Padidėjusi sraigė yra susijęs su limfmazgių metastazių ir blogos prognozės pacientams, sergantiems skrandžio cancer

Padidėjusi sraigė yra susijęs su limfmazgių metastazių ir blogos prognozės pacientams, sergantiems skrandžio vėžiu
tezės
Background pervežimas epitelio-mezenchimos perėjimo ( EMT) vaidina svarbų vaidmenį navikų progresavimo ir invazijos. Sraigė yra žinomas reguliatorius EMT įvairių piktybinių navikų. Šis tyrimas tyrė sraigė vaidmenį skrandžio vėžio.
Metodai
Mes išnagrinėjo nutildė poveikį arba ekspresija sraigė naudojant LENTI-virusinė konstruktus skrandžio vėžio ląsteles. Imunohistocheminis analizė audinių mikrogardelių iš 314 pacientų, sergančių skrandžio adenokarcinoma (GC) buvo siekiama nustatyti sraigė klinikos ir prognostinę reikšmę. Skirtumas genų ekspresijos 45 GC bandinių su sraigė raiškos buvo tiriama naudojant kDNR mikrogardeliq analizę.
Rezultatai
Triukšmo slopinimo sraigių iki shRNR sumažėjo invazija ir migracija GC ląstelių linijų. Priešingai, sraigė raiška padidėjo invazija ir migracijos skrandžio vėžio ląsteles, laikantis padidėjo VEGF ir MMP11. Sraigė raiška (≥75% teigiamas atominės dėmių atsiradimas) taip pat buvo reikšmingai susijęs su naviko progresavimo (p
< 0,001), limfmazgiuose metastazių (p
= 0,002), lymphovascular invasion (p
= 0,002), ir perineurinis invazija (p
= 0,002) ir 314 GC pacientų, ir su trumpesniu išlikimo (P, pervežimas = 0,023). kDNR Mikrogardelė analizė atskleidė, 213 diferencijuotai išreikštus genus GC audinių su sraigė raiškos, įskaitant genų, susijusių su metastazėmis ir invazijos.
sudarymo
sraigė ženkliai paveikia invazijos /migracijos gebėjimas GCS, taip pat gali būti naudojamas kaip prognozavimo biologinis žymuo už prognozė arba agresyvumas gCS.
Raktiniai žodžiai
Skrandžio adenokarcinoma sraigė Limfmazgių metastazės išgyvenimo faktai
epitelio-mezenchimos perėjimo (EMT), plėtros procesui, kuriuo epitelio ląstelės sumažinti tarpląstelinį sukibimą ir įgyti myofibroblastic funkcijas, yra labai svarbus naviko progresavimo [1-3]. Per EMT, reikšmingi pokyčiai, įskaitant downregulation epitelio žymenų, pavyzdžiui, E-cad, perkėlimas beta-kateninai (ty disociacija membraninis beta-kateninai ir perkėlimo į branduolinės dėtuve) ir ląstelę mezenchiminių žymenų, tokių kaip vimentin ir N -cadherin [3-6]. EMT yra sukeliama represijų E-cad išraiška pagal EMT reguliavimo, pavyzdžiui, sraigė, šliužas, ir ir pasukti. Sraigė šeimos cinko pirštų transkripcijos repressors tiesiogiai malšina El cad in vitro, parsisiųsti ir in vivo,
per tarp jų COOH-terminalo regione ir 5 sąveika "- CACCTG-3 " seka į E-cad rengėjas [7-9]. Sraigė Pranešama svarbus keletu karcinoma, įskaitant nesmulkialąstelinis plaučių karcinoma, kiaušidžių karcinoma, karcinoma urotelinis ir kepenų ląstelių karcinoma [10-13]. Tyrimai taip pat naudojamas Imunohistocheminiais analizė rodo klinikinė reikšmė sraigė raiškos skrandžio adenokarcinoma (GC) [14, 15]. Tačiau keli pranešimai apie sraigė vaidmenis GC įtraukė klinikos, prognostinė ir funkcionalus in vitro
analizuoja taip pat genų ekspresijos rezultatus. Todėl vertinamas sraigė poveikį invazijos /migruojančių gebėjimą skrandžio vėžio ląstelių linijų, taip pat tyrė sraigė galimybę naudojamas kaip prognozavimo žymeklis vertinant prastą prognozę arba naviko agresyvumą GC pacientams. Mes taip pat įvertino genų ekspresijos šabloną 45 GC audinių, sraigė raiškos, naudojant kDNR mikrogardelių.
Metodai
shRNR lentivirus tarpininkaujant nuslopinami ir raiškos sraigių skrandžio vėžio ląstelių
žmogaus skrandžio vėžio ląstelių linijas SNU216 ir SNU484 buvo gauti iš Korėjos ląstelių linijos bankas (KCLB) ir buvo patvirtintas DNR profiliavimo. Šios ląstelės kultivuojamos RPMI1640 terpėje su 10% vaisiaus galvijų serumo (FBS), 100 V /ml penicilino ir 100 mikrogramai /ml streptomicino (hyClone, Ogden, UT). Visos ląstelės buvo gydomi 37 ° C temperatūroje 5% CO 2. Lentiviruso pagrindu RNR nokdaunas ir raiška buvo naudojami triukšmo slopinimo ir padidėjusią sraigė. Lentiviruses išreiškiantys arba netikslinių ar sraigė
-targeted shRNAs buvo naudojami triukšmo slopinimo; PLKO lentiviruso vektorius orientacija sraigė
arba tuščią PLKO vektorių buvo naudojami Padidėjusi sraigė į SNU216 ir SNU484 ląsteles. Lentivirus atsargos buvo gaminamos naudojant Virapower ™ lentiviruso pakavimo mišinį naudojant 293FT ląstelių liniją pagal gamintojo protokolu (Invitrogen, Carlsbad, Kalifornija). SNU216 ir SNU484 ląstelės auginamos iki 50% santakoje buvo inkubuojamos 24 h esant 1: 1 praskiedus viruso: terpės su 5 g /ml polibrenui. Po 24-H atkūrimo laikotarpiu visiškai žiniasklaidos be virusu, polikloniniai stabilios ląstelių linijos buvo atrinkti ir prižiūrimi žiniasklaidos, kuriuose yra 5 mikrogramai /ml puromicino. Triukšmo slopinimo arba padidėjusią sraigė nulėmė RT-PGR ir Imunoblotingo.
Realaus laiko PGR analizė VEGF
, MMP11
ir sraigė
skrandžio vėžio ląstelių
Bendras ląstelių RNR buvo išgauta naudojant TRIzol metodą (Sigma-Aldrich, St Louis, Misūrio valstija, JAV). Dėl RT-PGR analizei, 2-mikrogramo mėginiai RNR buvo atliktas sintezei 200 U MMLV atvirkštinės transkriptazės ir 0,5 mikrogramų oligo (dT) -15 gruntas (Promega Madison, WI, JAV). Kiekybinis realaus laiko PGR buvo atliekama su Rotorius Gene ™ sistema (QIAGEN, Hilden, Vokietija), naudojant AccuPower 2 × Greenstar qPCR Master Mix (Bioneer, Daejeon, Pietų Korėja). kDNR 1 įxL Reakcijos mišinys buvo papildyta 0.5 U GoTaq DNR polimerazės (Promega) ir 10 pmol kiekvieno iš šių pojūčių ir antisensines pradmenis: GAPDH
5 '- TCCATGACAACTTTGGTATCG-3 ', 5 '- TGTAGCCAAATTCGTTGTCA-3 '; Sraigė
5 '- CTTCCTCTCCATACCTG-3 ', 5 '- CATAGTTAGTCACACCTCGT-3 '; VEGF
5 '- TTGCTGCTCTACCTCCACCA-3 ', 5 '- GCACACAGGATGGCTTGAA-3 '; MMP11
5 '- CTTGGCTGCTGTTGTGTGCT-3 ', 5-AGGTATGGAGCGATGTGACG-3 '. Šilumos dviračiu profilis buvo: denatūracijos 30 s, esant 95 ° C, atkaitinimo 30 s esant 52 ° C (priklausomai nuo pradmenų, naudojamų), ir išplėtimas 30 s 72 ° C temperatūroje. Pusiau-kiekybinio įvertinimo ekspresijos lygių, 30 ciklai, kuriuose naudojami už kiekvieną PGR reakciją. PGR produktai buvo dydis-frakcionuotas apie 1,0% Etidžio bromidas /agarozės gelius ir kiekybiškai pagal ultravioletinėje šviesoje. Slenkstinis ciklas (CT) yra apibrėžiamas kaip frakcinės ciklų skaičiaus, kuriam esant fluorescencija eina fiksuotą ribą, didesnę kaip bazinės linijos. Santykinis genų ekspresijos buvo įvertintas naudojant vidutinę CT reikšmę kiekvieno nuokrypio mėginio minus vidutinės nuokrypio CT vertės GAPDH
. Skirtumai tarp kontrolės (tuščia vektorių) ir eksperimentinėje grupėje (užsikrėtę lentiviruso) buvo apskaičiuojamas pagal formulę 2 - ([△ KT Lenti] - [△ CT kontrolės]) ir išreikštas kartų kaitos išraiška pagal lyginamasis riba ciklas metodas (2- △△ KT) [16].
Imunoblotingo
Ląstelės buvo nukirsta ir sutriktų lizės buferiniame tirpale (1% Triton X-100, 1 mM EGTA 1mm EDTA, 10mm Tris-HCl, pH 7,4 ir proteazės inhibitorių). Ląstelių nuolaužų buvo pašalintas centrifuguojant 10000 × g
10 min, esant 4 ° C temperatūroje. Gautos supernatantų, buvo išspręstas 12% SDS-PAGE, esant denatūruojami redukcinės sąlygos ir perkelti ant nitroceliuliozės membranos. Membranos buvo blokuotos 5% ne-riebalų sauso pieno kambario temperatūroje 30 min ir inkubuojami su pirminių antikūnų. Membranos buvo plaunamos ir inkubuojami su krienų peroksidazės-konjuguoto antrinio antikūno. Signalas buvo ryškinamos naudojant sustiprintą chemiliuminescenci (Amersham, Buckinghamshire, Jungtinė Karalystė).
Ląstelių migraciją ir Matrigel invazija tyrimas
skrandžio vėžio ląstelių buvo surinktos su 0,05% tripsino, kurių sudėtyje yra 0,02% EDTA (Sigma-Aldrich), ir sustabdomas RPMI esant 3 × 10 3 ląstelių koncentracija /pat. Membraniniai filtrai (porų dydis: 8 mkm) vienkartiniuose 96 duobučių chemotaksio kamerose (neuro Zondo, Gaithersburg, MD) iš anksto buvo dengtos 4 h su 5 mg /ml fibronektino kambario temperatūroje. Mėginiai (50 mikrol /duobutėje) iš ląstelių suspensijos buvo sutalpinama į viršutinių kamerų, ir 1% FBS buvo pakrauta į apatinę kamerą. Po 24-H inkubacijos ne migravimas ląstelės buvo pašalintas iš viršutinio kameroje su medvilnės tamponu; ląstelės, esantį ant apatinio paviršiaus intarpo buvo tamsintas su Hoechst33342 (Sigma-Aldrich). Invaziniai ląstelės buvo skaičiuojamas pagal fluorescencijos mikroskopu, kurio × 10 priartinimas.
Dėl Matrigel invazijos tyrime, 3 × 104 ląstelių /gerai buvo pasėjamos viršutiniame kambaryje, kuris buvo padengtas su Matrigel (5 mg /ml šalto terpėje, BD transdukcijos laboratorijos, Franklin ežerų, NJ, JAV), ir serumo neturinčioje terpėje, kuriame yra 1% FBS arba kontrolė transporto priemonė buvo įtraukta į apatinę kamerą. Po to, kai 24-h inkubacijos, ne migruoja ląstelės buvo pašalinimas iš viršutinio kameroje su medvilnės tamponu, ir ląstelių, esantį ant apatinio paviršiaus intarpo buvo tamsintas su Hoechst33342 (Sigma-Aldrich). tada Invazinės ląstelės buvo skaičiuojami pagal fluorescencijos mikroskopu × 10 priartinimas.
Audinių mikrogardelių, imunohistocheminis, ir rezultatų aiškinimas
pusiau automatinis audinių arrayer (Beecher įrankiai, WI, JAV) buvo naudojamas statyti audinių mikrogardelių , Gavome 3 audinių ritinių, kiekvienas 0,6 mm skersmens, nuo naviko blokų, paimtų iš GC pacientams. Ritiniai nebuvo renkami iš daugiau invazinių priekinės ar centrinių sričių navikų. Skaidrės kepdavo 60 ° C temperatūroje 30 min, deparaffinized su ksileno, tada rehidrataciją. Sekcijos vėliau buvo panardintas į citrato antigenas išėmimą iš buferinio tirpalo, microwaved antigeno gavimą, gydomi 3% vandenilio peroksido tirpalą metanolyje numalšinti endogeninio peroksidazės aktyvumo, ir tada inkubuojami su 1% albumino galvijų serumo blokuoti nespecifinį. Po to, kad dalys buvo inkubuotos su triušio anti-sraigė (Abcam, Jungtinė Karalystė) per naktį 4 ° C temperatūroje. Normalus triušis serumo buvo naudojamas kaip neigiama kontrolė. Išplovus audinio skyriai buvo gydomi antrinio antikūno, counterstained hematoksilinu, dehidratuoti, ir sumontuoti. Ne mažiau kaip 500 naviko ląstelės buvo skaičiuojami. Ląstelių procentas su sraigė + branduolių buvo išreikštas lyginant su viso naviko ląstelių skaičiuojami. Branduolinė išraiška sraigė buvo rūšiuojami pagal klasifikuojant teigiamą branduolinės dažymo mastu kaip ≤50%, 50-75%, arba ≥75%.
Klinikos ir išgyvenamumo analizė skrandžio vėžiu pacientams
Mes studijavo 314 GC kohortos pacientai, kuriems kiekvienas patyrė gastrostomija su limfmazgių skrodimo metu Pusano nacionalinio universiteto ligoninės (PNUH) tarp 2005 ir 2007 m grupė, kurią sudaro 218 vyrų ir 96 moterų, kurių vidutinis amžius 58,3 metų (diapazonas, 25-83 metų). Standartinė formalinu fiksuotų ir parafino įterptųjų skyriai buvo gautas patologijos PNUH departamento ir Nacionalinės biobanków Korėjos, PNUH. Tyrimas patvirtino institucinių ekspertizės valdyba. Nė vienas iš pacientų gautos priešoperacinė radioterapija ir /arba chemoterapija. Pagalbinis chemoterapija remiantis 5-FU buvo skiriamas pacientams su etapais II, III ir IV po radikalių rezekcija. Mes įvertino keletą klinikos veiksnius pagal Korėjos Standartinis patologijos ataskaitos skrandžio vėžys, Japonijos klasifikatoriaus Skrandžio vėžio (3 RD Anglų leidimas), ir Amerikos Jungtinis komitetas vėžio Sustojimo vadovas (7 -asis leidimas), įskaitant auglio vietą, bendrojo išvaizdą ir dydį, gylį invazijos histologinis klasifikaciją (ty, žarnyno arba pasklidųjų taršos) ir lymphovascular invazija [17-19]. Klinikinių tyrimų rezultatų kiekvienam pacientui buvo po nuo operacijos dienos iki mirties ar kovo 1 dienos 2012. Tęstinė laikotarpiai svyravo nuo maždaug 1 iki 81,5 mėnesių (vidutinė, 51.4 mėnesių). Atvejai pralaimėjo tolesnių ar mirties dėl bet kokios priežasties, išskyrus skrandžio vėžio buvo cenzūruojamos iš išgyvenamumas analizė. Klinikos funkcijos buvo analizuojami naudojant Stjudento t
-test, The χ 2 testus, ar tiksli Fišerio testas testas skirtumų sraigė išraiška. Suvestiniai išgyvenimo sklypai buvo gauti naudojant Kaplan-Meier metodą, ir reikšmė buvo palyginti naudojant log-rank testą. Prognostiniai veiksniai buvo nustatyti naudojant Cox regresijos pakopinis metodas (proporcingas rizikos analize), pakoreguota dėl pacientų amžiaus, lyties, auglio vietą, morfologinis tipas (žarnyno, palyginti su pasklidosios). Statistinis reikšmingumas buvo nustatytas P
< 0,05. Statistiniai skaičiavimai buvo atlikti su SPSS 10.0 versiją Windows (SPSS Inc., Chicago, IL, JAV).
KDNR mikrogardeliq analizę GC audinių remiantis sraigė raiškos
A 45 šviežių GC audiniuose viso buvo gautos iš nacionalinio biobanków Korėjos, PNUH ir CNUH; patvirtinimas buvo gautas iš jų institucinių peržiūros lentos. Iš viso RNR buvo išskirta iš šaldytos audinių naudojant mirVana RNR išskyrimas Kit (Ambion Inc., Ostinas, TX). Penkis šimtus nanogramų, kurių bendra RNR buvo naudojamas sintezei, o po to amplifikacijos /ženklinimo pakopa (in vitro
transkripcijos), naudojant "Illumina TotalPrep RNR amplifikacijos rinkinį (Ambion), kad sintetinti biotino žymėto Crna. Juodos koncentracija buvo matuojama RiboGreen metodą (Quant-IT RiboGreen RNR tyrimas rinkiniu; INVITROGEN molekulinės zondai, ON, Kanada), naudojant Victor3 spektrofotometru (PERKINELMER, KT), ir Juodos kokybė buvo nustatytas 1% agarozės gelyje. Paženklinti, papildyta medžiaga (1500 ng už masyvo) buvo kryžminosi į ILLUMINA HumanHT-12 BeadChips v4.0, pagal gamintojo nurodymus (ILLUMINA, San Diegas, CA). Array signalai sukūrė streptavidino-Cy3. Masyvai nuskaityta su Illumina iScan sistema. Mikrogardeliq duomenys buvo normalizuotas naudojant Kvantas normalizavimo metodą Illumina BeadStudio programinės įrangos. Sąvoka lygis kiekvieno geno buvo pertvarkyta į žurnalą 2 bazę prieš tolesnei analizei. "Excel" pirmiausia buvo naudojami statistinei analizei. buvo laikomi statistiškai reikšmingas, kai p
<genų ekspresijos skirtumus; 0,05; Visi testai buvo 2-tailed. Klasterio analizė buvo atliekama naudojant Grupių ir TREEVIEW [20]. Genas ontologija (GO) programa ( "http:... //David abcc ncifcrf valst /) buvo naudojamas kategorijas genus į pogrupius remiantis biologinės funkcijos. Fišerio tikslusis testas buvo siekiama nustatyti, ar genų kiekvienoje skyrėsi grupės kategorijoje proporcijas. GC audiniai buvo toliau skirstomi į tuos, su aukštuoju (≥75%) ir apatinės (< 75%) lygių sraigė išraiška; buvo nustatyta skirtumas genų ekspresijos tarp grupių. Pirminiai mikrogardeliq duomenys yra prieinami ncbi anketa GEO (genų ekspresijos Omnibus) duomenų bazė ( "http:.....? //Www ncbi NLM NIH valst /GEO /užklausos /ACC CGI acc = GSE38024).
rezultatai
reglamentas migracijos ir invazijos skrandžio vėžio ląstelių sraigė
lentiviruso įsikūrusio RNR triuškinantis ir raiškos būdai buvo naudojami, siekiant nustatyti sraigė vaidmenį invazijos ir migracijos skrandžio vėžio ląstelių linijas. SNU216 ir SNU484 ląstelės, naudojamos šiame tyrime yra nustatytos skrandžio adenokarcinoma ląstelių linijų iš Korėjos pacientams. Šios ląstelės buvo užsikrėtę lentiviruso išreiškiamas arba netikslinių ar sraigė
-targeted shRNAs dėl triukšmo slopinimo. PLKO lentiviruso vektorius, kad tikslingai sraigė parsisiųsti ir tuščiu PLKO vektorius buvo naudojami siekiant didesnio sraigė raiška į SNU216 ir SNU484 ląsteles. Polikloniniai stabilios ląstelių linijos buvo atrinkti naudojant puromicino. Sraigė
išraiška lėmė RT-PGR ir Imunoblotingo; stabilią sraigė
triuškinantis (SH-sraigė) ir Sraigė raiškos ląstelių linijas (OE sraigė) buvo gauti (1 paveikslas). 1 pav vaidmuo sraigė į invazijos ir migracijos skrandžio vėžio ląstelių linijas. A. SNU216 (viršutinis skydelis) ir SNU484 (apatinė panelė) ląstelės buvo užsikrėtę lentiviruses išreiškiančius arba netiksliniams shRNR (shNT
) arba sraigė
shRNR nuo 0 dieną, ir tada nuimamas nuo dienos 7 po užsikrėtimo. Sraigė
nokdaunas nulėmė RT-PGR ir Imunoblotingo; stabilios ląstelių linijos buvo generuojamas pagal kiekvieną iš ląstelių linijų (SH-sraigė). Triukšmo slopinimo ir sraigė
SNU216 ir SNU484 ląstelių sukeltas migracijos ir invazija sumažėjo. B. SNU216 (viršutinis skydelis) ir SNU484 (apatinė panelė) ląstelės buvo užsikrėtę lentiviruses išreiškiančius arba lentiviruso PLKO vektorių taikymo sraigė
arba tuščią PLKO vektorių (EV) nuo 0 dieną, ir tada nuimamas nuo dienos 7 po užsikrėtimo , Iš sraigė raiškos buvo nustatomas pagal RT-PGR ir Imunoblotingo; stabili ląstelių linija tipams buvo generuotas kiekvienas iš ląstelių linijų (O /E-sraigių). Sraigė ekspresija SNU216 ir SNU484 ląstelių sukeltas padidėjęs migracija ir invazija. C. sraigė raiškos sukeltas padidėjęs iRNR išraišką VEGF
ir MMP11
SNU216 ir SNU484 ląstelės realaus laiko AT-PGR analizei. Žemutinė skydelis rodo atstovybes AT-PGR skaičiai, VEGF
, MMP11
, sraigė
ir GAPDH
. Duomenys rodo, vidurkis ± SE ne mažiau kaip 3 nepriklausomų eksperimentų. * Nurodo P
< 0,05 iki Stjudento t
-test.
Norėdami nustatyti sraigė vaidmenis skrandžio vėžio ląstelių invazija, mes matuojamas chemotaktinį įsiveržimas ląstelių naudojančių Transwell sistemą su filtrais anksto padengtos Matrigel. Norint išmatuoti migracijos skrandžio vėžio ląsteles, mes tiriami ląstelių migraciją naudojant Boyden kameros aparatą. Triukšmo slopinimo ir sraigė
pagal shRNR sukeltas sumažėjo migracija ir invazija SNU216 ir SNU484 ląsteles, kaip parodyta 1a paveiksle. Skirtingai Sraigė
triukšmo slopinimo rezultatus, padidėjusią sraigė sukeltas padidėjęs migracija ir invazija SNU216 ir SNU484 ląsteles, kaip parodyta 1B pav. Padidėjusi sraigė taip pat buvo susijęs su padidėjusia VEGF ir MMP11 (1c pav.)
Poveikis sraigė raiškos apie naviko agresyvumą ir GC pacientų išgyvenimo pervežimas Teigiamas branduolinės dažymą už sraigė prie lygių ≤50%, 50-75%, ir ≥75% buvo stebimas 13,4% (42/314), 52,2% (164/314) ir 34,4% (108/314), atitinkamai, iš 314 GC pacientų imunohistocheminio analizė. Sraigė išraiška buvo pažymėta žarnyno ir difuzinio tipo GKS (2A pav B). Sraigė raiška (≥75% pozityvumo) koreliavo su naviko dydis, bendrojo tipo, gylio invazijos, lymphovascular invazijos, perineurinis invazijos, ir limfmazgių metastazių (1 lentelė). Sraigė raiška taip pat buvo susijęs su padidėjusiu naviko dydis (P
= 0,028) ir iškasta bruto tipą (P
< 0,001); ir padidėja naviko invazyvumas, t.y., didesnis T etapas (P
< 0,001) ir perineurinis invazijos buvimas (P
< 0,001) ir lymphovascular navikas embolijos, (P
= 0,002). Padidėjęs limfmazgis metastazės taip pat buvo susijęs su sraigė raiškos (p = 0,002 pervežimas) .Be pagal pirmiau pateiktų duomenų, rodančių teigiamą ryšį tarp sraigė raiškos ir GC agresyvumo, sraigė raiška patikimai koreliavo su bendro išgyvenamumo tarp GC pacientų (p
= 0.023) (2C pav.) Tiesinė priklausomybė buvo pastebėta tarp padidėjusio branduolinio išraiška sraigė ir sutrumpintas išlikimo (≤50%: 76,6 ± 2,7 mėnesių; 50-75%: 68,5 ± 2,0 mėnesių; ≥75%: 63.3 ± 2.8 mėnesių). Sraigė raiška (≥75% pozityvumo) buvo identifikuojamas kaip savarankiškas prognozuoti prastos prognozės 314 pacientams, sergantiems GC, pakoreguota pagal amžių, lytį, histologinis klasifikacijos, o auglio vietą, naudojant Cox regresijos proporcingos rizikos modelį (P
= 0,033; 2 lentelė). 2 pav sraigė išraiška skrandžio adenokarcinoma (GC) audinių mėginiai ir Kaplano-Meir sklypų bendro išgyvenamumo 314 GC pacientams. Sraigė daugiausia buvo išreikštas branduolių GC ląstelių (žarnyno tipas (A) ir pasklidųjų taršos tipas (Signet žiedas) ląstelės (B) taisyklė) įtraukta į audinių masyvo egzempliorių. Kai reaktyvinės fibroblastai taip pat parodė, sraigė atominės išraiška (Didinimas: × 400). C. Kaplan-Meier analizė ir bendro išgyvenamumo GC pacientų pagrįstų sraigė išraiška. Tiesinė priklausomybė tarp padidėjusio sraigė branduolinės saviraiškos ir trumpesnį išlikimo buvo pastebėtas tarp GC pacientų (p
= 0,023). Log-rank testas buvo naudojamas apskaičiuojant P
vertybes.
1 lentelė Sąryšis tarp sraigė saviraiškos ir klinikos ypatumus 314 pacientams, sergantiems skrandžio vėžiu
Pacientų skaičius (n = 314)

sraigė Pozityvumas
pvalue
< 75%
≥75%
Amžius (metai)
58,5 ± 10,6
59,1 ± 11,9
0,695
seksas
Vyras
218
143
75
0,996
Moteris
96
63
33
naviko dydis
≤4.0 cm
192
135
57
0,028
> 4,0 cm,
122
71
51
kur
Viršutinė /Artimųjų
167
112
55
0,561
Žemutinė
147
94
53
invazija gylis
t1
160
127
33
< 0.001
T2
41
26
15
T3
68
33
35
T4
43
19
24
Pilna tipas
Padidėjęs
77
51
26
< 0.001
Butas /depresija
131
105
26
Iškastas
106
50
56
histologinio tipo
Žarnų
182
123
59
0.609
Difuzinė
122
76
46
Mišrūnė
10
7
3
perineurinis invazijos
Neigiama
202 pervežimas 150
52
< 0.001
teigiamą
111
55
56
Lymphovascular embolijos
Neigiama
193 pervežimas 139 pervežimas 54
0,002
Teigiamas
120
66
54
Limfmazgių metastazės
N0, N1
270
186
84
0,002
N2, N3
44
20
24
2 lentelė daugiamatė išgyvenamumo analizė su Cox regresijos modelį 314 skrandžio vėžio
Kintamieji
B
VĮ
HR (95% PI)
P
amžius (≤59 palyginti > 59)
-0.438
0,264
0,645 (0.385-1.082)
0.097
Lytis (Vyras prieš moterų)
-0.037
0,267
0,963 (0.571-1.626)
0,889 Svetainės (viršutinę ir vidurinę palyginti mažesnis)
0.635
0,264
1,887 (1.126 -3,164)
0,016
Lauren (žarnyno vs difuzinės)
-0.537
0,263
0,585 (0.349-0.978)
0,041
sraigė (≥75%, palyginti su < 75 %)
-0.528
0,248
0.590 (0.363-0.958)
0.033
Pastaba: B, koeficientas; HR rizikos santykis; PI, pasikliautinasis intervalas.
Identifikavimas genų išraiškos būdus, remiantis sraigė raiškos naudojant kDNR mikrogardelių
kDNR mikrogardelių buvo naudojamas palyginti genų ekspresijos profilius 45 GC egzempliorių. Mes nustatė 213 genų, kurie buvo skirtingai išreikštas itin didelis (p
< 0,05) tarp GC bandinių su aukštojo (≥75%) ir žemesnio lygio (< 75%) sraigė išraiškos (3 lentelė). Iš šių 213 genų, 82 buvo aktyvinama ir 131 buvo downregulated į GC bandinių su aukštesnio lygio (≥75%) Iš sraigė išraiška. Mes naudojome hierarchinę grupavimo analizę, siekiant įvertinti 213 genus ir 45 GC egzemplioriai; prižiūrimas grupavimas analizė davė modelius mėginių aukštesnio ir žemesnio lygio sraigė išraiškos sugrupuotos į 2 atskiras grupes, išskyrus vieną mėginio aukštesnio lygio sraigė išraiškos (3 paveikslas). Ištirti biologines funkcijas dalyvauja diskriminuojančio genų, mes atlikome GO kategorijos analizę. Vienuolika genai buvo susiję su reguliavimo vėžio ląstelių ECM sukibimą (p
< 0,021) ir ECM baltymų (P
< 0,028, 4 lentelę). Dauguma buvo susijęs vėžys. ONECUT1
, ADAMTS
, IFNAR2
, MSR1
ir SORL1
įtakos migracijai arba metastazes, procesas, kuris apima prisirišimą vėžinių ląstelių į pamatinės membranos, degradaciją vietos jungiamojo audinio ir skverbtis ir migracijos naviko ląstelių per stromos [21-25] .table 3 genai skirtingai išreikštas GC egzempliorių su aukštesnio lygio sraigė išraiškos
PROBE_ID
SIMBOLIS
PAVADINIMAS

genai aktyvinama egzemplioriais su aukštesniais lygiais (≥75%) iš sraigė išraiškos (p
< 0,05)
ILMN_2374449
SPP1
sekretuojamą fosfoproteinu 1
ILMN_2337923
TPD52L1
naviko baltymų D52-kaip 1
ILMN_1679838
WBP5
WW domenas surišantis baltymas 5
ILMN_2078592
C6orf105
androgenų priklausomas TFPI -regulating baltymų
ILMN_1714383
TPD52L1
naviko baltymų D52-kaip 1 ILMN_1674817
C1orf115
Chromosomų 1 atviras skaitymo rėmelis 115
ILMN_1813561
SCIN
Scinderin
ILMN_1759818
SORL1

Sortilin susijusios receptorių, L (DLR klasė) A kartojasi, kuriuose
ILMN_1745686
MFHAS1

Piktybinis pluoštinė histiocytoma papildyta seka 1
ILMN_2060115
SORL1
Sortilin susijusių receptorių, L (DLR klasė) A kartojasi, kuriuose
ILMN_2337263
PKIB

baltymų kinazės (cAMP -dependent, katalizinio) inhibitorius beta
ILMN_2173835
FTHL3
feritinas, sunkiųjų polipeptidas 1 pseudogene 3
ILMN_1791057
IFNAR2
interferonas (alfa, beta ir omega) receptorių 2
ILMN_1807114
LOC255620
Panašus į UNC-93 homologą B1 (C elegans), stenograma 1 variantas (LOC255620), iRNR
ILMN_1669393
GGT1
Gama gliutamiltransferazės 1
ILMN_1685798
MAGEA6
Melanomos antigenas šeimos A 6
ILMN_3269395
GGT2
Gama gliutamiltransferazės 2
ILMN_1669833
SH2B2
SH2B adapteris baltymas 2
ILMN_3238534
LOC100133817
Hipotetinis baltymų LOC100133817
ILMN_2099315
TRPM8
Praeinantis receptorių potencialas katijonas kanalas, pošeimio, M, narys 8
ILMN_3298065
LOC729195
Panašus į viršūninio anksti endosomal glikoproteino
ILMN_1717726
FLJ43752
Rimta intergenic ne baltymų kodavimo RNR 336
ILMN_1670452
ANKRD20A1
Ankyrin Pakartokite domenas 20 šeimos narys A1
ILMN_3201060
LOC100132655

hipotetinis baltymų LOC100132655
ILMN_3282829
LOC727913
Panašus į iduronato 2-sulfatazės (medžiotojas sindromas)
ILMN_2339691
SYVN1
sinovinio apoptozė inhibitoriaus 1 , synoviolin
ILMN_1785549
SLC30A2
tirpinio vežėjas šeima 30 (cinko transporteris) narys 2
ILMN_3191898
LOC100129630
Hipotetinis LOC100129630
ILMN_1704204
LOC642204
Ankyrin Pakartokite domenų, kurių sudėtyje yra baltymų 26-kaip pervežimas ILMN_1682280 pervežimas LOC647753 pervežimas pervežimas hipotetinis baltymų LOC647753 pervežimas ILMN_3201944 pervežimas LOC646438 pervežimas pervežimas hipotetinis LOC646438
ILMN_2233314
SPANXA1
Spermatozoidų baltymų susijęs su branduolio, su X chromosoma susijusi, šeimos narys A1
ILMN_3305980
NS3BP
NS3BP
ILMN_1747850
CRIM2
Kielin /chordin panašus baltymas
ILMN_1700590
LOC645590
panašus į cAMP priklausoma baltymų kinazės I tipo beta reguliavimo subvieneto
ILMN_1766316
FLJ32679

Golgin-kaip hipotetinis baltymų LOC440321
ILMN_1890741
Hs
0,552561
Kasos salelių kDNR klonas hbt09690 3, iRNR sekos
ILMN_3308255
MIR33A

MicroRNA 33a
ILMN_1815716
LMLN
Leishmanolysin panašaus (metallopeptidase M8 šeimos)
ILMN_1654945
DNMT3A
DNR (citozinu-5 -) - metiltransferazė 3 alfa
ILMN_2256050
SERPINA1
serpino peptidazės inhibitorius, virulentiškumo A (alfa-1 antiproteinase, antitripsino) narys 1
ILMN_1759487
EGFLAM
EGF kaip, fibronektino III tipo ir lamininas G domenai
ILMN_1760410
LOC653086
panašus į RAN surišančio baltymo 2-kaip 1 izoformos 2
ILMN_1668969
MIXL1
Sumaišykite suporuotas-kaip homeozinis genas
ILMN_3279757
LOC100132532
Hipotetinis baltymų LOC100132532
ILMN_1715372
CAMKK1

Kalcio /kalmodulino priklausoma baltymų kinazės kinazės 1, alfa
ILMN_1731370
Yang ir kt. Kim ir kt. Visi autoriai skaityti ir patvirtino galutinį rankraštį.

• Kvėpavimo takų ląstelių skaičius, lipidų pakrautos makrofagai ir mikrobiologijos skrandžio sulčių ir kvėpavimo vaikams, sergantiems refliuksinio ezofagito
• Prognostinė reikšmė neutrofilų limfocitų santykis ir trombocitų limfocitų santykis išplitusiu skrandžio vėžiu sergančių pacientų, gydytų FOLFOX chemoterapijos