Das Auftreten von Helicobacter pyloriand Epstein-Barr-Virus-Infektion in der endoskopischen und Magenkrebs-Patienten aus Nordbrasilien

Das Auftreten von Helicobacter pylori
und Epstein-Barr-Virus-Infektion in der endoskopischen und Magenkrebs-Patienten aus Nordbrasilien
Zusammenfassung
Hintergrund Helicobacter pylori
(HP) und Epstein-Barr-Virus
( EBV) wurden mit der Entwicklung von Krebs in Verbindung gebracht. Wir untersuchten die Prävalenz von HP, HP CagA
+ und EBV-Infektion bei Magenkrebs (GC) Proben von Erwachsenen und in Magengewebe von Patienten, die oberen Endoskopie unterzogen (UE).
Methoden
Proben von UE und GC wurden gesammelt, um die Anwesenheit von HP-Infektion und die HP Virulenzfaktors CagA und Videos ein Urease-Test und PCR zu untersuchen. Die Anwesenheit von EBV von Ebers-1 in situ
Hybridisierung nachgewiesen wurde.
Ergebnisse
UE, 85,5% der jugendlichen Patienten ein gewisses Maß an Gastritis zeigten (45,3% der Patienten mit einer leichten Gastritis und 54,7% mit mäßigem /schwere Gastritis) und Patienten mit einer leichten Gastritis waren jünger als Patienten mit mäßig /stark Gastritis. Unter den Erwachsenen stellte 48,7% milde Gastritis und 51,3% mittel /schwer Gastritis. HP-Infektion wurde in 0% der normalen Schleimhaut, 58,5% der juvenilen Gastritis Patienten, 69,2% der erwachsenen Gastritis Patienten und 88% der GC-Patienten nachgewiesen. In dieser gleichen Gruppen, HP CagA
+
wurde in 0% festgestellt, 37,7%, 61,5% und 67,2% der Gewebeproben, respectively. Bei jugendlichen Patienten war HP-Infektion häufiger bei den Patienten mit Gastritis als in normalen Proben (p = 0,004). Die Patienten mit entweder HP oder HP CagA
+
waren älter als Patienten ohne diese Erreger (p < 0,05). Bei jugendlichen Patienten war HP-Infektion häufiger bei Fällen von mäßiger /schwerer Gastritis als bei leichten Gastritis (p = 0,026). Darüber hinaus kann in Patienten mit GC war HP-Infektion häufiger bei Männern als bei Frauen (p = 0,023). GC Patienten mit HP CagA
+
waren älter als Patienten mit HP CagA
-
(p = 0,027). HP CagA
+
wurde häufiger bei Darm-Typ als diffus-Typ GC (p = 0,012). HP CagA
+
auch mit Lymphknoten (p = 0,024) und distale (p = 0,005) Metastasierung assoziiert war. Kein Zusammenhang zwischen EBV-Infektion und HP-Infektion oder einer klinisch-pathologischen Variable erkannt wurde.
Schlussfolgerungen
Unsere Ergebnisse legen nahe, dass HP in der Pathophysiologie der schweren Magen-Läsionen und in der Entwicklung von GC beteiligt ist, vor allem, wenn CagA
+
vorhanden ist. EBV war nicht der primäre pathogenetischer Faktor in unseren Proben.
Schlüsselwörter Helicobacter pylori
Epstein-Barr-Virus
Gastritis Magenkrebs hintergrund und Magenkrebs (GC) und anderen Magen-Darm-Erkrankungen bei hohen Raten auftreten weltweit [1], und die Einbeziehung von Viren und Bakterien wurden mit diesen Krankheiten assoziierten Infektionen. In jüngster Zeit wurden mehrere Studien durchgeführt, um die Rolle von Krankheitserregern zu verstehen, die den menschlichen Magen infizieren, insbesondere Helicobacter pylori
(HP) und Epstein-Barr-Virus
(EBV), im Magen-Karzinogenese [2-5].
HP, eine Gram-negative Spirale Bakterium ist ein Problem der öffentlichen Gesundheit betrachtet. Im Jahr 1994 definiert die Internationale Agentur für Krebsforschung (IARC) HP als Karzinogen der Gruppe 1 [6, 7]. Dieses Bakterium kolonisiert die Magenschleimhaut von mehr als 50% der Bevölkerung der Welt [8]. Jedoch nur ca. 20% der infizierten Personen entwickeln eine schwere Magenerkrankungen wie GC. Unter den Faktoren-, die vorgeschlagen wurden, um die Entwicklung von Magenerkrankung in HP-infizierten Patienten zu tragen sind die Virulenz von HP-Stämmen, die Permissivität der Magenumgebung und der Host genetischen Hintergrund [9]. Die HP Zytotoxizität assoziierten Gens A (CagA
) ist einer der bedeutendsten Virulenzfaktoren dieser Bakterien, und es hat mit Risiko für GC [10] in Verbindung gebracht worden.
EBV infiziert mehr als 90% des weltweiten Erwachsenen Bevölkerung, und die meisten Menschen sind in der Kindheit infiziert. Bei Infektion, bleibt das Virus latent in B-Lymphozyten im Laufe des Lebens [5]. Um onkogenen, EBV muss sein Genom innerhalb von Wirtszellen halten, um den Zelltod zu vermeiden und zu entziehen Erkennung durch das Immunsystem. Der Beitrag der EBV magen Karzinogenese wurde nicht vollständig aufgeklärt worden [11, 12]. EBV infiziert Epithelzellen aus dem Mund-Rachenraum und in der Folge breitet sich auf den lymphatischen Geweben, wo es B-Lymphozyten infiziert [13-15]. Atrophischer Gastritis kann die Infiltration von EBV-tragenden Lymphozyten induzieren und die Möglichkeit ihrer Kontakt mit den Magen Epithelzellen erhöhen. Auf der anderen Seite kann die Magen-Entzündung auch ein Zytokin-reiche Mikro produzieren zu Klonwachstum von EBV-infizierten Epithelzellen [16].
In Entwicklungsländern wie Brasilien, HP und EBV-Infektionen sind besonders häufig im unteren sozioökonomischen Unterstützung Populationen. Darüber hinaus tritt Infektion bei früheren Zeiten in diesen Bevölkerungsgruppen im Vergleich zu den entwickelten Ländern [17-19]. Studien nötig sind, um diese Erreger Verband mit und Einfluss auf die Entwicklung von Magenerkrankungen bei früheren Zeiten, um zu bestimmen, wo sie initiieren könnten oder kanzerogene Prozesse fördern. Zusätzlich wird die Rolle von HP und EBV in der Entwicklung von Adenokarzinom des Magens bei älteren Menschen, die Bevölkerung, wo diese Krankheit am häufigsten ist, bleibt unklar.
Daher Ziel dieser Studie war die Prävalenz von HP und EBV-Infektion zu bewerten, wie gut wie die -positiver Status von HP, in Magengewebe von jugendlichen und erwachsenen Patienten, bei denen die obere Endoskopie (UE) und in Tumorproben von erwachsenen Patienten mit GC
CagA.
Methoden
Proben
die vorliegende Studie eingeschlossen: Magengewebeproben von 62 juvenile Patienten (i) im Bereich von 12 Monaten bis zu 18 Jahren, bezeichnet für die UE auf klinische Manifestationen im oberen Gastrointestinaltrakt klären, (ii) Magengewebeproben von 39 erwachsenen Patienten von 19 bis 61 Jahre reichen alt, bezeichnet für UE klinische Manifestationen im oberen Magen-Darm-Trakt zu klären, und (iii) Tumorproben von 125 Erwachsene, 26-89 Jahre alt, mit primären Adenokarzinom des Magens. Die Proben wurden in der Zeit von 2005-2013 in Belém Stadt Bundesstaat Pará, Nordbrasilien zufällig gesammelt. Die Einwilligungserklärung wurde vor erhalten Sammlung von allen erwachsenen Patienten oder von den Eltern oder Erziehungsberechtigten aller jugendlichen Patienten zu probieren. Probensammlung wurde mit Zustimmung der Ethikkommission des Menschen Institut für Gesundheitswissenschaften der Bundesuniversität von Pará (Protokoll#/2010) und João de Barros Barreto University Hospital (ProtokollŽ004) durchgeführt. Alle Patienten hatten negative Geschichte der Exposition gegenüber Chemotherapie und Strahlentherapie vor mit Co-Auftreten von Krebserkrankungen diagnostiziert präsentierte Sammlung, und kein Patient zu probieren. Die Daten über die klinischen Merkmale der Patienten wurden aus den Krankenakten gesammelt.
Histopathologie Endoskopische Befunde wurden klassifiziert nach dem aktualisierten Sydney-System [20], die den Grad der Entzündung der Auffassung, Aktivität, Atrophie und intestinale Metaplasie. Für jeden Patienten, 5 Biopsien von Magengewebe wurden bewertet: 2 aus dem antralen Bereich des Magens, 1 vom incisura angularis
und 2 von der oxyntic Schleimhaut. Chronische Gastritis wurde als mild bezeichnet, mittelschwerer oder schwerer.
Magentumoren wurden nach der Lauren Klassifikation klassifiziert [21] und in Szene gesetzt mit Standard-Kriterien von pTNM Staging [22]. Die Tabellen 1 und 2 zeigen die klinisch-pathologischen Eigenschaften von Gastritis und GC-Proben, respectively.Table 1 klinisch-pathologischen Eigenschaften, H. pylori und EBV-Infektion bei Gastritis Proben von jugendlichen Patienten
Variable
H. pylori

CagA


EBV

Negative

Positive

p
-value

Negativec

Positive

p
-value

Negative

Positive

p-
value

Alter (Jahre, Mittelwert ± SD)
7,45 ± 3,88
12,19 ± 4,09
< 0,001 *
8,88 ± 4,49
12.45 ± 4.01
0,005 *
9,96 ± 4,5
17 ± 1,41
0,033 *
Geschlecht [N (%)]
Weiblich
14 (42,4)
19 (57,6)
0.685a
23 (69,7
) 10 (30,3)
0.096a
32 (97,0)
1 (3.0)
0.626a
Male
8 (40,0)
12 (60,0)
10 (50,0)
10 (50,0)
19 (95,0)
1 (5.0)
Histologische Subtyp [N (%)]
Mild
16 (66,7)
8 (33,3)
0,026 * b
20 (83,3)
4 (16,7)
0.108b
23 (95,8)
1 (4.2)
0.136 b
mittel /schwer
6 (20,7)
23 (79,3)
13 (44,8)
16 (55,2)
28 (96,6)
1 (3.4)
EBV-Infektion [N (%)]
Absent
21 (41,2)
30 (58,8)
0.242b
31 (60,8)
20 (39,2)
0.998b
Gegenwart
1 (50)
1 (50)
2 (100)
0 (0)
* Signifikante Unterschiede zwischen den Gruppen, p < 0,05. p-Wert nach Adjustierung für Alter; bp-Wert nach Adjustierung für Alter und Geschlecht; cNegative Proben für H. pylori
und Proben mit H. pylori-Infektion
aber ohne Virulenzfaktors CagA; EBV: Epstein-Barr-Virus
; SD:. Standardabweichung
Tabelle 2 klinisch-pathologischen Eigenschaften, H. pylori und EBV-Infektion bei Gastritis Proben von Erwachsenen Patienten
Variable
H. pylori
CagA


EBV

Negative

Positive

p
-value

Negativec

Positive

p
-value

Negative

Positive

p
-value

Alter (Mittelwert ± SD)
35,58 ± 7,82
45.00 ± 10.89
0,011 *
37,6 ± 7,67
44,92 ± 11,75
0,039 *
42.24 ± 11.14
39.50 ± 3,54
0.733
Geschlecht [N (%)]
weiblich
3 (21,4)
11 (78,6)
0.410a
5 (35,7)
9 (64.3)
0.915a
14 (100)
0 (0)
0.999a
männlich
9 (36,0)
16 (64,0)
10 ( 40.0)
15 (60,0)
23 (92,0)
2 (8.0)
Histologische Subtyp [N (%)]
Mild
7 (36.8)
12 ( 63.2)
0.715b
9 (47,4)
10 (52,6)
0.820b
17 (89,5)
2 (10.5)
0.999b
Moderate /Schwere
5 (25,0)
15 (75,0)
6 (30,0)
14 (70,0)
20 (100)
0 (0)
EBV-Infektion [N (%)]
Absent
12 (32,4)
25 (67,6)
0.999b
14 (37,8)
23 (62,2)
0.810b
Präsens
0 (0)
2 (100)
1 (50.0)
1 (50,0)
* Signifikante Unterschiede zwischen den Gruppen, p < 0,05. p-Wert nach Adjustierung für Alter; bp-Wert nach Adjustierung für Alter und Geschlecht; cNegative Proben für H. pylori
und Proben mit H. pylori-Infektion
aber ohne Virulenzfaktors CagA; EBV: Epstein-Barr-Virus
; SD:. Standardabweichung
HP und CagA
Erkennung
Die Anwesenheit von HP mit einem handelsüblichen Urease-Schnelltest (Promedical, Brasilien) erkannt wurde, und die negativen Ergebnisse wurden durch PCR bestätigt unter Verwendung der beschriebenen Oligonukleotide durch Covacci et al.
[23]. Alle Magenproben wurden in ein Röhrchen, enthaltend 2% Christensen Harnstoff Agar und untersucht für Harnstoff-Hydrolyse nach 24 h Inkubation bei 37 ° C platziert. In Gegenwart von Urease von HP hergestellt wird der Harnstoff zu Ammoniak umgewandelt wird, in einer Änderung des pH resultierenden und folglich die Farbe der Lösung. Die Detektion des Gens
CagA
wurde durch PCR durchgeführt, in die Magenschleimhaut aller Patienten, die Oligonukleotide von Covacci et al beschrieben ist.
[23]. Alle Reaktionen wurden doppelt durchgeführt. Eine Probe wurde als positiv bewertet, wenn eine sichtbare und deutliche Bande auf einem 2% Agarose-Elektrophorese-Gel beobachtet wurde.
EBV Erkennung
EBV durch RNA-in-situ-Hybridisierung (ISH) mit einem 30-bp biotinylierte Sonde (5 'erkannt wurde -AGACACCGTCCTCACCACCCGGGACTTGTA-3 ') komplementär zu EBV-codierten kleinen RNA-1 (Eber1
), das am reichlichsten vorhandene Virusprodukt in latent infizierten Zellen [24]. Signal-Amplifikation wurde mit einem Maus-Anti-Biotin-Antikörper (Klon BK, 1:20 Verdünnung; DakoCytomation®, CA, USA) erreicht und biotinyliertes Kaninchen-Anti-Immunglobulin-Antikörpers (polyklonal, 1: 100 Verdünnung; DakoCytomation®, CA, USA). Die Reaktion wurde mit Streptavidin-Biotin-Peroxidase-Komplex (DakoCytomation®, CA, USA) und Diaminobenzidin Chromogen (DakoCytomation®, CA, USA) nachgewiesen. Die Objektträger wurden mit Harris Haematoxylin gegengefärbt. Zellanalyse wurde bei 40-facher oder 20-facher Vergrößerung von 2 unabhängigen Ermittler mit Lichtmikroskopie, durchgeführt. Insgesamt 10 repräsentative mikroskopische Felder wurden ausgewertet, und Felder, die weniger als 5 Zellen wurden nicht berücksichtigt. Eine Magenkrebs Probe positiv für EBV wurde als eine positive Kontrolle eingeschlossen und zwei ohne Sonde behandelt Objektträger wurden als negative Kontrollen verwendet. Proben, bei denen 5% oder mehr der Epithelzellen braun /rote Färbung enthielten, wurden als positiv betrachtet. Obwohl Lymphozyten auch durch EBV infiziert werden gefunden wurden, enthielt wir nicht infizierten lymphoiden Zellen in unserer Analyse.
Statistische Analysen
Der Shapiro-Wilk-Test, um die Verteilung der Altersdaten auszuwerten verwendet wurde und die entsprechenden Folge zu bestimmen Test für den statistischen Vergleich. Der Mann-Whitney-Test (nicht-parametrisch) oder t-Test für unabhängige Stichproben (parametrisch) wurde verwendet Alters zwischen den Gruppen zu vergleichen. Assoziationen zwischen HP oder EBV und anderen klinisch-pathologischen Eigenschaften wurden unter Verwendung von Chi-Quadrat (χ 2) und logistischer Regression analysiert. Ein p-Wert von weniger als 0,05 wurde als signifikant angesehen, und das Konfidenzintervall betrug 95%.
Ergebnisse

• Assoziation zwischen RUNX3-Promotor-Methylierung und Magenkrebs: eine Meta-Analyse
• Magen-Adenome in familiärer adenomatöser Polyposis sind häufig, aber subtil und haben eine gutartige course