Inverkan av IL17A polymorfismer på avvikande metylering av DAPK och CDH1 i godartade magslemhinnan

Påverkan av IL17A
polymorfismer på den avvikande metylering av DAPK
och CDH1
i icke-cancerös magslemhinnan Bild Sammanfattning
Bakgrund
CpG-ö avvikande metylering har visat sig vara en viktig mekanism i geners uttryck. Den viktiga roll som IL-17 i inflammatoriskt svar till H. pylori
kolonisering har indikerats. Vi undersökte påverkan av IL17A
polymorphisms, -197 G > A (rs2275913) och * 1249 C > T (rs3748067), på metylering av DAPK Mössor och CDH1
.
Metoder
gastrointestinala prover erhölls från 401 individer utan maligniteter. Metyleringsstatus av gen bestämdes genom MSP. Genotypning av IL17A
utfördes genom PCR-SSCP.
Resultat
metyleringar av DAPK Mössor och CDH1
sågs i 196 och 149 av alla 401 försökspersoner, respektive. Sammantaget * 1249 T bärare i samband med en minskad risk för DAPK
metylering, medan -197 G > En var inte. I de ämnen som är äldre än 60 år, * 1249 T bäraren mer starkt förknippad med genen metylering och -197 En bärare tenderade att förknippas med en ökad risk för CDH1
metylering. Vid bedömningen av av inflammation främja haplotyp (-197 mutant bärare med * 1249 homozygot), denna haplotyp hade en starkare ökad risk för både DAPK Mössor och CDH1
metyleringar i jämförelsevis äldre patienter. Både atrofi och metaplasi poäng var signifikant ökade med ålder -197 En bärare eller * 1249 CC homozygot, medan var inte -197 GG homozygot eller * 1249 T bärare. PG I /II förhållandet minskade mer påtagligt i -197 En bärare än i GG homozygot under påverkan av H. pylori
infektion.
Slutsatser
I -197 En allel bärare med * 1249 CC homozygota, de metyleringar både DAPK Mössor och CDH1
kan ökas gradvis, men snabbare än de andra genotyper, med ålder och förändrad magslemhinnan struktur induceras av H. pylori
infektion.
Nyckelord
IL17A
Aberrant DNA-metylering DAPK
CDH1
bakgrund
Interleukin-17 (IL-17) är en relativt nyligen beskriven cytokin som överbryggar det adaptiva och medfödda immunsystem. IL-17A är ett cytokin som ansvarar för den patogena aktiviteten hos Th17-celler [1], en distinkt härstamning av CD4 + effektorceller [2]. IL-17A inducerar multipla proinflammatoriska mediatorer, inklusive kemokiner, cytokiner och metalloproteinaser, från epiteliala och fibroblastceller [3]. En förbättrad expression av IL-17 har också dokumenterats och implicerats i patogenesen av immunmedierade sjukdomar, såsom reumatoid artrit, multipel skleros och psoriasis [4]. Dessutom har IL-17 förmågan att stimulera IL-8-produktion i både epitelceller och makrofager [5, 6], öka möjligheten att detta cytokin kan spela en viktig roll i rekryteringen av inflammatoriska celler under bakteriella infektioner. Först, Lussa et al. rapporterade att bio-aktivt IL-17A produktionen ökades under Helicobacter pylori
(H. pylori
) -infektion, vilket tyder på möjligheten att detta cytokin kan spela en viktig roll i H. pylori
-inducerad inflammatoriskt svar [7]. Därefter rapporterade flera studier att IL-17 stimulerar IL-8 frisättning genom mag epitelceller och underlättar kemotaxi av neutrofiler genom en IL-8-beroende mekanism, och bidrar till att stärka IL-8 nivåer i H. pylori
-colonized magslemhinnan [8-10].
Å andra sidan, är magcancer en av de vanligaste cancersjukdomarna i världen [11, 12], men etiologin av denna tumör är fortfarande oklart. H. pylori
infektion nu accepterat som en avgörande händelse i utvecklingen av magsår och atrofisk gastrit, och det är inblandad i utvecklingen av magcancer, särskilt inte i magmunnen [13-15]. Flera cancerformer, inklusive gastric tumörer, visar metyleringar av flera gener, inklusive E-cadherin-genen (CDH1
),
döds associerat protein-genen (DAPK
) och CDKN2A
[16, 17]. Vissa gener också metyleras i icke-neoplastiska vävnader med åldrande, och denna förändring kallas åldersrelaterad metylering [18, 19]. Dessutom har det också visat sig att genen metylering kan vara närvarande i kronisk inflammation i olika vävnader [20, 21]. I magslemhinnan, angavs att metylering av CpG-ön framkallades av H. pylori
infektion i godartade slemhinna [22, 23] och betraktas som de precancerösa tillstånd i gastric cancer [24]. Bland flera gener, DAPK
och CDH1
samt CDKN2A
, ofta metyleras i icke-neoplastisk magslemhinnan i förhållande till ålder, H. pylori
infektion, histologisk grad av gastrit, och gastric carcinogenesis [22, 25, 26]
Nyligen har vi rapporterat att IL-17A-gen (IL17A
) polymorfism (rs2275913 G > A). och IL-17 F-genen (IL17F
) polymorfism (rs763780 T > C) är nära förknippade med den känslighet för gastric cancer [27], liksom ulcerös kolit [28]. Därefter har flera studier visat att sambandet mellan IL17A
rs2275913 G > A och reumatoid artrit, gastric cancer och astma [29-31]. Den rs2275913 (G /A), som ligger vid en position -197 från startkodonet av IL17A
, kan reglera expressionen av mRNA. Dessutom finns det en polymorfism rs3748067 (* 1249 C > T) i IL17A
3'-UTR, som omfattas av vissa mikroRNA. . Vår hypotes är att dessa IL17A
gen polymorfismer kan påverka utvecklingen av avvikande DNA mathylation av magslemhinnan
I den aktuella studien undersökte vi sambandet mellan polymorfismer av IL17A
, rs2275913 (-197 G > A ) och rs3748067 (* 1249 C >. T), och den avvikande DNA-metylering av DAPK Mössor och CDH1
i godartade gastric epitel
metoder sälja kliniska prover
studerade populationen bestod 401 försökspersoner utan gastric maligniteter rekrytera Endoskopi Center of Fujita Health universitetssjukhus eller Kanazawa Medical University Hospital. I HapMap-JPT, frekvensen av IL17A -
197 A allelfrekvens var 45,3%. Vi antar att en 20% minskning av förekomsten av en allelisk frekvens skulle vara klinisk relevans (ometylerade grupp: 40% vs. denaturerad grupp: 50%). Förutsatt ett alfavärde = 0,05 och en effekt = 0,80, åtminstone 200 ometylerade ämnen och 200 metylerade ämnen skulle vara tillräckliga för att identifiera en klinisk relevant skillnad. Följaktligen skulle 400 patienter vara klinisk relevans för studien. Alla försökspersoner genomgick övre endoskopi med en eller två biopsiprover från godartade slemhinnan i antrum. Delar av varje prov fixerades i 10% buffrad formalin och inbäddades i paraffin, medan den andra delen var omedelbart frystes och lagrades vid -80 ° C. Senare blev Genomisk DNA isolerades från frusna prover med proteinas K. Ett prov från patienter som samtyckt till endast en biopsi användes inte för histologisk utvärdering.
Ämnena utan metylering av både DAPK Mössor och CDH1
klassificerades i icke CIHM (CpG-ö högt metylerad) grupp, medan de andra förutom icke CIHM klassificerades i CIHM grupp. Dessutom fick försökspersonerna indelade i 2 grupper av genotyp enligt följande:
HR (hög risk) grupp: IL17A -
197 En bärare med * 1249 CC genotyp
LR (låg risk) grupp: de ämnen utom HR Group sälja The etiska kommittéer i Fujita Hälsouniversitetet och Kanazawa Medical University godkänt protokollet, och tidigare, var skriftligt informerat samtycke erhållits från alla deltagande patienter.
Natriumbisulfat modifiering och metylering specifika PCR (MSP) Review för att undersöka DNA-metylering, var genom-DNA behandlades med natriumbisulfit med användning BislFast DNA Modification Kit för metylerat DNA Detection (TOYOBO, Co., Ltd., Osaka, Japan). MSP för DAPK
och CDH1
utfördes med användning av de metoder som rapporterats av Katzenellenbogen et al. [32] och Herman et al. [33], respektive. I korthet var MSP reaktioner utfördes med primerparen som beskrivs nedan, med hjälp av EX Taq HS (Takara Bio, Inc., Shiga, Japan)
primerpar DAPK:. Metyleras framåt; 5'-ggatagtcggatcgagttaacgtc-3 ', omvänd; 5'-ccctcccaaacgccga-3 ',
DAPK: ometylerade framåt; 5'-ggaggatagttggattgagttaatgtt-3 ', omvänd; 5'-caaatccctcccaaacaccaa-3 '
CDH1: metylerat framåt; 5'-ttaggttagagggttatcgcgt-3 ', omvänd; 5'-taactaaaaattcacctaccgac-3 ',
CDH1: ometylerade framåt; 5'-taattttaggttagagggttattgt-3 ', omvänd; 5'-cacaaccaatcaacaacaca-3 ', Review, en glödgningstemperatur och tider bestämdes med användning av DNA från perifert blod från en ung individ utan H.pylori
infektion och DNA metylerades med SSSI metylas (New England Biolabs Inc., Beverly, MA). MSP genomfördes i en volym av 20

• IL-1β-inducerad aktivering av p38 befrämjar metastaser i magcancer via uppreglering av AP-1 /c-fos, MMP2 och MMP9
• NF-kappaB-beroende MicroRNA-425 uppreglering främjar magsäckscancer celltillväxt genom att rikta PTEN på IL-1β induktion