Överuttryck av Snail är förknippad med lymfkörtelmetastaser och dålig prognos hos patienter med magsäcks cancer

överuttryck av Snail är förknippad med lymfkörtelmetastaser och dålig prognos hos patienter med magcancer Bild Sammanfattning
Bakgrund
Epithelial-mesenkymala övergång ( EMT) spelar en betydande roll i tumörprogression och invasion. Snail är en känd regulator av EMT i olika maligna tumörer. Denna studie undersökte rollen av Snail i magcancer.
Metoder
Vi undersökte effekterna av tystas eller överuttryckta Snail använder Lenti-virala konstruktioner i gastric cancerceller. Immunhistokemisk analys av vävnads mikroarrayer från 314 patienter med magcancer (GC) användes för att bestämma snigel klinisk-patologisk och prognostisk betydelse. Differentiell genuttryck i 45 GC prover med Snail uttryck undersöktes med användning av cDNA microarray analys.
Resultat
tysta Snail av shRNA minskade invasion och migration i GC-cellinjer. Omvänt, ökade Snail uttryck invasion och migrering av gastric cancerceller, i linje med ökad VEGF och MMP11. Snigel uttryck (≥75% positiv nukleär färgning) var också signifikant associerade med tumörprogression (P Hotel < 0,001), lymfkörtelmetastaser (P
= 0,002), lymphovascular invasion (P
= 0,002), och perineural invasion (P
= 0,002) i GC patienterna 314, och med kortare överlevnad (P
= 0,023). cDNA microarray analys avslöjade 213 differentiellt uttryckta gener i GC vävnader med Snail överuttryck, inbegripet gener relaterade till metastas och invasion.
Slutsats
Snail påverkar signifikant invasivitet /flyttande förmåga GC, och kan också användas som en prediktiv biomarkör för prognos eller aggressivitet GC.
Nyckelord
mage Adenocarcinom Snail Lymfkörtel metastasering Survival bakgrund
epithelial-mesenkymala övergång (EMT), en utvecklingsprocess där epitelceller minskar intercellulär vidhäftning och förvärva myofibroblastic funktioner, är avgörande för tumör progression [1-3]. Under EMT betydande förändringar, bland annat nedreglering av epitelceller markörer såsom E-cadherin, flyttning av β-catenin (dvs dissociation av membran β-catenin och translokation i kärnutrymmet) och uppreglering av mesenkymala markörer som vimentin och N -cadherin [3-6]. EMT induceras genom undertryckande av E-cadherin uttryck av EMT regulatorer såsom snigel, snigel, och Twist. Snigeln familj av zinkfingertranskriptions repressorer undertrycker direkt E-cadherin in vitro Mössor och in vivo
via en interaktion mellan deras COOH-terminala regionen och 5 '- CACCTG-3 ' sekvens i E-cadherin-promotorn [7-9]. Snigel är enligt uppgift viktigt i flera karcinom, inklusive icke-småcellig lungcancer, äggstockscancer, uroteliala karcinom och hepatocellulär cancer [10-13]. Studier har också använt immunohistokemiska analyser för att visa den kliniska betydelsen av Snail uttryck i magcancer (GC) [14, 15]. Dock har några rapporter om roller Snail i GC ingår klinisk-patologisk, prognostiska och funktionella in vitro
analyser samt genuttryck resultat. Vi utvärderas därför Snail'sen effekt på invasivitet /migrationsförmåga i gastriska cancercellinjer, och undersökte också möjligheten av Snail som används som ett prediktivt markör för utvärdering av dålig prognos eller tumör aggressivitet i GC-patienter. Vi utvärderade också genuttrycket i 45 GC vävnader med Snail uttryck, med hjälp av cDNA microarrays.
Metoder
shRNA lentivirus-medierad tysta och överuttryck av Snail i gastric cancerceller sälja mänskliga magsäckscancer cellinjer SNU216 och SNU484 erhölls från koreanska Cell Bank (KCLB) och var bestyrkas av DNA-profilering. Dessa celler odlade i RPMI1640-medium med 10% fetalt bovint serum (FBS), 100 U /ml penicillin och 100 | ig /ml streptomycin (Hyclone, Ogden, UT). Alla celler upprätthölls vid 37 ° C i 5% CO 2. Lentivirala baserade RNA knockdown och överuttryck användes för att tysta och överuttryck av Snail. Lentivirus uttrycker antingen icke-mål eller Snail
-targeted shRNAs användes för att tysta; en PLKO lentivirusvektor targeting Snail
eller en tom PLKO vektor användes för överexpression av Snail i SNU216 och SNU484-celler. Lentivirus lagren ställdes med användning av Virapower ™ Lentiviral förpackningar mix med hjälp av 293FT cellinje enligt tillverkarens protokoll (Invitrogen, Carlsbad, CA). SNU216 och SNU484-celler odlade till 50% sammanflytning inkuberades i 24 timmar i en 1: 1 spädning av virus: media med 5 | ig /ml polybren. Efter en 24-h återhämtningsperiod i komplett medium utan virus, var polyklonala stabila cellinjer valda och underhållas i media innehållande 5 pg /ml puromycin. Tystande eller överexpression av Snail bestämdes genom RT-PCR och Western blotting.
Realtid RT-PCR-analys av VEGF
, MMP11
och Snail
i gastriska cancerceller
Totalt cellulärt RNA extraherades med användning av TRIzol-metoden (Sigma-Aldrich, St Louis, MO, USA). För RT-PCR-analys, var två-ig alikvoter av RNA utsattes för cDNA-syntes med 200 U av MMLV-omvänt transkriptas och 0,5 ^ g av oligo (dT) -15-primer (Promega, Madison, WI, USA). Kvantitativ realtids-PCR utfördes med Rotor-Gene ™ System (QIAGEN, Hilden, Tyskland) med användning av AccuPower 2 × Green qPCR Master Mix (Bioneer, Daejeon, Korea). cDNA i 1 | il av reaktionsblandningen amplifierades med 0,5 U av GoTaq DNA-polymeras (Promega) och 10 pmol vardera av följande sense- och antisense-primrar: GAPDH
5 '- TCCATGACAACTTTGGTATCG-3 ', 5 '- TGTAGCCAAATTCGTTGTCA-3 '; Snail
5 '- CTTCCTCTCCATACCTG-3 ', 5 '- CATAGTTAGTCACACCTCGT-3 '; VEGF
5 '- TTGCTGCTCTACCTCCACCA-3 ', 5 '- GCACACAGGATGGCTTGAA-3 '; MMP11
5 '- CTTGGCTGCTGTTGTGTGCT-3 ', 5-AGGTATGGAGCGATGTGACG-3 '. Värmecyklingsprofil var: denaturering under 30 s vid 95 ° C, hybridisering under 30 s vid 52 ° C (beroende på de primrar som används), och förlängning för 30 s vid 72 ° C. För semikvantitativ bedömning av expressionsnivåer, var 30 cykler användes för varje PCR-reaktion. PCR-produkterna var storleksfraktionerades på 1,0% etidiumbromid /agaros-geler och kvantifieras under UV-genomlysning. Tröskelcykeln (CT) definieras som den fraktionella cykelantalet vid vilket fluorescens passerar en fast tröskel över baslinjen. Relativ genuttryck kvantifierades med hjälp av det genomsnittliga CT-värdet för varje tre exemplar prov minus den genomsnittliga tre exemplar CT värde för GAPDH
. Skillnader mellan kontroll (tom vektor) och experimentgrupper (infekterade med lentivirus) beräknades med hjälp av formeln 2 - ([△ CT Lenti] - [△ CT kontroll]) och uttrycks som en faldig förändring i uttryck enligt den jämförande tröskelcykeln metoden (2- △△ CT) [16].
Western blotting
Celler skördades och sönderdelades i lyseringsbuffert (1% Triton X-100, 1 mM EGTA, 1 mM EDTA, 10 mM Tris-HCl, pH 7,4 och proteasinhibitorer). Celldebris avlägsnades genom centrifugering vid 10000 x g
under 10 minuter vid 4 ° C. De resulterande supernatanterna upplöstes på en 12% SDS-PAGE under denaturerade reducerande betingelser och överfördes till nitrocellulosamembran. Membranen blockerades med 5% fettfri torrmjölk i rumstemperatur i 30 min och inkuberades med primära antikroppar. Membranen tvättades och inkuberades med pepparrotsperoxidas-konjugerad sekundär antikropp. Signalen visualiserades med användning av förstärkt kemiluminescens (Amersham, Buckinghamshire, UK).
Cellmigration och Matrigel invasion assay
magcancer celler skördades med 0,05% trypsin innehållande 0,02% EDTA (Sigma-Aldrich), och suspenderades i RPMI vid en koncentration av 3 x 10 3 celler /brunn. Membranfilter (porstorlek: 8 pm) i engångs 96 brunnar kemotaxi kammare (Neuro Probe, Gaithersburg, MD) var förbelagda under 4 timmar med 5 mg /ml fibronektin vid rumstemperatur. Alikvoter (50 | il /brunn) av cellsuspensionen laddades in i de övre kamrarna, och 1% FBS infördes i den undre kammaren. Efter 24-h inkubation, var icke-migrerande celler bort från den övre kammaren med en bomullspinne; celler närvarande på den undre ytan av skäret färgades med Hoechst33342 (Sigma-Aldrich). Invasiva celler räknades under ett fluorescensmikroskop vid × 10 förstoring.
För Matrigel invasion assay, 3 x 104 celler /brunn såddes i den övre kammaren, som var belagd med Matrigel (5 mg /ml i kallt medium, BD Transduction Laboratories, Franklin Lakes, NJ, USA), och serumfritt medium innehållande 1% FBS eller kontrollvehikel sattes till den undre kammaren. Efter 24-h inkubation, var icke-migrerande celler avlägsnas från den övre kammaren med en bomullstopp, och celler som finns på den undre ytan av skäret färgades med Hoechst33342 (Sigma-Aldrich). Invasiva celler räknades sedan under ett fluorescensmikroskop vid x 10 förstoring.
Tissue microarrays, immunohistokemi, och tolkningen av resultaten Review, en halvautomatisk vävnad arrayer (Beecher Instruments, WI, USA) användes för att konstruera vävnads microarrays . Vi fick 3 vävnadskärnor, vardera 0,6 mm i diameter, från tumörvävnad tagna från GC patienter. Kärnor inte samlats in från mer invasiva framifrån eller centrala delarna av tumörerna. Objektglasen bakades vid 60 ° C under 30 min, avparaffinerades med xylen och sedan rehydratiseras. Sektionerna därefter nedsänkt i citrat antigenåtervinning buffert, microwaved för antigenåtervinning, behandlades med 3% väteperoxid i metanol för att släcka endogen peroxidasaktivitet, och inkuberades sedan med 1% bovint serumalbumin för att blockera icke-specifik bindning. Därefter inkuberades sektionerna med kanin-anti-Snail (Abcam, UK) över natten vid 4 ° C. Normalt kaninserum användes som en negativ kontroll. Efter tvättning vävnadssnitt behandlades med sekundär antikropp, motfärgades med hematoxylin, dehydrerades och monterades. Minst 500 tumörceller räknades. Procentandelen celler med Snail + kärnor uttrycktes i förhållande till det totala antalet tumörceller räknades. Kärn uttryck för Snail graderades genom att klassificera graden av positiv nukleär färgning som ≤50%, 50-75% eller ≥75%.
Kliniskt patologiska och överlevnadsanalys av magcancer patienter
Vi studerade en kohort av 314 GC patienter som var genomgick en gastrostomi med lymfkörtel dissektion vid Pusan ​​National University Hospital (PNUH) mellan 2005 och 2007. gruppen bestod av 218 män och 96 kvinnor med en medelålder på 58,3 år (intervall 25-83 år). Standardformalinfixerade och paraffininbäddade snitt erhölls från Department of Pathology, PNUH och National Biobank Korea, PNUH. Studien godkändes av Institutional Review Board. Ingen av patienterna erhöll preoperativ strålbehandling och /eller kemoterapi. Adjuvant kemoterapi baserad på 5-FU administrerades på patienter med stadium II, III och IV efter botande resektion. Vi bedömde flera kliniskt patologiska faktorer enligt den koreanska Standardiserad patologi rapport för Gastric Cancer, den japanska Klassificering av magcancer (3 rd Svensk utgåva), och den amerikanska kommittén för cancer Staging Manual (7 e upplagan), inklusive tumörstället, grov utseende och storlek, djup invasion, histologiska klassificering (dvs., intestinal eller diffus), och lymphovascular invasion [17-19]. Kliniskt utfall för varje patient följdes från och med dagen för kirurgi till dagen för dödsfall eller den 1 mars 2012. Uppföljnings perioder varierade från cirka 1 till 81,5 månader (genomsnitt 51,4 månader). Fall förlorade mot uppföljning eller död oavsett orsak annan än magcancer censurerades från analys överlevnaden. Kliniskt patologiska egenskaper analyserades med Students t
-test, den χ 2 test, eller Fishers exakta test för att testa för skillnader i Snail uttryck. Kumulativa överlevnads tomter erhölls med användning av Kaplan-Meier-metoden, och betydelse jämfördes med användning av log-rank test. Prognostiska faktorer identifierades med hjälp av Cox regressions stegvis metod (proportionell risk modell), justerat för patienternas ålder, kön, tumörstället, morfologisk typ (intestinal kontra diffus). Statistisk signifikans sattes vid P
< 0,05. Statistiska beräkningar utfördes med SPSS version 10.0 för Windows (SPSS Inc., Chicago, IL, USA).
CDNA microarray analys av GC vävnader baserade på Snail uttryck Review, en totalt 45 färska GC vävnader erhölls från National biobank Korea, PNUH och CNUH; godkännande erhölls från deras institutionella prövningsnämnder. Totalt RNA extraherades från de färska frysta vävnader med hjälp av en Mirvana RNA Isolation kit (Ambion Inc., Austin, TX). Fem hundra nanogram av total RNA användes för cDNA-syntes, följt av en amplifiering /märkningssteget (in vitro
transkription) med användning av Illumina TotalPrep RNA Amplification kit (Ambion) att syntetisera biotinmärkt cRNA. cRNA-koncentrationer mättes genom RiboGreen metoden (Quant-iT RiboGreen RNA analyskit; Invitrogen-Molecular Probes, ON, Canada) med användning av en Victor3 spektrofotometer (PerkinElmer, CT), och cRNA kvalitet bestämdes på en 1% agarosgel. Märkt, amplifierat material (1.500 ng per array) hybridiserades till Illumina HumanHT-12 BeadChips v4.0, i enlighet med tillverkarens instruktioner (Illumina, San Diego, CA). Array signaler har utvecklats av streptavidin-Cy3. Arrayer scannades med en Illumina iScan systemet. De microarray data som normaliserades med användning av kvantil normaliseringsmetoden i Illumina BeadStudio programvara. Uttrycksnivån för varje gen förvandlades till en logg 2 bas innan vidare analys. Excel främst användas för statistiska analyser. Genuttryck skillnader ansågs statistiskt signifikanta om P Hotel < 0,05; alla tester var 2-tailed. Kluster analyser genomfördes med användning av Cluster och Treeview [20]. Genen ontologi (GO) program (http:... //David ABCC ncifcrf gov /) användes för att kategorisera gener i undergrupper baserade på biologisk funktion. Fishers exakta test användes för att bestämma om proportionerna av generna i varje kategori skilde per grupp. GC vävnader ytterligare delas in i sådana med högre (≥75%) och lägre (< 75%) nivåer av Snail uttryck; differentiell genuttryck mellan grupperna identifierades. Primära microarray data finns tillgängliga i NCBI: s GEO (Gene Expression Omnibus) databas (http:.....? //Www NCBI NLM NIH gov /geo /query /ACC cgi acc = GSE38024).
Resultat
förordning om migration och invasion av gastric cancerceller genom Snail
Lentiviral-baserad RNA knockdown och överuttryck tillvägagångssätt användes för att bestämma snigel roll i invasionen och migrering av magcancer cellinjer. SNU216 och SNU484-celler som används i denna studie är etablerade gastric adenocarcinoma cellinjer från koreanska patienter. Dessa celler infekterades med en lentivirus uttrycker antingen icke-mål eller Snail
-targeted shRNAs för tysta. En PLKO lentivirusvektor som riktade Snail Mössor och en tom PLKO vektor användes för att framkalla Snail uttryck i SNU216 och SNU484 celler. Polyklonala stabila cellinjer valdes ut med hjälp puromycin. Snigel
expression bestämdes genom RT-PCR och Western blotting; stabil Snail
knockdown (sh-Snail) och Snail överuttryck cellinjer (OE-Snail) erhölls (fig 1). Figur 1 roll snigel i invasionen och migrering av magcancer cellinjer. A. SNU216 (övre panelen) och SNU484 (undre panelen) celler infekterades med lentivirus uttrycker antingen icke-mål shRNA (shNT
) eller snigel
shRNA dag 0, och sedan skördades på dag 7 efter infektion. Snigel
knockdown bestämdes genom RT-PCR och Western blotting; stabila cellinjer genererades för var och en av de cellinjer (sh-Snail). Tysta snigel
i SNU216 och SNU484 celler inducerade minskade migration och invasion. B. SNU216 (övre panel) och SNU484 (undre panelen) celler infekterades med lentivirus som uttrycker antingen en lentiviral PLKO vektor targeting Snail
eller en tom PLKO vektor (EV) på dag 0, och sedan skördades på dag 7 efter infektion . Överuttryck av Snail bestämdes genom RT-PCR och Western blotting; stabil cellinje genererades för var och en av de cellinjer (O /E-snigel). Snigel uttryck i SNU216 och SNU484 celler inducerade ökad migration och invasion. C. Snail överuttryck inducerades ökad mRNA-uttryck av VEGF
och MMP11
i SNU216 och SNU484-celler i realtids-RT-PCR-analys. Undre panelen indikerar representativa RT-PCR-siffror för VEGF
, MMP11
, snigel
och GAPDH
. Data visar medelvärdet ± SE av åtminstone 3 oberoende experiment. * Indikerar P Hotel < 0,05 med Students t
-testet.
Att bestämma Snail roller i magcancer cellinvasion, mätte vi kemotaktisk invasion av celler med Transwell-system med filter i förväg belagda med Matrigel. För att mäta migration av gastric cancerceller, analyserade vi cellmigration med hjälp av en Boyden kammarapparat. Tysta Snail Musik av shRNA inducerad minskad migration och invasion av SNU216 och SNU484 celler, som visas i figur 1A. I motsats till Snail
tystande resultat, inducerad överuttryck av Snail ökad migration och invasion av SNU216 och SNU484 celler, som visas i figur 1B. Överexpression av Snail var också förenad med ökad VEGF och MMP11 (Figur 1C).
Effekt av Snail överuttryck på tumör aggressivitet och GC patientöverlevnad
Positiv nukleär färgning för Snail vid nivåer av ≤50%, 50-75%, och ≥75% observerades hos 13,4% (42/314), 52,2% (164/314) och 34,4% (108/314), respektive, av de 314 GC patienter i immunohistokemisk analys. Snigel uttryckning noterades i intestinal och diffus typ av GC (Figur 2A, B). Snigel överuttryck (≥75% positivitet) signifikant korrelerad med tumörstorlek, brutto typ, djup av invasion, lymphovascular invasion, perineural invasion och lymfkörtel metastas (Tabell 1). Snigel uttryck var också förenad med ökad tumörstorlek (P
= 0,028) och grävts brutto typ (P Hotel < 0,001); och ökad tumör invasivitet, dvs högre T-steget (P
< 0,001) och närvaron av perineural invasion (P
< 0,001) och lymphovascular tumör emboli (P
= 0,002). Ökad lymfkörtel metastas var också relaterad till Snail uttryck (P
= 0,002) .I enlighet med ovanstående data visar det positiva sambandet mellan Snail uttryck och GC aggressivitet, snigel uttryck signifikant korrelerad med total överlevnad bland GC patienter (P
= 0,023) (Figur 2C). Ett linjärt förhållande observerades mellan ökad kärn uttryck för Snail och förkortad överlevnad (≤50%: 76,6 ± 2,7 månader, 50-75%: 68,5 ± 2,0 månader, ≥75%: 63,3 ± 2,8 månader). Snigel uttryck (≥75% positivitet) identifierades som en oberoende prediktor för dålig prognos hos 314 patienter med GC, justerat för ålder, kön, histologisk klassificering, och tumör plats, med hjälp av en Cox regressions proportionell riskmodell (P
= 0,033; Tabell 2). Figur 2 Snail uttryck i magcancer (GC) vävnadsprover och Kaplan-Meir tomter av den totala överlevnaden av 314 GC patienter. Snigel var mestadels uttryckt i kärnor av GC-celler (intestinala typen (A), och diffus typ (klackring) celler (B)) som ingår i vävnadsarrayprover. Vissa reaktiva fibroblaster visade också Snail kärn uttryck (förstoring: x 400). C. Kaplan-Meier-analys av total överlevnad av GC patienter baserat på Snail uttryck. Ett linjärt samband mellan ökad Snail kärn uttryck och kortare överlevnad sågs hos GC patienter (P
= 0,023). Log-rank test användes för att beräkna P
värden.
Tabell 1 Förhållandet mellan Snail uttryck och kliniskt patologiska egenskaper hos 314 patienter med magcancer
Antal patienter (N = 314) katalog
Snail Positivitet
pvalue
< 75%
≥75%
Ålder (år)
58,5 ± 10,6
59,1 ± 11,9
0,695
Sex
Man
218
143
75
0,996
Kvinna
96
63
33
Tumörstorlek storlek~~POS=HEADCOMP
≤4.0 cm
192
135
57
0,028 Hotel > 4,0 cm
122
71
51
plats
Övre /Mellanöstern
167
112
55
0,561
Lower
147
94
53
Invasion djup
T1
160
127
33 Hotel < 0,001
T2
41
26
15
T3
68
33
35
T4
43
19
24
Brutto typ
Förhöjda
77
51
26 Hotel < 0,001
Flat /deprimerad
131
105
26
Utgrävt
106
50
56
Histologisk typ
Intestinal
182
123
59
0,609
Diffusa
122
76
46
Blandad
10
7
3
Perineural invasion
negativ
202
150
52 Hotel < 0,001
Positiv
111
55
56
Lymphovascular emboli
Negativ
193
139
54
0,002
Positiv
120
66
54
Lymfkörtel metastaser
N0, N1
270
186
84
0,002
N2, N3
44
20
24
Tabell 2 Multivariat överlevnadsanalys med Cox regressionsmodell i 314 gastric cancer
Variabler
B
SE
HR (95% CI)
P
Age (≤59 kontra > 59) katalog -0,438
0,264
0,645 (0,385 till 1,082) Review 0,097
Kön (male kontra kvinnligt) katalog -0,037
0,267
0,963 (0,571 till 1,626) Review 0,889 Site (övre och mellersta kontra lägre) katalog 0,635
0,264
1,887 (1,126 -3,164) katalog 0,016
Lauren (intestinal vs diffus) katalog -0,537
0,263
0,585 (0,349 till 0,978) Review 0,041
Snail (≥75% jämfört med < 75 %) katalog -0,528
0,248
0,590 (0,363 till 0,958) Review 0,033
Obs: B, koefficient; HR, hazard ratio; CI, konfidensintervall.
Identifiering av genuttryck mönster som bygger på Snail uttryck med hjälp av cDNA microarrays
cDNA microarrays användes för att jämföra genuttrycksprofilerna av 45 GC exemplar. Vi identifierade 213 gener som var differentiellt uttryckta på betydande nivåer (P Hotel < 0,05) mellan GC prover med högre (≥75%) och lägre nivåer (< 75%) av Snail uttryck (tabell 3). Av dessa 213 gener, var 82 uppreglerat och 131 var nedreglerade i GC prover med högre nivåer (≥75%) av Snail uttryck. Vi använde hierarkisk klustring analys för att bedöma de 213 gener och 45 GC exemplar; övervakad klustring analys gav mönster för prover med högre och lägre nivåer av Snail uttryck klustrade i 2 olika grupper, med undantag för ett prov med högre nivåer av Snail uttryck (Figur 3). För att undersöka de biologiska funktioner som ingår i diskriminerande gener, genomförde vi en GO kategori analys. Elva gener i samband med reglering av cancercell-ECM vidhäftning (P Hotel < 0,021) och ECM protein reglering (P Hotel < 0,028, tabell 4). De flesta har varit inblandade i cancer. ONECUT1
, ADAMTS
, IFNAR2
, MSR1
och SORL1
påverka migration eller metastas, en process som involverar fastsättning av tumörceller till basalmembranet, nedbrytning av lokal bindväv, och penetrerings och migrering av tumörceller genom stroma [21-25] .table 3 Gener differentiellt uttryckt i GC-prover med högre nivåer av Snail expression
PROBE_ID
SYMBOL
NAME

Gener uppreglerade i prover med högre nivåer (≥75%) av Snail expression (P
< 0,05) katalog ILMN_2374449
SPP1
Utsöndrad fosfoprotein ett
ILMN_2337923
TPD52L1
Tumör protein D52 liknande en
ILMN_1679838
WBP5
WW domän bindande protein 5
ILMN_2078592
C6orf105
androgenberoende TFPI Självreglerande protein
ILMN_1714383
TPD52L1
Tumör protein D52 liknande en
ILMN_1674817
C1orf115
kromosom 1 öppna läsramen 115
ILMN_1813561
SCIN
Scinderin
ILMN_1759818
SORL1
Sortilin-relaterade receptor, L (DLR klass) A upprepningar som innehåller
ILMN_1745686
MFHAS1
malignt fibrösa histiocytom förstärkt sekvens en
ILMN_2060115
SORL1
Sortilin relaterad receptor, L (DLR klass) A upprepningar som innehåller
ILMN_2337263
PKIB
Proteinkinas kinas~~POS=HEADCOMP (cAMP -beroende, katalytisk) hämmare beta
ILMN_2173835
FTHL3
ferritin, tung polypeptid en pseudogen 3
ILMN_1791057
IFNAR2
Interferon (alfa, beta och omega) receptor 2
ILMN_1807114
LOC255620
Liknar unc-93-homolog B1 (C. elegans), avskrift variant 1 (LOC255620), mRNA
ILMN_1669393
GGT1
gammaglutamyltransferas en
ILMN_1685798
MAGEA6
melanomantigen familj A, 6
ILMN_3269395
GGT2
gammaglutamyltransferas 2 Review ILMN_1669833
SH2B2
sh2b adapter protein 2 Review ILMN_3238534
LOC100133817
Hypotetisk protein LOC100133817
ILMN_2099315
TRPM8
Transient receptor potential ning kanal, underfamiljen M, ledamot 8
ILMN_3298065
LOC729195
likhet med apikal tidigt endosomala glykoprotein
ILMN_1717726
FLJ43752
Lång intergena icke-proteinkodande RNA 336
ILMN_1670452
ANKRD20A1
ankyrin repeat domän 20 familj, medlem A1
ILMN_3201060
LOC100132655

hypotetiskt protein LOC100132655
ILMN_3282829
LOC727913
Liknar iduronat 2-sulfatas (Hunters syndrom) katalog ILMN_2339691
SYVN1
synovial apoptoshämmare 1 , synoviolin
ILMN_1785549
SLC30A2
Solute bärare familj 30 (zink transportör), medlem 2 Review ILMN_3191898
LOC100129630
Hypotetiskt LOC100129630
ILMN_1704204
LOC642204
ankyrin repeat domän innehållande protein 26 liknande
ILMN_1682280
LOC647753
hypotetiskt protein LOC647753
ILMN_3201944
LOC646438
Hypotetisk LOC646438
ILMN_2233314
SPANXA1
Sperm protein associerat med kärnan, X-bunden, en familjemedlem A1
ILMN_3305980
NS3BP
NS3BP
ILMN_1747850
CRIM2
Kielin /chordin liknande protein
ILMN_1700590
LOC645590
Liknar cAMP-beroende proteinkinas typ i-beta regulatorisk underenhet
ILMN_1766316
FLJ32679

Golgin-liknande hypotetiskt protein LOC440321
ILMN_1890741
Hs
0,552561
Pancreatic islet cDNA-klon hbt09690 3, mRNA-sekvens
ILMN_3308255
MIR33A

MicroRNA 33a
ILMN_1815716
LMLN
Leishmanolysin liknande (metallopeptidase M8 familj) katalog ILMN_1654945
DNMT3A
DNA (cytosin-5 -) - metyltransferas tre alfa
ILMN_2256050
SERPINA1
Serpin peptidas-hämmare, klad A (alfa-1 antiproteinase, antitrypsin), medlem 1
ILMN_1759487
EGFLAM
EGF-liknande, fibronektin typ III och laminin G-domänerna
ILMN_1760410
LOC653086
likhet med RAN-bindande protein 2-liknande en isoform 2 Review ILMN_1668969
MIXL1
Blanda parade liknande homeobox
ILMN_3279757
LOC100132532
hypotetiskt protein LOC100132532
ILMN_1715372
CAMKK1
Kalcium /calmodulin-beroende proteinkinas kinas 1, alfa
ILMN_1731370
Yang et al. Kim m.fl.. Alla författare läst och godkänt den slutliga manuskriptet.

• Airway cellularitet, lipid lastat makrofager och mikrobiologi magsaft och luftvägar hos barn med refluxesofagit
• Prognostisk betydelse för neutrofila lymfocyter förhållande och blodplättar lymfocyter förhållande hos patienter med avancerad magsäckscancer behandlas med FOLFOX kemoterapi