontban az injekció beadása után, a vas mennyiségű szöveti mintákat értékeltük ICP tömegspektrometria (n = 3).
Kóros elemzése tumor és fontos szervek
In vitro
értékelését kimetszett nagyobb szövetek, beleértve a máj, tüdő , a lép, a vese és a szív, valamint a daganat, azt jelezte, hogy az anti-BRCAA1-FMNPs szondák főleg up-venni a tumor által szövetekben, ami mutatott erős fluoreszcens jeleket, amint a 7. ábrán látható, míg más szövetekben, beleértve a máj , tüdő, lép és a szív fel-vette anti-BRCAA1-FMNPs Nanoprobes nagyon kevesebb, ami azt jelzi, hogy továbbhaladva a felkészült BRCAA1-FMNPs Nanoprobes célozhatja gyomorrák szövetekben. Azt is használják HE festés, hogy ellenőrizze minden szerv, nincs nyilvánvaló károkat észleltek a fontos szervekben [lásd egyéb fájl 1]. 7. ábra eredménye Immunfluoreszcens analízis. Egy, a daganat szövet. B, máj. (Nagyítás = × 200).
Mivel felkészült Nanoprobes az MR képalkotás nude egerek megrakott gyomorrákos katalógusa In vivo katalógusa MR végeztünk csupasz egerekben megrakott szubkután gyomorrák 12 órával az injekció . Reprezentatív képek T2 térképeket a 8. ábrán látható, miután az intravénás a Nanoprobes, jelentős változás jelintenzitás volt megfigyelhető egyes régióiban tumorok, jelezve, hogy létezett felhalmozódása a Nanoprobes a tumor helyén ábra a 8B, mint a nyíl megmutatta. Kontrollként után az egerek modell gyomorrákos injektáltuk FMNPs 12 órán, az egereket végre MR képalkotás, amelyek nem mutatták az intenzív jel a tumor területén (8a ábra). 8. ábra MRI-kép az egerek. A, FMNPs nélkül Tengely BRCAA1 B, FMNPs párosulva BRCAA1 katalógusa lehetséges mechanizmusát célozza képalkotó katalógusa Az utóbbi években a molekuláris képalkotási technológiák már használják a valós idejű és nem-invazív képalkotó eljárások in vivo katalógusa daganatszöveteken [39-43]. Például, kvantum pontok miatt egyedi utánvilágító tulajdonságokat, már használt bio-címkézés és fluoreszcens képalkotó [11-13, 33, 43], de kvantumpontok toxicitása korlátozott alkalmazásuk az emberi szervezetben, amennyiben egy biztonságos kvantum pontok kidolgozása folyamatban van. Mágneses nanorészecskék is használják, mint kontraszt reagens MR képalkotás [15, 33, 36]. Ugyanakkor, kombináció két képalkotó biztosítja az előnyeit mind, mint használ egy módszert, ami átfogó információt nyújtanak a tumor lokalizációja, a környezet és az állapot.
Ebben a tanulmányban terveztünk és készítettünk egy új képalkotó szonda, amely tagjai szilícium-csomagolt kvantumpontok és mágneses nanorészecskék fokozása céljából biokompatibilitásának. Eredményeink azt mutatják, hogy az elkészített szilikon borítású kvantumpontok és mágneses nanorészecskék nagyon stabilak, és a saját erős fluoreszcens jelet, és a mágneses intenzitás. A erős fluoreszcens jelek, mint elkészített Nanoprobes, sikeresen kapott fluoreszcens képeit in vivo katalógusa gyomorrák szövetekben 5 mm-es átmérőjű nude egerekben modell szerint. Használata az erős mágneses jeleket AS-előkészített Nanoprobes, mi is sikeresen előállított MR felvételek az in vivo katalógusa gyomorrák szövetekben 5 mm-es átmérőjű nude egerekben modell szerint. Összehasonlítva a korábbi jelentéseket, nagyobb méretű tumor szövetek (> 5 mm) könnyen lehetett képalkotása fluoreszcens képalkotás és MRI, mint a kontraszt, az eredmények azt mutatták, hogy a felkészült Nanoprobes képes észlelni kisebb méretű tumor szövetek (kevesebb 5 mm átmérő), amely jelentősen javította a kimutatás érzékenysége módszerrel. Eredményeink is az első alkalom, hogy számoljon kettős modális célzás képalkotó in vivo katalógusa gyomorrák szövetekben.
Célzása in vivo katalógusa gyomorrák szövetekben is megtámadható probléma. Naprakész, nem egyedi gyomorrák biomarkerek jelentettek. Bár a HER-2-fehérje megerősítette, hogy pozitív expresszió 6-35% gyomorrák a szövetekben [28-31], a HER-2 fehérje is mutat túlzott expresszió sok tumoros szövetben, mint például a mellrák, tüdőrák, vastagbélrák, stb., ezért a HER-2 nem kell specifikus biomarker gyomorrák. Eredményeink azt mutatták, hogy BRCAA1 antigén csak túlzott kifejezve 64%, vagy úgy gyomorrák szöveteinek klinikai műtét betegek, azt is megerősítették, hogy BRCAA1 antigén overexpresszált bizonyos gyomor rákos sejtvonalak, mint például MKN-1, MKN-74 , SGC-7901, KATO-III és MGC803 [6-9]. Mi használt MGC803 sejtek készíteni nude egerekben modell megrakott gyomorrák, és sikeresen figyelhető meg, hogy előkészített Nanoprobes preferenciálisan felhalmozott tumorszövetekben összehasonlítva normál kontroll szövetekben, és mivel a poszt-injektálási idő nőtt. Azt is megfigyelték, hogy injektált Nanoprobes az egész testben mutatott az időfüggő clearance és a fluoreszcens jelet, fokozatosan csökkent, mint az eltelt idő miatt a máj-epehólyag kiválasztás rendszer és a vese tisztaság AS-előkészített Nanoprobes. Több jelentés azt mutatta, hogy a vese csak tiszta nanorészecskék 5 nm átmérőjű, tanulmányunkban azt tapasztaltuk, hogy a felkészült Nanoprobes 50 nm átmérőjű is lehet törölni 12 órán belül. Ez konkrét mechanizmus van. Katalógusa Nanoprobe biosafety is fontos probléma [44], amely határoz a kérelem várható, mint felkészült Nanoprobes. Eredményeink teljesen azt mutatták, hogy az elkészített Nanoprobes nem károsíthatja a létfontosságú szerveket, beleértve a máj, vese, szív, tüdő stb, szintén nem mutatnak hosszú távú tartózkodó fontos szervek, ami erősen arra utalnak, hogy a készítmények Nanoprobes saját jó biokompatibilitás, és nagy potenciállal alkalmazások, mint például a kettős modell képalkotás és szelektív kezelés korai gyomorrák. katalógusa Következtetés katalógusa sikeresen készített új anti-BRCAA1-FMNPs Nanoprobes, amelyet fel lehet használni az in vivo katalógusa két modális képalkotás mint például fluoreszcens képalkotó és mágneses rezonanciás képalkotás, és saját egy nyilvánvalóan konkrét célzási képesség felé gyomorrák szövetekben 5 mm-es átmérőjű közben 0,5 óra és 12 óra az injektálás után, és saját jó biokompatibilitás. Ezt kell első jelentés. Az AS-előkészített multifunkcionális Nanoprobes is lehet használni a hipertermia terápia gyomorrák in vitro
váltakozó mágneses tér besugárzás, és nagy potenciállal olyan alkalmazásokban, mint egyidejű képalkotás és célzás terápia klinikai gyomorrák a közeljövőben.
anyagok és módszerek katalógusa anti-BRCAA1 monoklonális antitestek katalógusa Állatkísérletek szerint végeztük irányelvek Animal Care and Use Committee, Shanghai Jiao Tong Egyetem. Monoklonális antitesteket állítottunk elő elleni tisztított fúziós fehérje BRCAA1. BALB /c nőstény egereket 4-6 hetes, vásároltunk a Shanghai LAC Laboratory Animal Co. Ltd., a Kínai Tudományos Akadémia (Sanghaj, Kína). Az egereket immunizáltunk intraperitoneális injekcióban 50 ug tisztított BRCAA1 fehérje, amely emulgeáljuk azonos térfogatú Freund-féle komplett adjuvánsban. Három további injekciók beadása alkalmazásával inkomplett adjuváns kéthetente. Három nappal az utolsó injekció után, a lépsejteket az egerek gyűjtöttünk és zsugorított az SP 2/0 egér mielóma sejtvonal. 10-14 nap múlva a tenyészet felülúszókat átvizsgáljuk egy ELISA teszt, amelynek során a szilárd fázist bevonva a rekombináns BRCAA1 fehérje (2 ng /ml) immunizálására használt. A szűrési folyamat, a monoklonális antitestek bevont BRCAA1 fehérje választottak ki. Azáltal, kétszeri korlátozó hígítással, a pozitív telepeket szubklónoztuk. Aszcitesz folyadékot gyűjtöttünk az egerek alapozott egy 0,5 ml intraperitoneális injekció prisztán, majd fecskendeznek, 10 6 hibridóma sejtek. Az osztály és alosztály minden egyes mAb alkalmazásával határoztuk meg egy egér monoklonális antitest izotipizáló reagenskészlet (Hy Cult Biotechnology B. V., Hollandia). Az mAb-ket tisztítottunk az egér aszkéta folyadékok alkalmazásával protein-G-Sepharose 4FF (Pharmacia, Uppsala, Svédország) oszlopon a gyártó utasításai eltávolítására alkatrészek, amelyek zavarhatják a biopanning kísérletek. Az antitest titereket ELISA módszerrel [45]. Végül az egyik előkészített anti-BRCAA1 monoklonális antitestek használtuk első ellenanyag festésére 50 példányai gyomorrák és ellenőrzik a gyomor nyálkahártyával, amely gyűjtöttünk Changzheng Klinikák és No.1 emberek Kórház Sanghajban és azonosított patológiai vizsgálat. Katalógusa előkészítés és felszíni funkcionalizálása FMNPs katalógusa készítése Fe 3O 4 nanorészecskék alapuló közös kicsapódása vas és vas-ion megoldások (1: 2 moláris arányban) [46-49]. CdTe nanokristályok szintetizáltuk a következő szerint a korábbi jelentés: CdCI 2 (5 mmól) feloldunk 110 ml vízben, és 12 mmol TGA adunk keverés közben, majd a pH 11 hozzácsepegtetésével 1 M NaOH-oldatban. A kevert oldatot behelyezzük egy háromnyakú lombikba légtelenítjük N 2 buborékolás 30 percig. Keverés közben 2,5 mmol oxigén-mentes NaHTe oldatot injektálunk a háromnyakú lombikba, melyet frissen előállított tellúr por és NaBH 4 (moláris arány 1: 2) vízben 0 ° C-on. A kapott oldatot körülbelül 4 mg /ml-es, és a 3,5 nm átmérőjű termék kibocsátott maximális körül 630 nm-en. Fluoreszkáló mágneses nanorészecskék (FMNPs) alkalmazásával állítottuk elő a fordított mikroemulzió megközelítés. Kapcsolás előtt a FMNPs a BRCAA1, először funkciós felületi funkciós csoport FMNPs karboxil-csoport. 95 ml etanol és 2 ml 3-Aminopropyltriethoxysilane (APS) adunk alkotnak egy kevert oldathoz és hagyjuk reagálni szobahőmérsékleten 24 órán át. Az amino-szilán-módosított FMNPs voltak elválasztva permanens mágnes, és mostuk ionmentesített vízzel háromszor. Ezután újra diszpergálni a FMNPs-NH 2 100 ml dimetil-formamidban (DMF), hozzáadunk túlzott borostyánkősavanhidridet alkotnak egy kevert oldathoz, és szobahőmérsékleten reagáltatjuk 24 órán át. A karboxil-módosított FMNPs elválasztjuk permanens mágnessel újra és ionmentesített vízzel mossuk háromszor.
Előállítása és jellemzése BRCAA1 ellenanyag-konjugált FMNPs
használtunk kétlépcsős folyamat, így stabil, anti-BRCAA1-FMNPs konjugáció [ ,,,0],48, 49]. 1,5 mg FMNPs-COOH oldatot diszpergáljuk 2 ml pH = 7 PBS puffer volt, és ultrahanggal kezeljük 10 percig. Ezután összekeverünk 1 ml friss 400 mM EDC-t és 100 mmol NHSS pH 6,0 MES-pufferben, és forgatjuk szobahőmérsékleten 15 percig keverjük. Ezt követően a kapott oldatot elválasztjuk mágneses mező és 1 mg /ml BRCAA1 monoklonális antitestet adunk a fenti keverékhez, keverjük sötét helyen 2 órán át. Eltávolításához szabad BRCAA1, a maradék elegyet elválasztva mágneses mező és a visszamaradó szilárd anyagot kimostuk 1 ml PBS pufferben háromszor. Végül 1 ml 0,05% Tween-20 /PBS-t adtunk a BRCAA1-FMNPs konjugáció és a végső biológiai konjugáció tároltuk 4 ° C-on. Amikor használni, ez BRCAA1-FMNPs konjugáció hígítani kell PBS /0,05% Tween-20. Ezután használtuk Nano Csepp készülék számszerűsíteni a kapcsolási sebessége BRCAA1 antitest FMNPs-COOH. Mielőtt kapcsolási reakció Mértük a teljes koncentráció BRCAA1 antitest. Miután kapcsolási reakció mértük a BRCAA1 antitest koncentráció maradék reakcióelegyből és a számított a kapcsolási sebesség szerint az egyenletet:
Coupling (%) = (1-koncentrációja BRCAA1 antitest maradék reakcióelegyből /összkoncentrációja BRCAA1 antitest) × 100.
AS-előkészített Nanoprobes és tiszta FMNPs jellemeztük transzmissziós elektronmikroszkópiával és fotolumineszcencia (PL) spektrometria, és a zéta potenciál oldalon.
Nanoprobes in vitro
célzó képalkotó gyomorrák sejtek katalógusa gyomorrák sejtvonal MGC803 sejtek overexpresszált BRCAA1 fehérjét használtunk célsejtek, humán fibroblaszt sejtek nélkül expresszált BRCAA1 fehérjét használtunk kontrollként, tenyésztettük, és összegyűjtjük, majd kezeltük 50 ng /ml BRCAA1-FMNPs Nanoprobes és tenyésztjük párásított, 5% CO 2 kiegyensúlyozott levegős inkubátorban, 37 ° C-on 4 órán át, miközben a MGC803 és humán fibroblaszt sejteket kezeltünk FMNPs mint a kontroll csoportban. Ezután a sejteket leöblítjük PBS-sel háromszor, majd rögzíteni sejteket 2,5% -os glutáraldehid-oldatot 30 percig keverjük. A nukleáris counterstaining, MGC803 inkubáltuk 1 mM Hoechst 33258 PBS-ben 5 percen keresztül. A sejteket által megfigyelt fluoreszcencia mikroszkóp (Nikon TS100-F), és a leképezett GE HDX 3.0T MR eszköz felszerelt ParaVision 3.0 szoftver.
Azt is használják az áramlási citométer, hogy értékelje a gyomorrák sejt-targeting képességét BRCAA1- FMNPs Nanoprobes.

• Mély szekvenálása gyomorrák kiderül szomatikus mutációk fontos a személyre szabott orvoslás
• BariSurg próba: Hüvely resectio versus Roux-en-Y gyomor bypass elhízott betegek BMI 35-60 kg /m2 - egy multicentrikus, randomizált beteg és megfigyelő vak nem rosszabb tárgyalás