Prekomjerna ekspresija puž je povezana s limfni čvor metastazama i lošom prognozom u bolesnika s želuca cancer

Prekomjerna ekspresija puž je povezana s limfni čvor metastazama i lošom prognozom u bolesnika s karcinomom želuca
apstraktne pregled pozadine
epitela-mczcnhimnog tranzicije ( EMT) igra važnu ulogu u napredovanju tumora i invaziji. Puž je poznati regulator EMT u različitim malignim tumorima. Ova studija istražuje ulogu puž u rak želuca.
Metode pregled ispitali smo učinke ušutkani ili prekomjerno puž pomoću Lenti-virusni konstrukte u želučanim stanicama raka. Imunohistokemijska analiza tkiva Microarrays od 314 bolesnika s želučanim adenokarcinom (GC) je korištena za određivanje puževa kliničkopatološkim i prognostički značaj. Diferencijalna ekspresija gena u 45 GC uzoraka puž prekomjerne ekspresije istraživana je pomoću cDNA microarray analize. | Rezultati
Ušutkavanje od puž po shRNA smanjila invaziju i migraciju u staničnim linijama GC. S druge strane, puž prekomjerna ekspresija povećana invaziju i migraciju stanica želuca raka, u skladu s povećanim VEGF i MMP11. Puž prekomjerna ekspresija (≥75% pozitivnih nuklearne bojenje) također je značajno povezana s progresijom tumora (P pregled < 0,001), metastaze u limfne čvorove (P
= 0.002), enzim imunoanaliza (P
= 0.002), i perineuralnu invazije (P pregled = 0,002) u GC pacijenata 314, te s kraćim preživljenjem (P
= 0,023). cDNA microarray analiza otkrila 213 različito izražene gene u GC tkiva s puž prekomjerne ekspresije, uključujući gena povezanih s metastazama i invaziji. pregled Zaključak pregled puž značajno utječe invazivnosti /migracijski sposobnost GCS, a također se može koristiti kao prediktivni biomarkera za prognoza ili agresivnost GCS. pregled Ključne riječi pregled želuca Adenokarcinom puž limfnih čvorova metastaze opstanak Pozadina pregled epitela-mczcnhimnog tranzicije (EMT), razvojni proces u kojem stanice epitela smanjila međustaničnu adheziju i steći miofibroblastični značajke, ključno je da se tumor napredovanje [1-3]. Tijekom EMT, javljaju značajne promjene, uključujući i smanjenom epitelnih markera kao što su E-kadherina, premještanje beta-katenina (tj disocijacija membranske P-katenina i premještanje u nuklearnoj pretinac) i ranijim koracima mezenhimalnim markera kao što su vimentin i N -cadherin [3-6]. EMT je izazvana represijom izražavanja E-kadherina strane EMT regulatori poput puža, cjevčica i Twist. Obitelj puž od cink-prst transkripcijskih represori izravno potiskuje E-kadherina u vitro pregled i in vivo pregled preko interakcije između njihovih COOH-terminalnom području i 5 '- CACCTG-3 ' slijed u promotora E-kadherina [7-9]. Puž je navodno važno u nekoliko karcinoma, uključujući i ne-malih stanica karcinoma pluća, karcinoma jajnika, urothelial karcinoma i hepatocelularnog karcinoma [10-13]. Studije su također korišteni imunohistokemijske analize pokazati kliničko značenje puž prekomjernom ekspresijom u želučanom adenokarcinom (GC) [14, 15]. Međutim, nekoliko izvješća o ulogama puž u GC su uključeni kliničkopatološkim, prognostički i funkcionalni in vitro pregled analize, kao i rezultata ekspresije gena. Stoga ocjenjuje puževa učinak na invazivnosti /migracijskih sposobnosti u želučanim staničnim linijama karcinoma, a također istražuju mogućnost puž koji se koristi kao prediktivni marker za procjenu lošu prognozu ili tumora agresivnost u GC pacijenata. Isto smo ekspresije gena uzorak u 45 GC tkivima s puž prekomjernom ekspresijom korištenjem cDNA microarrays. Pregled Methods pregled shRNA lentivirusa posredovane utišavanje i prekomjernom ekspresijom puž u stanicama raka želuca
ljudskih staničnih linija raka želuca SNU216 i SNU484 dobiveni su iz Korean Cell Line banke (KCLB) i ovjerena od strane DNA profiliranje. Te stanice uzgajane su u RPMI1640 mediju s 10% fetalnog goveđeg seruma (FBS), 100 U /ml penicilina i 100 ug /ml streptomicina (Hyclone, Ogden, UT). Stanice su održavane na 37 ° C u 5% CO 2. Lentivirasni bazi RNA obaranje i prekomjernom ekspresijom su se koristili za utišavanje i prekomjernom ekspresijom puž. Lentivirusi ekspresiju ne pripadaju ciljanoj skupini ili puž pregled -targeted shRNAs su se koristili za utišavanje; PLKO lentivirusni ciljnog vektora puž
ili praznu PLKO vektora su se koristili za prekomjernu ekspresiju puž u SNU216 i SNU484 stanica. Lentivirusni dionice su proizvedene korištenjem Virapower ™ mješavinu lentivirusni pakiranje pomoću stanične linije 293FT prema protokolu proizvođača (Invitrogen, Carlsbad, CA). SNU216 i SNU484 stanice uzgojene do 50% konfluencije se inkubiraju 24 h u 1: 1 razrjeđenju od virusa: medij sa 5 ug /ml polibrena. Nakon perioda od 24 h oporavka u kompletnom mediju bez virusa, poliklonalna stabilne stanične linije su odabrane i održavane u mediju koji je sadržavao 5 ug /ml puromicina. Ušutkavanje ili pojačanom ekspresijom puž je određena pomoću RT-PCR i Western blot pokusa. Pregled, u stvarnom vremenu RT-PCR analiza VEGF Netlogu, MMP11 Netlogu i puž pregled u želučanim stanicama raka
ukupna stanična RNA je ekstrahirana pomoću trizolne metode (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA). Za RT-PCR analizu, 2-ug alikvota RNA je izložena sintezi cDNA s 200 U of MMLV reverzne transkriptaze i 0,5 J..lg oligo (dT) -15 primer (Promega, Madison, WI, USA). Kvantitativna realnom vremenu PCRjeizvedenas rotor-gena ™ System (QIAGEN, Hilden, Njemačka) upotrebom AccuPower 2 × GreenStar qPCR Master Mix (Bioneer, Daejeon, Koreja). cDNA u 1 ul reakcijske smjese je amplificiran s 0,5 U of GoTaq DNA polimeraze (Promega) i 10 pmol od slijedećih smislenim i protivsmislenim zaglavljima: GAPDH pregled 5 '- TCCATGACAACTTTGGTATCG 3 ' 5 '- TGTAGCCAAATTCGTTGTCA 3 '; Puž pregled 5 '- CTTCCTCTCCATACCTG 3 ', 5 '- CATAGTTAGTCACACCTCGT 3 '; VEGF pregled 5 '- TTGCTGCTCTACCTCCACCA 3 ', 5 '- GCACACAGGATGGCTTGAA 3 '; MMP11 pregled 5 '- CTTGGCTGCTGTTGTGTGCT 3 ', 5-AGGTATGGAGCGATGTGACG 3 '. Profil toplinska biciklizam je: denaturacija 30 sekundi na 95 ° C, žarenja 30 s na 52 ° C (ovisno o primerima koji se koriste) i nastavak za 30 sekundi na 72 ° C. Za polu-kvantitativno procjenu ekspresije, 30 ciklusa korišteni su za svaku PCR reakciju. PCR proizvodi su veličina razdijeljen na 1,0% etidij bromid /agaroznom gelu i kvantificirati pod UV transiluminatoru. Prag ciklusa (CT) je definiran kao broj ciklusa frakcijskom u kojoj fluorescentni prolazi fiksni prag iznad osnovne linije. Relativne ekspresije gena je kvantificiran primjenom prosječne CT vrijednosti za svaki triplikat uzorka minus prosječne trostrukim CT vrijednosti za GAPDH
. Razlike između kontrole (prazna vektor) i eksperimentalnim grupama (zaraženo lentivirus) izračunati su pomoću formule 2 - ([△ CT Lenti] - [△ CT kontrole]), a izražava se kao mnogostrukost promjene ekspresije prema metoda usporedni prag ciklusa (2- △△ CT) [16].
Western blotting
Stanice su sakupljene i poremećen u puferu za liziranje (1% Triton X-100, 1 mM EGTA, 1 mM EDTA, 10 mM tris-HCl, pH 7,4 i inhibitore proteaze). Stanični debris uklonjen centrifugiranjem na 10000 x g
tijekom 10 minuta na 4 ° C. Rezultirajući Supernatanti su razdvojeni na 12% SDS-PAGE u reducirajućim uvjetima denaturirani i preneseni na nitroceluloznue membrane. Membrane su blokirane s 5% bezmasnim mlijekom osuši na sobnoj temperaturi 30 min i inkubirane s primarnim antitijelima. Membrane su zatim isprane i inkubirane s hren peroksidaza-konjugiranog sekundarnog antitijela. Signal je vizualiziran pomoću pojačane kemiluminiscencije (Amersham, Buckinghamshire, UK). Migracija pregled ćelija i Matrigelovu invaziju test pregled stanica raka želuca su sakupljene sa 0.05% tripsina koji sadrži 0,02% EDTA (Sigma-Aldrich) i suspendira u RPMI pri koncentraciji od 3 x 10 3 'stanica /jažici. Filtri membranu (veličine pora: 8 um) u jednokratnu 96 jažica kemotaksiju komora (Neuro Probe, Gaithersburg, MD) je prethodno obložen 4 h sa 5 mg /ml fibronektina na sobnoj temperaturi. Alikvoti (50 ul /jažici) stanične suspenzije su napunjeni u gornje komore, i 1% FBS je stavljen u donje komore. Nakon 24 sati inkubacije, ne-migrirajućeg stanice se uklanjaju iz gornje komore sa štapićem obloženim vatom, Stanice se nalaze na donjoj površini umetka su obojeni Hoechst33342 (Sigma-Aldrich). Invazivne stanice su izbrojene pod fluorescentnim mikroskopom na × 10 povećanjem.
Za ispitivanja Matrigelove invazije, 3 × 104 stanica /jažici se nasade u gornjoj komori, koja je prevučena Matrigel (5 mg /ml u hladnom mediju, BD transdukcije Laboratories, Franklin Lakes, NJ, USA), i 1% FBS ili sredstva kontrole bez seruma medij koji je dodan u donju komoru. Nakon 24 sati inkubacije, ne-migracijskog stanice uklonjene su iz gornje komore sa štapićem obloženim vatom, a stanica prisutnih na donjoj površini umetka su obojeni Hoechst33342 (Sigma-Aldrich). Invazivne stanice su tada broje pod fluorescentnim mikroskopom na × 10 uvećanja.
Tkiva Microarrays, imunohistokemija i tumačenje rezultata
polu-automatizirani arrayer tkiva (Beecher Instruments, WI, USA) je korišten za izgradnju mikropoljima tkiva , Dobije se 3 tkiva jezgre, svaka je 0,6 mm u promjeru, od tumora uzetih od blokova GC pacijenata. Tuljci nisu prikupljeni iz više invazivne frontalnog ili središnjim područjima od tumora. Objektna stakalca su pečena na 60 ° C tijekom 30 minuta, deparafmizirani ksilenom, a zatim rehidrirane. Sekcije su zatim uronjene u citratnom dohvat antigen pufera, mikrovalovima, na dohvat antigena, pomiješa se s 3% -tnim vodikovim peroksidom u metanolu kako bi se zaustavila Aktivnost endogene peroksidaze, a zatim inkubirane s 1% albumina goveđeg seruma blokirati nespecifično vezanje. Nakon toga, sekcije su inkubirane s mišjim anti-puž (Abcam, UK) preko noći na 4 ° C. Normalnim serumom kunića je korišten kao negativna kontrola. Nakon ispiranja, sekcije tkiva su tretirani s sekundarnim protutijelom, negativno hematoksilinom i dehidrirane i montiran. Najmanje 500 tumorske stanice su izbrojene. Postotak stanica s puž + jezgri je izražen u odnosu na ukupan broj tumorskih stanica prebrojanih. Nuklearna izraz puž se ocjenjuju klasificiranje opseg pozitivne nuklearnog mrlja kao ≤50%, 50-75%, ili ≥75%.
Kliničkopatološkim i opstanak analizu raka želuca bolesnika
Ispitana je skupina od 314 GC pacijenti koji su svaki je podvrgnut gastrostomy s limfni čvor disekcija na Pusan ​​National University Hospital (PNUH) između 2005. i 2007. skupina se sastojala od 218 muškaraca i 96 žena s prosječnom dobi od 58,3 godina (raspon 25-83 godina). Standardna formalinom fiksiranih i dijelovi parafin uklopljenih dobiveni su iz Odjela za patologiju PNUH, i Nacionalnog Biobank Koreje, PNUH. Istraživanje je odobreno od strane Institutional Review Board. Nijedan od pacijenata primili postoperativnog radioterapije i /ili kemoterapije. Dodatna kemoterapija se temelji na 5-FU se primjenjuje u bolesnika s fazi II, III i IV nakon kurativno resekcije. Procijenili smo nekoliko kliničkopatološka faktora u skladu s korejskog Standardizirani patologiju izvještaj za rak želuca, japanska klasifikaciji karcinoma želuca (3 rd engleski izdanje), a američki Zajedničko povjerenstvo za rak inscenacije Manual (7 th izdanje), uključujući sijelo tumora, bruto izgled i veličinu, dubinu invazije, histološku klasifikaciju (tj crijeva ili difuznog) i enzim imunoanaliza [17-19]. Klinički ishod za svakog pacijenta je uslijedila od datuma operacije do datuma smrti ili 1. ožujka 2012. follow-up razdoblja u rasponu od oko 1 do 81,5 mjeseci (u prosjeku, 51.4 mjeseci). Slučajevi izgubio follow-up ili smrt od bilo kojeg uzroka, osim raka želuca su cenzurirani iz analize stopu preživljavanja. Kliničkopatološkim osobine su analizirani korištenjem Student t-test pregled je χ 2 test ili Fisherov egzaktni test za testiranje razlike u puž izražavanja. Kumulativno parcele opstanak dobiveni su pomoću Kaplan-Meier metodi, a značajnost je u usporedbi pomoću log-rank testa. Prognostički faktori su identificirani korištenjem metode Cox regresijska stupnjevitog (model proporcionalna opasnost), prilagođen za dob pacijenata, spolu, sijelo tumora, tipa morfološka (crijevna u odnosu na difuzni). Statistička značajnost postavljena na P Netlogu < 0.05. Statistički izračuni su provedeni s SPSS verzija 10.0 za Windows (SPSS Inc., Chicago, IL, USA).
CDNA microarray analize GC tkiva na temelju puž prekomjernom ekspresijom pregled Ukupno 45 svježih GC tkiva dobiveni su iz Nacionalne Biobank Koreje, PNUH i CNUH; Odobrenje se dobije iz svoje institucionalne odbora za reviziju. Ukupna RNA je ekstrahirana iz svježe smrznuta tkiva rabeći mirVana RNA kompleta (Ambion Inc., Austin, TX). Petsto nanograma ukupne RNA korišten je za sintezu cDNA, potom amplifikacijskom /označavanje koraku (in vitro pregled transkripcija) primjenom Illumina TotalPrep RNA Amplification kita (Ambion) sintetizirati biotin-obilježenog Crna. Koncentracije Crna je mjerena metodom RiboGreen (Quant-to RiboGreen RNK testa kit, Invitrogen-Molecular Probes, ON, Canada), pomoću Victor3 spektrofotometar (Perkin Elmer, CT) i cRNA kvaliteta određena je na 1% -tnom agaroznom gelu. Označeno, pojačan materijal (1500 ng po polju) je hibridizirana Illumina HumanHT-12 BeadChips v4.0, u skladu s uputama proizvođača (Illumina, San Diego, CA). Array signali su pripremile streptavidin-Cy3. Nizovi su skenirane sa Illumina İşcan sustava. Podaci microarray su normalizirani korištenjem kvantilnih metode normalizacije u Illumina BeadStudio softvera. Razina ekspresije svakog gena je pretvoren u zapisnik 2 baze prije daljnje analize. Excel prvenstveno se koriste za statističke analize. Gene Expression razlike su smatrane statistički značajna ako je P Netlogu < 0,05; svi testovi su bili dva kraka. Klaster analiza izvedena je pomoću cluster i Treeview [20]. Gen ontologija (GO) programa (http:... //David abcc ncifcrf gov /) se koristi za kategorizaciju gena u podskupine na temelju biološke funkcije. Fisher-ov egzaktni test korišten je za određivanje jesu li proporcijama gena u svakoj kategoriji se razlikovali po grupama. GC tkiva su dalje podijeljeni u one s višim (≥75%) i niže (< 75%) razinama puž izražavanja; diferencijalne ekspresije gena između skupina identificirana. Primarni podaci microarray su dostupni u NCBI Geo (Gene Expression Omnibus) baze podataka (http:.....? //Www NCBI NLM NIH gov /geo /upit /acc CGI acc = GSE38024). | Rezultati
Regulacija migracije i invazije želučanih stanica raka od puževa pregled lentivirasni-based RNA obaranje i pristupi Prekomjerna ekspresija su korišteni za određivanje uloge puž invazije i migracije želučanih staničnim linijama karcinoma. SNU216 i SNU484 stanice korištene u ovom istraživanju su utvrđeni želučanog adenokarcinoma stanične linije iz korejskog pacijenata. Te stanice su zaražene s lentivirus izražava ili ne pripadaju ciljanoj skupini ili puž pregled -targeted shRNAs za utišavanje. PLKO lentivirusni vektor koji ciljano puž pregled i prazan PLKO vektora su korišteni za indukciju puž ekspresiju u SNU216 i SNU484 stanica. Poliklonalna stabilne stanične linije su izabrani korištenjem puromicin. Puž pregled, bila je određena pomoću RT-PCR i Western blot pokusa; Stabilno puž pregled obaranje (sh-puž), a puž pretjerana ekspresija stanične linije (OE-puž) dobiveni su (slika 1). Slika 1. Uloga puž u invaziju i migraciju želučanih staničnim linijama karcinoma. A. SNU216 (gornja ploča) i SNU484 (donji prikaz) stanice su zaražene s lentivirusima izražavanje bilo non-target shRNA (shNT pregled) ili puž pregled shRNA 0 dana, a zatim sakupljene na 7 dana nakon infekcije. Puž pregled obaranje određena je RT-PCR i Western blot pokusa; Stabilne stanične linije koje su stvorene za svaki od staničnih linija (sh-puža). Odsutnost puž pregled u SNU216 i SNU484 stanica izazvana smanjena migraciju i invaziju. B. SNU216 (gornja ploča) i SNU484 (donji prikaz) stanice su zaražene s lentivirusima eksprimiraju lentivirusnog PLKO vektor ciljanje puž
ili praznu PLKO vektor (EV) na dan 0, a zatim sakupljene na 7 dana nakon infekcije , Unosom puž je određena pomoću RT-PCR i Western blot pokusa; Stabilna stanična linija se generira za svaku od staničnih linija (O /E-puž). Puž prekomjerna ekspresija u SNU216 i SNU484 stanica izazvana povećanu migraciju i invaziju. C. puž prekomjerna ekspresija inducirana povećanu ekspresiju mRNA VEGF Netlogu i MMP11 Netlogu u SNU216 i SNU484 stanice u realnom vremenu RT-PCR analize. Donja ploča pokazuje reprezentativne RT-PCR podaci za VEGF Netlogu, MMP11 Netlogu, puž Netlogu i GAPDH Netlogu. Podaci pokazuju srednja vrijednost ± SE najmanje 3 nezavisna eksperimenta. * Označava P izvoznici < 0,05 Studentovim t-test pregled.
Za određivanje puževa ulogu u invaziji želučanom stanica karcinoma, izmjerili smo kemotaktičnu invaziju stanicama primjenom transjažičnih sustav s filtrima prethodno obloženim s Matrigel. Za mjerenje migraciju želučanih stanica raka, izmjerili smo migraciju stanica pomoću aparata za komornu Boyden. Odsutnost puž pregled od shRNA inducirane smanjena migraciju i invaziju SNU216 i SNU484 stanica, kao što je prikazano na slici 1A. Za razliku od puža pregled ušutkavanja rezultata, pojačanom ekspresijom puž inducirana povećana za migraciju i invaziju SNU216 i SNU484 stanica, kao što je prikazano na slici 1B. Prekomjerna ekspresija puž je također bila povezana s povećanim VEGF i MMP11 (slika 1C). Pregled Učinak puž prekomjernom ekspresijom na tumorske agresivnosti i GC preživljavanje pacijenta
pozitivnog nuklearne bojanjem puž na razinama ≤50%, 50-75%, i ≥75% se promatra u 13.4% (42/314), 52,2% (164/314) i 34,4% (108/314), odnosno, GC bolesnika 314 u imunohistokemijsku analizu. Puž ekspresija je navedeno u crijevnom i difuznog tipa GCS (slika 2A, B). Puž prekomjerna ekspresija (≥75% pozitivnost) značajno korelira s veličinom tumora, bruto tipa, dubine invazije, enzim imunoanaliza, perineuralnu invaziju i limfnih čvorova metastaza (Tablica 1). Puž prekomjerna ekspresija također bio povezan s povećanim veličine tumora (P Netlogu = 0,028), a iskopani bruto tip (P izvoznici < 0,001); i povećana invazivnost tumora, tj više T fazi (P pregled < 0,001), a prisustvo perineuralnu invazije (P pregled < 0,001) lymphovascular tumor embolije (P pregled = 0.002). Povećan limfni čvor metastaze također bio povezan s puž ekspresijom (P
= 0.002) .U skladu s gore navedenim podacima koji ukazuju na pozitivan odnos između puž prekomjernom ekspresijom i GC agresivnosti, puž prekomjerna ekspresija značajno korelira s ukupnom preživljavanju među GC bolesnika (p
= 0,023) (Slika 2C). Linearni odnos je zabilježeno između povećanog nuklearnog izražavanja puž i skraćeni opstanak (≤50%: 76,6 ± 2,7 mjeseci; 50-75%: 68,5 ± 2,0 mjeseci, ≥75%: 63,3 ± 2,8 mjeseci). Puž prekomjerna ekspresija (≥75% pozitivnost) identificiran je kao nezavisni prediktor lošom prognozom u 314 bolesnika s GC, prilagođen dobi, spola, histološka klasifikacija i lokaciji tumora, pomoću regresijskog modela proporcionalnog hazarda Cox (P pregled = 0,033 Tablica 2). Slika 2 izraz puž u želučanog adenokarcinoma (GC) uzoraka tkiva i Kaplan-Meir parcele ukupne opstanak 314 GC pacijenata. Puž uglavnom izražen u jezgrama GC stanicama (crijevna tipa (A) i difuzni tip (pečatni prsten) stanice (B)), uključen u tkivnim array uzorcima. Neki reaktivni fibroblasti također pokazala puž nuklearna izraz (uvećanja: × 400). C. Kaplan-Meier analiza ukupnog preživljavanja od GC bolesnika na temelju puž izražavanja. Linearni odnos između povećane puž nuklearne izražavanja i kraće preživljenje je viđen kod GC bolesnika (P pregled = 0,023). Log-rank test je korišten za izračun P
vrijednosti.
Tablica 1. Odnos između puž izražavanja i kliničkopatološkim obilježja u 314 bolesnika s karcinomom želuca
broj bolesnika (N = 314) pregled
puž pozitivnosti
pvalue
< 75%
≥75%
Dob (godine)
58,5 ± 10,6 pregled 59,1 ± 11,9 pregled 0.695 pregled, Sex pregled muški pregled 218 pregled 143 pregled 75 pregled 0,996 pregled ženskih pregled 96 pregled 63 pregled, 33 pregled, veličina tumora pregled ≤4.0 cm pregled 192 pregled 135 pregled 57 pregled 0,028 izvoznici > 4,0 cm
122 pregled 71 Netlogu 51 pregled Lokacija pregled Gornje /Srednji pregled 167 pregled 112 pregled 55 pregled 0,561 pregled Donja pregled 147 pregled 94 pregled, 53
dubini invazije
T1 pregled 160 pregled 127 pregled 33 izvoznici < 0.001 pregled T2 pregled, 41 pregled, 26 pregled, 15 pregled, T3 pregled, 68 pregled, 33 pregled, 35 pregled, T4 pregled 43 pregled, 19 pregled 24 77 pregled, 51 pregled, 26 izvoznici <br>; 0.001 pregled Stan /depresivan pregled 131 pregled 105 pregled 26 pregled Iskopani pregled 106 pregled 50 pregled, 56 pregled, histološki tip tumora pregled crijeva pregled 182
123 pregled 59 pregled 0,609 pregled difuznu pregled 122 pregled 76 pregled, 46
Mješoviti
10
7
3 pregled perineuralnu invazije Netlogu negativna pregled 202
150 pregled 52 Netlogu < 0.001 pregled pozitivnih pregled 111 pregled 55 pregled, 56 pregled Lymphovascular embolije pregled Negativna pregled 193
139
54
0,002 pregled Pozitivan pregled 120 pregled, 66 pregled, 54 pregled limfnih čvorova metastaze pregled N0, n1 pregled 270 pregled 186 pregled 84 pregled 0,002 pregled N2, N3 pregled 44 pregled, 20 pregled, 24 pregled Tablica 2 Multivarijatna analiza preživljenja s Cox regresijska modela u 314 karcinome želuca
varijabli pregled pregled B
SE
HR (95% CI)
P
doba (≤59 nasuprot > 59)
-0.438 pregled 0,264 pregled 0.645 (0.385-1.082)
0,097 pregled Spol (muško u odnosu na žene)
-0.037 pregled 0,267 pregled 0,963 (0.571-1.626)
0,889
stranice (gornji i srednji u odnosu na niže)
0,635 pregled 0,264 pregled 1,887 (1.126 -3,164) pregled 0,016 pregled Lauren (crijevna vs difuzni)
-0.537 pregled 0,263 pregled 0.585 (0.349-0.978)
0.041
puž (≥75% u odnosu na < 75 %)
-0.528 pregled 0,248 pregled 0.590 (0.363-0.958)
0,033 pregled Napomena: B, koeficijent; HR, omjer rizika; CI, interval pouzdanosti. Pregled Identifikacija gena obrazaca ekspresije temeljem puž prekomjernom ekspresijom korištenjem cDNA čipovi pregled cDNA čipovi su korišteni za usporedbu profila genske ekspresije 45 GC primjeraka. Identificirali smo 213 gena koji su različito izraženi na značajne razine (P izvoznici < 0,05) između GC uzoraka s većim (≥75%) i niže razine (< 75%) puž izraz (Tablica 3). Od tih 213 gena, 82 su regulira prema gore i 131 su regulirani u GC uzoraka s višim razinama (≥75%) od puž izražavanja. Koristili smo hijerarhijski analizu clustering procijeniti 213 gena i 45 GC primjeraka; nadzirana analiza klastera dali uzorke za uzorke s višim i nižim razinama puž izražavanja grupirani u 2 različite grupe, osim jednog uzorka s višim razinama puž izražavanja (Slika 3). Ispitati bioloških funkcija uključenih u diskriminirati genima, proveli smo analizu na GO kategorije. Jedanaest geni su povezani s reguliranjem stanica raka-ECM prianjanje (P izvoznici < 0,021) i ECM proteina regulacije (P izvoznici < 0,028, Tablica 4). Najviše je ona uključena u tumor. ONECUT1 pregled, DIMTS pregled, IFNAR2 pregled, MSR1 pregled i SORL1
utjecati na migraciju ili metastaza, proces koji uključuje vezivanje tumorskih stanica na bazalne membrane, razgradnju lokalne vezivnog tkiva, te penetracije i migraciju tumorskih stanica kroz strome [21-25] .table 3 Geni različito izražena u GC uzoraka s višim razinama puž izražavanja pregled PROBE_ID
SIMBOL
IME pregled
Geni reguliran u uzorcima s višim razinama (≥75%) od puž izražavanja (P izvoznici < 0,05) pregled ILMN_2374449 pregled SPP1
izlučuje fosfoprotein 1 pregled ILMN_2337923 pregled TPD52L1
tumora proteina D52-like 1 pregled ILMN_1679838 pregled WBP5
WW domena za vezanje proteina pet pregled ILMN_2078592 pregled C6orf105
androgenih ovisan TFPI -regulating proteina pregled ILMN_1714383 pregled TPD52L1
tumora proteina D52-like 1 pregled ILMN_1674817 pregled C1orf115
kromosoma 1 otvoreni okvir čitanja 115 pregled ILMN_1813561 pregled scin
Scinderin
ILMN_1759818
SORL1
Sortilin vezane receptora, L (klasa DLR) ponavlja sadrže pregled ILMN_1745686 pregled MFHAS1
Maligni fibrozni histiocitom pojačan slijed 1 pregled ILMN_2060115 pregled SORL1
Sortilin vezanih receptora, L (DLR razred) A ponavlja sadrže
ILMN_2337263
PKIB
protein kinaze (cAMP ovisna, katalizator) inhibitor beta pregled ILMN_2173835 pregled FTHL3
feritin, teška polipeptid 1 pseudogen 3 pregled ILMN_1791057 pregled IFNAR2
interferona (alfa, beta i omega) receptora 2 pregled ILMN_1807114 pregled LOC255620
Slično UNC-93 homolognog B1 (C. elegans), transkript varijanta 1 (LOC255620), mRNA pregled ILMN_1669393 pregled GGT1
Gamma-glutamiltransferaze 1 pregled ILMN_1685798 pregled MAGEA6
Melanom antigen obitelj A, 6
ILMN_3269395 pregled GGT2
Gamma-glutamiltransferaze 2 pregled ILMN_1669833 pregled SH2B2
SH2B adapter proteina 2 pregled ILMN_3238534 pregled LOC100133817
hipotetske protein LOC100133817 pregled ILMN_2099315 pregled TRPM8
Prolazna receptora potencijal kation kanala, potfamilija M, član 8. pregled ILMN_3298065 pregled LOC729195
Slično apikalni rano endozomskom glikoprotein Netlogu ILMN_1717726 pregled FLJ43752
Long među-ne-protein kodiranja RNA 336 pregled ILMN_1670452 pregled ANKRD20A1
Ankyrin ponoviti domene 20 obitelji, član A1 pregled ILMN_3201060 pregled LOC100132655
pregled hipotetskom proteina LOC100132655 pregled ILMN_3282829 pregled LOC727913
Slično iduronate 2-sulfataza (Hunter sindrom) pregled ILMN_2339691 pregled SYVN1
sinovijalni apoptoze inhibitora 1 , synoviolin pregled ILMN_1785549 pregled SLC30A2
otopljene tvari prijevoznik obitelj 30 (cink transporter), član 2. pregled ILMN_3191898 pregled LOC100129630
hipotetske LOC100129630 pregled ILMN_1704204 pregled LOC642204
Ankyrin ponoviti proteina domena koja sadrži 26-like
ILMN_1682280
LOC647753
hipotetske proteina LOC647753
ILMN_3201944
LOC646438
hipotetskom LOC646438
ILMN_2233314 pregled SPANXA1
Sperma protein povezan s jezgrom, X-vezani, član obitelji A1 pregled ILMN_3305980 pregled NS3BP
NS3BP pregled ILMN_1747850 pregled CRIM2
Kielin /chordin protein sličan pregled ILMN_1700590 pregled LOC645590
slično cAMP-ovisni tip protein kinaze I-beta podjedinica regulatorni pregled ILMN_1766316 pregled FLJ32679 pregled pregled Golgin-kao hipotetski protein LOC440321 pregled ILMN_1890741 pregled Hs
0,552561
otočića gušterače cDNA klon hbt09690 3, mRNA slijed pregled ILMN_3308255 pregled MIR33A pregled
mikrornk 33a pregled ILMN_1815716 pregled LMLN
Leishmanolysin nalik (metalopeptidaze obitelj M8) pregled ILMN_1654945 pregled DNMT3A
DNA (citozin-5 -) - mctiltransfcrazu 3 alfa pregled ILMN_2256050 pregled SERPINA1
serpin inhibitor peptidaze, clade a (alfa-1 antiproteinase, antitripsin), član 1 pregled ILMN_1759487 pregled EGFLAM
EGF-kao, fibronektina tip III i laminin G domene pregled ILMN_1760410 pregled LOC653086
slično ran-vezujući protein 2-like 1 izoforma 2 pregled ILMN_1668969 pregled MIXL1
Mix paru nalik homeobox pregled ILMN_3279757 pregled LOC100132532
hipotetske protein LOC100132532 pregled ILMN_1715372 pregled CAMKK1
Kalcij /kalmodulin ovisna proteinska kinaza 1, alfa pregled ILMN_1731370 pregled Yang et al. Kim et al. Svi autori pročitali i odobrili konačnu rukopis. Pregled

• Airway celularnost, lipida laden makrofagi i mikrobiologije želučanog soka i dišnih putova u djece s povratni ezofagitis
• Prognostički značaj omjera neutrofila i limfocita i omjer limfocita trombocita u pacijenata s uznapredovalim rakom želuca liječenih FOLFOX chemotherapy