La sobreexpresión de Snail se asocia con metástasis en los ganglios linfáticos y de mal pronóstico en pacientes con sobreexpresión de Snail cancer

gástrica se asocia con metástasis en los ganglios linfáticos y de mal pronóstico en pacientes con cáncer gástrico
Resumen Antecedentes

transición epitelio-mesenquimal ( EMT) desempeña un papel significativo en la progresión tumoral y la invasión. Caracol es un regulador conocido de la EMT en diversos tumores malignos. En este estudio se investigó el papel de caracol en el cáncer gástrico.
Métodos
se examinaron los efectos de ser silenciada o sobreexpresada Caracol utilizando construcciones lenti-viral en células de cáncer gástrico. Se utilizó el análisis inmunohistoquímico de microarrays de tejidos de 314 pacientes con adenocarcinoma gástrico (CG) para determinar la significación de pronóstico clínico-patológicos y de caracol. La expresión génica diferencial en 45 muestras de GC con Caracol sobreexpresión se investigó mediante análisis de cDNA microarray.
Resultados
silenciamiento de caracol por shRNA disminuyó la invasión y la migración en las líneas celulares de GC. Por el contrario, la sobreexpresión del caracol aumento de la invasión y la migración de células de cáncer gástrico, en línea con el aumento de VEGF y MMP11. sobreexpresión de caracol (tinción nuclear ≥75% positivas) también se asoció significativamente con la progresión tumoral (P Hotel < 0,001), metástasis de ganglios linfáticos (P = 0,002
), invasión linfovascular (P = 0,002
), y la invasión perineural (P
= 0,002) en los 314 pacientes GC, y con una menor supervivencia (P = 0,023
). cDNA microarray análisis reveló 213 genes expresados ​​diferencialmente en los tejidos de GC con el caracol sobreexpresión, incluidos los genes relacionados con la metástasis y la invasión.
Conclusión
Snail afecta de manera significativa la invasividad /capacidad migratoria de los GC, y también se puede usar como un biomarcador predictivo de pronóstico o la agresividad de los GC.
Palabras clave
estómago Adenocarcinoma Caracol metástasis de los ganglios linfáticos de la supervivencia de fondo
transición epitelio-mesenquimal (EMT), un proceso de desarrollo mediante el cual las células epiteliales reducen la adhesión intercelular y adquieren características myofibroblastic, es fundamental para tumoral la progresión [1-3]. Durante la EMT, se producen cambios significativos, incluyendo la regulación a la baja de los marcadores epiteliales, tales como E-cadherina, la translocación de β-catenina (es decir, la disociación de membranosa β-catenina y la translocación en el compartimento nuclear), y la regulación al alza de los marcadores mesenquimales como la vimentina y N -cadherin [3-6]. EMT es inducida por la represión de la expresión de E-cadherina por los reguladores de la EMT como caracol, barra, y Twist. La familia Snail de zinc-finger represores transcripcionales directamente reprime E-cadherina in vitro e in vivo

a través de una interacción entre su región COOH-terminal y el 5 '- CACCTG-3 ' secuencia en el promotor de la E-cadherina [7-9]. Según los informes, el caracol es importante en varios carcinomas, incluyendo no pequeñas carcinomas de pulmón de células, carcinomas de ovario, carcinomas uroteliales, y carcinoma hepatocelular [10-13]. Los estudios también han utilizado análisis inmunohistoquímico para mostrar la importancia clínica de caracol sobreexpresión en el adenocarcinoma gástrico (CG) [14, 15]. Sin embargo, pocos informes sobre los papeles de caracol en GC han incluido clinicopatológica, pronóstico y funcional in vitro
análisis, así como los resultados de expresión génica. por lo tanto, se evaluó el efecto de Caracol en la invasividad capacidad /migratorio en líneas celulares de cáncer gástrico, y también investigó la posibilidad de caracol de ser utilizado como un marcador predictivo de la evaluación de pronóstico pobre o la agresividad del tumor en pacientes GC. También se evaluó el patrón de expresión génica en tejidos GC 45 con sobreexpresión del caracol, utilizando microarrays de ADNc.
Métodos
shRNA silenciamiento lentivirus mediada y la sobreexpresión de Snail en células de cáncer gástrico
líneas celulares de cáncer gástrico humano SNU216 y SNU484 se obtuvieron a partir del Banco de la línea celular de Corea (KCLB) y fueron autenticados por el análisis de ADN. Estas células cultivadas en medio RPMI1640 con 10% de suero bovino fetal (FBS), 100 U /ml de penicilina, y 100 mg /ml de estreptomicina (Hyclone, Ogden, UT). Todas las células se mantuvieron a 37 ° C en 5% de CO 2. basados ​​en ARN lentiviral desmontables y sobreexpresión se utilizaron para silenciar y la sobreexpresión de Snail. Los lentivirus que expresan bien no objetivo o caracol
-targeted shRNAs fueron utilizados para silenciar; un vector lentiviral PLKO focalización Caracol
o un vector vacío PLKO se utilizaron para la sobreexpresión de Snail en el SNU216 y SNU484 células. las existencias de lentivirus se produjeron utilizando la mezcla de empaques lentiviral ViraPower ™ utilizando la línea celular 293FT de acuerdo con el protocolo del fabricante (Invitrogen, Carlsbad, CA). SNU216 y SNU484 las células cultivadas a 50% de confluencia se incubaron durante 24 h en una dilución 1: 1 de virus: los medios de comunicación con 5 mg /ml de Polybrene. Después de un período de recuperación de 24 h en medio completo sin virus, se seleccionaron líneas de células estables policlonales y se mantuvieron en medios que contienen 5 mg /ml de puromicina. Silenciamiento o sobreexpresión de Snail se determinó por RT-PCR y Western Blot.
En tiempo real RT-PCR análisis de VEGF
, MMP11
, y Caracol Hoteles en células de cáncer gástrico
ARN celular total se extrajo utilizando el método de Trizol (Sigma-Aldrich, St Louis, MO, EE.UU.). Para el análisis de RT-PCR, 2-g alícuotas de ARN se sometieron a la síntesis de ADNc con 200 U de transcriptasa inversa de MMLV y 0,5 g de oligo (dT) -15 cebador (Promega, Madison, WI, EE.UU.). Cuantitativa en tiempo real PCR se realizó con el sistema Rotor-Gene ™ (QIAGEN, Hilden, Alemania), utilizando AccuPower 2 × Greenstar qPCR Master Mix (Bioneer, Daejeon, Corea). cDNA en 1 l de la mezcla de reacción se amplificó con 0,5 U de ADN polimerasa GoTaq (Promega) y 10 pmoles de cada uno de los siguientes cebadores sentido y antisentido: GAPDH
5 '- TCCATGACAACTTTGGTATCG-3 ', 5 '- TGTAGCCAAATTCGTTGTCA-3 '; Caracol página 5 '- CTTCCTCTCCATACCTG-3 ', 5 '- CATAGTTAGTCACACCTCGT-3 '; VEGF página 5 '- TTGCTGCTCTACCTCCACCA-3 ', 5 '- GCACACAGGATGGCTTGAA-3 '; MMP11 página 5 '- CTTGGCTGCTGTTGTGTGCT-3 ', 5-AGGTATGGAGCGATGTGACG-3 '. El perfil de ciclado térmico fue: desnaturalización durante 30 s a 95 ° C, durante 30 s recocido a 52 ° C (dependiendo de los cebadores utilizados), y extensión durante 30 s a 72 ° C. Para la evaluación semi-cuantitativa de los niveles de expresión, se utilizaron 30 ciclos para cada reacción de PCR. productos de PCR se fraccionan por tamaños en geles de etidio 1,0% /bromuro de agarosa y se cuantifica mediante transiluminación UV. El ciclo umbral (CT) se define como el número de ciclo fraccional al que la fluorescencia pasa por encima de un umbral fijo de referencia. la expresión génica relativa se cuantificó utilizando el valor medio de CT para cada muestra por triplicado menos el valor CT triplicado promedio para GAPDH
. Las diferencias entre el control (vector vacío) y los grupos de experimentación (infectados con el lentivirus) se calcularon utilizando la fórmula 2 - ([△ CT Lenti] - [△ de control CT]) y se expresan como un cambio de veces en la expresión de acuerdo con el método de ciclo umbral comparativo (2- △△ CT) [16].
Blot las células
occidentales se recogieron y se rompieron en tampón de lisis (1% Triton X-100, 1 mM de EGTA, 1 mM EDTA, 10 mM Tris-HCl, pH 7,4 y los inhibidores de proteasa). Los restos celulares se eliminaron por centrifugación a 10.000 x g
durante 10 min a 4 ° C. Los sobrenadantes resultantes se resolvieron en un SDS-PAGE 12% en condiciones reductoras desnaturalizados y transferidos a membranas de nitrocelulosa. Las membranas se bloquearon con leche en polvo 5% no grasa a temperatura ambiente durante 30 min y se incubaron con anticuerpos primarios. Las membranas se lavaron y se incubaron con anticuerpo secundario de rábano picante conjugada con peroxidasa. La señal se visualizó utilizando un aumento de quimioluminiscencia (Amersham, Buckinghamshire, Reino Unido). Migración
celular y ensayo de invasión Matrigel
células de cáncer gástrico se recogieron con tripsina al 0,05% que contenía 0,02% de EDTA (Sigma-Aldrich), y se suspendió en RPMI a una concentración de 3 x 10 3 células /pocillo. Los filtros de membrana (tamaño de poro: 8 micras) en cámaras de quimiotaxis de 96 pocillos desechables (Neuro Probe, Gaithersburg, MD) fueron pre-revestido para 4 h con 5 mg /ml de fibronectina a temperatura ambiente. Alícuotas (50 l /pocillo) de la suspensión celular fueron cargados en las cámaras superiores, y 1% de FBS se cargó en la cámara inferior. Después de 24 h de incubación, las células no migran se retiran de la cámara superior con un hisopo de algodón; células presentes en la superficie inferior del inserto se tiñeron con Hoechst33342 (Sigma-Aldrich). células invasoras se contaron bajo un microscopio de fluorescencia a 10 × magnificación.
Para el ensayo de invasión Matrigel, 3 x 104 células /pocillo se sembraron en la cámara superior, que fue recubierta con Matrigel (5 mg /ml en un medio frío, BD transducción Laboratories, Franklin Lakes, Nueva Jersey, EE.UU.), y 1% de SFB o control del vehículo libre de suero que contiene medio se añadió a la cámara inferior. Después de 24 h de incubación, se eliminaron las células no migran desde la cámara superior con un hisopo de algodón, y las células presentes en la superficie inferior del inserto se tiñeron con Hoechst33342 (Sigma-Aldrich). Las células invasoras se contaron bajo un microscopio de fluorescencia a 10 × magnificación. microarrays de tejidos
, inmunohistoquímica, y la interpretación de los resultados
Un arrayer tejido semi-automatizado (Beecher Instruments, WI, EE.UU.) se utilizó para la construcción de los microarrays de tejidos . Se obtuvieron 3 núcleos de tejido, cada uno de 0,6 mm de diámetro, a partir de bloques tumorales tomadas de pacientes GC. Núcleos no fueron recogidos desde el frontal más invasiva o áreas centrales de los tumores. Los portaobjetos se coció a 60 ° C durante 30 min, se desparafinan con xileno y, a continuación rehidratado. Las secciones se sumergieron posteriormente en un tampón de citrato de recuperación de antígeno, al microondas para la recuperación de antígenos, se trató con peróxido de hidrógeno al 3% en metanol para apagar la actividad de la peroxidasa endógena, y después se incubaron con 1% de albúmina de suero bovino para bloquear la unión no específica. A continuación, las secciones se incubaron con anticuerpo de conejo anti-Snail (Abcam, UK) durante la noche a 4 ° C. suero normal de conejo se utilizó como control negativo. Después del lavado, las secciones de tejido se trataron con anticuerpo secundario, de contraste con hematoxilina, se deshidrataron y se montaron. Se contaron al menos 500 células tumorales. El porcentaje de células con el caracol + núcleos se expresó en relación al número total de células tumorales contados. La expresión nuclear de Snail se clasificó al clasificar el grado de tinción positiva nuclear como ≤50%, 50-75%, o ≥75%.
análisis clínico-patológica y la supervivencia de pacientes con cáncer gástrico
Se estudió una cohorte de 314 GC pacientes que se sometieron a cada una gastrostomía con disección de los ganglios linfáticos en el hospital de la Universidad Nacional de Pusan ​​(PNUH) entre 2005 y 2007. El grupo estaba compuesto por 218 hombres y 96 mujeres con una edad media de 58,3 años (rango, 25-83 años). Estándar fijados en formalina y embebidos en parafina secciones fueron obtenidos del Departamento de Patología, PNUH, y el Biobanco Nacional de Corea, PNUH. El estudio fue aprobado por la Junta de Revisión Institucional. Ninguno de los pacientes recibió radioterapia y /o quimioterapia preoperatoria. La quimioterapia adyuvante basado en 5-FU se administró en pacientes con las etapas II, III y IV después de la resección curativa. Se evaluaron varios factores clínico-patológicos según el Informe de Corea estandarizado Patología para el cáncer gástrico, la Clasificación japonesa de carcinoma gástrico (3 ª edición Inglés), y el American Joint Committee on Cancer Staging Manual (7 ª edición), incluyendo el sitio del tumor, aspecto macroscópico y tamaño, profundidad de la invasión, la clasificación histológica (es decir, intestinal o difuso), y la invasión linfovascular [17-19]. El resultado clínico de cada paciente fue seguido de la fecha de la cirugía a la fecha de la muerte o el 1 de marzo de 2012. Los períodos de seguimiento varió de aproximadamente 1 a 81,5 meses (media, 51,4 meses). Los casos perdidos durante el seguimiento o la muerte por cualquier causa distinta al cáncer gástrico fueron censurados desde el análisis de la tasa de supervivencia. características clinicopatológicas fueron analizados mediante la t de Student-test
, la χ 2 test o prueba exacta de Fisher para evaluar las diferencias en la expresión de Snail. parcelas de supervivencia acumulada se obtuvieron utilizando el método de Kaplan-Meier, y la significación se compararon mediante la prueba de log-rank. Los factores de pronóstico se identificaron utilizando el método de regresión de Cox por etapas (modelo de riesgo proporcional), ajustado por edad de los pacientes, sexo, localización tumoral, tipo morfológico (frente intestinal difusa). La significación estadística se estableció en p Hotel < 0.05. Los cálculos estadísticos se realizaron con el programa SPSS versión 10.0 para Windows (SPSS Inc., Chicago, IL, EE.UU.).
cDNA microarray análisis de los tejidos de GC basados ​​en Caracol sobreexpresión
Un total de 45 tejidos GC frescas se obtuvieron de la Nacional biobanco de Corea, PNUH, y CNUH; se obtuvo la aprobación de sus juntas de revisión institucional. ARN total fue extraído de los tejidos frescos congelados usando un kit de aislamiento de ARN mirVana (Ambion Inc., Austin, TX). Quinientos nanogramos de RNA total se usó para la síntesis de ADNc, seguido de un /paso de amplificación etiquetado (in vitro
transcripción) utilizando el kit de Illumina TotalPrep de amplificación del ARN (Ambion) para sintetizar ARNc marcado con biotina. concentraciones de ARNc se midieron por el método de RiboGreen (Quant-iT RiboGreen kit de ensayo de ARN; Invitrogen-Molecular Probes, ON, Canadá) usando un espectrofotómetro Victor3 (PerkinElmer, CT), y se determinó la calidad del cRNA en un gel de agarosa al 1%. , El material amplificado marcado (1500 ng por matriz) se hibridó con Illumina HumanHT-12 BeadChips v4.0, de acuerdo con las instrucciones del fabricante (Illumina, San Diego, CA). señales de grupo fueron desarrollados por estreptavidina-Cy3. Las matrices fueron escaneados con un sistema de iluminación iScan. Los datos de microarrays se normalizaron usando el método de normalización cuantil en el software Illumina BeadStudio. El nivel de expresión de cada gen se transformó en un registro 2 base antes de su posterior análisis. Excel se utiliza sobre todo para los análisis estadísticos. Se consideraron las diferencias de expresión de genes estadísticamente significativas si p Hotel < 0,05; Todas las pruebas fueron de 2 colas. Cluster análisis se realizaron utilizando Cluster y Treeview [20]. Se utilizó: (//David ABCC ncifcrf gov /http...) para clasificar los genes en subgrupos basados ​​en la función biológica del programa de la ontología de genes (GO). Se utilizó la prueba exacta de Fisher para determinar si las proporciones de genes en cada categoría difieren por grupo. tejidos GC se dividen además en aquellos con mayores (≥75%) e inferior (< 75%) los niveles de expresión de Snail; Se identificó la expresión génica diferencial entre los grupos. se dispone de datos de microarrays primarias en el GEO del NCBI (Expresión Génica Omnibus) de base de datos (http:.....? //www NCBI NLM NIH gov /geo /consulta /cgi acc acc = GSE38024).
resultados
regulación de la migración y la invasión de células de cáncer gástrico por Caracol
ARN a base de Lentiviral desmontables y se utilizaron métodos de sobreexpresión para determinar el papel de caracol en la invasión y migración de las líneas celulares de cáncer gástrico. células SNU216 y SNU484 utilizados en este estudio se establecen las líneas celulares de adenocarcinoma gástrico de pacientes coreanos. Estas células fueron infectadas con un lentivirus que manifieste no objetivo o un caracol
shRNAs -targeted para silenciar. Un vector lentiviral PLKO que tenía como objetivo Caracol
y un vector PLKO vacío se utiliza para inducir la sobreexpresión del caracol en SNU216 y SNU484 células. Se seleccionaron líneas celulares estables policlonales utilizando puromicina. Snail
expresión se determinó mediante RT-PCR y Western Blot; Caracol estable
desmontables (sh-Caracol) y líneas celulares sobreexpresión Caracol (Caracol-OE) fueron obtenidos (Figura 1). Figura 1 Papel de caracol en la invasión y migración de las líneas celulares de cáncer gástrico. A. células SNU216 (panel superior) y SNU484 (panel inferior) fueron infectadas con lentivirus que expresan bien no son objeto de shRNA (shNT
) o caracol
shRNA en el día 0, y después se recogieron en el día 7 después de la infección. Snail
desmontables se determina por RT-PCR y Western Blot; líneas celulares estables se generaron para cada una de las líneas celulares (sh-caracol). El silenciamiento de Caracol Hoteles en SNU216 y SNU484 células inducida por disminución de la migración y la invasión. células B. SNU216 (panel superior) y SNU484 (panel inferior) fueron infectadas con lentivirus que expresan bien un vector lentiviral PLKO focalización Caracol
o un vector de PLKO vacío (EV) en el día 0, y después se recogieron en el día 7 después de la infección . La sobreexpresión de Snail se determinó por RT-PCR y Western Blot; línea celular estable que se ha generado para cada una de las líneas celulares (O /E-caracol). sobreexpresión de Snail en células SNU216 y SNU484 induce aumento de la migración y la invasión. C. Caracol sobreexpresión induce la expresión del ARNm de VEGF Opiniones y MMP11 Hoteles en SNU216 y SNU484 células en tiempo real RT-PCR análisis. El panel inferior indica figuras representativas de RT-PCR para VEGF
, MMP11
, Caracol
, y GAPDH
. Los datos muestran la media ± SE de al menos 3 experimentos independientes. * Indica P Hotel < 0,05 por t de Student-test
.
Para determinar los roles de caracol en la invasión de células de cáncer gástrico, se midió la invasión quimiotáctica de las células que utilizan el sistema Transwell con filtros de pre-recubiertas con Matrigel. Para medir la migración de células de cáncer gástrico, que ensayaron la migración de células utilizando un aparato de cámara de Boyden. El silenciamiento de Snail
por shRNA inducida disminuyó la migración y la invasión de las células SNU216 y SNU484, como se muestra en la Figura 1A. En contraste con el caracol
resultados de silenciamiento, la sobreexpresión de Snail indujo aumento de la migración y la invasión de SNU216 y SNU484 células, como se muestra en la Figura 1B. La sobreexpresión de Snail también se asoció con un aumento de VEGF y MMP11 (Figura 1C).
Efecto de la sobreexpresión de Snail en la agresividad del tumor y la supervivencia del paciente GC
tinción nuclear positiva para Snail a niveles de ≤50%, 50-75%, y ≥75% se observó en 13,4% (42/314), 52,2% (164/314), y 34,4% (108/314), respectivamente, de los 314 pacientes de GC en el análisis inmunohistoquímico. la expresión de Snail se observó en el tipo intestinal y difuso de GC (Figura 2A, B). sobreexpresión de caracol (≥75% de positividad) se correlacionó significativamente con el tamaño del tumor, el tipo bruto, profundidad de la invasión, invasión linfovascular, invasión perineural, y la metástasis de los ganglios linfáticos (Tabla 1). sobreexpresión de caracol también se asoció con un aumento de tamaño del tumor (P = 0,028
) y excavado tipo bruto (P Hotel < 0,001); y el aumento de la invasividad del tumor, es decir, superior etapa T (P
< 0,001) y la presencia de invasión perineural (P
< 0,001) y linfovascular émbolos tumor (P
= 0,002). El aumento de la metástasis de los ganglios linfáticos también se relacionó con Caracol sobreexpresión (P = 0,002
) .En acuerdo con los datos anteriores que muestran la relación positiva entre la sobreexpresión del caracol y la agresividad GC, Caracol sobreexpresión correlacionó significativamente con la supervivencia global entre los pacientes GC (P
= 0,023) (Figura 2C). Se observó una relación lineal entre el aumento de la expresión nuclear de caracol y una supervivencia más corta (≤50%: 76,6 ± 2,7 meses, 50-75%: 68,5 ± 2,0 meses, ≥75%: 63,3 ± 2,8 meses). sobreexpresión de caracol (≥75% de positividad) fue identificado como un predictor independiente de mal pronóstico en pacientes con CG 314, ajustado por edad, sexo, clasificación histológica y la localización del tumor, utilizando un modelo de regresión de riesgos proporcionales de Cox (P = 0,033
; Tabla 2). Figura 2 la expresión de Snail en el adenocarcinoma gástrico (CG) muestras de tejido y gráficos de Kaplan-Meir de la supervivencia global de 314 pacientes GC. Snail se expresó sobre todo en los núcleos de células GC (tipo intestinal (A), y el tipo difuso (anillo de sello) células (B)) incluidos en las muestras de matriz de tejido. Algunos fibroblastos reactivos también mostraron caracol expresión nuclear (ampliación: x400). C. El análisis de Kaplan-Meier de supervivencia global de los pacientes con cáncer gástrico en base a la expresión de Snail. Una relación lineal entre el aumento de la expresión nuclear Caracol y una menor supervivencia se observó en los pacientes con cáncer gástrico (P = 0,023
). Se utilizó la prueba de log-rank para calcular los valores de P
.
Tabla 1 Relación entre la expresión de Snail y las características clínico-patológicos en 314 pacientes con cáncer gástrico
Número de pacientes (N = 314)

Caracol positividad
valor P
< 75%
≥75%
Edad (años)
58,5 ± 10,6 59,1 ± 11,9

0,695 Sexo seguro
Hombre
218 143

75
0.996
Mujer
96
63
33
El tamaño del tumor
≤4.0 cm
192 135

57
0,028 Hotel > 4,0 cm
122
71
51
Ubicación y superior /secundaria
167 112

55
0.561
Baja
147
94
53
profundidad invasión
T1
160 127

33 Hotel < 0,001
T2
41
26
15
T3
68
33
35
T4
43 página 19
24
tipo bruto
elevada
77
51
26 Hotel < 0,001
plana /deprimido
131 105

26
excavado
106
50
56
tipo histológico intestinal

182
123
59
0,609
difuso
122
76
46
Mixta
10 página 7 página 3
invasión perineural
negativo
202 150

52 Hotel < 0,001
positiva
111
55
56
linfovascular émbolos
Negativo
193 139

54
0,002
positiva
120
66
54
metástasis de ganglios linfáticos
N0, N1
270 186

84
0,002
N2, N3
44 20

24
Tabla 2 el análisis de supervivencia multivariante con el modelo de regresión de Cox en 314 cánceres gástricos
variables
B
SE
HR (IC del 95%)
P
Edad (≤59 frente a > 59)
-0,438 0,264

0,645 (0,385-1,082) 0,097

Género (masculino frente a la hembra): perfil -0,037 0,267

0,963 (0,571-1,626) 0,889

sitio (alta y media frente inferior)
0,635 0,264

1.887 (1.126 -3.164)
0,016
Lauren (intestinal difusa vs)
-0,537 0,263

0,585 (0,349-0,978) 0,041

Caracol (≥75% frente a < 75 %)
-0,528 0,248

0,590 (0,363-0,958) 0,033

Nota: B, coeficiente; HR, razón de riesgo; IC: intervalo de confianza.
Identificación de los patrones de expresión de genes basados ​​en Caracol sobreexpresión utilizando microarrays de ADNc
microarrays de ADNc se utilizaron para comparar los perfiles de expresión génica de 45 muestras de GC. Se identificaron 213 genes que son expresados ​​diferencialmente en niveles significativos (P Hotel < 0,05) entre las muestras con niveles más altos de GC (≥75%) e inferior (< 75%) de la expresión de Snail (Tabla 3). De estos 213 genes, 82 fueron upregulated y 131 se downregulated en las muestras con niveles más altos de GC (≥75%) de la expresión de Snail. Se utilizó el análisis de agrupamiento jerárquico para evaluar los 213 genes y 45 muestras de GC; análisis de la agregación supervisada dio las pautas para las muestras con niveles más altos y más bajos de expresión de Snail agrupados en 2 grupos distintos, a excepción de una muestra con los niveles más altos de expresión de Snail (Figura 3). Para investigar las funciones biológicas implicadas en la discriminación de los genes, se realizó un análisis GO categoría. Once genes estaban asociados con la regulación de cáncer de células-ECM adherencia (P Hotel < 0,021) y proteínas ECM regulación (P Hotel < 0,028, Tabla 4). La mayoría han sido implicados en el cáncer. ONECUT1
, ADAMTS
, IFNAR2
, MSR1
, y SORL1
afecta la migración o metástasis, un proceso que implica la unión de las células tumorales a la membrana basal, la degradación del tejido conectivo local, y penetración y migración de las células tumorales a través de estroma [21-25] .Tabla 3 genes expresados ​​diferencialmente en las muestras de GC con mayores niveles de expresión de Snail
PROBE_ID
SÍMBOLO
NOMBRE

Los genes regulados positivamente en muestras con niveles más altos (≥75%) de la expresión de Snail (P Hotel < 0,05)
ILMN_2374449
SPP1
fosfoproteína secretado 1 | ILMN_2337923
TPD52L1
D52-como la proteína del tumor 1 | ILMN_1679838
WBP5
proteína de unión al dominio WW 5
ILMN_2078592
C6orf105
TFPI andrógeno-dependientes -regulating proteína
ILMN_1714383
TPD52L1
D52-como la proteína del tumor 1 | ILMN_1674817
C1orf115
cromosoma 1 marco de lectura abierto 115
ILMN_1813561
SCIN
Scinderin
ILMN_1759818
SORL1
del receptor, L (DLR) de clase A se repite relacionadas con sortilin
contienen
ILMN_1745686
MFHAS1
maligno histiocitoma fibroso secuencia amplificada 1 | ILMN_2060115
SORL1 relacionados con sortilin
receptor, repite un L (clase DLR) que contienen
ILMN_2337263
PKIB
proteína quinasa (cAMP -dependiente, catalítica) inhibidor de beta
ILMN_2173835
FTHL3
ferritina, pesado polipéptido 1 pseudogen 3
ILMN_1791057
IFNAR2
interferón (alfa, beta y omega) receptor 2 del
ILMN_1807114
LOC255620
al igual que en unc-93 homólogo B1 (C. elegans), transcripción de la variante 1 (LOC255620), ARNm
ILMN_1669393
GGT1
gammaglutamiltransferasa 1 | ILMN_1685798
MAGEA6
familia de antígenos del melanoma A, 6
ILMN_3269395
GGT2
gammaglutamiltransferasa 2
ILMN_1669833
SH2B2
sh2b proteína adaptadora 2
ILMN_3238534
LOC100133817
hipotético LOC100133817 proteína TRPM8
ILMN_2099315

transitoria receptor potencial canal catiónico, subfamilia M, miembro de 8
ILMN_3298065
LOC729195
similar a principios endosomal apical glicoproteína
ILMN_1717726
FLJ43752
largo intergénica codificación de ARN 336 no proteico
ILMN_1670452
ANKRD20A1
dominio de las repeticiones anquirina 20 familia, miembro A1
ILMN_3201060
LOC100132655
hipotética proteína LOC100132655
ILMN_3282829
LOC727913
similares a iduronato 2-sulfatasa (síndrome de Hunter) inhibidor
ILMN_2339691
SYVN1
sinovial apoptosis 1 , synoviolin
ILMN_1785549
SLC30A2
familia de portador de soluto 30 (transportador de zinc), miembro 2
ILMN_3191898
LOC100129630
hipotético LOC100129630
ILMN_1704204
LOC642204
dominio que contienen proteínas ankyrin repetir 26-como
ILMN_1682280
LOC647753
proteína hipotética LOC647753
ILMN_3201944
LOC646438
hipotético LOC646438
ILMN_2233314
SPANXA1
proteína de esperma asociado con el núcleo ligado al X, miembro de la familia A1
ILMN_3305980
NS3BP
NS3BP
ILMN_1747850
CRIM2 proteína
Kielin /cordina-como
ILMN_1700590
LOC645590
similares a AMPc dependiente de la proteína quinasa tipo I-beta subunidad reguladora
ILMN_1766316
FLJ32679

golgin-como hipotética proteína LOC440321
ILMN_1890741
Hs
0.552561
islote pancreático clon de ADNc hbt09690 3, secuencia de ARNm
ILMN_3308255
MIR33A

MicroARN 33a
ILMN_1815716
LMLN
Leishmanolysin similar (familia M8 metalopeptidasa)
ILMN_1654945
DNMT3A
ADN (citosina-5 -) - 3 alfa metiltransferasa
ILMN_2256050
SERPINA1
serpina inhibidor de peptidasa, un clado (alfa-1 antiproteinase, antitripsina), miembro 1 | ILMN_1759487
EGFLAM
tipo EGF, fibronectina tipo III y laminina G dominios
ILMN_1760410
LOC653086
similar a la proteína de unión RAN-2-como isoforma 1 2
ILMN_1668969
MIXL1
Mezclar emparejado similar homeobox
ILMN_3279757
LOC100132532
proteína hipotética LOC100132532
ILMN_1715372
CAMKK1
calcio /calmodulina dependiente de la proteína quinasa quinasa 1, alfa
ILMN_1731370
Yang et al. Todos los autores leído y aprobado el manuscrito final.

• celularidad de las vías respiratorias, macrófagos cargados de lípidos y la microbiología de jugo gástrico y las vías respiratorias en niños con esofagitis por reflujo
• Significado pronóstico de la proporción de neutrófilos y linfocitos relación linfocito plaquetaria en pacientes con cáncer gástrico avanzado tratados con quimioterapia FOLFOX