Overexpression vun Wéngertsschleek ass verbonne mat lymph Node Metastasen an aarme hätt an Patienten mat gastric Kriibs

Overexpression vun Wéngertsschleek ass mat lymph Node Metastasen assoziéiert an aarme hätt an Patienten mat gastric Kriibs VerfÜgung méiglech VerfÜgung Background VerfÜgung Epithelial-mesenchymal Transitioun (EMT) spillt eng wichteg Roll an entholl Werdegang an Invasioun. Wéngertsschleek ass eng bekannt regulator vun EMT zu verschiddenen malignant erhéijen. Dës Etude propagéieren d'Roll vun Wéngertsschleek zu gastric Kriibs. VerfÜgung Method VerfÜgung Mir d'Auswierkunge vun entsat iwwerpréift oder overexpressed Wéngertsschleek lenti-Haren gesond an gastric Kriibs Zellen benotzt. Immunohistochemical Analyse vun Otemschwieregkeeten microarrays vu 314 Patienten mat gastric adenocarcinoma (GC) war benotzt Wéngertsschleek d'clinicopathological an prognostic Bedeitung ze bestëmmen. Ënnerscheed Gentherapie Ausdrock vun 45 GC uplanzen mat Wéngertsschleek overexpression war mat cDNA microarray Analyse ze propagéieren. VerfÜgung Resultater VerfÜgung Silencing vun Wéngertsschleek vun shRNA ofgeholl Invasioun an Migratioun zu GC Zell Linnen. Ëmgedréit, fräi Wéngertsschleek overexpression Invasioun an Migratioun vun gastric Kriibs Zellen, am Aklang mat fräi VEGF an MMP11. Wéngertsschleek overexpression (≥75% positive nuklear staining) war och vill mat entholl Werdegang verbonne (P VerfÜgung &Si besteet; 0.001), lymph Node Investitiounen (P VerfÜgung = 0.002), lymphovascular Invasioun (P VerfÜgung = 0.002), an perineural Invasioun (P VerfÜgung = 0.002) an den 314 GC Patienten, a mat kuerz Iwwerliewe (P VerfÜgung = 0.023). cDNA microarray Analyse réischt 213 differentially ausgedréckt Genen am GC Stoffer mat Wéngertsschleek overexpression, dorënner Genen Zesummenhang mat Metastasen an Invasioun. VerfÜgung Conclusioun VerfÜgung Wéngertsschleek vill invasiveness /Opbau Fähegkeet vun GCs schellt, a vläicht och als predictive uweist benotzt ginn fir Iwwregens hätt oder aggressiveness vun GCs. VerfÜgung Schlësselwieder VerfÜgung Mo. Adenocarcinoma Wéngertsschleek Lymph Node Metastasen traureg Background VerfÜgung epithelial-mesenchymal Transitioun (EMT), enger Entwécklungsphase Prozess woubäi epithelial Zellen intercellular Haftung reduzéieren an myofibroblastic Fonctiounen leien, ass kritesch ze entholl Werdegang [1-3]. Während EMT, bedeitendst Ännerungen geschéie, dorënner downregulation vun epithelial lues wéi E-cadherin, br vun β-catenin (dh, dissociation vun membranous β-catenin an br an d'nuklear unzekräizen), an upregulation vun mesenchymal lues wéi vimentin an N -cadherin [3-6]. EMT ass duerch Repressioun vun E-cadherin Ausdrock vun EMT Legislateuren wéi Wéngertsschleek, Slug, an Twist entschlof. De Wéngertsschleek Famill vun Zénk-Fanger transcriptional repressors represses direkt E-cadherin kënschtlech VerfÜgung an VIVO VerfÜgung via en Zesummespill tëschent hir COOH-Uschloss Regioun an de 5 "- CACCTG-3 'Haaptrei an der E-cadherin Promoteur [7-9]. Wéngertsschleek Berichter wichteg an e puer carcinomas, dorënner Net-kleng Zell haett carcinomas, spillt carcinomas, urothelial carcinomas, an hepatocellular carcinoma [10-13]. Ënnersich immunohistochemical och de Medeziner Bedeitung vun Wéngertsschleek overexpression zu gastric adenocarcinoma (GC) [14, 15] Analysë weisen benotzt. Allerdéngs puer Reportagen op der Rollen vun Wéngertsschleek am GC hunn abegraff clinicopathological, prognostic, a funktionell kënschtlech VerfÜgung souwéi Gentherapie Ausdrock Resultater analyséiert. Mir also Wéngertsschleek d'Wierkung op invasiveness /Opbau Fähegkeet an gastric Kriibs Zell Linnen évaluéiert, a propagéieren och d'Méiglechkeet vun Wéngertsschleek als predictive Bewaacher benotzt ginn fir Evaluéieren aarmséileg hätt oder entholl aggressiveness am GC Patienten. Mir évaluéiert och der Gentherapie Ausdrock Muster an 45 GC Stoffer mat Wéngertsschleek overexpression, cDNA microarrays benotzt. VerfÜgung Method VerfÜgung shRNA lentivirus-mediated silencing an overexpression vun Wéngertsschleek vun Zellen gastric Kriibs Mënscherechter gastric Kriibs Zell Linnen SNU216 an SNU484 VerfÜgung sech aus koreanesch Zell Linn Bank (KCLB) kritt a sech duerch DNA profiling versoen. Dës Zellen cultured zu RPMI1640 mëttelfristeg mat 10% An et Bovine serum (FBS), 100 U /ml penicillin, an 100 μg /ml streptomycin (hyClone, Ogden, ol). All Zellen sech op 37 ° C an 5% CO haten 2. Lentiviral-baséiert RNS knockdown an overexpression sech fir silencing an overexpression vun Wéngertsschleek benotzt. Lentiviruses entweder Net-Zil oder Wéngertsschleek ausdrécken VerfÜgung shRNAs -targeted fir silencing sech benotzt; engem PLKO lentiviral Vecteure Wéngertsschleek gezielt VerfÜgung oder eidelen PLKO Vecteure sech fir overexpression vun Wéngertsschleek vun der SNU216 an SNU484 Zellen benotzt. Lentivirus Stock sech mat der Virapower ™ lentiviral Verpackungen Mix mat der 293FT Zell Linn produzéiert laut den Hiersteller d'Protokoll (Invitrogen, Karlsbad CA). 1 dilution vun Virus:: SNU216 an SNU484 zu 50% Niewebaach ugebaut Zellen sech fir 24 h an engem 1 incubated Medien mat 5 μg /ml Polybrene. No enger 24-h Erhuelung Period an komplett Medien ouni Virus, huet polyclonal stabil Zell Linnen ausgewielt an Medien mat 5 μg /ml puromycin haten. Silencing oder overexpression vun Wéngertsschleek war vun RT-Hinnen alleguer a westlech blotting alles. VerfÜgung Real Zäit RT-Hinnen alleguer Analyse vun VEGF VerfÜgung, MMP11 VerfÜgung, an Wéngertsschleek VerfÜgung zu gastric Kriibs Zellen VerfÜgung Total bewosst RNS mat der TRIzol Method (Fläch-Aldrich, St Louis, MO, USA) war ofgebaut. Fir RT-Hinnen alleguer Analyse, 2-μg aliquots vun RNS sech ze cDNA Synthes mat 200 U vun MMLV transcriptase ëmgedréint ënnerworf an 0,5 μg vun oligo (DT) -15 primer (Promega, Madison, allem, USA). Chemeschen real-Zäit Hinnen alleguer war mat de Rotor-Gene ™ System (QIAGEN, Hilden, Däitschland) standing benotzt AccuPower 2 × Greenstar qPCR Master Mix (Bioneer, Daejeon, Korea). cDNA zu 1 μl vun der Reaktioun Mëschung war mat 0,5 U vun GoTaq DNA polymerase (Promega) an 10 pmol jiddereng vun den folgenden Sënn an antisense primers Implikatioune: GAPDH VerfÜgung 5 "- TCCATGACAACTTTGGTATCG-3 ", 5 "- TGTAGCCAAATTCGTTGTCA-3 '; Wéngertsschleek VerfÜgung 5 "- CTTCCTCTCCATACCTG-3 ", 5 "- CATAGTTAGTCACACCTCGT-3 '; VEGF VerfÜgung 5 "- TTGCTGCTCTACCTCCACCA-3 ", 5 "- GCACACAGGATGGCTTGAA-3 '; MMP11 VerfÜgung 5 "- CTTGGCTGCTGTTGTGTGCT-3 ", 5-AGGTATGGAGCGATGTGACG-3 ". D'thermesch Vëlos Profil war: denaturation fir 30 ass bei 95 ° C, annealing fir 30 ass bei 52 ° C (je op de primers benotzt ginn), an Endung fir 30 ass bei 72 ° C. Fir semi-grouss Beurteelung vun Ausdrock Niveauen, goufen 30 Zykle fir all Hinnen alleguer Reaktioun benotzt. Hinnen alleguer Produite goufen Gréisst-fractionated op 1.0% ethidium bromide /agarose gels an ënner UV transillumination laachen. D'loung Zyklus (Kosovo) ass den fractional Zyklus Zuel definéiert bei deem de fluorescence enger fester loung virun baseline Zack. Relativer Gentherapie Ausdrock war mat der Moyenne CT Wäert fir all triplicate Prouf laachen Minus der Moyenne triplicate CT Wäert fir GAPDH VerfÜgung. Differenzen tëscht der Kontroll (eidel Vecteure) an Experimenter Gruppen (mat der lentivirus Krankheet) sech mat der Formel 2 berechent - ([△ CT Lenti] - [△ CT Kontroll]) a ausgedréckt als fantastesch Verännerung Ausdrock no de Komparativ loung Zyklus Method (2- △△ CT) [16]. VerfÜgung Western blotting VerfÜgung BTS sech zu lysis Prellbock (1% Triton X-100, 1mM EGTA, 1mM héich, 10mM gesammelt an erofgaangen Tris-HCl, pH 7.4 an protease inhibitors). Zell Protokoll war fir 10 min bei 4 ° C vun centrifugation bei 10.000 × g VerfÜgung geläscht. Déi doraus resultéierend supernatants sech op eng 12% SDS-PAGE ënner denatured reduzéieren Konditiounen geléist an zu nitrocellulose Schläimhait transferéiert. D'Schläimhait sech mat 5% Nët-Fett gedréchent Mëllech bei Raumtemperatur mat Primärschoul antibodies fir 30 min an incubated gespaart. D'Schläimhait sech mat horseradish peroxidase-conjugated Secondaire antibody gewäsch a incubated. D'Signal war mat enger verstäerkter chemiluminescence (Amersham, Buckinghamshire, UK) visualized. VerfÜgung Zell Wanderung an Matrigel Invasioun assay VerfÜgung Gastric Kriibs Zellen mat 0,05% trypsin mat 0,02% héich (Fläch-Aldrich) gesammelt goufen, an Sursis an RPMI op eng Usammlung vun 3 × 10 3 Zellen gutt /. Membran Filter (pore Gréisst: 8 μm) zu ewechzegeheien 96-gutt chemotaxis CHAMBERS (Neuro NÄISCHT Gaithersburg, MD) waren Précoce-Beschichtete fir 4 h mat 5 mg /ml fibronectin bei Raumtemperatur. Aliquots (50 μl /gutt) vun der Zell Ophiewe sech an der ieweschter CHAMBERS iwwerlaascht, an 1% FBS war an der ënneschter Chambre iwwerlaascht. No 24-h incubation, waren Net-wanderen Zellen aus der ieweschter Chamber mat engem Koteng Swab geläscht; Zellen Moment op der ënneschter Uewerfläch vun der g sech mat Hoechst33342 (Fläch-Aldrich) geschriwwen. Invasiv Zellen sech um × 10 Vergréisserung ënnert engem fluorescence microscope gezielt. VerfÜgung Fir d'Matrigel Invasioun assay, 3 × 104 Zellen /gutt waren an der ieweschter Chambre rakommen, déi mat Matrigel (5 mg /ml zu kal mëttelfristeg bedeckt war, BD Transduction Laboratoiren, Franklin sin, NJ, USA), a serum-gratis mëttelfristeg mat 1% FBS oder Kontroll Gefier war op der ënneschter Chambre notéiert. No 24-h incubation, presentéieren Net-wanderen Zellen aus der ieweschter Chamber mat engem Koteng Swab geläscht huet, an Zellen op den ënneschten Uewerfläch vun der g sech mat Hoechst33342 (Fläch-Aldrich) geschriwwen. Invasiv Zellen sech dann um × 10 Vergréisserung ënnert engem fluorescence microscope gezielt. VerfÜgung Ray microarrays, immunohistochemistry, an Interpretatioun vun Resultater VerfÜgung enger semi-automatiséiert Otemschwieregkeeten arrayer (Beecher Instrumenter, allem, USA) war fréier d'Otemschwieregkeeten microarrays ze bauen . Mir kritt 3 Otemschwieregkeeten Placken, all 0,6 mm Duerchmiesser, aus entholl Bleck vum GC Patienten geholl. Placken a sech net aus der méi invasiv frontal oder zentrale Beräicher vun de erhéijen gesammelt. Drënner waren fir 30 min bei 60 ° C gebakene, deparaffinized mat xylene, an dann rehydrated. D'Sektiounen sech dono zu citrate antigen retrieval gefiermt dierfen, fir antigen retrieval microwaved, mat 3% Waasserstoff Hem zu methanol behandelt ze endogenous peroxidase Aktivitéit Duuscht, an dann mat 1% Bovine serum albumin incubated Net-spezifesch bindend ze blockéieren. Doropshin huet sech de Rubriken mat Kanéngchen anti-Wéngertsschleek (Abcam, UK) Iwwernuechtung bei 4 ° C incubated. Normal Kanéngchen serum war als negativ Kontroll benotzt. Nom Wäschen, Otemschwieregkeeten Rubriken sech mat Première antibody, counterstained mat hematoxylin behandelt, léif, an Descher. Op d'mannst 500 goufen entholl Zellen gezielt. De Prozentsaz vun Zellen mat Wéngertsschleek + Käre war ausgedréckt relativ gezielt op d'Gesamtzuel vun entholl Zellen. Nuclear Ausdrock vun Wéngertsschleek graded war vun der Mooss vun positive nuklear staining als ≤50% classifying, 50-75%, oder ≥75%. VerfÜgung Clinicopathological an Iwwerliewe Analyse vun gastric Kriibs Patienten VerfÜgung Mir engem Kohort vun 314 GC studéiert Patienten déi all tëschent 2005 an 2007. De Grupp huet sech aus 218 Männer an 96 Fraen mat engem mëttleren Alter vu 58,3 Joer (Rei, 25-83 Joer) mat engem gastrostomy mat lymph Node dissection um Pusan ​​National University Hospital (PNUH) mécht. Standard formalin-fix a paraffin-Ënnerbewosstsinn Rubriken sech aus de Chiffer vu wirklech, PNUH, an der National Biobank vun Korea, PNUH kritt. D'Etude gouf vun den institutionnelle Kritik Verwaltungsrot guttgeheescht. Keen vun de Patienten scho preoperative radiotherapy an /oder Chimiotherapie goen. Adjuvant Chimiotherapie baséiert op 5-FU war op Patienten mat Etappen verwalte II, III a IV der curative resection. Mir évaluéieren puer clinicopathological Faktoren no der Koreanesch standardiséierte wirklech Verknëppung fir Gastric Cancer, d'japanesch Course vun Gastric Carcinoma (3 drëtte Englesch Editioun), an der American Gemeinsam Comité op Cancer Stadium Manuell (7 September Editioun), dorënner entholl Site, consomméiert krut a Gréisst, Déift vun Invasioun, histological Klassifikatioun (dh, intestinal oder diffusen), an lymphovascular Invasioun [17-19]. Séminairen Resultat fir all Patient sech aus dem Datum vun Agrëff an den Datum vum Doud oder Mäerz 1, gefollegt 2012 Follow-up Periode vu ronn 1 bis 81.5 Méint gounge (Moyenne 51.4 Méint). Fäll verluer ze Suivi oder Doud vum keng Ursaach aner wéi gastric Kriibs vum Survival Taux Analyse censored goufen. Clinicopathological Fonctiounen huet mat Student d't analyséiert VerfÜgung Azeton, déi χ 2 Test, oder Fisher d'exakt Test fir Ënnerscheeder zu Wéngertsschleek Ausdrock ze testen. Entwéckele Iwwerliewe Diagrammen sech mat der Kaplan-Meier Method kritt, a Bedeitung war mat der Läschlëscht-Platz Test Verglach. Prognostic Facteure sech mat de Cox Réckgang stepwise Method (proportional iwwerschloen Modell) identifizéiert, fir den Alter 'Patienten ugepasst, Geschlecht, entholl Site, morphologic Typ (intestinal versus diffusen). Statistique Bedeitung war um P VerfÜgung &dra setzen; 0,05. Statistique Berechnungen huet mat SPSS Versioun 10.0 fir Windows (SPSS Galaxy Chicago, IL, USA) gesuergt. VerfÜgung cDNA microarray Analyse vun GC Stoffer baséiert op Wéngertsschleek overexpression VerfÜgung A Ganzen 45 frësch GC Stoffer aus der National kritt huet Biobank vun Korea, PNUH, an CNUH; averstaane war vun hiren Institutiounen review Conseils kritt. Total RNS war vun der frësch-gefruer Stoffer ofgebaut engem mirVana RNS Isolatioun Kit benotzt (Ambion Galaxy, Austin, Suerge). Cents nanograms vun insgesamt RNS war fir cDNA Synthes, gefollegt vun engem amplification /Etikette Etapp (kënschtlech VerfÜgung Transkriptiouns) mat der Illumina TotalPrep RNS Amplification Kit (Ambion) benotzt fir biotin-Label Crna synthesize. Crna Konzentratioune sech duerch d'RiboGreen Method (Quant-et RiboGreen RNS assay Kit; Invitrogen-cuisine Ämter, ON, Kanada) gemooss mat engem Victor3 spectrophotometer (PerkinElmer, CT), an Crna Qualitéit war op engem 1% agarose gelies alles. Gekennzeechent, Implikatioune Material (1500 NG pro Partie) war hybridized zu Illumina HumanHT-12 BeadChips v4.0, laut Hiersteller d'Instruktioune (Illumina, San Diego, CA). Vill Signaler sech duerch streptavidin-Cy3 entwéckelt. Flamenden Ofgrond huet mat enger Illumina iScan System gescannt. D'microarray Donnéeën sech mat der quantile normalization Method an Illumina BeadStudio Software normalized. Den Ausdrock Niveau vun all Gentherapie war nees e Log transforméiert 2 huel ier weider analyséiert. Iwwerschratt huet fir statistesch Analyse allem benotzt. Gene Ausdrock Differenzen sech statistesch relevant wann P VerfÜgung &Si besteet considéréiert; 0,05; all Tester goufen 2-tailed. Stärekoup analyséiert goufen benotzt Stärekoup an Treeview standing [20]. Der Gentherapie Ontologie (BEI) Programm (http:... //David abcc ncifcrf Gov /) war benotzt Genen an subgroups baséiert op biologesche Funktioun ze Kategorie. Fisher war genau Test an all Kategorie vun group ënnerscheet fir festzestellen, ob d'Undeeler vun Genen benotzt. GC Stoffer sech weider an déi ënnerdeelt mat héichen (≥75%) an ënnen (&Si besteet; 75%) Niveau vun Wéngertsschleek Ausdrock; Ënnerscheed Gentherapie Ausdrock tëscht war d'Gruppen identifizéiert. Primärschoul microarray Donnéeë sinn an NCBI d'Geo (Gene Expression Omnibus) Datebank (http:.....? //Www ncbi nlm nih Gov /Geo /fonktionnéiert /zu Enn CGI zu Enn = GSE38024). VerfÜgung Resultater VerfÜgung Reglement vun Wanderung an Invasioun vun gastric Kriibs Zellen vun Wéngertsschleek VerfÜgung Lentiviral-baséiert RNS knockdown a sech overexpression Approche benotzt Wéngertsschleek d'Roll vun Invasioun an Migratioun vun gastric Kriibs Zell Zeilen ze bestëmmen. SNU216 an SNU484 an dëser Etude benotzt Zelle vu Koreanesch Patienten gastric adenocarcinoma Zell Linnen etabléiert. Dës Zellen sech mat engem lentivirus Krankheet entweder Net-Zil oder Wéngertsschleek VerfÜgung -targeted shRNAs fir silencing ausdrécken. A PLKO lentiviral Vecteure datt Wéngertsschleek VerfÜgung cibléiert an eidelen PLKO Vecteure sech benotzt Wéngertsschleek overexpression zu SNU216 an SNU484 Zellen ze induce. Polyclonal stabil Zell goufe benotzt puromycin ausgewielt. Wéngertsschleek VerfÜgung Ausdrock war vun RT-Hinnen alleguer a westlech blotting alles; stabil Wéngertsschleek VerfÜgung knockdown (Ok-Wéngertsschleek) an Wéngertsschleek overexpression Zell Linnen (OE-Wéngertsschleek) kritt huet (Dorënner 1). Figur 1 Roll vum Wéngertsschleek zu Invasioun an Migratioun vun gastric Kriibs Zell Linnen. A. SNU216 (ieweschte Rot) an SNU484 (ënneschten Rot) Zellen sech mat lentiviruses Krankheet ausdrécken entweder Net-Zil- shRNA (shNT VerfÜgung) oder Wéngertsschleek VerfÜgung shRNA op Dag 0, an dann op den Dag 7 Post-Wonn recoltéiert. Wéngertsschleek VerfÜgung knockdown war vun RT-Hinnen alleguer a westlech blotting alles; stabil Zell goufe fir jiddereng vun der Zell Linnen (Ok-Wéngertsschleek) entsteet. Silencing vun Wéngertsschleek VerfÜgung zu SNU216 an SNU484 Zellen entschlof ofgeholl Wanderung an Invasioun. B. SNU216 (ieweschte Rot) an SNU484 (ënneschten Rot) Zellen sech mat lentiviruses Krankheet entweder eng lentiviral PLKO Vecteure ausdrécken Wéngertsschleek gezielt VerfÜgung oder eidelen PLKO Vecteure (ev) op Dag 0, an dann recoltéiert op wëssen 7 Post-Wonn . D'overexpression vun Wéngertsschleek war vun RT-Hinnen alleguer a westlech blotting alles; stabil Zell Linn war fir jiddereng vun der Zell Linnen (O /E-Schleek) entsteet. Wéngertsschleek overexpression zu SNU216 an SNU484 Zellen fräi Wanderung an Invasioun entschlof. C. Wéngertsschleek overexpression fräi mRNA Ausdrock vun VEGF VerfÜgung an MMP11 VerfÜgung zu SNU216 entschlof an SNU484 Zellen vun real-Zäit RT-Hinnen alleguer Analyse. Ënneschten Rot beweist Vertrieder RT-Hinnen alleguer Zuele fir VEGF VerfÜgung, MMP11 VerfÜgung, Wéngertsschleek VerfÜgung, an GAPDH VerfÜgung. Donnéeën weisen déi mengen SE vun op d'mannst 3 onofhängeg Experimenter ±. * Bedeit P VerfÜgung &Si besteet; 0,05 vum Student d't VerfÜgung Azeton. VerfÜgung Fir Wéngertsschleek d'Rollen vun gastric Kriibs Zell Invasioun festzestellen, gemooss mir chemotactic Invasioun vun den Zellen der Transwell System mat Filter- Pre-bedeckt mat Matrigel benotzt. Fir Migratioun vun gastric Kriibs Zellen Moossnam, assayed mir Zell Migratioun engem Boyden Chambre Staatsapparat benotzt. Silencing vun Wéngertsschleek VerfÜgung vun shRNA entschlof ofgeholl Wanderung an Invasioun vun SNU216 an SNU484 Zellen, wéi zu Dorënner 1A gewisen. Am Géigesaz zu der silencing Resultater VerfÜgung Wéngertsschleek, overexpression vun Wéngertsschleek entschlof Wanderung an Invasioun vun SNU216 an SNU484 Zellen fräi, wéi an Dorënner 1B gewisen. Overexpression vun Wéngertsschleek huet och mat sech VEGF assoziéiert an MMP11 (Dorënner 1c). VerfÜgung Effekt vun Wéngertsschleek overexpression op entholl aggressiveness an GC Patient Iwwerliewe VerfÜgung Positiv nuklear staining fir Wéngertsschleek um Niveau vun ≤50%, 50-75%, an ≥75% war zu 13,4% (42/314), 52,2% (164/314), an 34,4% (108/314), respektiv, vun der 314 GC Patienten zu immunohistochemical Analyse observéiert. Wéngertsschleek Ausdrock war zu intestinal an diffusen Typ vun GCs bemierken (Dorënner 2A, B). Wéngertsschleek overexpression (≥75% komm) bedeitend soll mat entholl Gréisst, consomméiert Typ, Déift vun Invasioun, lymphovascular Invasioun, perineural Invasioun, an lymph Node Metastasen (Table 1). Wéngertsschleek overexpression huet och mat sech entholl Gréisst verbonne (P VerfÜgung = 0.028) an ausgewäert consomméiert Typ (P VerfÜgung &Si besteet; 0.001); a fräi entholl invasiveness, i.e., héich T Etapp (P VerfÜgung &Si besteet; 0.001) an der Präsenz vun perineural Invasioun (P VerfÜgung &Si besteet; 0.001) an lymphovascular entholl emboli (P VerfÜgung = 0.002). Geklomm lymph Node Metastasen war och am Zesummenhang mat Wéngertsschleek overexpression (P VerfÜgung = 0.002) .In Aklang mat der uewe Daten déi positiv Relatioun tëschent Wéngertsschleek overexpression an GC aggressiveness weist, Wéngertsschleek overexpression vill mat globale Iwwerliewe ënnert GC Patienten (P
= 0.023) (Dorënner 2C). (:; 50-75% 76,6 ± 2,7 Méint: 68,5 ± 2.0 Méint; ≥75%: 63,3 ± 2,8 Méint ≤50%) A linear Relatioun war tëscht fräi nuklear Ausdrock vun Wéngertsschleek a verkierzt Iwwerliewe observéiert. Wéngertsschleek overexpression (≥75% komm) war mat GC zu 314 Patienten als onofhängeg Estimatioun vun aarme hätt bestëmmt, fir Alter ugepasst, Geschlecht, histologic klasséieren, an entholl Plaz, mat engem Réckgang Cox proportional iwwerschloen Modell (P VerfÜgung = 0,033; Table 2). Figur 2 Wéngertsschleek Ausdrock vun gastric adenocarcinoma (GC) Otemschwieregkeeten Echantillonen an Kaplan-Meir Diagramm vun globale Iwwerliewe vun 314 GC Patienten. Wéngertsschleek war zu Käre vun GC Zellen (intestinal Typ (A), an diffusen Typ (signet Ring) Zellen (B)) abegraff an Otemschwieregkeeten vill uplanzen meeschtens ausgedréckt. Verschidde reaktiv Här iwert mech selwer awer och Wéngertsschleek nuklear Ausdrock (Vergréisserung: × 400). C. Kaplan-Meier Analyse vun globale Iwwerliewe vun GC Patiente baséiert op Wéngertsschleek Ausdrock. A linear Relatioun tëscht fräi Wéngertsschleek nuklear Ausdrock a kuerz Iwwerliewe war ënner GC Patienten (P VerfÜgung = 0.023) gesinn. Log-Platz Test war vun Ufank un P VerfÜgung Wäerter berechnen. VerfÜgung Table 1 Bezéiung tëscht Wéngertsschleek Ausdrock an clinicopathological Beméien an 314 Patienten mat gastric Kriibs VerfÜgung Zuel vu Patienten VerfÜgung (N = 314) VerfÜgung
Wéngertsschleek komm
Pvalue

&Si besteet; 75%
≥75%
Alter (Joer)
58,5 ± 10,6 VerfÜgung 59,1 ± 11,9 VerfÜgung 0,695 VerfÜgung Sex VerfÜgung Männlech VerfÜgung 218 zu 143 VerfÜgung 75 VerfÜgung 0,996 VerfÜgung Weiblech VerfÜgung 96 VerfÜgung 63 zu 33 VerfÜgung entholl Gréisst VerfÜgung ≤4.0 cm VerfÜgung 192 zu 135 VerfÜgung 57 VerfÜgung 0,028 VerfÜgung > 4,0 cm VerfÜgung 122 VerfÜgung 71 VerfÜgung Location 51
Uewerstad /Middle VerfÜgung 167 zu 112 VerfÜgung 55 VerfÜgung 0,561 VerfÜgung niddreg VerfÜgung 147 VerfÜgung 94 zu 53 VerfÜgung Missiounen Déift
T1 VerfÜgung 160 zu 127 VerfÜgung 33 VerfÜgung &Si besteet; 0,001 VerfÜgung T2 VerfÜgung 41 zu 26 zu 15 VerfÜgung T3 VerfÜgung 68 zu 33 zu 35 VerfÜgung T4 VerfÜgung 43 zu 19 zu 24
Gross Typ VerfÜgung nik VerfÜgung 77 zu 51 zu 26 VerfÜgung &Si besteet; 0,001 VerfÜgung flaach /depriméiert VerfÜgung 131 zu 105 VerfÜgung 26 VerfÜgung ausgegruewe VerfÜgung 106 VerfÜgung 50 zu 56 VerfÜgung Histological Typ VerfÜgung Intestinal VerfÜgung 182
123 VerfÜgung 59 VerfÜgung 0,609 VerfÜgung Firwat 122 VerfÜgung 76 zu 46 zu Bréissel VerfÜgung 10 VerfÜgung 7 VerfÜgung 3 VerfÜgung Perineural Invasioun
negativ VerfÜgung 202 zu 150 VerfÜgung 52 VerfÜgung &Si besteet; 0,001 VerfÜgung Positiv VerfÜgung 111 VerfÜgung 55 zu 56 VerfÜgung Lymphovascular emboli VerfÜgung Negativ VerfÜgung 193 zu 139 VerfÜgung 54 VerfÜgung 0,002 VerfÜgung Positiv VerfÜgung 120 VerfÜgung 66 zu 54 VerfÜgung Lymph Node Metastasen VerfÜgung N0, N1 VerfÜgung 270 zu 186 VerfÜgung 84 VerfÜgung 0,002 VerfÜgung N2, N3 VerfÜgung 44 zu 20 VerfÜgung 24 VerfÜgung Table 2 Multivariate Iwwerliewe Analyse mat Cox Réckgang Modell an 314 gastric Cancers VerfÜgung Variablen VerfÜgung B
SE
HR (95% CI)
P
Alter (≤59 versus > 59) VerfÜgung -0,438 VerfÜgung 0,264 VerfÜgung 0.645 (0.385-1.082) VerfÜgung 0,097 VerfÜgung Geschlecht (männlech versus weiblech) VerfÜgung -0,037 VerfÜgung 0,267 VerfÜgung 0.963 (0.571-1.626) VerfÜgung 0,889 VerfÜgung Site (uewen an Mëtt versus ënnen) VerfÜgung 0,635 VerfÜgung 0,264 VerfÜgung 1.887 (1.126 -3.164) VerfÜgung 0,016 VerfÜgung Lauren (intestinal vs diffusen) VerfÜgung -0,537 VerfÜgung 0,263 VerfÜgung 0,585 (0.349-0.978) VerfÜgung 0,041 VerfÜgung Wéngertsschleek (≥75% versus &Si besteet; 75 %) VerfÜgung -0,528 VerfÜgung 0,248 VerfÜgung 0.590 (0.363-0.958) VerfÜgung 0,033 VerfÜgung Opgepasst: B, ass souguer gemaach ginn; HR, iwwerschloen Verhältnis; CI, Vertrauen nolauschterer. VerfÜgung Umeldung vun der Gentherapie Ausdrock Musteren baséiert op Wéngertsschleek overexpression cDNA microarrays benotzt VerfÜgung cDNA microarrays benotzt goufen Gentherapie Ausdrock Profiler vun 45 GC uplanzen ze vergläichen. Mir identifizéiert 213 Genen datt differentially um groussen Niveauen ausgedréckt huet (P VerfÜgung &Si besteet; 0,05) tëscht GC uplanzen mat héichen (≥75%) a manner Niveauen (&Si besteet; 75%) vun Wéngertsschleek Ausdrock (Table 3). Vun deenen 213 Genen, goufen 82 upregulated an 131 goufen der GC uplanzen mat héichen Niveau (≥75%) vun Wéngertsschleek Ausdrock downregulated. Mir benotzt Hierarchie Käre Analyse der 213 Genen an 45 GC uplanzen ze bewäerten; iwwerwaachter Käre Analyse vum Musteren fir Echantillon mat héijer a nidderegen Niveaue vun Ausdrock Wéngertsschleek Strooss an 2 verschidde Gruppen, ausser fir eng Prouf mat héichen Niveau vun Wéngertsschleek Ausdrock (Dorënner 3). Fir d'biologesch Funktiounen Équipe an discriminating Genen ermëttelen, standing mir eng GO Kategorie Analyse. an ECM FAQ Regulatioun (P VerfÜgung &Si besteet; 0,028, Table 4); eelef Genen huet mat Regulatioun Kriibs Zell-ECM Haftung (0.021 P VerfÜgung &Si besteet) assoziéiert. Déi meescht goufen zu Kriibs agebonne. ONECUT1 VerfÜgung, ADAMTS VerfÜgung, IFNAR2 VerfÜgung, MSR1 VerfÜgung, an SORL1 VerfÜgung Migratioun oder Metastasen betreffen, e Prozess datt Unhang vun entholl Zellen ze Keller Membran, ofgeschnidden vun lokal connective Otemschwieregkeeten handelt, an Pénétratioun a Migratioun vun entholl Zellen duerch stroma [21-25] .Table 3 Genen differentially am GC uplanzen mat héichen Niveau vun Wéngertsschleek Ausdrock ausgedréckt VerfÜgung PROBE_ID
Symbol
NAME VerfÜgung
zu uplanzen mat héichen Niveau (≥75%) vun Wéngertsschleek Ausdrock upregulated Genen (P VerfÜgung &Si besteet; 0,05) VerfÜgung ILMN_2374449 VerfÜgung SPP1
Secreted phosphoprotein 1 VerfÜgung ILMN_2337923 VerfÜgung TPD52L1
entholl FAQ D52-wëll 1 VerfÜgung ILMN_1679838 VerfÜgung WBP5
WW Beräich verbindlech FAQ 5 zur VerfÜgung ILMN_2078592 VerfÜgung C6orf105
Androgen-ofhängeg TFPI -regulating FAQ VerfÜgung ILMN_1714383 VerfÜgung TPD52L1
entholl FAQ D52-wëll 1 VerfÜgung ILMN_1674817 VerfÜgung C1orf115
Chromosome 1 oppen liesen Frame 115 VerfÜgung ILMN_1813561 VerfÜgung SCIN
Scinderin VerfÜgung ILMN_1759818 VerfÜgung SORL1
Sortilin-Zesummenhang receptor, L (DLR Klass) A Widerhuelung mat VerfÜgung ILMN_1745686 VerfÜgung MFHAS1
Malignant fibrous histiocytoma Implikatioune Haaptrei 1 VerfÜgung ILMN_2060115 VerfÜgung SORL1
Sortilin-Zesummenhang receptor, L (DLR Klass) A Widerhuelung mat VerfÜgung ILMN_2337263 VerfÜgung PKIB
Protein kinase (Camp -dependent, Katalysator) inhibitor Beta VerfÜgung ILMN_2173835 VerfÜgung FTHL3
Ferritin, markanter polypeptide 1 pseudogene 3 VerfÜgung ILMN_1791057 VerfÜgung IFNAR2
Interferon (Alpha, Beta an Omega) receptor 2 VerfÜgung ILMN_1807114 VerfÜgung LOC255620
Ähnlech zu unc-93 homolog B1 (C. elegans), ët Variant 1 (LOC255620), mRNA VerfÜgung ILMN_1669393 VerfÜgung GGT1
Gamma-glutamyltransferase 1 VerfÜgung ILMN_1685798 VerfÜgung MAGEA6
Melanoma antigen Famill A, 6
ILMN_3269395 VerfÜgung GGT2
Gamma-glutamyltransferase 2 VerfÜgung ILMN_1669833 VerfÜgung SH2B2
SH2B adapter FAQ 2 VerfÜgung ILMN_3238534 VerfÜgung LOC100133817
hypothetesch FAQ LOC100133817 VerfÜgung ILMN_2099315 VerfÜgung TRPM8
flüchteg receptor Potential, dass Kanal, subfamily M, Member 8 VerfÜgung ILMN_3298065 VerfÜgung LOC729195
Ähnlech zu enger steriler fréi endosomal glycoprotein VerfÜgung ILMN_1717726 VerfÜgung FLJ43752
Long intergenic Net-FAQ coding RNS 336 VerfÜgung ILMN_1670452 VerfÜgung ANKRD20A1
Ankyrin widderhuelen Domain 20. Famill, Member A1 VerfÜgung ILMN_3201060 VerfÜgung LOC100132655
hypothetesch FAQ LOC100132655 VerfÜgung ILMN_3282829 VerfÜgung LOC727913
Ähnlech zu iduronate 2-sulfatase (Hunter Syndrom) VerfÜgung ILMN_2339691 VerfÜgung SYVN1
Synovial apoptosis inhibitor 1 , synoviolin VerfÜgung ILMN_1785549 VerfÜgung SLC30A2
Musée gouf Famill 30 (Zénk Fernsehn), Member 2 VerfÜgung ILMN_3191898 VerfÜgung LOC100129630
hypothetesch LOC100129630 VerfÜgung ILMN_1704204 VerfÜgung LOC642204
Ankyrin widderhuelen Domain-haltege FAQ 26-wëll VerfÜgung ILMN_1682280 VerfÜgung LOC647753
hypothetesch FAQ LOC647753 VerfÜgung ILMN_3201944 VerfÜgung LOC646438
hypothetesch LOC646438
ILMN_2233314 VerfÜgung SPANXA1
presuméierten FAQ mat den helle assoziéiert, X-Hausnummeren, Familljemember A1 VerfÜgung ILMN_3305980 VerfÜgung NS3BP
NS3BP VerfÜgung ILMN_1747850 VerfÜgung CRIM2
Kielin /chordin-wëll FAQ VerfÜgung ILMN_1700590 VerfÜgung LOC645590
ähnlech zu Camp-ofhängeg FAQ kinase Typ I-Beta reglementaresche subunit VerfÜgung ILMN_1766316 VerfÜgung FLJ32679 VerfÜgung VerfÜgung Golgin-wëll hypothetesch FAQ LOC440321 VerfÜgung ILMN_1890741 VerfÜgung t VerfÜgung .552561
Pancreatic islet cDNA Klon hbt09690 3, mRNA Haaptreiestären VerfÜgung ILMN_3308255 VerfÜgung MIR33A VerfÜgung
MicroRNA 33a VerfÜgung ILMN_1815716 VerfÜgung LMLN
Leishmanolysin-wëll (metallopeptidase M8 Famill) VerfÜgung ILMN_1654945 VerfÜgung DNMT3A
DNA (cytosine-5 -) - methyltransferase 3 alpha VerfÜgung ILMN_2256050 VerfÜgung SERPINA1
Serpin peptidase inhibitor, clade A (Alpha-1 antiproteinase, antitrypsin), Member 1 VerfÜgung ILMN_1759487 VerfÜgung EGFLAM
EGF-wëll, fibronectin Typ III an laminin G Beräicher VerfÜgung ILMN_1760410 VerfÜgung LOC653086
ähnlech zu Ran-verbindlech FAQ 2-wëll 1 isoform 2 VerfÜgung ILMN_1668969 VerfÜgung MIXL1
Mix vläit-wëll homeobox VerfÜgung ILMN_3279757 VerfÜgung LOC100132532
hypothetesch FAQ LOC100132532 VerfÜgung ILMN_1715372 VerfÜgung CAMKK1
Kalzium /calmodulin-ofhängeg FAQ kinase kinase 1, alpha VerfÜgung ILMN_1731370 VerfÜgung Yang et al. Kim et al. All Auteuren liesen an guttgeheescht der Finale mëttelalterlech Handschrëft. VerfÜgung

• Airway cellularity, Lipid éisträichesch macrophages an microbiology vun gastric Jus an Airways an Kanner mat reflux oesophagitis
• Prognostic Bedeitung vun Verhältnis neutrophil lymphocyte an platelet lymphocyte Verhältnis zu fortgeschratt gastric Kriibs Patienten mat FOLFOX behandelt chemotherapy