La surexpression de Snail est associée à la métastase des ganglions lymphatiques et de mauvais pronostic chez les patients atteints cancer

gastrique surexpression de Snail est associée à la métastase des ganglions lymphatiques et de mauvais pronostic chez les patients atteints de cancer gastrique
Résumé de l'arrière-plan
transition épithéliale-mésenchymateuse ( EMT) joue un rôle important dans la progression de la tumeur et l'invasion. Snail est un régulateur connu de EMT dans diverses tumeurs malignes. Cette étude a examiné le rôle de Snail dans le cancer gastrique.
Méthodes
Nous avons examiné les effets de silence ou surexprimé Snail utilisant des constructions lenti-viral dans les cellules de cancer gastrique. L'analyse immunohistochimique des microréseaux de tissus provenant de 314 patients atteints d'un adénocarcinome gastrique (GC) a été utilisé pour déterminer la signification clinicopathologique et pronostique de Snail. l'expression génique différentielle dans 45 échantillons de GC avec Snail surexpression a été étudiée en utilisant l'analyse des puces à ADN.
Résultats de silençage de Snail par shRNA diminué l'invasion et la migration dans des lignées cellulaires de GC. A l'inverse, Snail surexpression augmente l'invasion et la migration des cellules de cancer gastrique, en ligne avec l'augmentation du VEGF et MMP11. surexpression Snail (coloration nucléaire ≥75% positifs) a également été associée de manière significative à la progression tumorale (P
< 0,001), les métastases des ganglions lymphatiques (P
= 0,002), invasion lymphovasculaire (P
= 0,002), et l'invasion périneural (P
= 0,002) dans les 314 patients atteints de GC, et avec une survie plus courte (P = 0,023
). l'analyse des puces à ADN a révélé 213 gènes exprimés de manière différentielle dans des tissus GC avec limaçon surexpression, y compris les gènes liés à des métastases et l'invasion. escargot
Conclusion affecte significativement invasivité /capacité migratoire des glucocorticoïdes et peut également être utilisé en tant que biomarqueur prédictif le pronostic ou l'agressivité des glucocorticoïdes.
Mots-clés
estomac adénocarcinome Snail métastase ganglionnaire Survival Contexte
transition épithéliale-mésenchymateuse (EMT), un processus de développement par lequel les cellules épithéliales réduisent l'adhérence intercellulaire et acquièrent des caractéristiques myofibroblastiques, est essentielle à la tumeur progression [1-3]. Au cours de l'EMT, des changements importants se produisent, y compris la régulation négative des marqueurs épithéliaux, tels que la E-cadhérine, la translocation de la β-caténine (par exemple, la dissociation de la β-caténine membraneuse et la translocation dans le compartiment nucléaire), et la régulation positive des marqueurs mésenchymateuses telles que la vimentine et N -cadherin [6/3]. EMT est induite par la répression de l'expression E-cadhérine par les régulateurs EMT tels que Snail, Slug, et Twist. La famille Escargot de doigt de zinc répresseurs de la transcription refoule directement E-cadhérine in vitro et in vivo

via une interaction entre leur région COOH-terminal et le 5 '- CACCTG-3 séquence dans le promoteur E-cadhérine [7-9]. Snail est censément important dans plusieurs cancers, y compris les non-carcinomes à petites cellules du poumon, les carcinomes ovariens, les carcinomes urothéliales et carcinome hépatocellulaire [10-13]. Des études ont également utilisé immunohistochimique analyses pour montrer la signification clinique de Snail surexpression dans l'adénocarcinome gastrique (GC) [14, 15]. Cependant, peu de rapports sur les rôles de Snail en GC ont inclus clinicopathologique, pronostique et fonctionnelle in vitro
analyses ainsi que les résultats d'expression génique. Nous avons donc évalué l'effet de Escargot sur invasivité /capacité migratoire dans des lignées cellulaires de cancer gastrique, et également étudié la possibilité de Snail être utilisé comme un marqueur prédictif pour évaluer un mauvais pronostic ou de l'agressivité de la tumeur chez les patients du GC. Nous avons également évalué le profil d'expression des gènes dans les 45 tissus GC avec Snail surexpression, en utilisant cDNA microarrays
. Méthodes
shRNA silençage et surexpression de Snail lentivirus médiée par des cellules de cancer gastrique
lignées cellulaires de cancer gastrique humaines SNU216 et SNU484 ont été obtenus auprès de la Banque coréenne Cell Line (KCLB) et ont été authentifiés par profilage de l'ADN. Ces cellules cultivées dans un milieu RPMI1640 avec 10% de sérum de veau fœtal (FBS), 100 U /ml de pénicilline et 100 pg /ml de streptomycine (Hyclone, Ogden, UT). Toutes les cellules ont été maintenues à 37 ° C dans 5% de CO 2. base Lentiviral-knockdown de l'ARN et la surexpression ont été utilisés pour faire taire et surexpression de Snail. Lentivirus exprimant soit non-cible ou Snail
-targeted shRNA ont été utilisés pour faire taire; un vecteur lentiviral PLKO ciblage Snail
ou un PLKO vecteur vide ont été utilisés pour la surexpression de Snail dans le SNU216 et SNU484 cellules. les stocks lentivirus ont été produites en utilisant le mélange d'emballage lentiviral Virapower ™ en utilisant la lignée cellulaire 293FT selon le protocole du fabricant (Invitrogen, Carlsbad, CA). SNU216 et SNU484 cellules cultivées à 50% de confluence ont été incubées pendant 24 h dans une dilution 1: 1 du virus: milieux avec 5 ug /ml de polybrène. Après une période de récupération de 24 heures dans un milieu complet sans virus, des lignées cellulaires stables ont été sélectionnés polyclonaux et maintenues dans des milieux contenant 5 ug /ml de puromycine. Silencing ou surexpression de Snail a été déterminée par RT-PCR et Western blot.
Temps en temps réel une analyse par RT-PCR du VEGF
, MMP11
et Snail
dans les cellules cancéreuses gastriques
ARN cellulaire total a été extrait en utilisant la méthode Trizol (Sigma-Aldrich, St Louis, MO, USA). Pour l'analyse par RT-PCR, des aliquotes de 2 pg d'ARN ont été soumis à une synthèse d'ADNc avec 200 U de MMLV transcriptase inverse et 0,5 pg d'oligo (dT) -15 amorce (Promega, Madison, WI, USA). PCR quantitative en temps réel a été réalisée avec le système Rotor-Gene ™ (QIAGEN, Hilden, Allemagne) en utilisant AccuPower 2 × Greenstar qPCR Master Mix (Bioneer, Daejeon, Corée). ADNc dans 1 ul du mélange réactionnel a été amplifié avec 0,5 U d'ADN polymerase GoTaq (Promega) et 10 pmol de chacune des amorces sens et antisens suivantes: GAPDH
5 '- TCCATGACAACTTTGGTATCG-3 ', 5 '- TGTAGCCAAATTCGTTGTCA-3 '; Snail
5 '- CTTCCTCTCCATACCTG-3 ', 5 '- CATAGTTAGTCACACCTCGT-3 '; VEGF
5 '- TTGCTGCTCTACCTCCACCA-3 ', 5 '- GCACACAGGATGGCTTGAA-3 '; MMP11
5 '- CTTGGCTGCTGTTGTGTGCT-3 ', 5-AGGTATGGAGCGATGTGACG-3 '. Le profil de cyclage thermique était: dénaturation pendant 30 s à 95 ° C, recuit pendant 30 s à 52 ° C (selon les amorces utilisées), et l'extension de 30 s à 72 ° C. Pour une évaluation semi-quantitative des niveaux d'expression, 30 cycles ont été utilisés pour chaque réaction de PCR. Les produits de PCR ont été fractionné par taille sur 1,0% éthidium gels /bromure d'agarose et quantifiés sous transillumination UV. Le cycle seuil (CT) est défini comme le nombre de cycles fractionnée au cours de laquelle la fluorescence dépasse un seuil déterminé au-dessus de la ligne de base. l'expression du gène par rapport a été quantifié en utilisant la valeur CT moyenne pour chaque échantillon en trois exemplaires, moins la valeur moyenne de CT triple pour GAPDH
. Les différences entre le contrôle (vecteur vide) et des groupes expérimentaux (infectés par le lentivirus) ont été calculées en utilisant la formule 2 - ([△ CT Lenti] - [△ contrôle CT]) et exprimé en tant que facteur de changement dans l'expression en fonction de le procédé du cycle de comparaison de seuil (2- △△ CT) [16].
buvardage Western
les cellules ont été récoltées et rompues dans un tampon de lyse (1% de Triton X-100, 1 mM EGTA, 1 mM d'EDTA, 10 mM tris-HCl, pH 7,4 et des inhibiteurs de la protéase). Les débris cellulaires ont été éliminés par centrifugation à 10.000 xg
pendant 10 min à 4 ° C. Les surnageants résultants ont été résolus sur une SDS-PAGE à 12% dans des conditions réductrices dénaturé et transféré sur des membranes de nitrocellulose. Les membranes ont été bloquées avec du lait en poudre 5% non grasse à la température ambiante pendant 30 minutes et incubées avec des anticorps primaires. Les membranes ont été lavées et incubées avec un anticorps secondaire conjugué à la peroxydase de raifort. Le signal a été visualisé en utilisant une chimioluminescence amplifiée (Amersham, Buckinghamshire, RU).
La migration cellulaire et l'invasion du Matrigel dosage
cellules cancéreuses gastriques ont été récoltées avec de la trypsine à 0,05% contenant 0,02% d'EDTA (Sigma-Aldrich) et mis en suspension dans RPMI à une concentration de 3 × 10 3 cellules /puits. Les filtres à membrane (taille des pores: 8 um) dans des chambres de chimiotactisme à 96 puits (Neuro Probe jetables, Gaithersburg, MD) ont été pré-revêtue pendant 4 h avec 5 mg /ml de fibronectine à la température ambiante. Des aliquotes (50 ul /puits) de la suspension cellulaire ont été chargés dans les chambres supérieures et 1% de SBF ont été chargés dans la chambre inférieure. Après 24 heures d'incubation, les cellules non migrantes ont été retirées de la chambre supérieure avec un coton-tige; des cellules présentes sur la surface inférieure de l'insert ont été colorées avec Hoechst33342 (Sigma-Aldrich). cellules invasives ont été comptées sous un microscope à fluorescence à × 10 grossissement.
Pour le dosage de l'invasion Matrigel, 3 x 104 cellules /puits ont été ensemencées dans la chambre supérieure, qui a été revêtue de Matrigel (5 mg /ml dans un milieu froid, BD Transduction Laboratories, Franklin Lakes, NJ, USA), et 1% de FBS ou de contrôle véhicule sans sérum milieu contenant a été ajouté à la chambre basse. Après 24 heures d'incubation, les cellules non migrantes ont été retirées de la chambre supérieure avec un coton-tige, et les cellules présentes sur la surface inférieure de l'insert ont été colorées avec Hoechst33342 (Sigma-Aldrich). cellules envahissantes ont ensuite été comptées sous un microscope à fluorescence à × 10 grossissement. microarrays
tissulaires, immunohistochimie, et l'interprétation des résultats
A arrayer semi-automatique des tissus (Instruments Beecher, WI, USA) a été utilisé pour construire les matrices tissulaires . Nous avons obtenu des carottes de tissu 3, chacun de 0,6 mm de diamètre, à partir de blocs de tumeur prélevés chez des patients GC. Cores ont pas été recueillies à partir du frontal plus intrusives ou les zones centrales des tumeurs. Les lames ont été cuites à 60 ° C pendant 30 min, déparaffinées avec du xylene, et ensuite réhydraté. Les sections ont ensuite été immergées dans un tampon de récupération d'antigène du citrate, au micro-ondes pour la récupération d'antigène, traitée avec 3% de peroxyde d'hydrogène dans du methanol pour éteindre l'activité de peroxydase endogène, puis incubées avec 1% d'albumine de sérum bovin pour bloquer la liaison non spécifique. Ensuite, les coupes ont été incubées avec des anticorps de lapin anti-Snail (Abcam, Royaume-Uni) pendant une nuit à 4 ° C. sérum de lapin normal a été utilisé comme témoin négatif. Après lavage, les coupes de tissu ont été traitées avec un anticorps secondaire, contre-coloration à l'hématoxyline, déshydratées et montées. les cellules tumorales au moins 500 ont été comptés. Le pourcentage de cellules avec Snail + noyaux a été exprimé par rapport au nombre total de cellules tumorales comptés. expression nucléaire de Snail a été classé en classant le degré de coloration nucléaire positive ≤50%, 50-75%, ou ≥75%.
analyse clinicopathologique et la survie du cancer gastrique patients
Nous avons étudié une cohorte de 314 GC les patients qui ont subi chacune une gastrostomie avec dissection des ganglions lymphatiques à l'hôpital universitaire national de Pusan ​​(PNUH) entre 2005 et 2007. Le groupe était composé de 218 hommes et 96 femmes avec un âge moyen de 58,3 ans (extrêmes, 25-83 ans). Standard formaline fixes et sections de paraffine ont été obtenues auprès du Département de pathologie, PNUH et la Biobanque nationale de Corée, PNUH. L'étude a été approuvée par le comité d'examen institutionnel. Aucun des patients n'a reçu une radiothérapie et /ou chimiothérapie pré-opératoire. La chimiothérapie adjuvante sur la base de 5-FU a été administré à des patients avec des stades II, III et IV après résection curative. Nous avons évalué plusieurs facteurs clinicopathologiques selon le rapport coréen normalisé Pathologie du cancer gastrique, la classification japonaise de gastrique Carcinome (3 e édition anglaise), et le American Joint Committee on Cancer Staging Manual (7 e édition), y compris le site de la tumeur, l'aspect brut et la taille, la profondeur de l'invasion, la classification histologique (c.-à-intestinal ou diffus), et l'invasion lymphovasculaire [17-19]. Les résultats cliniques pour chaque patient a été suivi de la date de la chirurgie à la date du décès ou 1 Mars 2012. périodes de suivi variait d'environ 1 à 81,5 mois (moyenne, 51,4 mois). Cas perdus de vue ou la mort de toute cause autre que le cancer gastrique ont été censurées de l'analyse des taux de survie. caractéristiques clinicopathologiques ont été analysées à l'aide de t de Student
-test, le χ 2 test, ou test exact de Fisher pour tester des différences dans l'expression Snail. parcelles de survie cumulatifs ont été obtenus en utilisant la méthode de Kaplan-Meier, et l'importance ont été comparées en utilisant le test du log-rank. Les facteurs pronostiques ont été identifiés à l'aide de la méthode Cox par étapes de régression (modèle de risque proportionnel), ajusté en fonction de l'âge des patients, le sexe, site de la tumeur, le type morphologique (intestinal par rapport diffuse). La signification statistique a été fixé à P
< 0,05. Les calculs statistiques ont été réalisées avec SPSS version 10.0 pour Windows (SPSS Inc., Chicago, IL, USA).
analyse des puces à ADN de tissus GC basé sur Snail surexpression
Un total de 45 tissus GC frais ont été obtenus à partir du National Biobanque de Corée, PNUH et CNUH; approbation a été obtenue à partir de leurs conseils d'examen institutionnels. L'ARN total a été extrait des tissus frais congelés en utilisant un kit d'isolement d'ARN MIRVANA (Ambion Inc., Austin, TX). Cinq cents nanogrammes d'ARN total a été utilisé pour la synthèse d'ADNc, suivie par /une étape de marquage d'amplification (in vitro
transcription) en utilisant le kit Illumina TotalPrep l'amplification d'ARN (Ambion) pour synthétiser ARNc marqué à la biotine. concentrations ARNc ont été mesurées par la méthode RiboGreen (QUANT-iT RiboGreen kit de dosage de l'ARN; Invitrogen moléculaire Sondes, ON, Canada) à l'aide d'un spectrophotomètre victor3 (PerkinElmer, CT), et la qualité ARNc a été déterminée sur un gel d'agarose à 1%. Étiqueté, matériel amplifié (1500 ng par matrice) a été hybridée avec Illumina HumanHT-12 BeadChips v4.0, selon les instructions du fabricant (Illumina, San Diego, CA). signaux Array ont été développés par streptavidine-Cy3. Les tableaux ont été analysés avec un système Illumina iScan. Les données de puces à ADN ont été normalisées en utilisant la méthode de normalisation quantile dans le logiciel BeadStudio Illumina. Le niveau de chaque gène d'expression a été transformé en un journal 2 base avant une analyse plus approfondie. Excel a été principalement utilisé pour les analyses statistiques. les différences d'expression génique ont été considérées comme statistiquement significatives si P
< 0,05; tous les tests ont été 2-tailed. Les analyses ont été effectuées en utilisant Cluster Cluster et Treeview [20]. Le programme ontologie génique (GO) (http:... //David abcc ncifcrf gov /) a été utilisé pour classer les gènes en sous-groupes basés sur la fonction biologique. Le test exact de Fisher a été utilisé pour déterminer si les proportions des gènes dans chacune des catégories diffèrent par le groupe. les tissus du GC ont été divisés en ceux qui ont plus élevées (≥75%) et inférieur (< 75%) les niveaux d'expression Snail; l'expression différentielle des gènes entre les groupes a été identifié. données de biopuces primaires sont disponibles dans GEO NCBI (Gene Expression Omnibus de) base de données (http:.....? //www NCBI nlm nih gov /geo /query /acc cgi acc = le règlement: Résultats de GSE38024). de la migration et l'invasion des cellules de cancer gastrique par l'ARN à base de Lentiviral de Snail knockdown et les approches de surexpression ont été utilisés pour déterminer le rôle de l'escargot dans l'invasion et la migration des lignées cellulaires de cancer gastrique. SNU216 cellules et SNU484 utilisées dans cette étude sont établies gastriques lignées cellulaires provenant de patients atteints d'un adénocarcinome coréen. Ces cellules ont été infectées avec un lentivirus exprimant soit non-cible ou shRNA -targeted de Snail pour réduire au silence. Un vecteur lentiviral PLKO qui visait Snail
et un PLKO vecteur vide ont été utilisés pour induire Snail surexpression dans SNU216 et SNU484 cellules. les lignées cellulaires stables ont été sélectionnées en utilisant polyclonales puromycine. Escargot expression a été déterminée par RT-PCR et transfert de type western; Le knockdown de stable Snail (sh-Snail) et Snail lignées de cellules surexpression (OE-Snail) ont été obtenus (Figure 1). Figure 1 Rôle de Snail dans l'invasion et la migration des lignées cellulaires de cancer gastrique. cellules A. SNU216 (panneau supérieur) et SNU484 (panneau inférieur) ont été infectés par le lentivirus exprimant soit non-cible shRNA (shNT
) ou Escargot de shRNA le jour 0, puis récoltées au jour 7 post-infection. Escargot de l'effet de choc a été déterminée par RT-PCR et transfert de type western; les lignées cellulaires stables ont été produites pour chacune des lignées cellulaires (SH-escargot). Silencing de Snail
en SNU216 et SNU484 cellules induites a diminué la migration et l'invasion. cellules B. SNU216 (panneau supérieur) et SNU484 (panneau inférieur) ont été infectés par le lentivirus exprimant soit un PLKO vecteur lentiviral ciblage Snail
ou un PLKO vecteur vide (EV) le jour 0, puis récoltées au jour 7 post-infection . La surexpression de l'escargot a été déterminée par RT-PCR et transfert de type western; lignée cellulaire stable a été générée pour chacune des lignées cellulaires (O /E-escargots). surexpression Snail dans les cellules SNU216 et SNU484 induit l'augmentation des migrations et de l'invasion. C. Snail surexpression induit une expression accrue de l'ARNm du VEGF
et MMP11
dans SNU216 et SNU484 cellules en temps réel une analyse par RT-PCR. Panneau inférieur indique les chiffres de RT-PCR représentatifs pour VEGF
, MMP11
, Snail
et GAPDH
. Les données indiquent la moyenne ± l'écart d'au moins 3 expériences indépendantes. * Indique P
< 0,05 par étudiant de t
-test.
Pour déterminer le rôle des escargots dans l'estomac invasion des cellules cancéreuses, nous avons mesuré l'invasion chimiotactique par les cellules en utilisant le système Transwell avec des filtres pré-revêtues de Matrigel. Pour mesurer la migration des cellules de cancer gastrique, nous avons dosé la migration des cellules en utilisant un dispositif de chambre de Boyden. Silencing de Snail
par shRNA induite a diminué la migration et l'invasion des cellules SNU216 et SNU484, comme le montre la Figure 1A. Contrairement à l'escargot de résultats silencieux, la surexpression de Snail a induit augmenté la migration et l'invasion de SNU216 et SNU484 cellules, comme le montre la figure 1B. La surexpression de Snail a également été associée à une augmentation du VEGF et MMP11 (figure 1C).
Effet de Snail surexpression sur l'agressivité de la tumeur et la survie des patients GC
coloration nucléaire positive pour Snail à des niveaux de ≤50%, 50-75%, et ≥75% a été observée à 13,4% (42/314) 52,2% (164/314) et 34,4% (108/314), respectivement, des 314 patients atteints de GC dans l'analyse immunohistochimique. expression Snail a été noté dans le type intestinal et diffus de glucocorticoïdes (figure 2A, B). surexpression Snail (≥75% de positivité) significativement corrélée avec la taille de la tumeur, le type brut, profondeur de l'invasion, l'invasion lymphovasculaire, invasion périneural et métastase ganglionnaire (tableau 1). surexpression Snail a également été associée à la taille de la tumeur accrue (P = 0,028
) et excavé de type brut (P
< 0,001); et l'invasivité tumorale accrue, à savoir, le stade T supérieur (P
< 0,001) et la présence de l'invasion périneural (P
< 0,001) et lymphovasculaire emboles de tumeur (P
= 0,002). Augmentation de la métastase ganglionnaire était également lié à Snail surexpression (P
= 0,002) .En conformité avec les données ci-dessus montrant la relation positive entre Snail surexpression et GC agressivité, Snail surexpression significativement corrélée à la survie globale chez les patients du GC (P
= 0,023) (figure 2C). Une relation linéaire a été observée entre l'augmentation de l'expression nucléaire de Snail et de survie raccourcie (≤50% de: 76,6 ± 2,7 mois; 50-75%: 68,5 ± 2,0 mois; ≥75%: 63,3 ± 2,8 mois). surexpression Snail (≥75% de positivité) a été identifiée comme un facteur prédictif indépendant de mauvais pronostic chez 314 patients avec GC, ajusté pour l'âge, le sexe, la classification histologique, et l'emplacement de la tumeur, en utilisant un modèle de régression à risques proportionnels de Cox (P
= 0,033; Tableau 2). Figure 2 expression Snail dans adénocarcinome gastrique (GC) des échantillons de tissus et de courbes de Kaplan-Meir de survie globale de 314 patients atteints de GC. Snail a été principalement exprimé dans les noyaux de cellules de GC (type intestinal (A), et le type diffus (chevalière) cellules (B)) inclus dans les échantillons de matrice de tissu. Certains fibroblastes réactifs ont également montré Snail expression nucléaire (grossissement: x 400). C. Analyse de Kaplan-Meier de la survie globale des patients atteints de GC basé sur l'expression Snail. Une relation linéaire entre l'augmentation de l'expression nucléaire Escargot et une survie plus courte a été observée chez les patients du GC (P = 0,023
). log-rank test a été utilisé pour calculer P
valeurs.
Tableau 1 Relation entre l'expression Snail et les caractéristiques clinico dans 314 patients atteints de cancer gastrique
Nombre de patients (N = 314)

Snail Positivity
Pvalue
< 75%
≥75%
âge (années)
96
218
143
75
0,996
Femme de 58,5 ± 10,6 59,1 ± 11,9

0,695
Sex
Homme 63
33
taille de la tumeur
≤4.0 cm
192
135
57
0,028
> 4,0 cm
122
71
51
Situation et Upper /Moyen
167
112
55
0,561
Lower
147
94
53
profondeur Invasion
160
127
33 de
<de T1; 0,001
68
33
35
T4 de 41
26
15
T3 T2
43
19
24
Type Gross
Elevated
77
51
26
< 0,001
plat /déprimé
131
105
26
excavé
106
50
56
Le type histologique
Intestinal
182
123
59
0,609
diffuse
122
76
46
Mixed 10
7 3
périneural invasion
négatif
202
150
52
< 111
55
56
lymphovasculaire embolies 0.001
positif
négatif
193
139
54
0,002
Positive
120
66
54
métastases ganglionnaires
N0, 270
186
84
0,002
N2 N1, N3
44
20
24
Tableau 2 multivariée analyse de survie avec le modèle de régression de Cox dans les variables de 314 cancers gastriques
B
SE
HR (IC à 95%)
P
âge (≤59 par rapport > 59)
-0,438
0,264
0,645 (0,385 à 1,082)
0,097
Sexe (masculin et femelles)
-0,037
0,267
0,963 (0,571 à 1,626) 0,889

site (moyenne et supérieure par rapport inférieur)
0,635
0,264
1.887 (1.126 -3,164)
0,016
Lauren (intestinale vs diffuse)
-0,537
0,263
0,585 (0,349 à 0,978) 0,041

Snail (≥75% par rapport à < 75 %)
-0,528
0,248
0,590 (0,363-0,958) 0,033

note: B, coefficient; HR, rapport de risque; CI, intervalle de confiance.
Identification des profils d'expression de gènes à base de Snail surexpression utilisant cDNA microarrays
microarrays d'ADNc ont été utilisés pour comparer les profils d'expression des gènes de 45 spécimens de GC. Nous avons identifié 213 gènes qui ont été exprimés de manière différentielle à des niveaux significatifs (P
< 0,05) entre les spécimens de GC avec plus élevées (≥75%) et inférieur niveaux (< 75%) d'expression Snail (tableau 3). Parmi ces 213 gènes, 82 ont été régulée à la hausse et 131 ont été downregulated dans les échantillons de GC avec des niveaux plus élevés (≥75%) des expression Snail. Nous avons utilisé une analyse de classification hiérarchique pour évaluer les 213 gènes et 45 spécimens de GC; analyse de la concentration surveillée a donné des motifs pour les échantillons avec des niveaux d'expression Snail regroupés en 2 groupes distincts supérieurs et inférieurs, sauf pour un échantillon avec des niveaux plus élevés d'expression Snail (figure 3). Pour étudier les fonctions biologiques impliquées dans les gènes de discrimination, nous avons effectué une analyse des catégories de GO. Onze gènes ont été associés à la régulation des cellules cancéreuses ECM adhérence (P
< 0,021) et de protéines ECM régulation (P
< 0,028, tableau 4). La plupart ont été impliqués dans le cancer. ONECUT1
, ADAMTS
, IFNAR2
, MSR1
et SORL1
affecte la migration ou la métastase, un processus qui implique la fixation des cellules tumorales à la membrane basale, la dégradation du tissu conjonctif local, et pénétration et la migration des cellules tumorales par stroma [21-25] .Table 3 gènes exprimés de manière différentielle dans des échantillons de GC avec des niveaux plus élevés d'expression Snail
PROBE_ID
SYMBOLE
NOM

les gènes surexprimés dans des échantillons avec des niveaux plus élevés (≥75%) des expression Snail (P
< 0,05)
ILMN_2374449
SPP1
phosphoprotéine sécrétée 1
ILMN_2337923
TPD52L1
protéine de tumeur D52-like 1
ILMN_1679838
WBP5
WW protéine de liaison de domaine 5
ILMN_2078592
C6orf105
androgéno-dépendants TFPI -regulating protéines
ILMN_1714383
TPD52L1
protéine de tumeur D52-like 1
ILMN_1674817
C1orf115
chromosome 1 cadre de lecture ouvert 115
ILMN_1813561
SCIN
Scinderin
ILMN_1759818
SORL1
récepteurs, L (classe DLR) répétitions A
Sortiline liées contenant
ILMN_1745686
MFHAS1
Malignant histiocytome amplifiée séquence fibreuse 1
ILMN_2060115
SORL1
Sortiline liés récepteur, L (classe DLR) répétitions A contenant
ILMN_2337263
PKIB
protéine kinase (AMPc dépendante, catalytique) inhibiteur de bêta
ILMN_2173835
FTHL3
ferritine, polypeptide lourd 1 pseudogène 3
ILMN_1791057
IFNAR2
Interferon (alpha, bêta et oméga) récepteur 2
ILMN_1807114
LOC255620
similaires à unc-93 homolog B1 (C. elegans), variante de transcription 1 (LOC255620), ARNm
ILMN_1669393
GGT1
Gamma-glutamyl 1
ILMN_1685798
MAGEA6
Mélanome famille de l'antigène A, 6
ILMN_3269395
GGT2
Gamma-glutamyl transférase 2
ILMN_1669833
SH2B2
SH2B protéine adaptatrice 2
ILMN_3238534
LOC100133817
hypothétique protéines LOC100133817
ILMN_2099315
TRPM8
transitoire potentiel canal cationique du récepteur, sous-famille M, membre 8
ILMN_3298065
LOC729195
similaires à apical endosomal précoce glycoprotéine
ILMN_1717726
FLJ43752
longue non-protéine intergénique codant l'ARN 336
ILMN_1670452
ANKRD20A1
Ankyrin domaine de répétition 20 famille, membre A1
ILMN_3201060
LOC100132655
protéine hypothétique LOC100132655
ILMN_3282829
LOC727913
Semblable à iduronate 2-sulfatase (syndrome de Hunter) inhibiteur
ILMN_2339691
SYVN1
apoptose synoviale 1 , synovioline
ILMN_1785549
SLC30A2
transporteur soluté famille 30 (transporteur de zinc), membre 2
ILMN_3191898
LOC100129630
hypothétique LOC100129630
ILMN_1704204
LOC642204
Ankyrin répétition contenant des protéines domaine-26-like
ILMN_1682280
LOC647753
protéines hypothétique LOC647753
ILMN_3201944
LOC646438
hypothétique LOC646438
la protéine de sperme de ILMN_2233314
SPANXA1
associé au noyau, lié à l'X, membre de la famille A1
ILMN_3305980
NS3BP
NS3BP
ILMN_1747850
CRIM2 protéines
Kielin /chordin-like
ILMN_1700590
LOC645590
similaires à AMPc dépendante de type protéine kinase I-bêta sous-unité régulatrice
ILMN_1766316
FLJ32679

Golgin-like LOC440321 de protéine hypothétique
ILMN_1890741 de Hs
0,552561
îlots pancréatiques clone d'ADNc hbt09690 3, la séquence d'ARNm
ILMN_3308255
MIR33A

microARN 33a
ILMN_1815716
LMLN
Leishmanolysin-like (métallopeptidasique famille M8)
ILMN_1654945
Dnmt3a
ADN (cytosine-5 -) - methyltransferase 3 alpha
ILMN_2256050
SERPINA1
inhibiteur de peptidase Serpin, clade A (alpha-1 antiprotéinase, antitrypsine), membre 1
ILMN_1759487
EGFLAM
EGF-like, fibronectine type III et de la laminine G domaines
ILMN_1760410
LOC653086
similaires à RAN-binding protein 2-like 1 isoforme 2
ILMN_1668969
MIXL1
Mélanger appariées comme homeobox
ILMN_3279757
LOC100132532
protéines hypothétique LOC100132532
ILMN_1715372
CAMKK1
calcium /calmoduline-dépendante protéine kinase kinase 1, alpha
ILMN_1731370
Yang et al. Tous les auteurs ont lu et approuvé le manuscrit final.

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