mikrornk-146a inhibira G protein-vezani receptori aktivaciju NF-kB ciljajući CARD10 i COPS8 kod raka želuca

mikrornk-146a inhibira G aktivaciju NF-kB proteinski vezanog receptora posredovane ciljajući CARD10 i COPS8 kod raka želuca pregled apstraktne pregled pozadine pregled Rak želuca je drugi najčešći uzrok raka povezanih smrti u svijet. Upalne signale koji potječu iz želuca stanice raka važni su za zapošljavanje upalne stanice i regulaciju metastaza raka želuca. Nekoliko mikroRNA (Mirna) su pokazala da se uključe u razvoj i progresiju raka želuca. Mirna-146a (Mir-146a) modulator upalne signale, ali malo je poznato o njegovu važnost u raka želuca. Stoga smo željeli utvrditi ciljeve Mir-146A kod raka želuca i ispitati svoje biološke uloge. pregled Rezultati
izražavanja Mir-146A je procijenjena kvantitativnog PCR (qPCR) i našao se regulirano na gastrin knockout miševa , mišji model karcinoma želuca, i u 73% ispitivanih ljudske želučane adenokarcinom. Izražavanje Mir-146A od želučanih stanica raka potvrđena je in situ pregled hibridizacije. Globalna analiza promjena razine mRNA nakon Mir-146A transfekcije identificirali dvije transkripata, kaspaza zapošljavanje protein domene koje sadrže 10 (CARD10) i COP9 signalosome kompleks podjedinica 8 (COPS8), kao nove Mir-146A ciljeva. qPCR, Western hibridizacija i luciferaze testovi potvrdili su ove transkripte kao izravna Mir-146A ciljeva. CARD10 i COPS8 Pokazano je da su dio G proteinski vezani receptor (GPCR) puta nuklearne aktivacije faktora kappaB (NF-kB). Lizofosfatidna kiselina (LPA) inducira NF-kB aktivaciju preko pregled ovog puta, a prekomjerna ekspresija Mir-146A inhibirala LPA inducirana aktivacija NF-kB, smanjene LPA-induciranu ekspresiju tumorskih poticanje citokina i faktora rasta i inhibirani monocita privlačnost .
Zaključci pregled mir-146a izraz up-regulirana u većini želučanog karcinoma gdje se cilja CARD10 i COPS8, zabranjivanje GPCR posredovane aktivaciju NF-kB, čime se smanjuje ekspresiju NF-kB regulirano tumor- promoviranje citokine i čimbenike rasta. Do komponente nekoliko NF-kB-aktivirajući puteva ciljanje, Mir-146a je ključna komponenta u regulaciji aktivnosti NF-kappaB. Pregled Ključne riječi pregled, karcinom želuca NEKODIRAJUĆA RNK Citokini Pozadina
rak Globalno želuca je drugi najčešći uzrok raka povezanih smrt [1]. Razvoj karcinoma želuca je pod utjecajem interakcija između domaćina, okoliš i bakterijskih čimbenika. Primjeri sinergijskih faktora rizika za rak želuca polimorfizama u genima uključenim u domaćinu upalnom odgovoru [2], Helicobacter pylori pregled (H. pylori pregled) čimbenika virulencije [3] i prehrana bogata solju i nitrata [4] , Unatoč nedavnom napretku u otkrivanju i liječenju ranog karcinoma želuca, dugotrajno stopa preživljavanja za uznapredovali karcinom želuca je niska [5]. Glavni izazovi u liječenju uznapredovalog raka želuca limfe, peritonealne ili udaljene organe metastaze, koji istovremeno predviđaju slab ishod ovih pacijenata [6].
Iako mnogi onkogeni i tumor prigušivači su izvijestili da se uključe u razvoj želučanih karcinoma , molekularni mehanizmi koji su podloga metastaziranja naprednih želučanog karcinoma i dalje slabo razumije [7]. Jedan od ključnih događaja u želučanom karcinogeneze je upala. Upala dovodi do aktivacije faktora transkripcije nuklearni faktor-kB (NF-kB), koji je povezan s želučane karcinogeneze [8, 9].
MikroRNA (Mirna) su uključene u razvoj i progresiju raka želuca [10- 13]. Mirna je klasa endogenog, ne-kodiranje, jednolančane RNA molekula aplikacije. 22 nukleotida koji posreduju post-regulaciji transkripcije gena putem sparivanja baza s 3 'netranslatirane regiji (UTR) ciljne glasničke RNA (mRNA) [14]. miRNAs su uključeni u regulaciju većine staničnih procesa, uključujući staničnu proliferaciju, migraciju, diferenciranje i apoptozu [10, 14, 15]. miRNAs neprirodno su izraženi u većini humanih karcinoma i, poput gena za kodiranje proteina, miRNAs mogu funkcionirati bilo kao tumora smetnji ili onkogena, čime se regulira karcinogeneze [10, 12]. Mirni-146a (Mir-146a) se regulira NF-kB i inhibira receptor interleukina-1 (IL-1R) i Toll-like receptora (TLR) - inducirane aktivaciju NF-kB i ciljanjem na interleukin-1 kinaze receptora povezana 1 (IRAK1) i TNF receptor faktora povezana 6 (TRAF6) [16-18]. Mir-146a je prijavljen neuobičajeno izražene kod raznih upalnih bolesti i raka, ali uloga Mir-146A kod raka želuca je još uvijek kontroverzan, kao ekspresija Mir-146A je pronađen na gore i na dolje regulirano ovdje [19-24 ]. Stoga smo istraživali ekspresiju Mir-146A kod raka želuca, a karakterizira svoje ciljeve i molekularne funkcije pojasniti kontradiktorne rezultate. Pregled, otkrili smo da Mir-146a je viša u mišjem modelu karcinoma želuca, kao i kod ljudska želučani adenokarcinoma i identificirati CARD10 i COPS8 kao i nove mete Mir-146A. Oba su dio G proteinski vezani receptor (GPCR) posredovanog prijenosa signala koja posreduje aktivaciju NF-kB. To upućuje na zaključak da je Mir-146a djeluje tumora suzbijanju inhibirajući GPCR posredovane aktivaciju NF-kB i dobivenu ekspresiju tumorskih poticanje citokina i faktora rasta. Pregled Rezultati
Mir-146A izražavanja je viša u miša model karcinoma želuca i ljudskog želuca adenokarcinoma
gastrina nokautom (KO) miševi su achlorhydric i razvoj crijevne metaplazije i želučanog adenoma tijekom vremena [25]. Korištenje kvantitativni PCR (qPCR) našli smo ekspresiju Mir-146A aplikacije. 2-struko viša u stari gastrina KO miševa s bilo fundusa intestinalne metaplazije ili antralnog adenoma u odnosu na ekspresiju u divljeg tipa (WT) miševa (P 0,05) (Slika 1A). Korištenje in situ hibridizacije pregled, Mir-146A je otkriven u metaplastičnim želučanog tkiva iz gastrina KO miševa, ali ne u normalnom želučanog tkiva iz WT miševa (Slika 2ab) (Dodatni file1: Slika S1). Nakon što je utvrđeno da je Mir-146a se povećava u našem mišjem modelu karcinoma želuca ispitali smo ekspresiju Mir-146A u uparenih ljudskih želučanih adenokarcinoma i susjednih kontrolnih biopsija i utvrdili da je viša u 27 od 37 slučajeva (73%) ( slika 1B). In situ hibridizacija pregled pokazali da miR-146a je izražena pomoću humanih stanica adenokarcinoma želuca, dok miR-146a-pozitivne stanice nisu nađene su u normalnom želučane sluznice (Slika 2CD) (Dodatni file1: Slika S1). Slika 1 Povećana ekspresija Mir-146A u gastrina KO mišjem modelu karcinoma želuca i ljudskog raka želuca. (A) Relativna izraz Mir-146A u metaplastičnim fundusa tkiva (n = 8) i hiperpla sekundarnom sluznica (n = 4) /antralne adenoma (n = 4) iz gastrina nokautom (KO) miševa u usporedbi s prosječnom izražavanja u podudaranju divljeg tipa (WT) miš tkiva. * = P < 0.05. (B) Vodopad zemljište ekspresije Mir-146A u 37 ljudskih želučanog adenokarcinoma u odnosu na ekspresiju u susjednom normalnom tkivu. Mir-146a se regulira prema gore u 27 od ukupno 37 tumora (73%). Razina ekspresije Mir-146A su određene qPCR te normalizirana na one endogenog kontrolne RNU44.
Slici 2 in situ detekciju hibridizacije miR-146A ekspresiju u gastrin KO miševima želuca modelu raka i ljudskog raka želuca. (A) Ekspresija Mir-146A nije detektiran u WT fundusa mišjim tkivima, (B), dok miR-146a-pozitivne stanice (plava jezgre) detektirane su u metaplastičnim fundusa tkiva gastrina KO miševa. (C) br signal je otkriven sa kodiranim LNA sonde. (D) miR-146a ekspresija bila odsutna u normalnom tkivu humanog želučanog, (E) već prisutan u stanicama humanih želuca stanica adenokarcinoma (plava nuclei). (F) Negativna kontrola pomoću kodiranih LNA sondu. Reprezentativne Mir-146A-pozitivne stanice su označene sa strelicama. Izvorni uvećanje x20, Mjerilo = 100 m.
Nema korelacije između Mir-146A izražavanja u želučanim adenokarcinoma i pacijenti 'dob, spol i lokalizacija ili klasifikacija tumora (podaci nisu prikazani). Iako pacijenti s visokim Mir-146A izrazom kao da imaju bolje ukupno preživljenje to nije bio značajan. (Dodatni file1: Slika S2)
Mir-146A targeta članove GPCR-posredovane NF-kB aktivaciju puta pregled Nakon što je pokazao povećana ekspresija Mir-146A u većini želučanog karcinoma, željeli smo utvrditi biološke akcije Mir-146A karakterizaciju izravne ciljnih molekula u ljudskom raka želuca. Željeli smo to učiniti pretjerano izražavanje Mir-146A u želučanom stanica raka, a zatim identifikacije mRNA sa smanjenom ekspresijom [26]. Dakle, ispitali smo izraz Mir-146A u panelu stanične linije i našli raznolik, ali iznenađujuće nisku ekspresiju Mir-146A u dostupnim staničnim linijama želuca (Dodatni file1: Slika S3), s obzirom na detektirati povećanom ekspresijom u tumorima <. br> je pronađen ljudski stanična linija karcinoma želuca SNU638, koja ima zanemarive razine endogenog Mir-146A je pogodna za Mir-146A više ekspresija studija. Od Mir-146a izraz lica bio je vrlo nizak u ispitanim želučane staničnim linijama studije inhibicije Mir-146A nisu provedena. Pregled Prvo smo testirali ako prekomjerna ekspresija Mir-146A je utjecalo na rast SNU638 stanica i našli rast stanica nepromijenjen ( Dodatna file1: Slika S4). Nakon toga, su ispitivani globalne promjene u ekspresiji gena u stanicama SNU638 Slijedeći ekspresijom Mir-146A. Nakon Mir-146A transfekcije mRNA s predviđenim 3'UTR Mir-146A ciljnim mjestima bili su značajno pale regulirano u odnosu na mRNA bez predviđenih cilja web stranice (P < 4.6e-11, dvosmjerni Wilcoxon čin-zbroj test) (slika 3A) , Analizirali smo sve riječi duljine 5-7 za više od zastupljenosti u dolje-regulira mRNA nakon Mir-146A transfekcije i našao riječ najjača u korelaciji s down-regulacije je bio zametak stranice komplementarnu zrele Mir-146A baze 2-7 /8 ( slika 3B). Transkripti s predviđenim 3'UTR Mir-146A ciljnim mjestima koja su značajno pale-regulirani nakon Mir-146A transfekcije su kao potencijalne izravne Mir-146A ciljeva. 847 podudaraju s ovim kriterijima (Dodatni file1: Tablica S5). Top 10 najviše dolje regulirane potencijalne mete Mir-146A prikazani su na slici 3C. Kao negativna kontrola za provjeru valjanosti ponovili smo postupak za tretiranje SNU638 stanice s inhibitorom miR-146A LNA. Nije bilo značajne up-regulacija gena mjestu sjemena komplementarne zrele Mir-146A baze (podaci nisu prikazani). Slika 3 Identifikacija Mir-146A ciljeva. (A) Predviđeni Mir-146A ciljne transkripti su značajno pale regulirana nakon Mir-146A transfekciju u usporedbi s izraženim genima koji nisu predviđeni ciljeva Mir-146A (P < 4.6e-11, dvosmjerni Wilcoxon čin-sum test) , (B) Top 10 riječi najviše korelira s down-regulacije (korelacije Z-rezultati su označene s lijeve strane svake riječi, svih 10 riječi imaju procijenjenu FDR < 1e-6). Velika slova ukazuju na sjeme regiju Mirne, Watson-Crick parova baza (plavo), neusklađenosti (crveni). Riječ najjači u korelaciji s down-regulacije je sjeme stranica komplementarne zrele Mirna baze 2-7 /8. prikazati (c) zapisnike, ima 6mer ili 7mer Mir-146A sjeme mjesta u 3'UTR, koji su u većini dolje regulirani nakon Mir-146A ubacivanja. To su potencijalni izravni Mir-146A ciljevi. Izraz je dano u promjeni log2 puta. 3'UTR 6 m /7 m stupci označavaju brojeve 6 ili 7mer Mir-146A sjemena mjesta u 3'UTR.
Tri najviše dolje regulirano gene Po Mir-146A prekomjerna ekspresija IRAK1, kaspaze zapošljavanje protein domene koje sadrže 10 (CARD10) i COP9 konstitutivna photomorphogenic homologni podjedinica 8 (COPS8) (Slika 3C) svi pripadaju signalnih putova koji vode do NF-kB aktivacije [27-29]. IRAK1 je poznati meta miR-146a koji su uključeni u TLR- i IL-1R posredovanu aktivaciju NF-kB [16-18]. CARD10 je uključen u GPCR-posredovane aktivacije NF-kB [27], a COPS8 se smatra da je uključen u ovom putu na temelju svojeg uključenja u T stanični receptor (TCR) posredovano NF-kB aktivacije [28]. Iznenađujuće, ali slično nalazima Boldin et al.
[30], izraz TRAF6, koji je prethodno opisan kao metu za Mir-146A [16, 18, 31], a ne smanjena na razini transkripcije nakon mir-146a povećanom ekspresijom u našem modelu sustava. Netlogu kod raka želuca, NF-kB modulira preživljenje stanice, imunitet i upale, i NF-kB aktivacije je povezana s lošim ishodom u rakom želuca [32, 33]. Stoga smo se usredotočili na karakterizaciju CARD10 i COPS8 kao izravna Mir-146A ciljeva i njihove uloge u NF-kB aktivacije u raka želuca. Potvrdili smo Mir-146a-posredovane down-regulacije CARD10, COPS8 i IRAK1 na razini prijepisa (slika 4a), a također je utvrdio da Mir-146a smanjene razine CARD10, COPS8 i IRAK1 proteina (slika 4b). Konačno, izravno ciljanje Mir-146a u 3'UTR ciljnih gena pokazano je pomoću analize luciferaze (slika 4c). U sažetku, utvrdili smo ranija opažanja pokazuju da Mir-146a izravno cilja IRAK1 i mi nadalje prepoznaje dvije nove ciljeve, CARD10 i COPS8, koji kodira za proteine ​​predložene biti uključeni u NF-kB aktivacije. COPS8 je komponenta COP9 signalosome koji se sastoji od osam podjedinica (GPS1 i COPS2-8) [34]. COPS8 je jedini podjedinica ciljani direktno Mir-146, ali budući da promjene u iznosu od pojedinih podjedinica je pokazala da utječu na količinu drugih podjedinica [35, 36], ispitali smo kako transfekciju Mir-146A utjecati na ekspresiju sve COP9 signalosome komponente. U nestimulirane stanice izraz COPS2 je smanjena (20%) (Dodatni file1: Slika S5). Stoga pretpostavljamo da su učinci Mir-146A na COP9 kompleksa uglavnom su rezultat smanjenja COPS8 izražavanja, iako posredni destabilizaciju kompleksa ne može biti isključeno. Slika 4 CARD10 i COPS8 su izravni Mir-146A ciljevi. (A) mRNA dva nova miR-146A ciljevima CARD10 i COPS8 i IRAK1, poznat miR_146a cilj, bio je određen u qPCR kontrolom- i miR-146A-transfektirane SNU638 stanica. Ekspresija svakog transkripta prikazan u odnosu na ekspresiju u kontroli stanica transfektirane. CARD10, COPS8 i IRAK1 ekspresija dolje regulira sljedeće Mir-146A nad-izražavanja. Podaci su prikazani kao srednja vrijednost ± S.D. od četiri bioloških ponavljanja. * = P < 0,05, ** = p < 0,01, *** = p < 0.001. (B) miR-146a transfekcija je također smanjio razine proteina u CARD10, COPS8 i IRAK1 u miR-146a-transficiranim SNU638 stanica. Izraz svakog proteina je prikazan u odnosu na ekspresiju u kontroli stanica transfektirane. Bendovi su kvantificirani u odnosu na p-aktin. Podaci su prikazani kao srednja vrijednost ± S.D. od četiri bioloških ponavljanja. * = P < 0,05, ** = p < 0,01, *** = p < 0.001. (C) Provjera izravne i funkcionalne cilj vezanja korištenjem luciferaze konstrukata koji drže WT 3'UTR i mutirani (MUT) 3'UTR (središnja 4 nukleotida su zamijenjeni Mir-146A mjesto vezanja) za CARD10, COPS8 i IRAK1. Konstrukti sadrže bilo WT ili mutiranih (mut) 3'UTR nizvodno na gen luciferaze krijesnice su ko-transfektirane u stanice HEK293 zajedno s kontrolnom Renilla luciferaze i plazmid ili Mir-146a ili kontrolom (Siglo). Lijevo, aktivnost luciferaze je dano u odnosu na aktivnost u kontrolnim stanicama transficiranih. Mir-146a smanjena aktivnost luciferaze konstrukata s WT CARD10, COPS8 i IRAK1 3'UTR. U redu, slijed poravnanja Mir-146A i potencijalne WT i Mut 3'UTR ciljnim mjestima prikazati, mutirane baze prikazani su u crvenom. Podaci su prikazani kao srednja vrijednost ± S.D. Često biološki ponavljanja. *** = P < 0.001. Slijed poravnanja su prilagođeni od DIANALab (2009).
Mir-146A inhibira GPCR-posredovanu aktivnost NF-kB ciljajući CARD10 i COPS8 pregled CARD10 i COPS8 su uključeni u GPCR posredovanu aktivaciju NF-kB [28, 29 ]. Stoga smo željeli utvrditi njihove uloge u prijenosu signala u rak želuca, a naknadno istražiti važnost Mir-146A za inhibiciju ovog signalizaciju. U tu svrhu smo koristili lysophosphatiditc kiselina (LPA) koji je poznat aktivator za GPCR-posredovane sa NF-kB aktivaciju puta [29], te promiče želučane migraciju stanica raka i invaziju [37]. LPA-stiumlation znatno povećana aktivnost NF-kB u našem reporterskog sustava (Slika 5). siRNA obaranje CARD10 i COPS8 ekspresija značajno inhibira LPA-stimuliranu GPCR posredovano aktivaciju NF-kB u stanicama SNU638 (Slika 5). Ova inhibicija je usporediva s inhibicijom miR-146A-inducirana. Nasuprot tome, inhibirajući endogenog Mir-146a je bez učinka na NF-kB aktivacije. Kao što je predvidio, siRNA posredovane represija IRAK1 izražavanja nije utjecala LPA-stimulira aktivaciju NF-kB (slika 5), ​​kao IRAK1 nije uključen GPCR posredovanog put. Kao TRAF6 je miR-146a meta imaju ulogu u NF-kB aktivacije, proučavan je učinak siRNA posredovanu represiju TRAF6 izrazu LPA-stimulirana aktivnošću NF-kB. Međutim, obaranje TRAF6 ne inhibira LPA-stimulira aktivnost NF-kB (slika 5). Ovi rezultati pokazuju da su dvije nedavno identificirani miR-146A ciljevi, CARD10 i COPS8, koji su uključeni u GPCR-posredovane aktivacije NF-kB. Dakle, učinak Mir-146A više-izražavanja na LPA-stimulirana aktivnost NF-kB je proučavao. Mir-146a značajno inhibira LPA-stimuliranu aktivnost NF-kB u stanicama SNU638 (Slika 5). Mješavina iRNK protiv CARD10, COPS8, IRAK1 i TRAF6 oponašao Mir-146a-posredovana inhibicija aktivnosti NF-kB (slika 5.). Obaranje druga dva COP9 komponentama (COPS2 i COPS5) također inhibira LPA-stimuliranu aktivnost NF-kB, što pokazuje važnost prisutnosti svih COP9 signalosome podjedinica za LPA-stimuliranog aktivaciju NF-kB. qPCR ekspresije različitih komponenti ispitivanih potvrdilo obaranje (Slika 5). Slika 5 Mir-146A ciljevi COPS8 i CARD10 GPCR-posredovane aktivacije NF-kB. SNU638 stanice su ko-transficirane s NF-kB reporterskog plazmida i Renilla kontrolnog plazmida luciferaze uz kontrolu (Siglo) siRNA ili Mir-146A. Stanice su stimulirane s izmjerena je 25 uM LPA i aktivnost luciferaze. Aktivnost luciferaze je dano u odnosu na aktivnost u kontrolnim transfeciranim LPA-stimuliranim stanicama. siRNA protiv CARD10 i COPS8, Mir-146A, inhibitora Mir-146A i siRNA mix smanjene aktivnosti luciferaze. siRNA protiv IRAK1 i TRAF6 nije smanjila aktivnosti luciferaze. LPA-stimulirana aktivacija NF-kB također je inhibirana siRNA protiv COPS2 i COPS5, pokazujući da drugi perturbacija od COP9 signalosome kompleksa smanjuje GPCR-posredovane aktivacije NF-kB. siMix, mix od iRNK protiv CARD10, COPS8, IRAK1 i TRAF6. Podaci su prikazani kao srednja vrijednost ± S.D. sedam bioloških ponavljanja * = P '. 0.05. Relativna izraz TRAF6, COPS8, IRAK1, CARD10, COPS2 i COPS5 je mjerena pomoću qPCR. Sivo-zasjenjenje označava značajnu promjenu u izrazu, p < 0,05, n = 4. pregled ekspresiju Mir-146A je dijelom pod kontrolom NF-kB. Stoga smo testirali i kako se izraz Mir-146A je utjecalo LPA i stimulacije IL-1. Otkrili smo da LPA tretman udvostručio ekspresiju Mir-146A i stimulacije IL-1 je dao 4-struko povećanje Mir-146A izražavanja, koji se može usporediti s ranijim opažanjima [16, 38] (Dodatni file1: Slika S6). Iako je Mir-146a LNA povećao ekspresiju tri Mir-146A ciljeva (TRAF6, IRAK1 i CARD10) (Slika 5) ukupna aktivacija NF-kB nije promijenila u LPA-stimuliranih Mir-146A LNA liječi SNU638 stanice.
mir-146a smanjuje LPA-inducirana ekspresija citokina i faktora rasta
U većini karcinoma microenvironmental čimbenici, a ne genetske promjene su vjerojatno odgovorna za aktivaciju NF-kB signala koji regulira nekoliko procesa, uključujući lučenja faktora rasta i citokina [39, 40]. Stoga smo istraživali kako miR-146a modulira ekspresija odabranih NF-kB regulirani faktora rasta i citokina induciranih extracelluar signale poput LPA. LPA stimulacija značajno povećava ekspresiju interleukina-6, -8, 23A (IL-6, IL-8, IL-23A) i kemokina (CC motiv) ligand 5 (CCL5), faktor koji stimulira koloniju 1 (makrofaga) (CSF- 1) i čimbenika rasta beta polipeptid (PDGFB) u SNU638 stanica (Slika iz trombocita-6). To je potvrdio da je ekspresija tih gena je regulirano LPA-inducirana aktivnost NF-kB. Prekomjerna ekspresija Mir-146A značajno smanjena ekspresija IL-8, IL-23A, CCL5, CSF-1 i PDGFB u SNU638 stanicama (Slika 6). Iako IL-6 je ciljni gen NF-kB, a također regulirano LPA Mir-146A prekomjerna ekspresija nije smanjio ekspresiju IL-6 pod našim uvjetima (slika 6). Međutim, LPA indukcija IL-6 ekspresije nije samo posredovana NF-kB, već i preko drugih puteva (MAPK /ERK, PI3K /Akt i p38), [41], koji mogu doprinijeti razlikama. U SNU638 stanicama bazalna razina IL-6 je veća od IL-8, što može utjecati na mRNA promet. To bi mogao biti jedan od razloga da je Mir-146a ima manji učinak na LPA-stimulirane IL-6 izražavanja nego na IL-8 ekspresije, koji je također vidio u drugim staničnim sustavima [42]. Slika 6 Mir-146a inhibira LPA-induciranu ekspresiju citokina. 25 uM LPA se koristiti za izazivanje ekspresije citokina iz ljudskog želučanog SNU638 karcinom stanica. LPA znatno poboljšana ekspresija IL-6, IL-8, IL-23A, CCL5, CSF-1 i PDGFB, koja se mjerila koristeći qPCR i prikazana u odnosu na razinu ekspresije u netretiranih kontrolnih stanica. Ovaj odgovor je smanjen u Mir-146A-transfektiranim stanicama. Podaci su prikazani kao srednja vrijednost ± S.D., n = 4, * = P < 0,05, ns = nije značajno.
Mir-146A prekomjerna ekspresija u stanicama SNU638 smanjuje regrutiranja monocita pregled u karcinomima monociti može se regrutiraju npr CCL5 i CSF-1 izražen na tumorske stanice i ovaj tumor infiltraciju monocita doprinosi tumorski aktivirajuće upalnog odgovora u raka [39, 40]. Što su pokazali da miR-146a smanjene LPA-induciranu ekspresiju citokina, ispitali smo kako miR-146a prekomjerna ekspresija utječe na regrutiranja monocita. Otkrili smo da LPA-obrada SNU638 stanica povećan monocita migraciju prema uvjetovanoj medij iz SNU638 stanica (slika 7 i dodatni file1: Slika S7), dok transfekciju Mir-146A djelomično ukinuo taj odgovor (slika 7), opet pokazujući da MIR -146a inhibira biološke odgovore GPCR-posredovane aktivacije NF-kB, kao što su, novačenje monocita. Slika 7 Mir-146a smanjuje monocita migracija. Monocita migracija protiv prilagođenog medija iz kontrolnog udjela ili Mir-146A-transfektirane SNU638 stanica koje su se ne liječi ili stimulirane s 25 uM LPA je uslijedila tijekom 8 sati. Migracija stanica je prikazana u odnosu na migraciju netretiranih kontrolnih stanica. povećan monocita migracija protiv medija iz LPA-stimuliranih SNU638 stanica u odnosu na migracije protiv medija iz netretiranih stanica, a monocita migracija protiv medija od Mir-146A-transfektirane, LPA-stimulirane stanice je smanjen u odnosu na medij iz upravljačke transfektirane, LPA-stimulirana Stanice. Podaci su prikazani kao srednja vrijednost ± S.D. od četiri bioloških ponavljanja. ** = P < 0,01, ns = nije značajno. Pregled Rasprava pregled Microenvironmental čimbenika važni su za NF-kB aktivacije u upalama-driven raka, kao što su rak želuca i ovim NF-kB aktivacije može osigurati stanice raka s prednostima koje doprinijeti tumorske procesi [32, 43]. Modulacija sa NF-kB aktiviraju signaliziranje Stoga je važno za kontrolu razvoj tumora upalu posredovanu. Ovdje ćemo pokazati da Mir-146a je središnji negativni regulator NF-kB aktivacije kao što inhibira nekoliko NF-kB aktiviranje puteve.
Izraz Mir-146A pronađen je viša u aplikaciji. 2/3 ljudskog želučanog adenokarcinoma kao u gastrina KO mišjem modelu raka želuca. Slično tome, izraz Mir-146a je nađeno povećan u cerviksa, dojke, gušterače i karcinoma štitnjače [11, 44-46]. Prije toga, izraz Mir-146A je pronađen na gore i na dolje regulirana rakom želuca [21-24]. Ovi su proturječne rezultate odražavaju razlike u tumorima i njihove okoline što rezultira različitim stupnjevima NF-kB aktivnosti, koji kontrolira Mir-146A izraza [16]. Iznenađujuće, otkrili smo nisku razinu Mir-146a u ljudskim staničnim linijama raka želuca. To bi moglo značiti da su povećane razine Mir-146A vidjeti u tumorima coursed by microenvironmental faktora, npr stanice koje okružuju stanice tumora.
Ispitati učinak povećane razine Mir-146A u rak želuca smo identificirali dva nova Mir-146A ciljeve, CARD10 i COPS8 i istražuju uloge tih ciljeva. Otkrili smo da je Mir-146a inhibirana GPCR-posredovane aktivacije NF-kB izravno ciljanje i smanjuju regulaciju ekspresije CARD10 i COPS8. CARD10 je poznato da su potrebni za GPCR-inducirana aktivacija NF-kB [27, 29], a COPS8 je podjedinica COP9 signalosome koji kontrolira NF-kB aktivacije [28, 47]. Pokazali smo da CARD10 je uključen u GPCR-posredovane aktivacije NF-kB, a pod uvjetom nove dokaze koji COPS8 je uključen u ovaj put kao dobro. Mir-146a prekomjerna ekspresija također je dovelo do smanjene ekspresije COPS2, još podjedinice COP9 signalosome. Pretpostavljamo da je to indirektan učinak, budući da ne postoji Mir-146a vezno mjesto u COPS2 3'UTR te je pokazala promjene u ekspresiji jedne podjedinice utječe na onom drugom [35, 36]. Zbog toga je moguće da se miR-146a donekle može djelovati ne samo ciljanje COPS8 nego destabilizaciju COP9 signalosome.
Aberantnom signala kroz GPCR je povezana s rastom stanica tumora i preživljavanja i NF-kB aktiviraju GPCR su pokazalo se da doprinosi širok raspon karcinoma (pregledao Dorsam & Gutkind [48]). GPCR mogu aktivirati NF-kB preko pregled u CARD10 /BCL10 /MALT1 kompleks poslije vezanja liganda, kao što su, LPA enothelin-1, angiotenzin II (Ang II) i kemokina (CXC motiv) ligand 12 (CXCL12) (Slika 8) [ ,,,0],29, 49]. U našem istraživanju smo koristili LPA za model GPCR-posredovanu aktivaciju NF-kB. LPA-inducirana GPCR signalizaciju dovodi do napredovanja tumora [49]. Tako, miR-146a-posreduju da inhibicija GPCR-signalizacije može imati tumorske supresije učinaka. Slika 8 Mir-146A ciljevi višestruki NF-kB staze aktivacije. Shematski prikaz sa NF-kB aktiviraju puteve. Mir-146a Ranije je pokazano da ciljaju IRAK1 i TRAF6 iu ovom istraživanju pokazali smo da Mir-146a cilja CARD10 i COPS8. Mir-146A ciljevi označeni su crvenim krugovima.
Osim GPCR-posredovane aktivacije NF-kB, NF-kB može aktivirati putem
receptora nekroze tumora-faktora (TNFR), IL-1R, TLR, TCR i B stanični receptor (BCR) [50] (Slika 8). Ranije miR-146a je pokazano da inhibira NF-kB aktivaciju preko
ovih receptora podreguliranjem ekspresije TRAF6 i IRAK1 [16, 18, 30, 31]. Mir-146a cilja IRAK1 u želučanim stanicama raka, ali ne TRAF6. Iako se ovdje pokazuju da miR-146a usmjeren GPCR posredovanu aktivaciju NF-kB, uz aktivaciju preko
TNFR, IL-1R, TLR, TCR i BCR, ciljajući CARD10 i COPS8 (Slika 8). Tako, miR-146a cilja više komponenti sa NF-kB aktivacije signalne puteve kod želučanih stanica raka. To nije dokazano za NF-kB puta prije, ali je prethodno viđen u faktora transformacije rasta-p (TGF-beta) puta, gdje su i Mir-21 i klaster ciljne Mir-17-92 nekoliko mRNA koja kodira za proteini TGF-P puta [51, 52]. Do cilja više komponenti različitih NF-kB aktiviranju putevi Mir-146a posreduje robustan i kompleksnu kontrolu aktivnosti NF-kB. Nekoliko drugih miRNAs također može regulirati NF-kB signala, ali samo Mir-146A ciljevi nekoliko gena u različitim NF-kB aktiviraju puteve, što ukazuje Mir-146A kao ključnog modulator NF-kB aktivacije.
NF-kB regulira ekspresiji citokina i faktora rasta koji su uključeni u nekoliko aspekata progresiju tumora [43]. Obzirom da miR-146a smanjuje aktivnost NF-kB, moguće je da miR-146a djeluje tumora suzbijanju smanjenjem ekspresije tih citokina i faktora rasta. Doista, otkrili smo da Mir-146a prekomjerna ekspresija smanjuje ekspresiju nekoliko citokina i faktora rasta s poznatom ulogom u razvoju raka; IL-8, IL-23A, CCL5, CSF-1 i PDGFB. Ovi geni mogu povećati proliferaciju stanica, adheziju stanica i angiogeneze [53-55], pridonose tumora limfangiogeneze [56], aktivirati fibroblaste [57], regrutirati monocite na tumore [39, 40] i izazvati tumor povezan makrofagi (TAMs) do izlučuju tumorski aktivirajuće medijatori [58] (slika 9). Slika 9 bioloških procesa u želučanih stanica raka inhibira Mir-146A. Lijeva ploča, Mir-146a izravno cilja IRAK1, CARD10 i COPS8 u SNU638 stanica. To dovodi do inhibicije NF-kB aktivacije i time potisnuti ekspresiju NF-kB regulirani citokina i faktora rasta. Izražavanje Mir-146A je također regulirano NF-kB [16]. Desna ploča, miR-146a smanjuje ekspresiju CCL5, CSF-1, IL-8, IL-PDGF i 23A, koje su uključene u monocita migraciju i diferencijaciju, proliferaciju, angiogeneze, limfangiogeneze i fibroblasta i rasta makrofaga faktora otpuštanja. Tako, miR-146a mogu djelovati kao tumor-supresor smanjenjem raka pospješuju učinak djelovanja NF-kB.
Kemotaktičnih citokina koji se oslobađaju djelovanjem tumorskih stanica može zaposliti monocita na tumorske mjestima [39, 59]. Ove monociti mogu promovirati progresije tumora [60]. CCL5 i CSF-1 su primjeri monocita-zapošljavanje citokina koji se oslobađaju tumorske stanice [39, 40]. Kao što se očekivalo, monociti premješten manje protiv prilagođenog medija iz LPA-stimuliranih SNU638 stanica pretjerano izražavanje Mir-146A u odnosu na LPA-stimuliranih kontrolnih stanica. Slika S2. Slika S3. Slika S4. Slika S5. Slika S6. 0.05. Svi autori pročitali i odobrili konačnu rukopis. Pregled

• Simultano pojačanom ekspresijom u serumu p53 mutacija povezanih s Helicobacter pylori infection
• Intraneural metastaze želučanog karcinoma dovodi do bedreni živac palsy