Сверхэкспрессия Улитка связано с метастазов в лимфатических узлах и плохим прогнозом у больных раком желудка

Сверхэкспрессия Улитка связано с метастазов в лимфатических узлах и плохим прогнозом у больных раком желудка
Аннотация
фон
Эпителиальные-мезенхимальных перехода (EMT) играет существенную роль в опухолевой прогрессии и инвазии. Улитка является известным регулятором EMT в различных злокачественных опухолей. В данном исследовании изучали роль Snail при раке желудка.
Методы
Мы исследовали эффекты замолчать или суперэкспрессированный улитка с использованием Ленти-вирусные конструкции в желудочном раковых клеток. Иммуногистохимическое анализ микрочипов ткани из 314 пациентов с аденокарциномой желудка (GC) был использован для определения клинико-патологическими и прогностическое значение черепашьей. Дифференциальная экспрессия генов в 45 образцах GC с Snail оверэкспрессии исследовали с помощью анализа кДНК микрочипов.

Результаты Сайленсинг Улитка на shRNA уменьшилось вторжение и миграцию в линиях GC клеток. С другой стороны, избыточная экспрессия Snail увеличилась вторжение и миграцию клеток рака желудка, в соответствии с увеличением VEGF и MMP11. Улитка избыточная экспрессия (≥75% положительных ядерное окрашивание) также в значительной степени связано с развитием опухоли (P &
л; 0,001), метастазами в лимфатических узлах (P
= 0,002), лимфоваскулярная инвазии (P
= 0,002), и периневральная вторжение (P
= 0,002) в 314 больных GC, и с более короткой выживаемости (P = 0,023
). Анализ кДНК микрочипов показал 213 дифференциально выраженных генов в тканях с GC Snail оверэкспрессии, в том числе генов, связанных с метастаза и инвазии.
Заключение
Улитка существенно влияет на инвазивности /миграционную способность ШС, а также может быть использован в качестве прогностического биомаркера прогноз или агрессивность ШС.
Ключевые слова
Желудок Аденокарцинома Улитка лимфоузлов метастаз выживания фон
эпителиальные-мезенхимальных перехода (EMT), процесс развития которой эпителиальные клетки уменьшить межклеточной адгезии и приобретают миофибробластической особенности, имеет решающее значение для опухоли прогрессирование [1-3]. Во время EMT, происходят значительные изменения, в том числе понижающей эпителиальных маркеров, таких как Е-кадгерина, транслокации -катенина (т.е. диссоциация мембранозной -катенина и транслокации в ядерный отсек) и повышающую регуляцию маркеров мезенхимальных, таких как виментину и N -cadherin [3-6]. EMT индуцируется репрессии экспрессии E-кадгерина регуляторами ЕМТ, такими как улитка, Slug, и твист. Семейство Улитка цинково-пальцевых транскрипционных репрессоров непосредственно репрессирует E-кадгерина в пробирке
и в естественных условиях
через взаимодействие между их СООН-концевой области и 5 '- CACCTG-3 ' последовательности в E-кадгерина промотора [7-9]. Улитка, как сообщается, важно в ряде карцином, в том числе немелкоклеточного рака легкого, рака яичников, уротелиальных карциномы и гепатоцеллюлярной карциномы [10-13]. Исследования также использовали иммуногистохимические анализы, чтобы показать клиническое значение Snail оверэкспрессии в аденокарциномы желудка (GC) [14, 15]. Тем не менее, лишь немногие доклады о роли Snail в GC включали клинико-патологическими, прогностический и функциональным в пробирке
анализа, а также результаты экспрессии генов. Поэтому мы оценивали эффект черепашьими на инвазивности /миграционный способности в желудочном линиях раковых клеток, а также исследовали возможность Улитка используется в качестве прогностического маркера для оценки плохой прогноз или агрессивности опухоли у больных ГЦ. Мы также оценивали характер экспрессии генов в 45 ГЦ тканей с Snail оверэкспрессии, с использованием кДНК микрочипов.
Методы
shRNA лентивирусов-опосредованной глушителей и избыточная экспрессия Snail в раковых клетках желудка человека
линии клеток желудка SNU216 и SNU484 были получены от корейской линии клеток банка (KCLB) и были заверены профилированию ДНК. Эти клетки, культивируемые в среде RPMI1640 с 10% фетальной бычьей сыворотки (FBS), 100 ед /мл пенициллина и 100 мкг /мл стрептомицина (Hyclone, Огден, Юта). Все клетки поддерживали при 37 ° С в атмосфере 5% СО <югу> 2. Лентивирусов на основе РНК нокдаун и избыточная экспрессия были использованы для глушителей и избыточная экспрессия Snail. Лентивирусов экспрессирующие либо нецелевых или улитка
-targeted shRNAs были использованы для глушителей; PLKO лентивирусов вектор ориентации улитка
или пустой вектор PLKO были использованы для избыточной экспрессии Snail в SNU216 и SNU484 клеток. Лентивирус запасы были произведены с использованием лентивирусов упаковки смеси Virapower ™ с использованием клеточной линии 293FT в соответствии с протоколом производителя (Invitrogen, Carlsbad, CA). SNU216 и SNU484 клетки, выращенные до 50% слияния инкубировали в течение 24 ч в соотношении 1: 1 разведении вируса: носитель с 5 мкг /мл полибрена. После 24-часового периода восстановления в полной среде без вируса, поликлональные стабильные клеточные линии были выбраны и поддерживали в среде, содержащей 5 мкг /мл пуромицин. Шумопоглотительные или избыточная экспрессия Snail определяли с помощью ОТ-ПЦР и Вестерн-блоттинга.
В режиме реального времени RT-PCR анализ VEGF
, MMP11
и Snail
в желудочном раковых клеток
общей клеточной РНК экстрагируют с помощью метода TRIzol (Sigma-Aldrich, Сент-Луис, штат Миссури, США). Для анализа RT-PCR, 2 мкг аликвот РНК подвергали синтезу кДНК с 200 ед ММЛЖ обратной транскриптазы и 0,5 мкг олиго (дТ) -15 праймер (Promega, Madison, WI, USA). Количественная ПЦР в реальном времени проводили с системой Rotor-Gene ™ (Qiagen, Hilden, Германия) с использованием AccuPower 2 × Гринстар КПЦР Master Mix (Bioneer, Тэджон, Корея). кДНК в 1 мкл реакционной смеси амплифицировали с 0,5 U из GoTaq ДНК-полимеразы (Promega) и 10 пмоль каждого из следующих смысловых и антисмысловых праймеров: GAPDH
5 '- TCCATGACAACTTTGGTATCG-3 ', 5 '- TGTAGCCAAATTCGTTGTCA-3 '; Улитка
5 '- CTTCCTCTCCATACCTG-3 ', 5 '- CATAGTTAGTCACACCTCGT-3 '; VEGF
5 '- TTGCTGCTCTACCTCCACCA-3 ', 5 '- GCACACAGGATGGCTTGAA-3 '; MMP11
5 '- CTTGGCTGCTGTTGTGTGCT-3 ', 5-AGGTATGGAGCGATGTGACG-3 '. Термический профиль циклинг: денатурация в течение 30 сек при 95 ° С, отжиг в течение 30 с при 52 ° C (в зависимости от используемых праймеров), и удлинение в течение 30 секунд при 72 ° C. Для полуколичественного оценки уровней экспрессии, 30 циклов использовали для каждой ПЦР-реакции. ПЦР-продукты были фракционировали по размеру 1,0% этидийбромид /агарозном геле и количественно под действием УФ-просвечивания. Пороговый цикл (СТ) определяется как дробное число циклов, при котором флуоресцентный проходит фиксированный порог, выше базовой линии. Выражение относительный ген количественно, используя среднее значение CT для каждого трех экземплярах образца минус среднее значение трех экземплярах CT для GAPDH
. Различия между контролем (пустой вектор) и экспериментальные группы (инфицирована лентивирусов) были рассчитаны по формуле 2 - ([△ CT Ленти] - [△ контроль CT]) и выражается в виде кратного изменения в выражении в соответствии с метод сравнительного порогового цикла (2- △△ КТ) [16].
вестерн-блоттинга
Клетки собирали и разрушали в буфере для лизиса (1% Тритон Х-100, 1 мМ EGTA, 1 мМ ЭДТА, 10 мМ Трис-HCl, рН 7,4 и ингибиторы протеаз). Остатки клеток удал ли центрифугированием при 10000 • g
течение 10 мин при температуре 4 ° С. Полученные супернатанты были разрешены на 12% SDS-PAGE при восстановительных условиях денатурированных и переносили на нитроцеллюлозные мембраны. Мембраны блокировали 5% обезжиренным сухим молоком при комнатной температуре в течение 30 мин и инкубируют с первичными антителами. Мембраны промывали и инкубировали с конъюгированными с пероксидазой хрена вторичного антитела. Сигнал визуализировали с помощью усиленной хемилюминесценции (Amersham, Buckinghamshire, UK).
Миграция клеток и инвазию анализ Матригель
раковых клеток Желудочные собирали с помощью 0,05% трипсина, содержащим 0,02% ЭДТА (Sigma-Aldrich), и суспендировали в RPMI при концентрации 3 × 10 3 клеток /лунку. Фильтры мембранные (размер пор: 8 мкм) в одноразовых 96-луночные камеры хемотаксиса (Neuro Probe, Gaithersburg, MD), предварительно покрытые в течение 4 ч с 5 мг /мл фибронектина при комнатной температуре. Аликвоты (50 мкл /лунку) клеточной суспензии загружали в верхние камеры, и 1% FBS, загружают в нижнюю камеру. После 24-часовой инкубации, немигрирующим клетки были удалены из верхней камеры с помощью ватного тампона; клетки, присутствующие на нижней поверхности вкладыша окрашивали Hoechst33342 (Sigma-Aldrich). Инвазивные клетки подсчитывали под флуоресцентным микроскопом при увеличении × 10.
Для вторжения анализа Матригель, 3 × 104 клеток /лунку высевали в верхней палате, которая была с покрытием Матригель (5 мг /мл в холодной среде, BD трансдукции Laboratories, Franklin Lakes, NJ, USA) и не содержащей сыворотки среде, содержащей 1% FBS, или контрольный носитель добавляли в нижнюю камеру. После 24-часовой инкубации, немигрирующим клетки удаляли из верхней камеры с помощью ватного тампона, а также клеток, присутствующих на нижней поверхности вкладыша окрашивали Hoechst33342 (Sigma-Aldrich). Инвазивные Затем клетки подсчитывали под флуоресцентным микроскопом при увеличении × 10.
Tissue микрочипов, иммуногистохимии и интерпретации результатов
полуавтоматический arrayer ткани (Бичер Instruments, WI, USA) использовали для построения микрочипов ткани , Мы получили 3-жильный ткани, каждый 0,6 мм в диаметре, с опухолевыми блоков, взятых у больных ГХ. Сердечники не были собраны из более инвазивной лобной или центральных областях опухолей. Слайды обжигали при температуре 60 ° С в течение 30 мин, депарафинизировали ксилолом, а затем регидратации. Срезы затем погружают в цитратном буфере поискового антигена, в микроволновой печи для извлечения антигена, обрабатывают 3% раствором перекиси водорода в метаноле, чтобы подавить эндогенную активность пероксидазы, а затем инкубировали с 1% бычьего сывороточного альбумина, чтобы блокировать неспецифическое связывание. Затем срезы инкубировали с кроличьими анти-улитка (Abcam, UK) в течение ночи при температуре 4 ° С. Нормальная сыворотка кролика использовали в качестве отрицательного контроля. После промывки срезы ткани обрабатывали вторичными антителами, контрастному окрашиванию гематоксилином, обезвожены, и смонтированный. По крайней мере, в 500 опухолевые клетки подсчитывали. была выражена относительно общего количества опухолевых клеток, подсчитанных Процент клеток с Snail + ядер. Ядерная экспрессия Snail оценивали путем классификации степени положительного ядерного окрашивания, как ≤50%, 50-75%, или ≥75%.
И клинико-патологическими выживаемости анализ рака желудка у пациентов
Мы изучили когорту из 314 GC пациенты, которые каждый перенесших гастростомой с лимфодиссекция в Пусане Национальной университетской больницы (PNUH) в период с 2005 по 2007 год группа включала 218 мужчин и 96 женщин со средним возрастом 58,3 лет (диапазон, 25-83 лет). Стандартный формалином фиксированной и парафином срезы были получены из Департамента Патологии, PNUH и Национальной Биобанка Кореи, PNUH. Исследование было одобрено Советом по рассмотрению Institutional. Ни один из пациентов не получали предоперационной лучевой терапии и /или химиотерапии. Адъювантной химиотерапии на основе 5-ФУ вводили на пациентов со стадиями II, III и IV после лечебной резекции. Мы оценивали несколько клинико-факторов согласно отчету корейской Унифицированная патологии для рака желудка, японской классификации Желудочный карцинома (3 й английское издание), и американский Объединенный комитет по вопросам рака Балетмейстер Руководство (7 е издание), включая локализацию опухоли, валовой внешний вид и размеры, глубину инвазии, гистологическую классификацию (т.е., кишечную или диффузная) и лимфоваскулярная вторжения [17-19]. Клинический результат для каждого пациента последовало от даты операции до даты смерти или 1-го марта 2012 года Последующие периоды варьировались от приблизительно 1 до 81,5 месяцев (в среднем, 51,4 месяцев). Случаи потеряны для последующего наблюдения или смерти от любой причины, кроме рака желудка были подвергнуты цензуре из анализа выживаемости. Клинико-патологическими особенности были проанализированы с использованием т Стьюдента
-test, χ 2 тест или точный критерий Фишера для проверки различий в экспрессии Snail. Совокупные участки выживаемости были получены с использованием метода Каплана-Мейера, и значение сравнивали с помощью лог-рангового теста. Прогностические факторы были идентифицированы с помощью метода регрессии Кокса (ступенчатое модель пропорционального риска), с поправкой на возраст пациентов, пол, место локализации опухоли, морфологический тип (кишечная по сравнению с диффузным). Статистическая значимость была установлена ​​на уровне P &
ЛТ; 0.05. Статистические расчеты были проведены с SPSS версии 10.0 для Windows (SPSS Inc., Чикаго, Иллинойс, США).
Анализ кДНК микрочипов тканей GC на основе Snail избыточной экспрессии
В общей сложности 45 свежих тканей GC были получены из Национального биобанк Корея, PNUH и CNUH; утверждение было получено из своих институциональных наблюдательных советов. Суммарную РНК экстрагировали из свежезамороженной ткани с использованием набора для выделения РНК Mirvana (Ambion Inc., Austin, TX). Пятьсот нанограммов общей РНК использовали для синтеза кДНК, с последующей амплификации /стадии мечения (экстракорпоральное
транскрипции) с использованием набора Illumina TotalPrep РНК ПЦР (Амбион) для синтеза меченных биотином кРНК. Концентрации кРНК были измерены методом RiboGreen (Квант-она RiboGreen анализ РНК; комплект Invitrogen-Molecular Probes, Онтарио, Канада) с использованием спектрофотометра Victor3 (PerkinElmer, КТ), и качество кРНК определяли на агарозном геле 1%. Маркированный, усиленный материал (1500 нг на массив) гибридизовали с Illumina HumanHT-12 BeadChips v4.0, в соответствии с инструкциями производителя (Illumina, Сан-Диего, Калифорния). Массив сигналов были разработаны стрептавидин-Cy3. Массивы были отсканированы с системой Illumina ISCAN. Данные микрочипов были нормализованы с использованием квантиль метод нормализации в программном обеспечении Illumina BeadStudio. Уровень экспрессии каждого гена был преобразован в журнал 2 базы до дальнейшего анализа. Excel в основном используется для статистического анализа. Различия экспрессии генов считались статистически значимыми, если P &
ЛТ; 0,05; все тесты были 2-белохвост. Кластерный анализ проводили с использованием кластера и Treeview [20]. Ген Онтология (ГО) Программа (HTTP:... //David ABCC ncifcrf гов /) был использован для классификации генов на подгруппы, основанные на биологической функции. точный критерий Фишера использовали для определения пропорций генов в каждой категории отличались по группам. ткани GC были дополнительно разделены на те с более высокими (≥75%) и нижней (< 75%) уровни экспрессии Snail; был идентифицирован дифференциальная экспрессия генов между группами. Первичные данные микрочипов доступны в GEO NCBI (в экспрессии генов Омнибус) базы данных (HTTP:.....? //WWW NCBI NLM NIH гов /гео /запрос /акк CGI акк = GSE38024).

Результаты Регулирование миграции и инвазии клеток рака желудка с помощью Улитка
РНК лентивирусов на основе нокдаун и избыточная экспрессия подходы были использованы для определения роли черепашьими в инвазии и миграции желудка линий раковых клеток. Клетки SNU216 и SNU484, используемые в данном исследовании установлены аденокарциномы желудка клеточных линий корейских пациентов. Эти клетки были инфицированы лентивирусов, выражающей либо нецелевых или улитку
-targeted shRNAs для глушителей. Лентивирусного вектор PLKO, что целевой Улитка
и пустым вектором PLKO были использованы, чтобы побудить улитка сверхэкспрессии в SNU216 и SNU484 клеток. Поликлональные стабильные клеточные линии были выбраны с помощью пуромицин. Улитки
выражение определяли с помощью ОТ-ПЦР и вестерн-блоттинга; стабильная Улитка
нокдаун (ш-улитка) и линии клеток избыточная экспрессия Snail (OE-улитка) были получены (рисунок 1). Рисунок 1 Роль Snail в инвазии и миграции желудка линий раковых клеток. А. SNU216 (верхняя панель) и SNU484 (нижняя панель) клетки были инфицированы лентивирусах, выражающих либо нецелевых shRNA (shNT
) или Улитка
shRNA на день 0, а затем собирали на 7-й день после заражения. Улитки
нокдаун определяли с помощью ОТ-ПЦР и вестерн-блоттинга; стабильные клеточные линии были получены для каждой из линий клеток (SH-Snail). Сайленсинг Улитка
в SNU216 и SNU484 клеток индуцированных уменьшилось миграцию и инвазию. B. SNU216 (верхняя панель) и SNU484 (нижняя панель) клетки были инфицированы лентивирусах, выражающих либо Lentiviral PLKO вектор ориентации улитка
или пустой вектор PLKO (EV) в день 0, а затем собирали на 7-й день после заражения , Сверхэкспрессия Snail определяли с помощью ОТ-ПЦР и вестерн-блоттинга; стабильной клеточной линии была сгенерирована для каждой из линий клеток (O /E-улиток). Улитка избыточная экспрессия в SNU216 и SNU484 клеток индуцируется повышенную миграцию и инвазию. С. Улитка избыточная экспрессия индуцируется повышенную экспрессию мРНК VEGF
и MMP11
в SNU216 и SNU484 клетки в режиме реального времени анализа RT-PCR. Нижняя панель показывает репрезентативные фигуры RT-PCR для VEGF
, MMP11
, улитка
и GAPDH
. Данные показывают среднее ± SE, по меньшей мере, 3 независимых экспериментов. * Указывает P &
лт; 0,05 по Стьюдента
-test.
Для определения роли черепашьими в желудочном раковых клеток вторжения, мы измеряли хемотаксисную вторжение клеток с использованием системы Transwell с фильтрами предварительно покрытых Матригель. Для измерения миграции клеток рака желудка, мы анализировали клеточную миграцию с помощью камеры устройства Бойдена. Сайленсинг Улитка Ру по shRNA индуцированной миграции уменьшилось и вторжение SNU216 и SNU484 клеток, как показано на рисунке 1А. В отличие от улитка
глушителей результатов, избыточная экспрессия Snail наведенный усиление миграции и инвазии SNU216 и SNU484 клеток, как показано на рисунке 1В. Сверхэкспрессия Snail был также связан с увеличением VEGF и MMP11 (фиг.1С).
Влияние сверхэкспрессии Snail на агрессивность опухоли и выживаемости пациентов GC
Positive ядерное окрашивание для Улитка на уровне ≤50%, 50-75%, и ≥75% наблюдалось в 13,4% (42/314), 52,2% (164/314) и 34,4% (108/314), соответственно, из 314 больных ГХ в иммуногистохимического анализа. Улитки выражение было отмечено в кишечном и диффузного типа ГКС (рис 2А, В). Улитка избыточная экспрессия (≥75% позитивности) в значительной степени коррелирует с размером опухоли, валового типа, глубина вторжения, лимфоваскулярной вторжения, периневральным вторжения и метастазов в лимфатических узлах (Таблица 1). Улитка избыточная экспрессия была также связана с увеличением размера опухоли (P = 0,028
) и раскопаны валовой тип (P &
л; 0,001); и увеличение инвазивности опухолей, то есть выше, Т стадия (Р
&л; 0,001), а также наличие периневральная инвазия (Р
&л; 0,001) и лимфоваскулярная опухоль эмболии (Р = 0,002
). Увеличение метастаз лимфатических узлов был также связан с Snail оверэкспрессии (P
= 0,002) .В соответствии с приведенными выше данными, показывающими положительную взаимосвязь между Snail оверэкспрессии и GC агрессивностью, Улитка избыточная экспрессия достоверно коррелирует с общей выживаемости среди пациентов GC (P <бр> = 0,023) (рис 2С). Линейная зависимость наблюдается между ростом ядерной экспрессии Snail и укороченной выживаемости (≤50%: 76,6 ± 2,7 месяца; 50-75%: 68,5 ± 2,0 месяца; ≥75%: 63,3 ± 2,8 месяца). Улитка избыточная экспрессия (≥75% положительность) был идентифицирован как независимый предиктор неблагоприятного прогноза в 314 больных с ГК, с учетом возраста, пола, гистологической классификации и локализации опухоли, с помощью регрессионной модели пропорционального риска Кокса (P = 0,033
; Таблица 2). Выражение Рисунок 2 Улитка в аденокарциномы желудка (GC) образцов ткани и Каплан-Меир участков общей выживаемости 314 пациентов GC. в основном выражается Улитка в ядрах клеток GC (кишечного типа (А), и диффузного типа (перстень) клетки (B)), включенных в образцах тканей массива. Некоторые реактивные фибробласты также показали улитка ядерное выражение (увеличение × 400). С. Каплан-Майера анализ общей выживаемости пациентов GC на основе экспрессии Snail. Линейная зависимость между увеличением ядерной экспрессии Snail и короткий выживания был замечен среди пациентов GC (P = 0,023
). лог-рангового использовали для расчета значений P
.
Таблица 1 Взаимосвязь между выражением Snail и клинико-патологическими характеристиками в 314 больных раком желудка

Количество пациентов (N = 314)

Улитка Positivity


p-значение


&л; 75%

≥75%


Возраст (лет)
58,5 ± 10,6
59,1 ± 11,9
0,695 Любительские секс
Мужской
218
143
75
0,996
Female
96
63
33
размер опухоли
≤4.0 см
192
135
57
0,028
> 4,0 см
122
71
51
Местоположение
Верхний /Средний
167
112
55
0,561
Нижняя
147
94
53
глубины вторжения <бр> T1
160
127
33
&л; 0.001
T2
41
26
15
T3
68
33
35
T4
43
19
24
Gross тип
Повышенные
77
51
26
&лт; 0,001
Плоский /депрессии
131
105
26
Вырытый
106
50
56
гистологического типа
Кишечные
182 <бр> 123
59
0,609
Диффузный
122
76
46
Смешанная
10
7 страница 3 периневральная инвазия
Отрицательная
202
150
52
< 0.001
позитиве
111
55
56
лимфоваскулярная эмболии
Негативный
193
139
54
0,002
Положительный
120
66
54
метастаз лимфатических узлов
n0, n1
270
186
84
0,002
N2, N3
44
20
24
Таблица 2 Многофакторный анализ выживаемости с Кокса регрессионной модели в 314 рака желудка
переменные

B

SE

HR (95% ДИ)

P

Возраст (≤59 по сравнению с > 59)
-0.438
0,264
0,645 (0.385-1.082)
0,097
Пол (мужской по сравнению с женской)
-0.037
0,267
0,963 (0.571-1.626)
0,889
сайта (верхний и средний по сравнению с нижней)
0,635
0,264
1,887 (1,126 -3,164)
0,016
Lauren (кишечная против диффузного)
-0.537
0,263
0,585 (0.349-0.978)
0,041
улитка (≥75% по сравнению с &л; 75 %)
-0.528
0,248
0.590 (0.363-0.958)
0,033
Примечание: B, коэффициент; HR, отношение рисков; CI, доверительный интервал.
Идентификация паттернов экспрессии генов на основе Snail избыточной экспрессии с помощью кДНК микрочипов
кДНК микрочипов были использованы для сравнения профили экспрессии генов в 45 образцах GC. Мы определили 213 генов, которые были дифференцированно, выраженные в значительных количествах (Р
≪ 0,05) между GC образцов с более высокими (≥75%) и нижний уровни (&ЛТ; 75%) из выражения Snail (таблица 3). Из этих 213 генов, 82 были и 131 повышающей регуляции были подавляются в образцах GC с более высокими уровнями (≥75%) экспрессии Snail. Мы использовали иерархический кластерный анализ для оценки 213 генов и 45 образцов GC; поднадзорная кластерный анализ дал образцы для образцов с более высокими и более низкими уровнями экспрессии Snail кластерном на 2 отдельные группы, для одного образца с более высокими уровнями экспрессии Snail (Рисунок 3), за исключением. Для исследования биологических функций, связанных с дискриминационными генов, мы провели анализ GO категории. Одиннадцать генов были связаны с регулированием раковых клеток ECM адгезии (Р
≪ 0,021) и белок ЕСМ регулирования (Р
≪ 0,028, таблица 4). Большинство из них были вовлечены в рак. ONECUT1
, ADAMTS
, IFNAR2
, MSR1
и SORL1
влияют на миграцию или метастаз, процесс, который включает в себя присоединение опухолевых клеток к базальной мембране, деградации местной соединительной ткани, а также проникновения и миграции опухолевых клеток через стромы [21-25] .table 3 Гены дифференцированно выражены в образцах GC с более высокими уровнями экспрессии Snail
PROBE_ID

SYMBOL

NAME
<бр> Гены активируемых в образцах с более высокими уровнями (≥75%) экспрессии Snail (P &
л; 0,05)
ILMN_2374449
SPP1

Секретируемый фосфопротеином 1
ILMN_2337923
TPD52L1

Опухоль белок D52 типа 1
ILMN_1679838
WBP5

WW домен связывающий белок 5
ILMN_2078592
C6orf105

андрогензависимом TFPI -regulating белок
ILMN_1714383
TPD52L1

Опухоль белок D52 типа 1
ILMN_1674817
C1orf115

Хромосома 1 открытая рамка считывания 115
ILMN_1813561
SCIN

Scinderin
ILMN_1759818
SORL1

Sortilin связанных рецепторов, L (класс DLR) повторяет, содержащие
ILMN_1745686
MFHAS1

Злокачественная фиброзная гистиоцитома амплифицировали последовательность 1
ILMN_2060115
SORL1

Sortilin связанных с рецептором, L (DLR класс) повторяет, содержащие
ILMN_2337263
PKIB

протеинкиназы (цАМФ -зависимая, катализатор) ингибитор бета
ILMN_2173835
FTHL3

Ферритин, тяжелый полипептид 1 псевдогеном 3
ILMN_1791057
IFNAR2

Интерферон (альфа, бета и омега) рецептор 2
ILMN_1807114
LOC255620

Подобно КСН-93 гомолога B1 (C. Элеганс), стенограмма вариант 1 (LOC255620), мРНК
ILMN_1669393
GGT1

Гамма-глютамилтрансфераза 1
ILMN_1685798
MAGEA6

Меланома антиген семейство А, 6
ILMN_3269395
GGT2

Гамма-глютамилтрансфераза 2
ILMN_1669833
sh2b2

sh2b адаптер белок 2
ILMN_3238534
LOC100133817

Гипотетический белок LOC100133817
ILMN_2099315
TRPM8

Переходный рецептор потенциал катиона канала, подсемейство М, член 8
ILMN_3298065
LOC729195

Подобно верхушечного рано эндосомный гликопротеина
ILMN_1717726
FLJ43752

Long межгенная небелковой кодирующей РНК 336
ILMN_1670452
ANKRD20A1

анкириновых повтора домена 20 семьи, член A1
ILMN_3201060
LOC100132655

гипотетического белка LOC100132655
ILMN_3282829
LOC727913

Подобно iduronate 2-сульфатазы (синдром Хантера) ингибитора
ILMN_2339691
SYVN1

синовиальной апоптозу 1 , synoviolin
ILMN_1785549
SLC30A2

Растворенный носитель семьи 30 (цинк транспортер), член 2
ILMN_3191898
LOC100129630

Гипотетический LOC100129630
ILMN_1704204
LOC642204

анкириновых повтор домен-содержащий белок 26-
как ILMN_1682280
LOC647753

гипотетический белок LOC647753
ILMN_3201944
LOC646438

гипотетического LOC646438
ILMN_2233314
SPANXA1

сперматозоида белок, связанный с ядром, Х-хромосомой, член семьи A1
ILMN_3305980
NS3BP

NS3BP
ILMN_1747850
CRIM2

Kielin /Chordin-подобный белок
ILMN_1700590
LOC645590

подобно цАМФ-зависимой протеинкиназы типа I-бета-регуляторная субъединица
ILMN_1766316
FLJ32679

Golgin-подобный гипотетический белок LOC440321
ILMN_1890741
Hs
0,552561

панкреатическими островками клон кДНК hbt09690 3, последовательность мРНК
ILMN_3308255
MIR33A
<бр> микроРНК 33а
ILMN_1815716
LMLN

Leishmanolysin типа (metallopeptidase семья M8)
ILMN_1654945
Dnmt3a

ДНК (цитозин-5 -) - метилтрансфераза 3 альфа
ILMN_2256050
SERPINA1

Серпин ингибитор пептидазы, клады А (альфа-1 antiproteinase, антитрипсина), член 1
ILMN_1759487
EGFLAM

ЭФР-подобный, фибронектин тип III и ламинин G домены
ILMN_1760410
LOC653086

подобно RAN-связывающего белка 2 типа 1 изоформы 2
ILMN_1668969
MIXL1

Mix спаренных как гомеобоксный
ILMN_3279757
LOC100132532

гипотетический белок LOC100132532
ILMN_1715372
CAMKK1

Кальций /кальмодулин-зависимой протеинкиназы киназы 1, альфа
ILMN_1731370
Ян и др. Ким и др. Все авторы читали и одобрили окончательный вариант рукописи.

• Дыхательные пути Клеточность, липидные нагруженные макрофаги и микробиология желудочного сока и дыхательны…
• Прогностическое значение соотношения нейтрофилов и лимфоцитов соотношение тромбоцитов лимфоцитов в прогре…