BRCAA1 monoklonalno antitijelo konjugirano fluorescentne magnetske nanočestice za in vivo ciljano magnetofluorescent prikazivanje raka želuca

BRCAA1 monoklonalno antitijelo konjugirano fluorescentne magnetske nanočestice in vivo pregled ciljano magnetofluorescent oslikavanje raka želuca pregled apstraktne pregled Pozadina pregled, rak želuca je 2th najčešći rak u Kini, a još uvijek je drugi najčešći uzrok raka povezani s grupom smrti u svijetu. Kako prepoznati rane želučanih stanica raka je još uvijek veliki izazov za ranu dijagnozu i terapiju bolesnika s rakom želuca. Ova studija ima za cilj da se razvije jedan tip multifunkcionalnih nanosonde in vivo pregled ciljano magnetofluorescent prikazivanje raka želuca.
Methods
BRCAA1 monoklonsko antitijelo je pripravljeno, korištena je kao prvo protutijelo mrlja 50 para primjercima želučane rak i kontrolu normalne želučane sluzokože i konjugirani s fluorescentnim magnetskim nanočestica 50 nm u promjeru, rezultirajući BRCAA1-konjugirani fluorescentni magnetske nanosonde karakterizira transmisijskim elektronskim mikroskopom i photoluminescence spektrometrijom kako pripremljene nanosonde su inkubirani s raka želuca MGC803 stanice te se injektira u modelu miševa opterećene s karcinomom želuca 5 mm preko repne vene, te se oslikavaju fluorescencijskom optičke slike i magnetskom rezonancom, njihova biodistribucije je istraživana. Odresci tkiva promatrane su fluorescentne mikroskopije, a važni organi, poput srca, pluća, bubrega, mozga i jetre analizirani su hematoksilinom i metodom bojanja eozinom (HE). Pregled Rezultati
BRCAA1 monoklonalno antitijelo je uspješno pripremljen, BRCAA1 protein izlaže prekomjerna ekspresija u 64% želučanih tkiva raka, ekspresiju kod kontrolnih normalnih želučane sluzokože, postoji statistički značajna razlika između dvije skupine (P pregled < 0,01). BRCAA1-konjugirani fluorescentne magnetske nanosonde pokazuju vrlo niske toksičnosti, niži magnetski intenzitet i manji intenzitet fluorescencije sa pika-plavo-smjeni od čistih FMNPs, može se endocitozom ubačen rak želuca MGC803 stanica, može ciljati in vivo
želučanog tkiva raka učita od strane miševa, a može se koristiti i za slikovne želučanog tkiva raka fluorescentnom slike i magnetske rezonance, i uglavnom distribuira na lokalnim želučanog tkiva raka u roku od 12 sata nakon injekcije. On mrlja analiza pokazala je da su očite štete promatrati u važnim organima.
Zaključci
visokih performansi BRCAA1 monoklonskih antitijela konjugirana fluorescentnim magnetskim nanočesticama može ciljati in vivo
stanice karcinoma želuca, može se koristiti za simultano magnetofluorescent slike, a može imati veliki potencijal u aplikacijama kao što su dual-modela snimanje i lokalnu toplinsku terapiju ranog karcinoma želuca u bliskoj budućnosti. pregled Pozadina pregled, raka želuca je nekada drugi najčešći rak u riječ [1]. Do sada, u Sjedinjenim Američkim Državama, želuca maligne bolesti trenutno je 14. najčešći rak, a 2th najčešći rak u Kini [2, 3]. Rak želuca je još uvijek drugi najčešći uzrok raka povezanih smrti u svijetu, a dalje je teško izliječiti jer većina bolesnika dolazi s uznapredovalom bolesti. Stoga, kako prepoznati, pratiti ili ubiti rane želučane stanice raka vrlo je ključ za ranu dijagnozu i terapiju bolesnika s rakom želuca.
Do danas, u potrazi za biomarkera usko povezane s rakom želuca je još uvijek važan zadatak. Od 1998. godine, bili smo se pokušali uspostaviti sustav ranog želučani karcinom unaprijed upozorenja [4], i nadam se da koristiti ovaj sustav unaprijed upozorenja za rano otkrivanje želučane stanice raka prepoznati bolesnika s ranim rakom želuca. Iako su neke pojedinosti na drugi način izraženi geni povezani s ranom karcinomu želuca identificirano [5, 6], nitko gen može se potvrditi da su specifični biomarkera raka želuca. Stoga, kako bi se prepoznali rane želučane stanice raka, možemo samo odabrati potencijalne biomarkera povezanih s rakom želuca, i kombinirati nanočestice i tehnike molekularne imaging, pokušati pronaći u rano stanice vivo
rak želuca in vivo
tumora ciljano snimanje , U našem dosadašnjem radu smo prikazan van i klonirani BRCAA1 gena (rak dojke povezan antigen 1 gen) iz stanična linija karcinoma dojke MCF-7cells [AF208045, koji se nazivaju ARID4B (AT-bogatih interaktivnih domene koje sadrže protein 4B)] i identificirati njegova antigen epitop peptida SSKKQKRSHK [7, 8]. Također smo pripremili BRCAA1 poliklonalna antitijela, te je primijetio da BRCAA1 protein izložen pojačanom ekspresijom u gotovo 65% kliničkih uzoraka želučane tkiva raka [9-11]. Također primijetili da BRCAA1 antigen je prekomjerno ekspresivan u želučanim tumorskih staničnih linija kao što je MKN-1, MKN-74, SGC-7901, KATO III-i MGC803 stanice. Stoga predviđaju da BRCAA1 proteina može biti jedan potencijalni ciljanje molekula in vivo pregled želučane stanice raka. Netlogu U posljednjih nekoliko godina, tehnologija molekularni imaging na temelju multi-funkcionalni nanosonde su napravili veliki napredak. Na primjer, nanočestice poput kvantnih točkica, magnetskih nanočestica i zlato nanorods, itd su korišteni za molekularnu slike [12-19]. Do sada nekoliko malih životinja Tehnologije razvijene su kao što je optička slike (OI) bioluminiscenciju (BLI), fluorescencije (FLI) i intravitalnog mikroskopom (IVM) i mikro-PET, MRI i CT [20-26]. Među svim tim tehnologijama, kako poboljšati njihovu prostornu rezoluciju i osjetljivost dubini u tkivu je veliki izazov. Do sada je u vivo pregled tumorskih tkiva s više od 1 cm u promjeru može se lako identificirati pomoću CT, MRI, PET i bioluminiscencija slike, tumori s manje od ili jednaka 5 mm u promjeru je vrlo teško naći u kliničkim pacijenata. U našim prethodnim izvješćima, fotosenzibilizator-konjugirani magnetske nanočestice uspješno koriste za in vivo
simultani magnetofluorescent slike i usmjeravanje terapije [27]. Međutim, sposobnost ciljanja nanosonde je vrlo ovisna o magnetskim nanočesticama. Također smo pripremili multifunkcionalni ribonukleaza-A-konjugirani CdTe kvantne točke klastera nanosystem za sinkroni slike karcinoma i terapija [28], sposobnost usmjeravanja kao pripremljenim nanosonde ovisi o RDG peptida. Neke studije pokazuju da HER-2 protein pokazuje abnormalno izraz u 6-35% tkiva raka želuca [29, 30], te je bio korišten kao terapijski cilj za kliničke bolesnika s karcinomom želuca [31], dakle, HER-2 proteina posjeduje veliki potencijal u slike i terapije raka želuca. Međutim, do danas, bez izvješće pokazuje da je ciljano slikanje i terapija in vivo
raka želuca se temelji na biomarkera povezanih s rakom želuca.
U posljednjih nekoliko godina, mi kontrolirano pripremili silikona presvučene kvantne točkice i super-paramagnetičan nanočestični kompoziti (FMNPs) s jakim fluorescentnim signala i odličnim magnetska svojstva, te ih koristiti za bio-označavanje, praćenje matične stanice, bio-odvajanje, slike i hipertermije tumora [29-32] ciljanje, također primijetio da je kao pripremljena nanočestice posjeduju dobru biokompatibilnost i stabilnost [33-38].
U ovom radu, u potpunosti iskoristiti prednosti FMNPs i BRCAA1 antigena, pripremljenu monoklonskim protutijelom protiv BRCAA1 proteina i spremni BRCAA1 monoklonskih antitijela konjugirana fluorescentnim magnetskim nanosonde (BRCAA1- FMNPs), zaposlen miševe Model učitava s karcinomom želuca od 5 mm u promjeru i Ivis imaging sustav i magnetska rezonancija, istražuje izvedivost kao pripremljenim nanosonde za neinvazivnu in vivo pregled ciljano dvojno modal prikazivanje raka želuca. Rezultati pokazuju da pripremljene nanosonde mogu se koristiti za in vivo pregled dual-modela prikazivanje raka želuca, a može imati veliki potencijal u aplikacijama kao što su dual-modela snimanje i lokalnu toplinsku terapiju ranog karcinoma želuca u bliskoj budućnosti.
Rezultati i rasprava pregled Karakterizacija anti-BRCAA1 monoklonalno antitijelo Netlogu Kao što je prikazano u tablici 1, uspješno smo dobivena dva pozitivna klona stanične linije S-200-5 i S-335-5, njihovi sadržaji su bili različiti, napokon smo odabrali anti-BRCAA1 monoklonsko antitijelo iz s-200-5 stanične linije kao prvi antitijela da mrlja rak želuca tkiva i kontrola tkiva. otkrili smo da BRCAA1 protein izlaže prekomjerna ekspresija u 64% želučanih tkiva raka, ne pokazuje se u normalnim kontrolnim želučane sluzokože, kao što je prikazano na slici 1, ne postoji statistički značajna razlika između dvije skupine (P pregled < 0,01). Ovaj rezultat je gotovo identičan našem prethodnom izvješću [4, 9-11], koji visoko predlažemo da BRCAA1 antigen može biti odabrana kao potencijalna meta za rak najviše želuca, ako je kao pripremljeni nanosonde mogu prepoznati 64% bolesnika s ranim karcinomom želuca, to će biti vrlo korisno za dijagnozu i terapiju kliničkih rak želuca patients.Table 1 titre BRCAA1 monoklonskih protutijela u ascites fluid induciranih klon hibridoma stanica pomoću ELISA pregled pregled titar antitijela *
Klon
BRCAA1 (C) -OVA **
BRCAA1 (C) -BSA **
BSA **
OVA **
S-200-5 pregled 1.024.000 pregled 1.024.000 izvoznici < 1.000 izvoznici < 1000 pregled, S-335- 5. pregled 128.000 pregled 512.000 izvoznici < 1.000 izvoznici < 1000
* recipročna ascitesom razrjeđivanje tekućine, prvo razrjeđenje ascites tekućine je 1:. 1000
** antigeni obloženi na ELISA ploču.
Slika 1 Iskazivanje BRCAA1 proteina u želučanog tkiva raka i normalne želučane sluzokože. A: želučani tkiva raka, × 100; B: normalne kontrole tkiva, × 50. pregled Priprema i karakterizacija BRCAA1- FMNPs nanosonde pregled Kao što je prikazano na Slici 2A, pripremljeni FMNPs su sastavljeni od silika-omotan CdTe i magnetskih nanočestica, njihova veličina je 50 nm ili tako da u promjer. Kao što je prikazano na slici 2D, nakon FMNPs bio vezan s anti-BRCAA1 antitijela, kao što je pripremljeno nanosonde 'photoluminescence (PL) intenzitet bio manji nego što je FMNPs, izlaže utakmice smjeni od 40 nm, što je zbog smanjenja stope polarizacije okolnih molekula, a što je rezultiralo smanjenjem raseljavanja Stokes, na kraju je rezultiralo u plavom pomak u spektrima emisije. Isto tako, magnetski intenzitet kao pripremljenim nanosonde je također bio niži od FMNPs. Slika 2 Karakterizacija anti-BRCAA1-FMNPs nanosonde. A: HR-TEM slika FMNPs; B: Magnetic vlasništvo anti-BRCAA1-FMNPs nanosonde; C: Zeta-potencijal FMNPs s amino skupinom, COOH, Si-O skupina; D:. PL spektri FMNPs sprezi sa i bez BRCAA1 antitijela
U toku pripreme BRCAA1-FMNPs nanosonde, otkrili smo da je površina u funkciju od FMNPs je vrlo ključna za konjugaciju anti-BRCAA1 antitijela i FMNPs preko kovalentne veze. Kao što je prikazano na Slici 2C, različite funkcionalne skupine FMNPs imaju različite vrijednosti zeta-potencijal. FMNPs imala negativan Si-O-skupinu, njihov zeta-potencijal vrijednost bila -34,05 mV, a FMNPs s amino skupinom pozitivno zeta-potencijal vrijednost 24,80 mV, FMNPs s karboksilnom skupinom imala negativan zeta-potencijal vrijednost -30.50 mV. Ustanovljeno je da se karboksilne skupine na površini FMNPs sprezi s anti-antitijelo BRCAA1 lakše od amino skupina na površini FMNPs. Kao što je prikazano u tablici 2, prosječna stopa vezanje anti-BRCAA1 antitijela s FMNPs-COOH je 80,28% .table 2 Vezanje mjerenje brzina FMNPs-anti-BRCAA1 antitijela pregled pregled, ukupna koncentracija anti-BRCAA1 antitijela (ng /ul)
koncentracija protiv BRCAA1 antitijela na zaostale reakcijske smjese (ng /ul)
spojke rate (%)

1
1000.0
197.3
80.27
2
1000.0
191.2
80.88
3
1000.0
203.0
79.70
Kao što je pripremljen nanosonde za in vitro pregled ciljano želučane stanice raka
ciljanje sposobnost kao pripremljenim nanosonde in vitro pregled su se pridržavaju fluorescentnim mikroskopom i izračunatih FACSCalibur protočnom citometru. Kao što je prikazano na slici 3, FMNPs slučajno dispergirane u unutrašnji citoplazme i anti-BRCAA1-FMNPs nanosonde postoji oko jezgra je. Oba FMNPs i pripremljeni BRCAA1-FMNPs nanosonde može ući u citoplazmi stanica MGC803 Nakon 4 sata inkubacije s MGC803 stanica, kao što je prikazano na slici 4A, može označavati FMNPs 25.23% MGC803 stanica, ostatak 74.77% stanica ne može biti obilježen. Kao što je prikazano na slici 4B, 45.92% MGC803 stanice mogu biti obilježena u BRCAA1-FMNPs nanosonde. Kad FMNPs i anti-BRCAA1-FMNPs nanosonde su redom inkubirani s MGC803 stanica i humanih fibroblasta za 0,5 sata, gledali smo puno anti-BRCAA1-FMNPs nanosonde su stupili na MGC803 stanica, nekoliko nanosonde ušao u ljudske stanice fibroblasti, malo FMNPs mogla ući u MGC803 stanica i humanih fibroblasta, koje je visoko sugeriraju da je anti-BRCAA1-FMNPs nanosonde mogu ciljati MGC803 stanica specifično. Magnetsko rezonancija MGC803 stanica i humanih fibroblasta inkubiraju s anti-BRCAA1-FMNPs za 4 sata je prikazano na slici 5, MGC803 stanice pokazivale su jako magnetsko signal od ljudskih fibroblasta (HDF), koji je također pokazalo da su pripremljeni nanosonde mogu ciljati MGC803 stanice na specifičan način. Slika 3 In vitro fluorescencije slike MGC 803 nakon tretirana s FMNPs i FMNPs-BRCAA1 nanočestica (povećanje = × 200). Vrh grupa slika ilustrirano FMNPs slučajnim distribuirati u citoplazmi, dno grupa slika izložena FMNPs-BRCAA1 raspršene oko jezgra je i mogućnost da se MGC803 je dobro ciljanje.
Slika 4 FACSalibur protočnom citometru analizom MGC803 označena s FMNPs i FMNPs-BRCAA1. A: MGC803 pomiješa s 50 ug /ml FMNPs za 24 sata, izlaže 25.23% stanica su označene s FMNPs. B: MGC803 pomiješa s 50 ug /ml FMNPs-BRCAA1 24 h ilustriran do 45.92% stanica je označena s FMNPs-BRCAA1
Slika 5 MR prikaze MGC803 stanica i HDF stanica.. A: MGC803 stanice s anti-BRCAA1-FMNPs. B: HDF stanice s anti-BRCAA1-FMNPs. C:. MGC803 stanice sa samo FMNPs
Kao pripremljeni nanosonde za fluorescentnu oslikavanje in vivo pregled želučane stanice raka
Za procjenu tumora ciljanih svojstava protiv BRCAA1-FMNPs nanosonde golih miševa modela učitava s MGC- 803 želučane stanice raka su pripremljeni i prati pod neinvazivna način za 12 h koristeći Ivis fluorescencije imaging sustav.
praćenjem realnom vremenu intenzitet fluorescencije u cijelom tijelu, znak tumora ciljanje anti-BRCAA1- FMNPs sonda jednostavno je određen u golim miševima učitava s rakom želuca MGC803 stanica. Kao što je prikazano na slici 6A, cijeli životinje proizvedena fluorescentne signale u 30 min nakon injekcije nanosonde, potkožnog tumorsko tkivo može jasno opisanim od okolnog pozadinskog tkiva između 1 sata i 12 sata nakon injekcije, kod maksimalne kontrasta javljaju na 6 sati nakon injekcije. Jaka fluorescentni signal je i dalje biti otkrivena u mjestu tumora u 6 sati nakon ubrizgavanja, što ukazuje da su anti-BRCAA1-FMNPs nanosonde su pretežno akumulira u tumorskim tkivima. Doista temelju rezultata u slici 6B, veći tumora pozadinski omjer (TBR) vrijednosti vrlo predložili kao pripremljeni nanosonde poželjno akumulira u tumorskim tkivima u odnosu na normalne kontrolnim tkivima. To je potvrđeno u fluorescencije slika, koji su pokazali da je fluorescentni signal kao o pripremljenim nanosonde u mjestu tumora bio je najjači od svih miševa organima kao što je prikazano na slici 6C. Osim toga, nakon 12 sata nakon injekcije protiv BRCAA1-FMNPs nanosonde, intenzitet fluorescencije u tumor je još uvijek promatrao jasno, dok je unos pripremljenih nanosonde u normalnim organima nije bilo jasno. Ovi podaci ukazuju na to da vrlo pripremljeni nanosonde mogu ciljati visoko učinkovito tumorskih tkiva unutar golim miševima učitava s rakom želuca. Također smo primijetili da su ti nanosonde u cijelom tijelu miša gotovo potpuno nestao na 12 sata nakon injekcije, također otkrivene nanosonde izašao iz cholecyst sustava (podaci nisu prikazani), vrijeme ovisna cholecyst klirens nanosonde visoko predlažemo da se kao -prepared nanosonde ne može ostati unutar golim miševima za duže vrijeme, dakle, kao što je pripremljeno nanosonde posjeduju dobru biološku sigurnost. Slika 6 In vivo fluorescentna slika akumulacije tumora i distribuciju tkiva za FMNPs-BRCAA1 nanočestica u MGC803 ljudskih imaju tumor atimičnih golih miševa želuca. A, In vivo pregled fluorescentnom slike atimičnih golih miševa koji nose. MGC803 ljudske želučane tumora dobiven je nakon injekcije FMNPs-BRCAA1 nanočestica na drugu vremensku točku. Lokacija tumora je određen sa strelice. A-1: 0 h, A-2: 0.5 h, A-3: 1 h, A-4: 3 h, A-5: 6 sati, A-6: 12 sati. B, TBR [tkiva na okolnu (mišića) Ratio] vrijednosti. TBR vrijednost je određena kao što slijedi: TBR = (tumorske signala pozadinski signal) /(pozadina signala). C, Ex vivo pregled fluorescencije slike izvađenih organa i tumora kod miševa koji nose tumor MGC803 humanog želučanog žrtvovani nakon 12 sati nakon injekcije FMNPs-BRCAA1 nanočesticama. Fluorescencije slike izvađenih organa i tumora su dobiveni uporabom fluorescencije imaging tehnike sa filtrom emisije na 630 nm. D biodistribucije antirepublikanskih BRCAA1-FMNPs u miševa nakon intravenske injekcije. Nekoliko vremenskih točaka nakon ubrizgavanja, željezo izraženo u uzorcima tkiva su ocijenjeni ICP masene spektrometrije (n = 3). Pregled Patološka analiza tumora i važnih organa pregled In vitro pregled evaluaciju isječenih velikih tkivima uključujući jetru, pluća , slezena, bubrezi i srce, te tumora, pokazuju da je anti-BRCAA1-FMNPs probe su uglavnom up-uzeti tumorskih tkiva, koji pokazuju snažne fluorescentne signale, kao što je prikazano na slici 7, dok je drugi tkivima uključujući jetru , pluća, slezenu i srce up-uzeo anti-BRCAA1-FMNPs nanosonde vrlo manje, što, nadalje, ukazuje na to da, kao pripremljeni BRCAA1-FMNPs nanosonde mogu ciljati želučanog tkiva raka. Također smo koristili HE bojenje provjeriti sve organe, bez očite štete zabilježene su u važnim organima [vidjeti dodatne datoteke 1]. Slika 7 rezultat imunofluorescencije analize. A, tumorsko tkivo. B, jetra. (Povećanje = × 200).
Kao pripremljeni nanosonde za MR oslikavanje golih miševa učitava s rakom želuca pregled In vivo pregled MR je provedeno na golim miševima učitava s potkožnog karcinoma želuca u 12 sati postubrizgavanje , Reprezentativne slike T2 kartama prikazani su na slici 8, nakon injiciranja nanosonde, značajna promjena u intenzitetu signala zabilježeno je u nekim regijama tumora, što pokazuje da postoji akumulaciju nanosonde u tumorskom stranice kao što je prikazano na slici 8B, kao strelice pokazala. Kao kontrola, nakon miševi modela raka želuca su injektirani FMNPs 12 sati, miševi su provedena MR imaging, koje ne pokazuju intenzivno signala u području tumora (Slika 8A). Slika 8 MR slika miševa. A, FMNPs bez spojke BRCAA1 B, FMNPs kombinaciji s BRCAA1 pregled potencijalni mehanizam usmjeravanja imaging
U posljednjih nekoliko godina, tehnologija molekularni imaging su korišteni za real-time i ne-invazivne imaging in vivo
tumorskih tkiva [39-43]. Na primjer, kvantna točkice, zbog svojih jedinstvenih fotoluminescentnih svojstava, koriste se za bio-označavanje i fluorescentne slike [11-13, 33, 43], ali kvantna točkice 'toksičnost ograničena njihova primjena u ljudskom tijelu, do sada je neko siguran kvantum točkice su se razvili. Magnetskih nanočestica su također korišteni kao kontrastni reagensa za MRT [15, 33, 36]. U isto vrijeme, kombinacija dvaju metode slikovnog pruža prednosti i da koristi jednu metodu, koja će objediniti sve informacije o tumor lokalizacije, okoliš i status.
U ovoj studiji, dizajnirali smo i pripremili novi imaging sondu, koji je bio sastavljen od silicijskih-omotan kvantnih točkica i magnetskih nanočestica s ciljem povećanja njihove biokompatibilnost. Naši rezultati pokazuju da je pripremljena silicij-omotan kvantne točkice i magnetske nanočestice su vrlo stabilne, a vlastita jaka fluorescentna signali i magnetski intenzitet. Pomoću jake fluorescentne signale kao pripremljeni nanosonde, uspješno dobiven fluorescentnih slika in vivo
želučanog tkiva raka sa 5 mm u golim miševima modelom. Pomoću jake magnetske signala kao pripremljeni nanosonde, također uspješno dobiti MR in vivo
želučanog tkiva raka s 5 mm u golim miševima modelom. U usporedbi s prethodnim izvješćima, veća veličina tumorskim tkivima (+ 5 mm) može se lako snimljenih pomoću fluorescentne slike i MRI snimanje, kao kontrast, naši rezultati pokazuju da kao pripremljen nanosonde može otkriti manje veličine tumorskih tkiva (manje 5 mm), koji je značajno poboljšan osjetljivost metode detekcije. Naš rezultat također je prvi put prijaviti dual-modal ciljanja snimanje u uvjetima in vivo
želučanog tkiva raka.
Kako ciljati in vivo
želučanog tkiva raka je također challengeable problema. Do danas, nema specifičnih želučani biomarkera raka su prijavili. Iako je HER-2 proteina je potvrđeno da je pozitivno izraz u 6-35% karcinoma želuca tkiva [28-31], HER-2 protein također pokazuje prekomjernu ekspresiju u mnogim tumorskim tkivima, kao što su rak dojke, rak pluća, rak debelog crijeva, itd, dakle HER-2 ne smije biti specifičan biomarkera na karcinom želuca. Naši rezultati pokazuju da BRCAA1 antigen je samo pretjerano izražena u 64% ili tako želučanog tkiva raka od operacije pacijenata kliničkih, također je potvrdio da BRCAA1 antigen je pretjerano izražen u nekim želučanih staničnim linijama karcinoma, kao što su MKN-1, MKN-74 , SGC-7901, KATO-III i MGC803 [6-9]. Koristili smo MGC803 stanica za pripremu golim miševima modela učitava s rakom želuca, a uspješno je primijetio da kao pripremljen nanosonde pretežno akumulira u tumorskim tkivima u usporedbi s normalnim kontrolnim tkivima, a kako je vrijeme nakon ubrizgavanja povećana. Također smo primijetili da ubrizgava nanosonde u cijelom tijelu pokazao je vremenski ovisan klirens i fluorescentni signal se postupno smanjio kao vrijeme proteklo zbog izlučivanja sustavu jetre cholecyst i bubrega jasnoću kao pripremljenim nanosonde. Nekoliko izvještaji pokazuju da bubrezima samo jasno nanočestice sa 5 nm promjera, u našem istraživanju, primijetili smo da se kao pripravljena nanosonde s 50 nm u promjeru, i može biti uklonjena u 12 sati. Ovaj konkretni mehanizam je u tijeku. Pregled Nanoprobe biološku sigurnost je također važan problem [44], koji odlučuje aplikacija izglede kao pripremljenim nanosonde. Naši rezultati u potpunosti su pokazali da što pripremljene nanosonde nije oštetiti važne organe, uključujući jetre, bubrega, srca, pluća, itd, i ne pokazuje dugoročni ostanak u važnim organima, koje je visoko ukazuju na to da su pripremljeni nanosonde posjeduju dobru biokompatibilnost i imaju veliki potencijal u aplikacijama kao što su dual modela slike i selektivno liječenje ranog karcinoma želuca. pregled Zaključak pregled uspješno pripremili nove anti-BRCAA1-FMNPs nanosonde, koji se mogu koristiti za in vivo
dva modalni slike kao što su fluorescentne slike i magnetskom rezonancom, a vlasnik očito određenu sposobnost ciljanja prema želučanog tkiva raka sa 5 mm tijekom 0,5 sata i 12 h postubrizgavanje i vlastito dobro biokompatibilnosti. To bi trebao biti prvi izvještaj. AS-Pripremljeni multifunkcionalni nanosonde se također može koristiti za hipertermije liječenje karcinoma želuca u in vitro pregled izmjeničnom magnetskom polju zračenje, a imaju veliki potencijal u aplikacijama kao što su simultani slike i terapije ciljanje kliničkog raka želuca u bliskoj budućnosti.
Materijali i metode
Priprema anti-BRCAA1 monoklonskih protutijela pregled eksperimenti na životinjama su izvedene u skladu sa smjernicama za njegu životinja i korištenja odbora, Shanghai Jiao Tong University. Monoklonska antitijela su pripravljena od pročišćenog fuzijskog proteina BRCAA1. Balb /c ženke, 4-6 tjedana stari, nabavljene su iz Šangaja LAC laboratorijskih životinja Co. Ltd., Kineske akademije znanosti (Shanghai, Kina). Miševi su imunizirani intraperitonealnom injekcijom sa 50 ug pročišćenog BRCAA1 proteina koji je emulgiran s jednakim volumenom Freundovog kompletnog adjuvansa. Tri dodatna injekcija primjenjuje pomoću nepotpunom adjuvantu svaka dva tjedna. Tri dana nakon zadnje injekcije, a stanica slezene miševa su bile skupljene i spojeno s Sp 2/0 mišjim mijelomskim stanicama. Nakon 10-14 dana, supernatanti kultura pretraženi su s ELISA testa u kojem je kruta faza je premazana s rekombinantnim BRCAA1 proteina (2 ng /ml), koji se koristi za imunizaciju. U procesu selekcije, monoklonska antitijela se vežu s obloženom BRCAA1 proteina izabrani su. Po dva puta ograničavajućim razrjeđenjima, pozitivne kolonije su subkloniran. Ascitesa tekućine su sakupljene iz miševa primarnih s 0,5 ml intraperitonealnom injekcijom pristan, a zatim im je injektirano 10 6 hibridnim stanicama. Klasa i potklasa za svako mAb su određene korištenjem mišje monoklonsko protutijelo izotipskim priborom (Hy Cult Biotechnology B.V., Nizozemska). Mab-i su pročišćeni iz asketskog tekućine mišem korištenjem proteinske G-Sepharose 4FF (Pharmacia, Uppsala, Švedska) kolone prema uputama proizvođača ukloniti komponente koje bi mogle ometati eksperimenata Biopaniranje. Titri antitijela određeni su ELISA metode [45]. Na kraju je jedan od pripremljenih anti-BRCAA1 monoklonskih antitijela se koriste kao prvog antitijela mrlja 50 uzoraka raka želuca i kontrola želučane sluzokože, koje su prikupljene iz bolnice Changzheng i No.1 Ljudi bolnice u Šangaju i utvrđene patološkog pregleda. Pregled Priprema i površina Funkcionalizacija FMNPs
Priprema Fe 3o 4 nanočestice se temelji na ko-taloženje željeza i željeza ionskih otopina (1: 2 molarni omjer) [46-49]. CdTe Nanokristali su bili sintetizirani kao što slijedi u skladu s našim prethodno izvješće: CDClj 2 (5 mmol) se otopi u 110 ml vode, i 12 mmol TGA doda se uz miješanje, nakon čega slijedi podešavanje pH na 11 dodavanjem u kapima 1 M otopine NaOH. Pomiješana otopina se stavi u trogrlu tikvicu odzračene s N 2 mjehurića tijekom 30 minuta. Uz miješanje, 2.5 mmol NaHTe otopine bez kisika se injicira u trogrlu tikvicu koja je svježe pripravljen iz telurij praha i NaBH 4 (molarnom odnosu 1: 2), u vodi na 0 ° C. Dobivena otopina je oko 4 mg /ml, a promjer produkt 3.5 nm emitira s najviše oko 630 nm. Fluorescentna magnetske nanočestice (FMNPs) pripravljeni su primjenom reverzne mikroemulzije pristup. Prije vezanjem FMNPs s BRCAA1, najprije funkcionaliziran funkcionalnu skupinu površine FMNPs kao karboksilnu skupinu. 95 ml etanola i 2 ml 3-aminopropiltrietoksisilana (APS) dodani su kako bi se dobilo mješoviti otopinu i ostavi da reagira na sobnoj temperaturi 24 h. Aminosilana modificirani FMNPs razdvojeni su permanentni magnet i isperu deioniziranom vodom tri puta. Zatim se redispersed FMNPs-NH 2 u 100 ml dimetilformamida (DMF), dodano je prekomjerno sukcininski anhidrid tvore miješani otopina koja reagira na sobnoj temperaturi 24 h. Karboksilne modificirani FMNPs razdvojeni su stalni magnet i opet pere sa deionizirane vode tri puta. Pregled Priprema i karakterizacija BRCAA1 FMNPs antitijela konjugirana pregled koristili smo dva koraka za dobivanje stabilnog anti-BRCAA1-FMNPs konjugacija [ ,,,0],48, 49]. 1,5 mg FMNPs-COOH otopina je raspršena u 2 ml pH 7 PBS pufera, te je tretiran u ultrazvučnoj kupelji tijekom 10 min. Zatim se pomiješa 1 ml svježeg 400 mM EDC i 100 mM NHSS na pH 6,0, MES pufer i okreće ga na sobnoj temperaturi 15 min. Nakon toga, dobivena otopina se odvoji od magnetskog polja i 1 mg /mL BRCAA1 monoklonsko antitijelo dodano je u gore navedenu smjesu, miješa na tamnom mjestu tijekom 2 sata. Da bi se uklonio slobodan BRCAA1, preostala reakcijska smjesa razdvoji se magnetsko polje i Kruti ostatak se ispere s 1 ml PBS puferu tri puta. Konačno, 1 ml 0,05% Tween-20 /PBS se doda BRCAA1-FMNPs konjugacije i konačni bio-konjugacije je pohranjen pri 4 ° C. Kada se koristi ovaj BRCAA1-FMNPs konjugacija treba razrijediti s PBS /0,05% Tween-20. Onda smo koristili nano Drop uređaj kvantificirati brzinu spajanja BRCAA1 antitijela s FMNPs-COOH. Prije reakcije povezivanja, mjerili smo ukupnu koncentraciju BRCAA1 antitijela. Nakon reakcije povezivanja, mjerili smo koncentracije BRCAA1 antitijela zaostale reakcijske smjese i izračunala brzina spajanja prema jednadžbi: pregled za spajanje (%) = (1-Koncentracija antitijela u BRCAA1 zaostale reakcijske smjese /ukupna koncentracija BRCAA1 antitijela) × 100. pregled AS-pripremljenih nanosonde i čiste FMNPs karakterizira transmisijskim elektronskim mikroskopom i photoluminescence (pl) spektrometrije i Zeta analizator potencijala.
nanosonde za in vitro pregled ciljanje slike želučanih stanica raka pregled je korišten želuca stanična linija karcinoma MGC803 stanice s prekomjerno izražava BRCAA1 proteina korištene su kao ciljne stanice, ljudske stanice fibroblasta, bez izraženog BRCAA1 proteina kao kontrola, su uzgojene i sakupljena je i zatim se pomiješa s 50 ug /mL BRCAA1-FMNPs nanosonde i uzgojene u vlažnoj 5% CO 2 uravnotežen zračnom inkubatoru pri 37 ° C kroz 4 sata, u međuvremenu MGC803 i ljudske stanice fibroblasta su tretirane s FMNPs kao kontrolne skupine. Nakon toga, stanice su isprane s PBS-om tri puta, a zatim fiksne stanice s 2,5% -tne otopine glutaraldehida 30 min. Za nuklearnu counterstaining, MGC803 su inkubirani s 1 mM Hoechst 33258 u PBS tijekom 5 minuta. Stanice su promatrana od strane fluorescentnim mikroskopom (Nikon TS100-F), a snimio GE HDX 3.0T MRT instrumentu opremljenom ParaVision 3.0 softverom. Pregled Također smo koristili protočnom citometru ocijeniti želučane stanicu raka sposobnost BRCAA1- ciljanje FMNPs nanosonde.

• Duboko sekvencioniranje želučanog karcinoma otkriva somatske mutacije relevantne za personalizirane medicine
• BariSurg suđenje: Sleeve gastrektomija odnosu Roux-en-Y želudac zaobići u pretilih bolesnika s BMI 35-60 kg /m2 - multi-centar nasumično strpljivi i promatrač slijepi ne-inferiornost trial