mikro-RNS-146a gátolja a G-fehérjéhez kapcsolt receptor által közvetített NF-kB célzásával CARD10 és COPS8 gyomorrákban

mikroRNS-146a gátolja G-fehérjéhez kapcsolt receptorok által közvetített NF-kB megcélozva CARD10 és COPS8 gyomorrákban katalógusa Abstract Background katalógusa katalógusa gyomorrák a második leggyakoribb oka a rák okozta halál a világ. Gyulladásos származó jelek gyomor rákos sejtek számára fontos toborzása gyulladásos sejtek és szabályozása metasztázis gyomorrák. Számos mikroRNS (miRNS) kimutatták, hogy részt vesz kifejlődésének és progressziójának gyomorrák. miRNS-146a (miR-146a) egy modulátor gyulladásos jelek, de keveset tudunk annak jelentőségét a gyomorrák. Ezért akarta célok meghatározása a miR-146a a gyomorrák és megvizsgálja annak biológiai szerepe. Katalógusa Eredmények katalógusa A kifejezés a miR-146a értékelték kvantitatív PCR (qPCR), és megállapította, up-szabályozott gasztrinre egerek , egy egérmodelljében gyomorrák, és 73% a vizsgált emberi gyomor adenocarcinoma. Expression miR-146a a gyomor rákos sejtek megerősítette in situ hibridizáció katalógusa. Globális változások elemzése az mRNS szint után a miR-146a transzfekciós két olyan átiratok, kaszpáz toborzó domént tartalmazó fehérje 10 (CARD10) és COP9 szignaloszóma komplex alegység 8 (COPS8), mint új miR-146a célokat. qPCR, Western blot és luciferáz vizsgálat megerősítette ezeket átiratok közvetlen miR-146a célokat. CARD10 és COPS8 kimutatták, hogy részt vesz a G-fehérjéhez kapcsolt receptor (GPCR) útvonal a nukleáris faktor-kappaB (NF-kappaB) aktiválást. Lizofoszfatidsav (LPA) indukálja az NF-kappaB aktiválás keresztül katalógusa ezt az útvonalat, és túlzott expressziója a miR-146a gátolja LPA-indukált NF-kappaB aktiváció, csökkentett LPA-indukált expressziója a tumor-elősegítő citokinek és növekedési faktorok és gátolt monocita vonzás .
Következtetések
miR-146a expresszió up-szabályozott többsége gyomor rák, ahol célozza CARD10 és COPS8, gátlására GPCR által közvetített NF-kappaB, csökkentve ezáltal expresszióját az NF-kappaB-szabályozott tumor- elősegítő citokinek és növekedési faktorok. Megcélozva komponensei számos NF-kappaB-aktiváló utak, miR-146a kulcsfontosságú eleme a szabályozásában NF-kappaB aktivitását. Katalógusa Kulcsszavak katalógusa Gyomorrák nem kódoló RNS citokinek Háttér
globálisan gyomorrák a második leggyakoribb oka a rák okozta halál [1]. Gyomorrák kialakulásával befolyásolja közötti kölcsönhatások fogadó, környezeti és bakteriális tényezők. Példák a szinergikus kockázati tényezők a gyomorrák vannak polimorfizmusok részt vevő gének a fogadó gyulladásos válasz, [2] a Helicobacter pylori katalógusa (H. pylori
) virulencia faktorok [3] és étrend gazdag só és nitrát [4] . A javulás ellenére a felismerése és kezelése a korai gyomorrák, a hosszú távú túlélés aránya az előrehaladott gyomorrák alacsony [5]. A legnagyobb kihívást az előrehaladott gyomorrák nyirok, peritonealis vagy távoli szervi áttétek, amely egyidejűleg megjósolni rossz kimenetel az ilyen betegek [6].
Bár sok onkogének és tumor szupresszor számoltak be kell vonni a fejlesztés gyomor carcinoma a molekuláris mechanizmusok mögöttes metasztázis előrehaladott gyomorrák karcinómák még kevéssé ismert [7]. Az egyik legfontosabb esemény a gyomor karcinogenezis gyulladása. Gyulladás aktiválásához vezet a transzkripciós faktor a nukleáris faktor-kappaB (NF-kB), amely kapcsolatban van a gyomor karcinogenezis [8, 9].
MikroRNS (miRNS) részt vesz a fejlődés és a progresszióját gyomorrák [10- 13]. miRNS egy osztály az endogén, a nem kódoló, egyszálú RNS-molekulák az APP. 22. nukleotidok, amelyek közvetítik poszt-transzkripciós génexpresszió szabályozásában a bázispárosodás a 3 'nem transzlálódó régiót (UTR) cél hírvivő RNS (mRNS) [14]. miRNS-ek részt vesznek a szabályozás a legtöbb sejtes folyamatok, beleértve a sejtproliferációt, a migrációt, differenciálódást és apoptózist [10, 14, 15]. miRNS vannak abnormálisan expresszált a legtöbb emberi rákos, és mint fehérjét kódoló géneket, miRNS működhet, mint akár tumorszupresszorok vagy onkogének, így szabályozza a karcinogenezis [10, 12]. miRNS-146a (MIR-146a) szabályozza az NF-kB és gátolja az interleukin-1-receptor (IL-1R) és a Toll-szerű receptor (TLR) - indukált NF-kB célzásával interleukin-1-receptor-asszociált kináz 1 (IRAK1) és TNF-receptor asszociált faktor 6 (TRAF6) [16-18]. miR-146a számoltak abnormálisan expresszált számos gyulladásos betegségek és a rák, de a szerepe a miR-146a a gyomorrák még mindig ellentmondásos, mint kifejezése miR-146a találtuk mind felfelé és lefelé szabályozni itt [19-24 ]. Ezért megvizsgáltuk a kifejezés a miR-146a a gyomorrák és jellemeztük a célok és molekuláris funkciók tisztázása ellentmondó eredményt. Katalógusa Azt találtuk, hogy a miR-146a akár szabályozott egér modellben a gyomorrák, valamint a emberi gyomor adenocarcinoma és azonosítottak CARD10 és COPS8 új közvetlen célpontjai miR-146a. Mindkettő része a G-fehérjéhez kapcsolt receptor (GPCR) által közvetített jelátviteli, amely közvetíti NF-kB. Ez azt sugallja, hogy a miR-146a jár tumort visszaszorító gátlásával GPCR által közvetített NF-kB és az így kapott expresszió a tumor-elősegítő citokinek és a növekedési faktorok.
Eredmények
miR-146a expresszió fel szabályozott egy egér modellje gyomorrák és az emberi gyomor adenocarcinoma katalógusa gasztrin knockout (KO) egerek achlorhydric és fejlesztése intestinalis metaplasia és gyomorrák adenoma idővel [25]. Kvantitatív PCR (qPCR) találtunk a kifejezés a miR-146a app. 2-szeres fel-szabályozott régi gasztrin KO egerek akár fundus intesztinális metaplázia vagy antrális adenoma képest expresszió vad típusú (WT) egerekben (P < 0,05) (1a ábra). In situ
hibridizáció miR-146a-t detektáltunk metaplasztikus gyomor szövetet a gasztrin KO egerek, de nem a normál gyomor szövetet a WT egerek (ábra 2AB) (Plusz fájl1 ábra S1). Miután megállapítottuk, hogy a miR-146a megnő a egérmodellben gyomorrák megvizsgáltuk expresszióját miR-146a párosított emberi gyomor adenocarcinoma és a szomszédos kontroll biopszia, és megállapította, hogy a fel-szabályozott ből 27, 37 esetben (73%) ( 1B ábra). In situ hibridizáció katalógusa azt mutatta, hogy a miR-146a fejezte ki az emberi gyomor adenokarcinóma sejtekben, míg a miR-146a-pozitív sejteket nem lehetett kimutatni a normál gyomornyálkahártya (ábra 2CD) (Plusz áll_1 ábra S1). 1. ábra fokozott expressziója miR-146a a gasztrin KO egér gyomorrák modell és az emberi gyomorrák. (A) A relatív expressziós miR-146a in metaplasztikus fundus szövetben (n = 8) és hyperplasiás antrális nyálkahártya (n = 4) /antrális adenomák (n = 4) a gasztrin knockout (KO) egerekben, összehasonlítva az átlagos expressziót találtunk megfelelő vad típusú (WT) egér szövetben. * = P < 0.05. (B) vízesés telek expressziójának miR-146a 37 emberi gyomor adenokarcinómája expressziójához viszonyított a szomszédos normál szövetben. miR-146a-t serkentő szabályozás 27 a 37 tumorok (73%). Az expressziós szinteket a miR-146a határoztuk qPCR és normalizált azoknak az endogén kontroll RNU44.
2. ábra situ hibridizáció kimutatását miR-146a expresszió a gasztrin KO egér gasztrikus rák modell és humán gyomorrák. (A) expressziója a miR-146a-t nem lehetett kimutatni a WT fundus egér szövetben, (B), míg a miR-146a-pozitív sejtek (kék atommag) detektáltunk a metaplasztikus fundus szövetet gasztrin KO egerekben. (C) Nincs jel volt kimutatható a kódolt LNA szonda. (D) a miR-146a expressziója nem volt jelen a normál humán gasztrikus szövet, (E), de jelen van az emberi gyomor adenokarcinóma sejteket (kék magok). (F) Negatív kontroll segítségével egy kódolt LNA szonda. Reprezentatív miR-146a-pozitív sejteket nyilakkal jelöljük. Eredeti nagyítás x20, Skála = 100 nm.
Nem volt összefüggés a miR-146a expressziója gyomor- adenocarcinoma és a betegek életkora, neme és lokalizációja vagy besorolását daganatok (nem közölt adatok). Bár a betegek magas miR-146a kifejezés tűnt, hogy egy jobb teljes túlélést ez nem volt szignifikáns (Plusz áll_1: S2 kép).
MiR-146a célok tagjai a GPCR által közvetített NF-kB aktiváció útvonal katalógusa Miután kimutattuk, fokozott expressziója miR-146a a legtöbb gyomorrák, szerettünk volna létrehozni biológiai hatásának miR-146a jellemezte közvetlen molekuláris célpontokat humán gyomorrák. Azt akartuk, hogy ezt a túl-kifejezésével miR-146a a gyomorrák sejtek, majd azonosítja mRNS csökkent kifejezés [26]. Ezért megvizsgáltuk a miR-146a expresszióra paneljén sejtvonalak, és megállapította, változatos, de meglepően alacsony expressziója miR-146a a rendelkezésre álló gyomor sejtvonalak (Plusz fájl1: ábra S3), figyelembe véve a detektált túlzott expresszió az tumorokban.
Az emberi gyomorrák sejtvonal SNU638, amely elhanyagolható mennyiségű endogén miR-146a találtak alkalmas miR-146a túlzott kifejeződése tanulmányokat. Mivel a miR-146a expressziója nagyon alacsony volt a vizsgált gyomor sejtvonalak miR-146a gátlási vizsgálatokat nem végeztek. Katalógusa először azt vizsgáltuk, ha túl-miR-146a befolyásolja a növekedés a SNU638 sejtek, és megállapította, sejtnövekedést érinti ( további áll_1 ábra S4). Ezt követően, a globális változások génexpresszió SNU638 sejtekben következő túlzott expressziójának miR-146a vizsgáltunk. Miután a miR-146a transzfekció mRNS megjósolt 3'UTR miR-146a célwebhelyet szignifikánsan leszabályozott képest mRNS nélkül előre jelzett célok oldalak (P < 4.6e-11, kétfarkú Wilcoxon rank-sum tesztet) (3A) . Elemeztük minden szó hosszúságú 5-7 túlzott reprezentációt leszabályozott mRNS után miR-146a transzfekció és megtalálta a szót legerősebb korrelált leszabályozza volt a mag helyén komplementer érett miR-146a bázisok 2-7 /8 ( 3B ábra). Átírási megjósolt 3'UTR miR-146a célwebhelyet hogy szignifikánsan leszabályozott upon miR-146a transzfekció tekintették potenciális közvetlen miR-146a célokat. 847 illesztett ezeknek a kritériumoknak (Plusz áll_1 táblázat S5). A 10 legnagyobb leszabályozott potenciális miR-146a célok ábrán látható 3C. Ennek negatív érvényesítési ellenőrzés megismételtük az eljárást kezelésére SNU638 sejteket miR-146a LNA inhibitor. Nem volt szignifikáns up-gének szabályozásában a mag helyén komplementer érett miR-146a bázisok (az adatokat nem mutatjuk be). 3. ábra azonosítása miR-146a célokat. (A) a becsült miR-146a cél átiratok jelentősen leszabályozott után miR-146a transzfekciós képest expresszált gének, amelyek nem jelzett célokat miR-146a (P < 4.6e-11, kétfarkú Wilcoxon rank-sum tesztet) . (B) Top 10 szó leginkább korrelál leszabályozza (korrelációs Z-score jelzi balra minden szó, minden 10 szót a becsült FDR < 1e-6). Nagybetűvel kiemelje a miRNS mag régió, a Watson-Crick bázispár (kék), eltérések (piros). A szó a legerősebb korrelációt mutatott leszabályozza volt a mag helyén komplementer érett miRNS bázisok 2-7 /8. (C) átiratokat, amelynek 6mer vagy 7mer miR-146a vetőmag oldalak 3'UTR, amelyek leginkább leszabályozott upon miR-146a transzfekció jelennek meg. Ezek potenciális közvetlen miR-146a célokat. Kifejezés megadva log2 szeres változás. 3'UTR 6 m /7 m oszlopokban számok 6 vagy 7mer miR-146a vetőmag oldalak 3'UTR.
A három legnagyobb lefelé gének upon miR-146a túlzott expressziója, IRAK1, kaszpáz toborzó domént tartalmazó fehérje 10 (CARD10) és COP9 konstitutív photomorphogenic homológ alegység 8 (COPS8) (3C, ábra) mind jelátviteli vezető NF-kB aktiválás [27-29]. IRAK1 egy ismert miR-146a cél részt TLR- és IL-1R-közvetített aktiválását NF-kB [16-18]. CARD10 részt vesz a GPCR által közvetített NF-kB [27], míg COPS8 úgy gondolják, hogy részt vesz ebben a útvonal alapján való részvétele a T-sejt-receptor (TCR) által közvetített NF-kB aktiválás [28]. Meglepő módon, de hasonló a megállapításait Boldin és munkatársai.
[30], kifejezése TRAF6, amelyet korábban már le, mint egy miR-146a cél [16, 18, 31], nem csökkent transzkripciós szinten után miR-146a túlzott expressziója a mi modell rendszerben.
a gyomorrák, NF-kB modulálja a sejt túlélését, immunitás és gyulladás, és az NF-kB aktiválás társul rossz kimenetellel gyomorrákban [32, 33]. Ezért összpontosított jellemző CARD10 és COPS8 közvetlen miR-146a célokat és szerepük a NF-kB aktiválás gyomorrákban. Igazoltuk miR-146a-mediált down-regulációja CARD10, COPS8 és IRAK1 a transzkriptum szintjén (4a ábra), és azt is megállapította, hogy a miR-146a csökkent szinten CARD10, COPS8 és IRAK1 fehérje (4B ábra). Végül, a közvetlen célzás a miR-146a, hogy 3'UTRs a cél gének igazolni luciferáz assay (4C). Összefoglalva, azt megerősítette korábbi megfigyelések azt mutatják, hogy a miR-146a közvetlenül célozza IRAK1 és emellett két olyan új célokat, CARD10 és COPS8, amely kódolja a fehérjék javasolt, hogy részt vegyen az NF-kB aktiválást. COPS8 egy komponense a COP9 szignaloszóma amely nyolc alegységek (GPS1 és COPS2-8) [34]. COPS8 az egyetlen alegység megcélzott közvetlenül miR-146, de mivel változás az összeg az egyedi alegységek kimutatták, hogy befolyásolja az összeget a többi alegységek [35, 36], azt vizsgáltuk, hogyan transzfekciót miR-146a érint expresszióját minden COP9 szignaloszóma alkatrészeket. Nem stimulált sejtekben a kifejezés a COPS2 csökkent (20%) (Plusz fájl1 ábra S5). Ezért feltételezzük, hogy a hatás a miR-146a a COP9 összetett oka főként csökkentését COPS8 kifejezés, bár közvetett destabilizációját komplex nem zárható ki. 4. ábra CARD10 és COPS8 közvetlen miR-146a célokat. (A) mRNS-expressziója a két új miR-146a célokat, CARD10 és COPS8, és IRAK1, egy ismert miR_146a cél, úgy határoztuk meg, qPCR a vezérlő- és miR-146a-transzfektált SNU638 sejtekben. Expressziója minden egyes transzkriptum látható expressziójához viszonyított kontroll transzfektált sejtekben. CARD10, COPS8 és IRAK1 expressziója alulszabályozott következő miR-146a túlzott expressziója. Az adatokat mutatjuk átlag ± S.D. Négy biológiai ismétlésben. * = P < 0,05, ** = P < 0,01, *** = P < 0.001. (B) a miR-146a transzfekció csökkentette a fehérje szintje CARD10, COPS8 és IRAK1 a miR-146a-transzfektált sejtek SNU638. A kifejezés az egyes fehérje látható expressziójához viszonyított kontroll transzfektált sejtekben. Csíkok mennyiségi képest béta-aktin. Az adatokat mutatjuk átlag ± S.D. Négy biológiai ismétlésben. * = P < 0,05, ** = P < 0,01, *** = P < 0.001. (C) ellenőrzése közvetlen és funkcionális célt kötő segítségével luciferáz gazdaság WT 3'UTRs és mutáns (Mut) 3'UTRs (a központi 4 nukleotid váltották fel a miR-146a-kötő hely) CARD10, COPS8 és IRAK1. Tartalmazó konstrukciók akár WT vagy mutáns (Mut) 3'UTRs downstream a szentjánosbogár luciferáz gént ko-transzfektáltuk HEK293 sejteket együtt Renilla luciferáz kontroll plazmid és vagy miR-146a vagy vezérlő (Siglo). Bal, luciferázaktivitást vonatkoztatva adjuk aktivitás kontroll-transzfektált sejtekben. miR-146a csökkent luciferáz aktivitást a konstrukciók WT CARD10, COPS8 és IRAK1 3'UTRs. Jobb, szekvencia illesztések miR-146a és a potenciális WT és Mut 3'UTR célwebhelyeket láthatók, mutált bázisok pirossal. Az adatokat mutatjuk átlag ± S.D. gyakran biológiai ismétlésben. *** = P < 0.001. Sequence nyomvonalakat vannak átvéve DIANALab (2009).
MiR-146a gátolja a GPCR által közvetített NF-kB aktivitását célzásával CARD10 és COPS8
CARD10 és COPS8 részt vesznek a GPCR által közvetített NF-kB [28, 29 ]. Ezért akartak létrehozni saját szerepük jelátviteli gyomorrák, majd vizsgálja meg annak fontosságát, hogy a miR-146a gátlására jelátviteli. Erre a célra használható lysophosphatiditc sav (LPA), amely egy ismert aktivátora a GPCR által közvetített NF-kB-aktivációs útvonalat [29], és elősegíti a gyomorrák sejtek migrációját és invázióját [37]. LPA-stiumlation szignifikánsan növelte az NF-kB aktivitás a luciferáz riporter rendszer (5. ábra). siRNS kiütése CARD10 és COPS8 expresszió szignifikánsan gátolta LPA-stimulált GPCR által közvetített NF-kB in SNU638 sejtekben (5. ábra). Ez a gátlás hasonló volt a miR-146a-indukált gátlásának. Ezzel szemben, a gátló endogén miR-146a hatás nélkül maradt NF-kB aktiválást. Ahogy várható, az siRNS-közvetített elnyomását IRAK1 kifejezés nem befolyásolta LPA-stimulált NF-kB (5. ábra) A IRAK1 nem vesz részt a GPCR által közvetített útvonal. Mivel TRAF6 egy miR-146a cél, amely szerepet játszik az NF-kB aktiválás hatására siRNS-közvetített elnyomását TRAF6 expresszió LPA-stimulált NF-kB aktivitását vizsgálták. Azonban kiütése TRAF6 nem gátolta a LPA-stimulált NF-kB aktivitását (5. ábra). Ezek az eredmények azt jelzik, hogy a két újonnan azonosított miR-146a célokat, CARD10 és COPS8, részt vesznek GPCR által közvetített NF-kB. Ezért, a hatás a miR-146a túlzott kifejeződése a LPA-stimulált NF-kB aktivitását vizsgálták. miR-146a szignifikánsan gátolta LPA-stimulált NF-kB aktivitását SNU638 sejtekben (5. ábra). A mix a siRNS-ek ellen CARD10, COPS8, IRAK1 és TRAF6 utánozták a miR-146a-közvetített gátlása az NF-kB aktivitását (5. ábra). Kiütése két másik COP9 komponens (COPS2 és COPS5) szintén gátolta a LPA-stimulált NF-kB aktivitását, bizonyítva, hogy fontos a jelenléte minden COP9 szignaloszóma alegységek számára LPA-stimulált NF-kB. qPCR expressziójának a különböző komponensek vizsgált megerősítette a knockdown (5. ábra). 5. ábra miR-146a célok COPS8 és CARD10 GPCR által közvetített NF-kB aktiválást. SNU638 sejteket együtt transzfektáltunk NF-kB riporter plazmiddal és Renilla luciferáz kontroll plazmid együtt kontroll (Siglo), siRNS vagy miR-146a. Sejteket stimulálunk 25 pM LPA és luciferáz-aktivitást mértünk. A luciferáz aktivitást adott viszonyítva aktivitását a kontroll transzfektált LPA-stimulált sejtekben. elleni siRNS CARD10 és COPS8, miR-146a, miR-146a-gátló és siRNS mix csökkent luciferáz aktivitást. elleni siRNS IRAK1 és TRAF6 nem csökkentette a luciferáz aktivitást. LPA-stimulált NF-kB aktiválás is gátolta elleni siRNS COPS2 és COPS5, demonstrálva, hogy más zavarása az COP9 szignaloszóma komplex csökkenti GPCR által közvetített NF-kB aktiválást. siMix, keverjük össze siRNS ellen CARD10, COPS8, IRAK1 és TRAF6. Az adatokat mutatjuk, mint az átlag ± S.D. hét biológiai ismétlésben. * = P < 0.05. A relatív expresszióját TRAF6, COPS8, IRAK1, CARD10, COPS2 és COPS5 mértük qPCR. Szürke-árnyékoló szignifikáns változást jelez a kifejezés, p < 0,05, n = 4 katalógusa A kifejezés a miR-146a részben vezérli NF-kB. Ezért is teszteltük, hogy a kifejezés a miR-146a érintette LPA és IL-1β stimuláció. Azt találtuk, hogy LPA kezelés megduplázódott expressziójának miR-146a és IL-1β stimuláció adott egy 4-szeres növekedését miR-146a kifejezés, ami hasonló a korábbi megfigyelések [16, 38] (Plusz fájl1 ábra S6). Bár a miR-146a LNA fokozott expresszióját három miR-146a célok (TRAF6, IRAK1 és CARD10) (5. ábra) a teljes NF-kB nem változott meg LPA-stimulált miR-146a LNA kezelt SNU638 sejtekben.
miR-146a csökkenti LPA-indukált expresszióját a citokinek és a növekedési faktorok
legtöbb karcinómák mikrokörnyezeti tényező, nem pedig genetikai eltérések valószínűleg aktiválásáért felelős NF-kB jelátvitel, amely szabályozza számos folyamatban, beleértve a váladék a növekedési faktorok és citokinek [39, 40]. Ezért megvizsgáltuk, hogy hogyan miR-146a modulálja expresszióját kiválasztott NF-kB által szabályozott növekedési faktorok és citokinek által indukált extracelluláris szignálok, mint például LPA. LPA-stimuláció szignifikánsan megnövekedett expressziója az interleukin-6, -8, 23A (IL-6, IL-8, IL-23A) és kemokin (CC motívum) ligandum 5 (CCL5), kolónia stimuláló faktor 1 (makrofág) (CSF 1), és a vérlemezke-eredetű növekedési faktor béta polipeptid (PDGFB) a SNU638 sejtekben (6. ábra). Ez megerősítette, hogy az ilyen gének expresszálódásának szabályozza LPA-indukált NF-kB aktivitását. Túlzott expressziója miR-146a szignifikánsan csökkentette az IL-8, IL-23A, CCL5, CSF-1 és PDGFB a SNU638 sejtekben (6. ábra). Bár az IL-6 egy célgén az NF-kB, valamint serkentett által LPA miR-146a túlzott expressziója nem csökkentette az IL-6 expresszióját a mi körülmények között (6. ábra). Azonban LPA indukció IL-6 expressziója nem csak által közvetített NF-kB, hanem keresztül más utak (MAPK /ERK, PI3K /Akt és p38) [41], amely hozzájárulhat a különbségeket. A SNU638 sejtek bazális szint az IL-6 magasabb, mint az IL-8, ami befolyásolhatja az mRNS forgalmát. Ez lehet az egyik oka, hogy a miR-146a kevésbé van hatással a LPA-stimulált IL-6 expresszió, mint az IL-8 expresszióját, amely szintén látható más sejtes rendszerek [42]. 6. ábra miR-146a gátolja LPA által indukált citokin expressziót. 25 uM LPA használtunk indukálására citokin expresszió humán gyomorkarcinóma SNU638 sejtekben. LPA jelentősen fokozott expresszióját az IL-6, IL-8, IL-23A, CCL5, CSF-1 és PDGFB, amely alkalmazásával mértük qPCR és kimutatták viszonyított expressziós szintje a kezeletlen kontroll sejtek. Ez a válasz csökken miR-146a-transzfektált sejtekben. Az adatokat mutatjuk átlag ± S.D., n = 4, * = P < 0,05, ns = nem szignifikáns.
MiR-146a túlzott expressziója SNU638 sejtekben csökkenti a monociták katalógusa A carcinoma monociták által felvett például CCL5 és a CSF-1 által kifejezett tumorsejtek, és ez a tumor infiltrációját monociták hozzájárul a tumor elősegítő gyulladásos választ a rák [39, 40]. Miután kimutattuk, hogy a miR-146a csökkentett LPA-indukált expresszióját a citokinek, azt vizsgáltuk, hogyan miR-146a túlzott expressziója befolyásolja monociták. Azt találtuk, hogy az LPA-kezelés SNU638 sejtek fokozott monocita migráció felé kondicionált médium a SNU638 sejteket (7. ábra és további áll_1 ábra S7), míg transzfekciót miR-146a részben megszüntette ezt a választ (7. ábra), ismét azt mutatja, hogy a miR -146a gátolja a biológiai válaszokat a GPCR által közvetített NF-kB, mint például, monociták. 7. ábra miR-146a csökkenti monocita migráció. Monocita migráció elleni kondicionált médium szabályozási vagy miR-146a-transzfektált SNU638 sejteket, amelyek nem kezelik vagy stimulált 25 nM LPA követte több mint 8 óra. A sejtek vándorlását mutatjuk relatív vándorlása kezeletlen kontroll sejtek. Monocita migráció elleni közeg LPA-stimulált SNU638 sejtek képest nőtt migráció ellen közepes kezeletlen sejtekhez, míg a monocita migráció ellen közeg miR-146a-transzfektált, LPA-stimulált sejtekben csökkent képest közepes kontroll transzfektált, LPA-stimulált sejtekben. Az adatokat mutatjuk átlag ± S.D. Négy biológiai ismétlésben. ** = P < 0,01, NS = nem szignifikáns.
Discussion
mikrokörnyezeti tényezők fontosak az NF-kB aktiváció gyulladás által vezérelt rákok, például gyomorrák, és ez az NF-kB aktiválás nyújthatnak a rákos sejteket előnyei, amelyek hozzájárulnak a tumorgenic eljárások [32, 43]. Moduláció az NF-kB-aktiváló jelátviteli Ezért fontos, hogy a gyulladás kézbentartására által közvetített tumor fejlődését. Itt azt mutatják, hogy a miR-146a központi negatív szabályozója az NF-kB aktiválását, mivel gátolja számos NF-kB-aktiváló utak.
MiR-146a expressziót találtunk up-szabályozott alkalmazásban. 2/3, az emberi gyomor adenokarcinómája, valamint a gasztrin KO egér modellben a gyomorrák. Hasonlóképpen kifejezése miR-146a találtak emelkedett a nyaki, emlő-, hasnyálmirigy- és pajzsmirigyrák [11, 44-46]. Korábban kifejezése miR-146a találtuk mind felfelé és lefelé szabályozni gyomorrák [21-24]. Ezek az egymásnak ellentmondó eredmények különbségeket tükrözik a tumorokban és azok mikrokörnyezetében eredményező különböző mértékben az NF-kB tevékenység, ami vezérli a miR-146a expressziója [16]. Meglepő módon azt találtuk, alacsony miR-146a humán gyomorrák sejtvonalakon. Ez azt jelentheti, hogy a megnövekedett miR-146a szinten látható tumorokat coursed által mikrokörnyezet tényezők, például körülvevő sejtek tumorsejteket.
hatásainak vizsgálata fokozott miR-146a szintek gyomorrák ben két új miR-146a célokat, CARD10 és COPS8, és vizsgálták a szerepét ezeket a célokat. Azt találtuk, hogy a miR-146a gátolja GPCR által közvetített NF-kB aktiválását közvetlenül megcélzó és alulszabályozza kifejezése CARD10 és COPS8. CARD10 ismert, hogy szükséges a GPCR-indukált NF-kB [27, 29], míg COPS8 egyik alegysége COP9 szignaloszóma amely szabályozza az NF-kB aktiválását [28, 47]. Kimutattuk, hogy a CARD10 részt vesz a GPCR által közvetített NF-kB, és feltéve, új bizonyíték arra, hogy COPS8 részt ebben a folyamatban is. miR-146a túlzott kifejeződése is vezetett csökkent expressziója COPS2 másik alegysége a COP9 szignaloszóma. Azt feltételezzük, hogy ez egy közvetett hatás, mivel nincs miR-146a kötőhely COPS2 3'UTR és változások a kifejezés egy alegység kimutatták, hogy befolyásolja a többi [35, 36]. Ezért lehetséges, hogy a miR-146a bizonyos mértékig úgy is hathatnak, nem csak a célzási COPS8 de destabilizáló a COP9 szignaloszóma.
Aberráns jelátviteli keresztül GPCR-ek összefüggésbe hozták a tumor sejtek növekedését és túlélését, és az NF-kB-aktiváló GPCR-ek voltak kimutatták, hogy a széles körű rák (felül Dorsam & Gutkind [48]). GPCR-ek aktiválhatja az NF-kB keresztül
a CARD10 /BCL10 /MALT1 komplex után ligandok, mint például LPA, enothelin-1, angiotenzin II (Ang II) és kemokin (CXC motívum) ligandum 12 (CXCL12) (8. ábra) [ ,,,0],29, 49]. Tanulmányunkban használt LPA modellezni GPCR által közvetített NF-kB. LPA-indukált GPCR-jelző vezet a daganat progressziója [49]. Így a miR-146a-közvetített gátlását GPCR-jelátviteli lehetnek tumor elnyomja hatásokat. 8. ábra miR-146a célok több NF-kB aktivációs utak. Sematikus ábrázolása az NF-kB-aktiváló utak. miR-146a korábban kimutatták, hogy a cél IRAK1 és TRAF6 és ebben a tanulmányban azt mutatják, hogy a miR-146a célozza CARD10 és COPS8. miR-146a célokat jelöli piros körök.
mellett GPCR által közvetített NF-kB aktiváció, NF-kB keresztül lehet aktiválni katalógusa tumor-nekrózis-faktor receptor (TNFR), IL-1R, TLR, TCR és B-sejt-receptor (BCR) [50] (8. ábra). Korábban, a miR-146a kimutatták, hogy gátolja az NF-kB aktiválás
ilyen receptorok down-expressziójának szabályozására TRAF6 és IRAK1 [16, 18, 30, 31]. miR-146a célozza IRAK1 gyomor rákos sejtek, de nem TRAF6. Bár, mi itt azt mutatják, hogy a miR-146a célozza GPCR által közvetített NF-kB, amellett, hogy az aktiválási keresztül
TNFR, IL-1R, TLR, TCR és a BCR, célzásával CARD10 és COPS8 (8. ábra). Így a miR-146a céloz több összetevő az NF-kB-aktiváló útjainak gyomor rákos sejtekben. Ezt nem mutatták ki a NF-kB utat előtt, de korábban látható a transzformáló növekedési faktor-β (TGF-β) útvonala, ahol mind a miR-21 és a MIR-17-92 klaszter cél több mRNS-ek kódoló fehérjék a TGF-β útvonal [51, 52]. Megcélozva több összetevő különböző NF-kB-aktiváló utak miR-146a közvetíti az erőteljes és összetett ellenőrzési az NF-kB aktivitását. Több más miRNS is szabályozni az NF-kB-jelátvitel, de csak a miR-146a célokat több gén különböző NF-kB-aktiváló utakat, ami arra utal, miR-146a kulcsfontosságú modulátor az NF-kB aktiválás.
NF-kB szabályozza kifejezése citokinek és növekedési faktorok részt vesz számos szempontból a tumor progresszióját [43]. Tekintettel arra, hogy a miR-146a csökkenti az NF-kB aktivitást, lehetséges, hogy a miR-146a jár tumort visszaszorító csökkentésével expressziójának ilyen citokinek és növekedési faktorok. Sőt, azt találtuk, hogy a miR-146a túlzott expressziója csökkent expressziója számos citokin és növekedési faktorok egy ismert szerepe a rák fejlődését; Az IL-8, IL-23A, CCL5, CSF-1 és PDGFB. Ezek a gének növelheti sejtburjánzást, sejt adhézió és az angiogenezis [53-55], hozzájárul a daganat lymphangiogenezist [56], aktiválja a fibroblasztokat [57], monocitákat, hogy tumorok [39, 40], és indukálják a tumor-asszociált makrofágok (TAM) a szekretálnak tumor elősegítő mediátorok [58] (9. ábra). 9. ábrát biológiai folyamatokat gyomorrák sejtek gátolják a miR-146a. Bal oldali panel, miR-146a közvetlenül célozza IRAK1, CARD10 és COPS8 a SNU638 sejtekben. Ez gátlásához vezet az NF-kB aktiválását és következésképpen elfojtott expresszióját az NF-kB-szabályozott citokineket és növekedési faktorokat. Expression miR-146a is szabályozza NF-kB [16]. Jobb panel, miR-146a csökkenti expresszióját CCL5, CSF-1, IL-8, a PDGF és az IL-23A, amelyek részt vesznek a monocita migráció és differenciálódást, proliferációt, angiogenezis, lymphangiogenezis és fibroblaszt és a makrofág növekedési faktor felszabadulását. Így a miR-146a működhetne tumorszuppresszor csökkentésével rák elősegítő hatását az NF-kB aktivitását.
Kemotaktikus citokinek által felszabadított tumorsejtek monocitákat tumor oldalak [39, 59]. Ezek monociták elősegítik a tumor progresszióját [60]. CCL5 és CSF-1 példái monocita toborzás citokinek által felszabadított tumorsejtek [39, 40]. Ahogy az várható volt, a monociták vándoroltak kevesebb ellen kondicionált tápközeggel LPA-stimulált SNU638 sejtek túl-expresszáló miR-146a képest LPA-stimulált kontroll sejtek. Minden szerző elolvasta és jóváhagyta a végleges kéziratot. Katalógusa

• Egyidejű túltermelése szérum p53 mutáció kapcsolatos Helicobacter pylori-infection
• Intraneural metasztázis gyomorrák vezet ülőideg palsy