Yliekspressio Snail liittyy imusolmuke etäpesäke ja huonon ennusteen potilailla mahalaukun syöpä

Yliekspressio Snail liittyy imusolmuke etäpesäke ja huonon ennusteen potilailla mahalaukun syövän
tiivistelmä
tausta
epiteelikasvaimet-mesenkymaalitransitioon (EMT) on merkittävä rooli tuumorin etenemisessä ja invaasio. Snail on tunnettu säätelijä EMT eri pahanlaatuisia kasvaimia. Tässä tutkimuksessa tutkittiin miten Snail mahasyövän. Tool Menetelmät
Olemme tutkineet vaikutuksia vaiennettu tai yli-ilmennetään Snail käyttämällä lenti-virus- konstruktioita mahalaukun syöpäsoluja. Immunohistokemiallinen analyysi kudossiruina alkaen 314 mahalaukun adenokarsinoomaa sairastavien potilaiden (GC) käytettiin määrittämään etanan kliinis sekä varoituksia merkitys. Differential geeniekspression 45 GC yksilöiden Snaililla yliekspressio tutkittiin käyttäen cDNA mikrosiruanalyysi.
Tulokset
hiljentäminen Snail by shRNA laski hyökkäyksen ja muuttoliike GC solulinjoissa. Toisaalta Snail yliekspressio lisäsi invaasion ja migraatio mahasyövän solujen lisäämisen kanssa VEGF ja MMP11. Etana yliekspressio (≥75% positiivinen tumavärjäystä) oli myös merkitsevästi liittyy kasvaimen etenemiseen (P
< 0,001), imusolmukemetastaaseja (P
= 0,002), lymphovascular invaasio (P
= 0,002), ja hermoa invaasio (P
= 0,002) että 314 GC potilaita, ja lyhyemmin eloonjäämisen (P
= 0,023). cDNA microarray analyysi paljasti 213 ilmennetty eri geenien GC kudoksiin Snail yliekspressio, kuten geenit liittyvät etäpesäkkeiden ja invaasio.
Päätelmä
Snail merkittävästi vaikuttaa invasiivisuus /leviämiskyky GC, ja voidaan myös käyttää ennakoivaa biomarkkeri ennustetta tai aggressiivisuus GC.
avainsanat
Vatsa Adenokarsinooma Snail Imusolmuke etäpesäke Survival Background
epiteelikasvaimet-mesenkymaalitransitioon (EMT), kehityksellinen prosessi, jossa epiteelisolujen vähentää solujen välistä adheesiota ja hankkia myofibroblastic ominaisuuksia, on kriittinen kasvain eteneminen [1-3]. Aikana EMT, merkittäviä muutoksia ilmenee myös downregulation epiteelin markkereita, kuten E-kadheriinin, translokaatio β-kateniinin (eli dissosiaatiota kalvo β-kateniinin ja translokaation osaksi ydin- laatikolla), ja säätelyä mesenkymaalisten markkereita, kuten vimentiinista ja N -cadherin [3-6]. EMT aiheutetaan tukahduttaminen E-kadheriinin ilmentymisen EMT sääntelyviranomaisten kuten Snail, Slug, ja Twist. Snail perhe sinkki sormen transkriptiorepresso- suoraan tukahduttaa E-kadheriinin in vitro
ja in vivo
kautta vuorovaikutusta niiden COOH-terminaalista aluetta ja 5 '- CACCTG-3 ' sekvenssi E-kadheriinipromoottorin [7-9]. Snail on tiettävästi merkittävä useissa karsinoomat, kuten ei-pienisoluisen keuhkosyövän, munasarjakarsinoomat, urothelial karsinoomat, ja maksasyövän [10-13]. Tutkimukset ovat myös käytetty immunohistokemiallinen analyysit osoittamaan kliinistä merkitystä Snail yli-ilmentymisen mahalaukun adenokarsinooman (GC) [14, 15]. Kuitenkin vain harvat raportit roolit Snail GC ovat olleet kliinis, prognoosi-, ja toiminnallinen in vitro
analyysien sekä geenien ilmentyminen tuloksia. Siksi arvioitiin Snail vaikutuksesta invasiivisuus /leviämiskyky mahasyövän solulinjoissa, ja myös tutki mahdollisuutta Snail on käytetty ennakoiva merkki arvioimiseksi huonoon ennusteeseen tai kasvaimen aggressiivisuus GC potilailla. Olemme myös arvioineet geeniekspressiomalli 45 GC kudoksiin Snail yliekspressio käyttämällä cDNA mikrosiruja. Tool Menetelmät
shRNA lentivirusta välittämää hiljentäminen ja yliekspressio Snail mahalaukun syöpäsoluissa
Ihmisen mahalaukun syövän solulinjat SNU216 ja SNU484 saatiin Korean Cell Line Bank (KCLB) ja olivat oikeaksi DNA profilointia. Näitä soluja viljeltiin RPMI1640-väliaineessa, jossa oli 10% naudan sikiön seerumia (FBS), 100 U /ml penisilliiniä ja 100 ug /ml streptomysiiniä (Hyclone, Ogden, UT). Kaikki solut pidettiin 37 ° C: ssa, 5% CO 2. Lentivirusvektorikonstruktit-pohjainen RNA Knockdown ja yli-ilmentyminen käytettiin hiljentäminen ja yliekspressio Snail. Lentiviruksiin joka joko ei-kohde- tai Snail
-targeted shRNAs käytettiin hiljentäminen; PLKO lentivirusvektoriannos kohdistamista Snail
tai tyhjän PLKO vektorin käytettiin yliekspressio Snail on SNU216 ja SNU484 soluja. Lentivirus kannat tuotettiin käyttämällä Virapower ™ lentiviruksen pakkaus sekoitus käyttäen 293FT mukaisen solulinjan valmistajan protokollan (Invitrogen, Carlsbad, CA). SNU216 ja SNU484 soluja kasvatettiin 50% konfluenssiin inkuboitiin 24 tunnin ajan 1: 1 laimennosta virus: media 5 ug /ml polybreeniä. Sen jälkeen 24 tunnin toipumisaika täydellisessä mediassa ilman virusta, polyklonaalinen stabiileja solulinjoja valita ja ylläpitää väliaineessa, joka sisälsi 5 ug /ml puromysiiniä. Hiljentäminen tai yliekspressio Snail määritettiin RT-PCR: llä ja western-blottauksella.
Reaaliaikainen RT-PCR-analyysi VEGF
, MMP11
, ja Snail
mahasyövän soluissa
Solun kokonais-RNA uutettiin käyttäen TRIzol menetelmää (Sigma-Aldrich, St Louis, MO, USA). RT-PCR-analyysi, 2-ug eriä RNA alistettiin cDNA-synteesi 200 U MMLV-käänteistranskriptaasia ja 0,5 ug oligo (dT) -15-aluketta (Promega, Madison, WI, USA). Kvantitatiivisen tosiaikaisen PCR suoritettiin Roottorin Gene ™ System (QIAGEN, Hilden, Saksa) käyttäen AccuPower 2 × Greenstar qPCR Master Mix (Bioneer, Daejeon, Korea). cDNA: 1 ui reaktioseosta monistettiin 0,5 U GoTaq DNA-polymeraasia (Promega) ja 10 pmol kutakin seuraavaa sense- ja antisense-alukkeita: GAPDH
5 '- TCCATGACAACTTTGGTATCG-3 ", 5 '- TGTAGCCAAATTCGTTGTCA-3 "; Snail
5 '- CTTCCTCTCCATACCTG-3 ', 5 '- CATAGTTAGTCACACCTCGT-3 "; VEGF
5 '- TTGCTGCTCTACCTCCACCA-3 ', 5 '- GCACACAGGATGGCTTGAA-3 "; MMP11
5 '- CTTGGCTGCTGTTGTGTGCT-3 ', 5-AGGTATGGAGCGATGTGACG-3 ". Lämpötilasyklit profiili oli seuraava: denaturaatio 30 s 95 ° C: ssa, alukkeiden 30 s 52 ° C: ssa (riippuen käytettyjen alukkeiden), ja laajennuksen 30 s 72 ° C: ssa. Sillä puolikvantitatiivinen arvio ekspressiotasoja, 30 sykliä käytettiin kutakin PCR-reaktioon. PCR-tuotteet fraktioidaan koon 1,0% etidiumbromidia /agaroosigeeleillä ja kvantitoitiin UV-läpivalaisulla. Kynnyssyklinä (CT) on määritelty murto-syklin, jossa fluoresenssi kulkee kiinteän kynnyksen yli lähtötason. Suhteellinen geeniekspressio kvantifioitiin käyttäen keskimääräistä CT arvon kullekin kolmena näytteen miinus keskimääräinen kolmena CT vastine GAPDH
. Erot ohjaus (tyhjä vektori) ja koe ryhmät (tartunnan kanssa lentivirus) laskettiin kaavalla 2 - ([△ CT Lenti] - [△ CT ohjaus]) ja ilmaistaan ​​kertainen muutos ilmaisun mukaan vertailevan kynnyssyklistä menetelmällä (2- △△ CT) [16].
Western blotting
Solut kerättiin ja hajotettiin hajotuspuskurissa (1% Triton X-100, 1 mM EGTA, 1 mM EDTA, 10 mM Tris-HCl, pH 7,4, ja proteaasi-inhibiittoreita). Solujätteet poistettiin sentrifugoimalla 10000 x g
10 minuutin ajan 4 ° C: ssa. Saatu supernatantit erotettiin 12% SDS-PAGE: ssa denaturoitua pelkistävissä olosuhteissa ja siirrettiin nitroselluloosamembraaneille. Membraanit blokattiin 5% rasvatonta kuivamaitoa huoneenlämpötilassa 30 minuutin ajan ja inkuboitiin primaarisilla vasta-aineilla. Membraanit pestiin ja niitä inkuboitiin piparjuuriperoksidaasi-konjugoidulla sekundaarisella vasta-aineella. Signaali visualisoitiin käyttämällä tehostettua kemiluminesenssin (Amersham, Buckinghamshire, UK).
Cell muuttoliike ja Matrigel invaasiomääritys
Mahasyöpää solut kerättiin 0,05% trypsiiniä, joka sisälsi 0,02% EDTA (Sigma-Aldrich), ja suspendoitiin RPMI pitoisuutena 3 x 10 3 solua /kuoppa. Kalvosuodattimia (huokoskoko: 8 um) kertakäyttöisissä 96-kemotaksista kammiot (Neuro Probe, Gaithersburg, MD) esi-pinnoitettu 4 h 5 mg /ml fibronektiinin huoneenlämmössä. Alikvootit (50 ui /kuoppa) solususpensiota laitettiin yläkammiot, ja 1% FBS: ää ladattiin alempaan kammioon. Sen jälkeen kun 24-tunnin inkuboinnin kuin vaeltavat solut poistettiin kattohuoneeseen pumpulipuikolla; solujen läsnä alapinnan insertin värjättiin Hoechst33342 (Sigma-Aldrich). Invasiivisia solut laskettiin fluoresenssimikroskoopissa on x 10 suurennuksella.
Varten Matrigel invaasiomääritys, 3 x 104 solua /kuoppa siirrostettiin ylemmässä kammiossa, joka oli päällystetty Matrigelillä (5 mg /ml kylmällä väliaineessa, BD Transduction Laboratories, Franklin Lakes, NJ, USA), ja seerumia, joka sisälsi 1% FBS: ää tai valvontaa ajoneuvon lisättiin alempaan kammioon. Sen jälkeen, kun 24-tunnin inkuboinnin, ei-vaeltavat solut poistettiin ylempään kammioon vanupuikolla, ja solujen läsnä alapinnan insertin värjättiin Hoechst33342 (Sigma-Aldrich). Invasiivisia solut laskettiin sitten fluoresenssimikroskoopilla at x 10 suurennus.
Kudossiruina, immunohistokemia, ja tulosten tulkinta
puoliautomaattista kudoksen ryhmittäjällä (Beecher Instruments, WI, USA) käytettiin rakentaa kudossiruina . Saimme 3 kudoksen sydämiä, kukin 0,6 mm, mistä kasvainkudospalasta otettu GC potilaista. Ytimiä ei kerättiin enemmän invasiivisia edestä tai keskiosiin kasvaimia. Levyjä lämmitettiin 60 ° C: ssa 30 minuutin ajan, poistettiin parafiini ksyleenillä, ja sitten nesteytyksestä. Leikkeet jälkeen upotettiin sitraatti antigeenin haku puskuria, mikroaalloilla antigeenin haku, käsiteltiin 3% vetyperoksidilla metanolissa sammuttaa endogeenisen peroksidaasin aktiivisuus, ja sitten inkuboitiin 1% naudan seerumin albumiinia estää ei-spesifinen sitoutuminen. Sen jälkeen leikkeitä inkuboitiin kaniinin anti-Snail (Abcam, UK) yön yli 4 ° C: ssa. Normaali kanin seerumi käytettiin negatiivisena kontrollina. Pesun jälkeen kudosleikkeiden hoidettiin sekundaarista vasta-ainetta, vasta- värjättiin hematoksyliinillä, kuivattu ja kiinnitetty. Vähintään 500 kasvaimen solut laskettiin. Prosenttiosuus solujen Snail + ytimet on ilmaistu suhteessa kokonaismäärään kasvainsolujen laskettiin. Nuclear ilmentyminen Snail luokiteltiin luokittelemalla laajuus positiivisten tumavärjäystä kuin ≤50%, 50-75%, eli ≥75%.
Kliinis ja eloonjääminen analyysi mahasyöpäpotilaista
Tutkimme kohortin 314 GC potilaat, jotka kukin tehtiin gastrostomialetkun imusolmukedissektiossa at Pusan ​​National University Hospital (PNUH) vuosina 2005 ja 2007. ryhmä koostui 218 miestä ja 96 naista, joiden keski-ikä oli 58,3 vuotta (vaihteluväli 25-83 vuotta). Standard formaliinikiinnitetyt ja parafinoidut osat saatiin Patologian osasto, PNUH, ja National Biopankkiverkosto Korean PNUH. Tutkimuksen hyväksyi Institutional Review Board. Kukaan potilaista ei saanut ennen leikkausta sädehoidon ja /tai kemoterapian. Adjuvanttihoitoa perustuva 5-FU annettiin potilaille vaiheiden II, III ja IV jälkeen parantava resektio. Arvioimme useita kliinis tekijät mukaan Korean Standardoitu patologian raportti mahasyövän, Japanin luokittelu mahakarsinooman (3 rd Englanti painos), ja amerikkalaisen sekakomitean Cancer Staging Manual (7 painos), kuten kasvainpaikkaa, brutto ulkonäkö ja koko, syvyys invaasio, histologiset luokittelu (eli suoliston tai hajanainen), ja lymphovascular hyökkäys [17-19]. Kliiniset tulokset kullekin potilaalle seurasi alkaen leikkaus kuolinpäivästä tai 1. maaliskuuta 2012. Seuranta jaksoja vaihdellut noin 1-81,5 kuukautta (keskimäärin 51,4 kuukautta). Tapaukset hävisi seuranta tai kuolema mistä tahansa syystä muu kuin mahasyövän sensuroitiin päässä eloonjäämisaste analyysi. Kliinis analysoitiin Studentin t
-testissä, The χ 2 testiä, tai Fisherin testiä testata erot Snail ilme. Kumulatiivinen selviytymisen tontteja saatiin käyttämällä Kaplan-Meier menetelmällä, ja merkittävyys verrattiin käyttäen log-rank-testi. Ennustetekijöiden tunnistettiin Coxin regressiomallin vaiheittain menetelmä (suhteellinen vaara malli), oikaistu potilaiden ikä, sukupuoli, kasvainpaikkaa, morfologinen tyyppi (suoliston vs. diffuusi). Tilastollinen merkitsevyys asetettiin P
< 0,05. Tilastolliset laskelmat suoritettiin SPSS versio 10.0 for Windows (SPSS Inc., Chicago, IL, USA).
CDNA microarray analyysi GC kudosten perustuu Etana yliekspressio
kaikkiaan 45 tuoretta GC kudokset saatiin National biopankki Korean PNUH, ja CNUH; hyväksyntä on saatu niiden institutionaalisten tarkastuslautakunta. Kokonais-RNA uutettiin tuoreista-pakastetut kudokset käyttäen Mirvana RNA: n eristäminen kit (Ambion Inc., Austin, TX). Viisisataa nanogrammaa kokonais-RNA: ta käytettiin cDNA-synteesin, jota seuraa monistus /merkinnät vaiheen (in vitro
transkriptio) käyttäen Illumina TotalPrep RNA Amplification Kit (Ambion) syntetisoimiseksi biotiini-leimattu cRNA. cRNA pitoisuudet mitattiin RiboGreen menetelmällä (Quant-iT RiboGreen RNA-määritys kit, Invitrogen-Molecular Probes, ON, Kanada) käyttäen Victor3 spektrofotometrillä (PerkinElmer, CT), ja cRNA laatu määritettiin 1% agaroosigeelillä. Leimattu, monistettiin materiaali (1500 ng ryhmää kohti) hybridisoitiin Illumina HumanHT-12 BeadChips v4.0, mukaan valmistajan ohjeiden (Illumina, San Diego, CA). Array signaaleja kehitettiin streptavidiini-Cy3. Arrays skannattiin kanssa Illumina Iscan järjestelmä. Microarray data normalisoitiin käyttämällä quantile normalisoinnin menetelmää Illumina BeadStudio ohjelmisto. Ilmaisu taso kunkin geenin muutettiin log 2 base ennen tarkempaa analyysiä. Excel käytettiin pääasiassa tilastollisia analyysejä. Geenien ilmentyminen erot katsottiin tilastollisesti merkitsevä, jos P
< 0,05; kaikki testit olivat 2-tailed. Cluster analyysit suoritettiin käyttäen klusterin ja Puunäkymäikkuna [20]. Geeni ontologian (GO) ohjelma (http: //david. Abcc. Ncifcrf. Gov /) käytettiin luokitella geenien alaryhmiin oleva biologinen toiminto. Fisherin testiä käytettiin määrittämään onko osuudet geenien kuhunkin luokkaan erosivat ryhmittäin. GC kudokset jaetaan edelleen korkeammat (≥75%) ja pienempi (< 75%) tasot Snail ilmaisun; ero geenien ilmentyminen ryhmien välillä tunnistettiin. Ensisijainen microarray tiedot ovat saatavilla NCBI: n GEO (Gene Expression Omnibus) tietokannasta (http: //www. NCBI. NLM. NIH. Gov /geo /kysely /acc. Cgi? Acc = GSE38024).
tulokset
asetus muuttoliikkeen ja invaasion mahalaukun syöpäsolujen Snail
Lentivirusvektorikonstruktit-pohjainen RNA pudotus ja yli-ilmentyminen lähestymistapoja käytettiin määrittämään Snail rooli hyökkäys ja kulkeutumista mahasyövän solulinjoissa. SNU216 ja SNU484 soluja käytettiin tässä tutkimuksessa vahvistetaan mahalaukun adenokarsinooman solulinjoja Korean potilaista. Nämä solut infektoitiin lentiviruksesta joka joko ei-kohde- tai Snail
-targeted shRNAs hiljentää. PLKO lentivirusvektoriannos kohdennetusti Snail
ja tyhjän PLKO vektorin käytettiin indusoimaan Snail yli-ilmentymisen SNU216 ja SNU484 soluja. Polyklonaaliset stabiileja solulinjoja valittu puromysiiniä. Snail
ilmentyminen määritettiin RT-PCR: llä ja western-blottauksella; vakaa Snail
taintumisen (sh-Etana) ja Snail yliekspressiosolu- linjat (OE-Snail) saatiin (kuvio 1). Kuva 1 rooli Snail in invaasion ja kulkeutumista mahasyövän solulinjoissa. A. SNU216 (yläpaneeli) ja SNU484 (alempi paneeli) solut infektoitiin lentiviruksien joka joko ei-kohde shRNA (shNT
) tai Snail
shRNA päivänä 0, ja sitten korjataan 7. päivänä infektion jälkeen. Snail
Knockdown määritettiin RT-PCR ja western blotting; stabiileja solulinjoja kunkin solulinjojen (sh-Snail). Hiljentäminen Snail
vuonna SNU216 ja SNU484 solujen aiheuttama vähentynyt muuttoliike ja hyökkäystä. B. SNU216 (yläpaneeli) ja SNU484 (alempi paneeli) solut infektoitiin lentiviruksien ilmentävät joko lentiviraalinen PLKO vektori kohdistamista Snail
tai tyhjän PLKO vektorin (EV) päivänä 0, ja sitten korjataan 7. päivänä infektion jälkeen . Yli-ilmentyminen Snail määritettiin RT-PCR: llä ja western-blottauksella; stabiili solulinja luodaan jokaista solulinjaa (O /E-etanat). Snail yliekspressio SNU216 ja SNU484 solujen aiheuttama lisääntynyt maahanmuutto ja hyökkäystä. C. Snail yli-ilmentyminen indusoi kasvanut mRNA: n ilmentymisen VEGF
ja MMP11
in SNU216 ja SNU484 solujen reaaliajassa RT-PCR-analyysillä. Alempi paneeli osoittaa edustava RT-PCR luvut VEGF
, MMP11
, Snail
, ja GAPDH
. Tiedot osoittavat keskimääräistä ± SE on vähintään 3 toisistaan ​​riippumattoman kokeen. * Tarkoittaa P
< 0,05 Studentin t
-testissä.
Määrittämiseksi Snail roolit mahalaukun syöpäsoluinvaasiota mittasimme kemotaktinen hyökkäystä soluihin käyttäen TranswellTM järjestelmä suodattimien esipäällystetty matrigeeliä. Mitata migraatio mahalaukun syöpäsoluja, me testattiin solujen vaeltamiseen käyttämällä Boyden kammion laitetta. Hiljentäminen Snail
mukaan shRNA aiheuttama vähentynyt muuttoliike ja hyökkäys SNU216 ja SNU484 soluja, kuten kuviossa 1A. Toisin kuin Snail
hiljentämisen tuloksia, yliekspressio Snail indusoi lisääntynyt liikkuvuus ja hyökkäys SNU216 ja SNU484 soluja, kuten kuviossa 1B on esitetty. Yliekspressio Snail liittyi myös lisääntynyt VEGF ja MMP11 (kuvio 1 C).
Vaikutus Snail ilmentymisen vaikutus kasvaimen aggressiivisuus ja GC potilaan selviytymistä
Positiivinen tumavärjäystä varten Snail pitoisuustasolla ≤50%, 50-75%, ja ≥75% havaittiin 13,4% (42/314), 52,2% (164/314), ja 34,4% (108/314), vastaavasti, 314 GC potilaiden immunohistokemiallinen analyysi. Snail ilmentyminen havaittiin suoliston ja hajanainen tyyppi GC (kuvio 2A, B). Etana yliekspressio (≥75% positiivisuus) korreloi merkitsevästi kasvaimen kokoa, brutto tyyppi, syvyys invaasio, lymphovascular invaasio, hermoa invaasio, ja imusolmuke etäpesäke (taulukko 1). Snail yliekspressio liittyi myös kohonnut kasvaimen kokoa (P
= 0,028) ja kaivettu brutto tyyppi (P
< 0,001); ja lisääntynyt kasvaimen invasiivisuus eli korkeampi T vaiheessa (P
< 0,001) ja läsnäolo hermoa invaasion (P
< 0,001) ja lymphovascular kasvaimen emboli (P
= 0,002). Lisääntynyt imusolmuke etäpesäke liittyi myös Snail yli-ilmentymisen (P
= 0,002) .Vuonna mukaisesti nämä tiedot osoittavat positiivista suhdetta Snail yli-ilmentymisen ja GC aggressiivisuus, Snail yliekspressio korreloi merkitsevästi eloonjäämisaste keskuudessa GC potilaiden (p
= 0,023) (kuvio 2C). Lineaarinen suhde havaittiin lisääntynyt ydinvoiman ilmentymä Snail ja lyhentää eloonjääminen (≤50%: 76,6 ± 2,7 kuukautta, 50-75%: 68,5 ± 2,0 kuukautta; ≥75%: 63,3 ± 2,8 kuukautta). Etana yliekspressio (≥75% positiivisuus) todettiin itsenäisesti ennusta huonon ennusteen 314 potilaalla on GC, ikä-, sukupuoli, histologisen luokituksen, ja kasvaimen sijainti, käyttäen Coxin regressiota suhteellinen riskin malliin (P
= 0,033; taulukko 2). Kuvio 2 Snail ilmentymisen mahalaukun adenokarsinooman (GC) kudosnäytteistä ja Kaplan-Meir kuvaajia eloonjäämisaste 314 GC potilaista. Snail oli enimmäkseen ilmaistu ytimet GC solujen (suoliston tyyppi (A), ja hajanainen tyyppi (sinettisormus) soluja (B)) sisältyvät kudoksen array yksilöitä. Jotkut reaktiivinen fibroblastit osoittivat myös Snail ydin- lauseke (suurennus: × 400). C. Kaplan-Meier analyysi eloonjäämisaste GC potilaiden perustuvat Snail ilme. Lineaarinen suhde kasvoi Snail ydinvoiman ilmaisun ja lyhyempi eloonjääminen nähtiin keskuudessa GC potilailla (P
= 0,023). Log-rank-testi käytettiin laskemiseen P
arvoja.
Taulukko 1 suhde Snail ilmaisun ja kliinis ominaisuudet 314 potilailla, joilla on mahalaukun syövän
Potilaiden lukumäärä (N = 314) B
Snail Positivity
pvalue
< 75%
≥75%
Ikä (vuosia)
58,5 ± 10,6
59,1 ± 11,9
0,695
Sukupuoli
Mies
218
143
75
0,996
Female
96
63
33
Tuumorikoko
≤4.0 cm
192
135
57
0,028
> 4,0 cm
122
71
51
Sijainti
ylempi /Lähi
167
112
55
0,561
Ala
147
94
53
Invasion syvyys
T1
160
127
33
< 0,001
T2
41
26
15
T3
68
33
35
T4
43
19
24
Gross tyyppi
Kohonnut
77
51
26
< 0,001
Flat /masentunut
131
105
26
Louhittu
106
50
56
histologinen tyyppi
Suoliston
182
123
59
0,609
Diffuusi
122
76
46
Mixed
10
7
3
hermoa invaasio
negatiivinen
202
150
52
< 0,001
Positiivinen
111
55
56
Lymphovascular emboli
Negative
193
139
54
0,002
Positiivinen
120
66
54
Imusolmuke etäpesäke
N0, N1
270
186
84
0,002
N2, N3
44
20
24
Taulukko 2 monimuuttuja eloonjääminen analyysi Cox regressiomallia 314 mahasyövistä
muuttujat
B
SE
HR (95% CI)
P
Age (≤59 vs. > 59)
-0,438
0,264
0,645 (0,385-1,082) B 0,097
Sukupuoli (male versus naaras)
-0,037
0,267
0,963 (+0,571-+1,626) B 0,889 Sivuston (ylempi ja keskimmäinen vs. alempi) B 0,635
0,264
1,887 (1,126 -3,164) B 0,016
Lauren (suoliston vs diffuusi)
-0,537
0,263
0,585 (,349-0,978) B 0,041
Snail (≥75% vs. < 75 %)
-0,528
0,248
0.590 (+0,363-0,958) B 0,033
Huomautus: B, kerroin; HR, riskisuhde; CI, luottamusväli.
Tunnistaminen geeniekspressiomalleja perustuvat Snail yliekspressio käyttämällä cDNA microarray
cDNA microarray käytettiin geeniekspression ver- profiilit 45 GC yksilöitä. Havaitsimme 213 geenejä, jotka ilmentyvät differentiaalisesti merkittävillä tasoilla (P
< 0,05) välillä GC yksilöt, joilla on korkeampi (≥75%) ja alemmat tasot (< 75%) Etana ilmaisun (taulukko 3). Näistä 213 geenit, 82 olivat upregulated ja 131 olivat vaimentua GC yksilöiden korkeasti (≥75%) Snail ilmaisua. Käytimme hierarkkinen klusterointi analysoitaviksi 213 geenit ja 45 GC yksilöt; valvottu klustereiden analyysi antoi kaavoja näytteiden korkeampi ja alhaisempi Snail ilmaisun ryhmittyneet 2 eri ryhmään, lukuun ottamatta yhtä näytteessä korkeampia Snail lauseke (kuva 3). Tutkia biologisten toimintojen mukana erotteleva geenejä, teimme GO luokka analyysi. Yksitoista geenit liittyivät säätelevät syöpäsolu-ECM tartuntaan (P
< 0,021) ja ECM-proteiinia asetuksen (P
< 0,028, taulukko 4). Useimmat ovat sekaantuneet syöpää. ONECUT1
, ADAMTS
, IFNAR2
, MSR1
, ja SORL1
vaikuttaa kulkeutumista tai metastaasin, prosessi, johon kiinnitys kasvainsolujen tyvikalvon, hajoaminen paikallisten sidekudoksen, ja levinneisyys ja kasvainsolujen vaeltamista läpi strooman [21-25] .table 3 Geenit differentiaalisesti ilmaistut GC yksilöiden korkeasti Snail ilmaisun
PROBE_ID
SYMBOLI
NAME

Geenit yläreguloituja yksilöiden korkeasti (≥75%) of Snail ilmaisun (P
< 0,05) B ILMN_2374449
SPP1
Eritettyä fosfoproteiinista 1
ILMN_2337923
TPD52L1
tuumoriproteiinia D52-like 1
ILMN_1679838
WBP5
WW verkkotunnuksen sitovaa proteiinia 5
ILMN_2078592
C6orf105
androgeeniriippuvaisissa TFPI -regulating proteiini
ILMN_1714383
TPD52L1
tuumoriproteiinia D52-like 1
ILMN_1674817
C1orf115
kromosomi 1: n avoimen lukukehyksen 115
ILMN_1813561
Scin
Scinderin
ILMN_1759818
SORL1
Sortilin-reseptori, L (DLR luokka) toistoja sisältävä
ILMN_1745686
MFHAS1
Pahanlaatuinen kuitu- histiosytooma monistettu sekvenssi 1
ILMN_2060115
SORL1
Sortilin-reseptori, L (DLR luokka) toistoja sisältävä
ILMN_2337263
PKIB
proteiinikinaasin (cAMP -riippuvaista, katalyyttinen) estäjä beta
ILMN_2173835
FTHL3
Ferritin, raskas polypeptidi 1 pseudogeenistä 3
ILMN_1791057
IFNAR2
Interferon (alfa-, beeta- ja omega) reseptori 2
ILMN_1807114
LOC255620
Samanlaisia ​​UNC-93-homologin B1 (C. elegans), transkripti variantti 1 (LOC255620), mRNA
ILMN_1669393
GGT1
GT-arvon 1
ILMN_1685798
MAGEA6
Melanooma antigeeniperheen A, 6
ILMN_3269395
GGT2
GT-arvon 2
ILMN_1669833
SH2B2
SH2B sovitin proteiini 2
ILMN_3238534
LOC100133817
Hypoteettiset proteiini LOC100133817
ILMN_2099315
TRPM8
ohimenevä reseptorin potentiaalia kationi kanava, subfamily M, jäsen 8
ILMN_3298065
LOC729195
Samanlainen apikaalisella aikaisin endosomaalista glykoproteiini
ILMN_1717726
FLJ43752
Long intergeeniset ei-proteiinia koodaavan RNA 336
ILMN_1670452
ANKRD20A1
ankyriiniproteiinista toista toimialueen 20 perhe, jäsen A1
ILMN_3201060
LOC100132655

Hypothetical proteiini LOC100132655
ILMN_3282829
LOC727913
Samanlainen iduronaatti 2-sulfataasi (Hunterin oireyhtymä) B ILMN_2339691
SYVN1
Nivelkalvonäytteet apoptoosi 1 , synoviolin
ILMN_1785549
SLC30A2
liuenneen aineen kantaja perheen 30 (sinkki kuljettaja), jäsen 2
ILMN_3191898
LOC100129630
Hypothetical LOC100129630
ILMN_1704204
LOC642204
ankyriiniproteiinista toista toimialueen sisältävä proteiini 26 kaltainen
ILMN_1682280
LOC647753
Hypothetical proteiini LOC647753
ILMN_3201944
LOC646438
Hypoteettiset LOC646438
ILMN_2233314
SPANXA1
Siittiöt proteiini liittyy ydin, X-sidottu, perheenjäsen A1
ILMN_3305980
NS3BP
NS3BP
ILMN_1747850
CRIM2
kielin /chordin kaltainen proteiini
ILMN_1700590
LOC645590
Samanlaisia ​​cAMP-riippuvaisen proteiinikinaasin tyypin I-beeta-säätelyalayksikkö
ILMN_1766316
FLJ32679

Golgin kaltainen hypoteettisen proteiinin LOC440321
ILMN_1890741
Hs
0,552561
Haiman saarekesolujen cDNA-klooni hbt09690 3, mRNA-sekvenssin
ILMN_3308255
MIR33A

MicroRNA 33a
ILMN_1815716
LMLN
Leishmanolysin kaltainen (metallopeptidaasi M8 perhe) B ILMN_1654945
DNMT3A
DNA (sytosiini-5 -) - metyylitransferaasi 3 alpha
ILMN_2256050
SERPINA1
Serpin peptidaasi estäjä, haaran A (alfa-1 antiproteinase, antitrypsiini), jäsen 1
ILMN_1759487
EGFLAM
EGF: n kaltainen, fibronektiini tyyppi III ja laminiini G verkkotunnuksia
ILMN_1760410
LOC653086
Samanlainen RAN-sitovan proteiinin 2 kaltainen 1 isoformia 2
ILMN_1668969
MIXL1
Sekoita pariksi kaltaisia homeobox
ILMN_3279757
LOC100132532
Hypoteettinen proteiinin LOC100132532
ILMN_1715372
CAMKK1
Kalsium /kalmoduliinista riippuvan proteiinikinaasi kinaasi 1, alfa-
ILMN_1731370
Yang et ai. Kim et ai. Kaikki kirjoittajat luettu ja hyväksytty lopullinen käsikirjoitus.

• Hengitysteiden soluihin, rasva-kuormattuna makrofagien ja mikrobiologian mahanesteen ja hengitysteihin lapsilla refluksiesofagiitti
• Prognostic merkitys neutrofiilien lymfosyyttien suhteen ja verihiutaleiden lymfosyyttien suhde edennyt mahasyöpä potilaita hoidettiin FOLFOX chemotherapy