Korreláció a HER-2 /neu (ErbB-2) expressziós szintje és a terápiás hatás kombinációs kezelés HERCEPTIN® és a kemoterápiás szerek gyomor rákos sejtvonalakban

Korreláció a HER-2 /neu (ErbB-2) expressziós szintje és a terápiás hatás kombinációs kezelés HERCEPTIN® és a kemoterápiás szerek gyomor rákos sejtvonalakban
Abstract
Bevezetés
Bár előrehaladott gyomorrák sok korlátja és válasz mértéke elhanyagolható, kemoterápia. Overexpressziója humán epidermális növekedési faktor receptor-2 (HER-2 /neu
) gén és annak fehérje társított fokozott sejtosztódást és magas a tumor növekedés és számoltak be számos rosszindulatú betegségekben. Különösen, körülbelül 30% az emlőrák betegek fokozott expressziója a HER-2 /neu-
fehérje és a overexpressziója áttétet gyorsabb, rezisztenciát indukál a kemoterápia és a lefelé szabályozni funkciója az ösztrogén receptort. Rekombináns humanizált anti-HER2 antitest (Herceptin) proliferációját gátolja a HER-2 /neu-
túltermelő tumorsejtek és a használata, amely kombinációban az áttétes emlőrák megnövekedett citotoxicitást a kemoterápiás szerek.
Módszerek
értékeltük a kifejezés a HER-2 /neu-
fehérje gyomor sejtvonalakban FACS majd összehasonlítjuk a citotoxicitás kemoterapeutikumok (doxorubicin, ciszplatin, paclitaxel, 5-FU) önmagában és kombinációban Herceptin szerint a kifejezés a HER-2 /neu
fehérje MTT assay.
Eredmények
1. NCI-N87 (88%) gyomorrák sejtvonal és az SK-BR-3 (89%) emlőrák sejtvonal erős pozitivitása HER 2 /neu katalógusa kifejezést. YBC-2 (55%) és YBC-3 (48%) gyomorrák sejtvonal közvetített, gyenge pozitivitást ill. Negatív kontroll U-87 mg (6%), agy rákos sejtvonalat mutatott alacsony expressziója a HER-2 /neu. 2. A sejtnövekedést úgy dózis-függő módon gátolta a HER-2 /neu-
pozitív, kontroll sejtvonal az SK-BR-3 által Herceptin kezelést, de nem figyeltek meg a HER-2 /neu-
negatív kontroll sejtvonalat U-87 MG. Hatékony növekedés gátlás nem volt megfigyelhető a gyomorrák sejtvonalak egyetlen kezelés Herceptin, valamennyi sejtvonalban megfigyelhető a dózis-függő növekedési gátlás a kemoterápiás szerek (doxorubicin, ciszplatin, paclitaxel és 5-FU). 3. Kombinált Herceptin doxorubicinnel megfigyelt szinergikus hatásokat az összes rákos sejtvonalakban kivéve YBC-3, kombinált Herceptin ciszplatinnal megfigyelt NCI-N87 és az SK-BR-3 és kombinációja Herceptin paklitaxellel megfigyelt szinergetikus hatást YBC-2. Kombináció Herceptin és 5-FU megfigyelt antagonista hatások minden rákos sejtvonalak.
Következtetések
szerint a HER-2 /neu-
expressziós szintje, hatása rákellenes szerek volt megfigyelhető eltérő kombinációban Herceptin és kemoterápiás szerek. Ez azt sugallja, hogy a HER-2 /neu-
expressziós szintet lehet alkalmazni szabványos kombinált gyógyszer kiválasztás kombinációban Herceptin kemoterápiás szerekkel gyomorrákban.
Kulcsszavak
HER-2 /neu-katalógusa (erbB- 2) a Herceptin Gyomorrák Kombinált kezelés CI Bevezetés katalógusa óta ismert, hogy a jelátviteli utak a növekedési faktor és receptora játszanak impotens szerepet rákkeltő folyamat számos vizsgálatok folynak. A HER-2 /neu-katalógusa (erbB-2) fehérje, sejt membrán glikoprotein, egy növekedési faktor receptor aktivitásának receptor tirozin-kináz [1]. HER2 már eddig is gyakran kimutathatók számos humán tumorok. Normál sejt szekréciós társított HER-2 /neu-fehérjét, de pusztulása normális sejtek szabályozású okozó fehérje túlexpressziója, növeli az arány a sejtosztódás és a növekedés indukálnak rákmegelőző változásokat [2].
A HER-2 /neu-katalógusa ( erbB-2) gén, amely humán kromoszómán található 17q21 [3], amely a részleges homológiát mutat az epidermális növekedési faktor receptor (EGFR) [4, 5]. EGF (epidermális növekedési faktor) receptor családnak van aktivitásának receptor tirozin-kináz és állt EGF receptor, a c-erbB-2, C-erbB-3 és C-erbB-4 [6-8]. A HER-2 /neu onkoprotein, kódol p185kD membrán glikoprotein, receptor, amely részt vesz a növekedés és diffentiation a tumorsejtek és a 25 ~ 30% túlexpresszálódik mell-, petefészek- és gastricus karcinómák [9-12] és a prognózis ezeknek betegek rossz [13-15].
túlexpressziója a HER-2 /neu-
gén, és ez fehérje társított emlőrákos páciens prognózisa és a terápia [16-18], és expresszióját a HER-2 /neu-katalógusa erősen szükséges a tumor növekedését [19]. Azok azt sugallják, hogy a HER-2 /neu-
részt vesz a mellrák előfordulásának, progresszió és a rosszindulatú és a HER-2 /neu-
overexpresszió sokkal fontosabb, mint hormon receptorok a betegek nyirokcsomó-metasztázis [9]. Ezért ezek a terápiás célpontok a HER-2 /neu-
fehérje gyógyszerek, a rekombináns humanizált anti-HER-2 /neu-
antitest - Herceptin, hatásos a mellrák kezelésére leírták [20].
Gyomor rák a leggyakoribb rák a Kínában. Előfordulása gyomorrák többlépcsős rákkeltő folyamat különböző genetikai mutáció. HER-2 állapota összefüggésben van a mélysége invázió, TNM stádium, nyirokcsomó és távoli metasztázis gyomorrák [21]. A HER-2 /neu túlzott expressziója összefügg a rossz prognózissal gyomorrák, de mérsékelt hatása a túlélésre a gyomorrák, mint egy független prognózist tényező [22]. Herceptin® mint daganatellenes szer, a mono-terápia hatékony tumorellenes hatások nem várhatók, de sok kutatás folyik a kombinációs terápia más rákellenes drogok vagy biológiai szerek. Azonban még mindig nem pontosan tanulmányozza a kombinációs terápia Herceptin rákellenes gyógyszerek gyomor sejtvonalak [13]. Ezért ebben a tanulmányban azt vizsgáljuk, a hatékony kombinációja Herceptin (Trastuzumab, Genentech Inc, CA, USA) [23-25], célzott HER-2 /neu katalógusa onkoprotein, rákellenes gyógyszerek gyomor rákos sejtvonalak , attól függően, HER-2 /neu-
onkoprotein expresszióját.
anyagok és módszerek
Cells
Gyomorrák sejtvonalakat használtunk YBC-2, YBC-3 és az NCI-N 87 sejtvonalakban. A YBC-2 és YBC-3 sejtvonalak létre hasüregbe, metasztatikus gyomor rák Pathologiai, Yanbian Egyetemen. Az NCI-N 87 sejtvonalat hoztunk létre az Egyesült Állam által NCI (National Cancer Institute, CRL5822, USA). Az U-87 MG (ATCC, HTB14) agydaganat sejtvonal és az SK-BR-3 (ATCC, HTB30) emlőrák sejtvonalat alkalmaztuk a HER-2 /neu-
fehérje expressziója a pozitív és negatív kontroll, ill.
Ezek a sejtvonalat tenyésztettünk használat minimum esszenciális közegben (MEM, GINCO BRL, Grand Island, NY, USA), amely tartalmazó inaktivált (56 ° C-on 30 perc) 10% magzati borjúszérummal (FBS, GINCO BRL, Grand Island , NY, USA), 100 egység /ml penicillinnel és 0,1 mg /ml sztreptomicinnel egészítettünk ki. Minden kultúra inkubálást is végzünk, párásított, 37 ° C-on, 5% CO 2 inkubátorban.
Drugs
Herceptin, Humanoid rekombináns HER-2 /neu-antitest volt az USA-tól (Trastuzumab, 440 mg /20 ml-es , Genentech Inc., San Francisco, CA, USA), és elismert rákellenes gyógyszerek, hatása a gyomorrák, adriamicin (doxorubicin, 10 mg /5 ml), ciszplatin (ciszplatin, 10 mg /fiola), Taxol (paclitaxel, 30 mg /ampulla) és az 5-FU (5-Flourouracil, 250 mg /5 ml) Kínából. Ennek során kísérletet mindegyik gyógyszert alkalmaztuk hígítottuk sejtkultúra média.
FACS analízis (HER-2 /neu-fehérje expresszióját) hotelben a HER-2 /neu-katalógusa (erbB-2) onkoprotein expresszió alkalmazásával végeztük Fluorescence- sejtválogató (FACS, Becton Dickinson, USA) végzett immunfenotipizáló a sejt felszínén. Kultúra sejteket (1 × 10 6) gyűjtöttünk után treat tripszin-EDTA-t (GIBCOBRL, Grand Island, NY, USA), és inkubáltuk a primer antitest, anti-HER-2 /neu-
antitest (egér monoklonális antitest, LAB VISION, CA, USA), 1: 200 hígítás és 50 ul 1 órán át 4 ° C-on. A megfestett sejteket kétszer mostuk hideg PBS-sel. Festés és átmosás végeztünk PBS-ben (foszfát-puffer-oldattal, pH = 7,6 Ca ++ Mg ++ mentes, Gibco BRL, Grand Island, NY, USA), 2% FBS-t. Kétszeri mosás után másodlagos FITC-antiegér antitest (Anti-Mouse FITC-konjugált antitest, Novocastra, USA) használtunk 1:40 hígításban, és 50 ul-on inkubáltuk 40 percig 4 ° C hőmérsékleten, majd kétszer mossuk hideg PBS-ben. Befejezése után a festés, szűréssel sejtes oldatot alkalmazunk 40 um nylon mesh beszerzése egyetlen sejt lebegőanyag és ezzel elemzés FACS. Katalógusa MTT assay (in vitro Herceptin és kemoterápiás szerek érzékenységi vizsgálat gyomor rákos sejtvonalak) hotelben Az MTT assay-óta használják az in vitro
kábítószer érzékenységi vizsgálat gyomor rákos sejtvonalak. Az MTT-színezéket [3- (4,5-dimetil-tiazol-2-il) -2,5-difenil-tetrazólium-bromid] redukáljuk formazán (egy sötét lila vízben oldhatatlan vegyület) a szukcinát-dehidrogenáz-rendszerben az aktív mitokondriumok, és így, kimondottan az optikai sűrűség (OD) a kutak mértük egy enzimmel kapcsolt immunoszorbens assay (ELISA) olvasó Sunrise (TECAN) 560 nm-en. Az OD korrelált lineárisan életképes sejtek számát. A sejteket 180 ul média 1 × 10 4 sejt lyukanként egy 96 lyukú multi-lyukas lemez, és inkubáltuk 24 órán át 37 ° C-on és 5% CO 2.
Egyszeri kábítószer érzékenységi vizsgálat, két módszert alkalmaztak. Először is, a Herceptin (4,625, 9,25, 18,5, 37 uM), a doxorubicin (0,0183, 0,183, 1,83, 18,3 pM), ciszplatin (0,166, 1,666, 16,66, 166,6 nmol), a paclitaxel (0,0585, 0,585, 5,85, 58,5

• Funkcionális módosítások járó gyomor-bél traktus organogenesis alatt metamorfózis az atlanti óriás laposhal (Hippoglossus hippoglossus)
• Azonosítása és hitelesítése gének gyomor tumorigenesis