Overekspression af Snail er forbundet med lymfeknudemetastaser og dårlig prognose hos patienter med gastrisk cancer

Overekspression af Snail er forbundet med lymfeknudemetastaser og dårlig prognose hos patienter med gastrisk cancer Salg Abstract
Baggrund
Epithelial-mesenchymale overgang ( EMT) spiller en væsentlig rolle i tumorudvikling og invasion. Sneglen er en kendt regulator af EMT i forskellige maligne tumorer. Dette studie undersøgte rolle Snail i mavekræft.
Metoder
Vi undersøgte effekten af ​​tavshed eller overudtrykt Snail hjælp Lenti-viral konstruktioner i gastriske kræftceller. Immunohistokemisk analyse af væv microarrays fra 314 patienter med gastrisk adenocarcinom (GC) blev anvendt til at bestemme snegl klinisk-patologisk og prognostisk betydning. Differential genekspression i 45 GC prøver med Snail overekspression blev undersøgt ved hjælp af cDNA microarray analyse.
Resultater
Silencing af Snail ved shRNA faldt invasion og migration i GC cellelinjer. Omvendt Snail overekspression øget invasion og migration af gastrisk kræftceller, i takt med øget VEGF og MMP11. Snail overekspression (≥75% positive nukleare farvning) blev også signifikant associeret med tumor progression (P
< 0,001), lymfeknudemetastaser (P
= 0,002), lymphovascular invasion (P
= 0,002), og perineurale invasion (P
= 0,002) i de 314 GC patienter, og med kortere overlevelse (P
= 0,023). cDNA microarray analyse afslørede 213 differentielt udtrykte gener i GC væv med Snail overekspression, herunder gener relateret til metastase og invasion.
Konklusion
snail signifikant påvirker invasionsevne /migreringsevnen af ​​GCS, og kan også anvendes som en prædiktiv biomarkør for prognose eller aggressivitet GC'er.
Nøgleord
mave Adenocarcinom Snail lymfeknudemetastase Survival Baggrund
epithelial-mesenkymale overgang (EMT), en udviklingsmæssig proces, hvorved epitelceller reducerer intercellulære vedhæftning og erhverve myofibroblastisk funktioner, er afgørende for tumor progression [1-3]. Under EMT, forekommer betydelige ændringer, herunder nedregulering af epitelial markører, såsom E-cadherin, translokation af β-catenin (dvs. dissociation af membranøs β-catenin og translokation i det nukleære rum), og opregulering af mesenchymale markører, såsom vimentin og N -cadherin [3-6]. EMT induceres ved undertrykkelse af E-cadherinekspression af EMT regulatorer som Snail, Slug, og Twist. Sneglen familie af zink-finger transkriptionelle repressorer undertrykker direkte E-cadherin in vitro
og in vivo
via en vekselvirkning mellem deres COOH-terminale region og 5 '- CACCTG-3 ' sekvens i E-cadherin promotoren [7-9]. Snail er efter sigende vigtigt i flere carcinomer, herunder ikke-småcellet karcinom, ovariecarcinomer, urothelial carcinomer og hepatocellulært carcinom [10-13]. Undersøgelser har også brugt immunhistokemisk analyser at vise den kliniske betydning af Snail overekspression i gastrisk adenocarcinom (GC) [14, 15]. Imidlertid har nogle rapporter om roller Snail i GC inkluderet klinisk-patologisk, prognostisk og funktionelle in vitro
analyser samt genekspression resultater. Vi har derfor evalueret snail effekt på invasionsevne /migreringsevnen i gastrisk cancer cellelinjer, og også undersøgt muligheden for Snail anvendes som en prædiktiv markør for vurdering dårlig prognose eller tumor aggressivitet i GC patienter. Vi evaluerede også genekspression mønster i 45 GC væv med Snail overekspression, hjælp cDNA mikroarrays.
Metoder
shRNA lentivirus-medieret lyddæmpning og overekspression af Snail i gastriske kræftceller
Humane mavekræft cellelinjer SNU216 og SNU484 blev opnået fra koreanske cellelinje Bank (KCLB) og blev bekræftet af DNA-profilering. Disse celler dyrket i RPMI1640 medium med 10% føtalt bovint serum (FBS), 100 U /ml penicillin og 100 pg /ml streptomycin (Hyclone, Ogden, UT). Alle celler blev holdt ved 37 ° C i 5% CO 2. Lentiviral-baserede RNA knockdown og overekspression blev brugt til lyddæmpning og overekspression af Snail. Lentivira udtrykker enten ikke-mål eller Snail
-targeted shRNAs blev brugt til lyddæmpning; en PLKO lentivirusvektor målrettet Snail
eller en tom PLKO vektor blev anvendt til overekspression af Snail i SNU216 og SNU484 celler. Lentivirus lagrene blev fremstillet under anvendelse af Virapower ™ lentiviral emballagemix hjælp af 293FT cellelinie ifølge fabrikantens protokol (Invitrogen, Carlsbad, CA). SNU216 og SNU484 celler dyrket til 50% konfluens blev inkuberet i 24 timer i en 1: 1 fortynding af virus: medier med 5 ug /ml Polybrene. Efter en 24-h restitutionsperiode i komplette medier uden virus blev polyklonale stabile cellelinjer udvælges og opretholdes i medier, der indeholder 5 ug /ml puromycin. Silencing eller overekspression af Snail blev bestemt ved RT-PCR og western blotting.
Real time RT-PCR-analyse af VEGF
, MMP11
, og snail
i gastriske cancerceller
Totalt cellulært RNA blev ekstraheret under anvendelse af TRIzol-metoden (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA). For RT-PCR-analyse blev 2-ug portioner af RNA underkastet cDNA syntese med 200 U MMLV-revers transkriptase og 0,5 ug oligo (dT) -15 primer (Promega, Madison, WI, USA). Kvantitativ realtids-PCR blev udført med rotoren-Gene ™ System (QIAGEN, Hilden, Tyskland) ved anvendelse AccuPower 2 × Greenstar qPCR Master Mix (Bioneer, Daejeon, Sydkorea). cDNA i 1 pi reaktionsblandingen blev amplificeret med 0,5 U af GoTaq DNA-polymerase (Promega) og 10 pmol af hver af følgende sense- og antisense-primere: GAPDH
5 '- TCCATGACAACTTTGGTATCG-3 ', 5 '- TGTAGCCAAATTCGTTGTCA-3 '; Snail
5 '- CTTCCTCTCCATACCTG-3 ', 5 '- CATAGTTAGTCACACCTCGT-3 '; VEGF
5 '- TTGCTGCTCTACCTCCACCA-3 ', 5 '- GCACACAGGATGGCTTGAA-3 '; MMP11
5 '- CTTGGCTGCTGTTGTGTGCT-3 ', 5-AGGTATGGAGCGATGTGACG-3 '. Den termisk cykling profil var: denaturering i 30 s ved 95 ° C, annealing i 30 sek ved 52 ° C (afhængig af de anvendte primere) og ekstension i 30 s ved 72 ° C. Til semi-kvantitativ vurdering af ekspressionsniveauer blev 30 cykler anvendt til hver PCR-reaktion. PCR-produkter blev størrelsesfraktioneret på 1,0% ethidiumbromid /agarosegeler og kvantificeres under UV-gennemlysning. Tærskelcyklen (CT) er defineret som den fraktionerede cyklusnummer hvor fluorescensen passerer en fast tærskelværdi over baseline. Relativ genekspression blev kvantificeret ved hjælp af den gennemsnitlige CT-værdi for hver tredobbelt prøve minus den gennemsnitlige tre eksemplarer CT værdi for GAPDH
. Forskelle mellem kontrol (tom vektor) og eksperimentgrupper (inficeret med lentivirus) blev beregnet ved hjælp af formlen 2 - ([△ CT Lenti] - [△ CT-kontrol]) og udtrykkes som en fold ændring i udtryk efter den sammenlignende tærskelcyklus metode (2- △△ CT) [16]. Salg Western blotting Salg Celler blev høstet og sprængt i lysisbuffer (1% Triton X-100, 1 mM EGTA, 1 mM EDTA, 10 mM Tris-HCI, pH 7,4 og proteaseinhibitorer). Cellerester blev fjernet ved centrifugering ved 10.000 x g
i 10 minutter ved 4 ° C. De resulterende supernatanter blev opløst på en 12% SDS-PAGE under reducerende betingelser denatureret og overført til nitrocellulosemembraner. Membranerne blev blokeret med 5% fedtfri tørmælk ved stuetemperatur i 30 minutter og inkuberet med primære antistoffer. Membranerne blev vasket og inkuberet med peberrodsperoxidase-konjugeret sekundært antistof. Signalet blev visualiseret under anvendelse af et forøget kemiluminescens (Amersham, Buckinghamshire, UK).
Cell migration og Matrigel invasion assay
mavekræft celler blev høstet med 0,05% trypsin indeholdende 0,02% EDTA (Sigma-Aldrich) og suspenderet i RPMI ved en koncentration på 3 × 10 3 celler /brønd. Membranfiltre (porestørrelse: 8 um) i engangs 96-kemotaksisplader kamre (Neuro Probe, Gaithersburg, MD) blev præ-coatet i 4 timer med 5 mg /ml fibronectin ved stuetemperatur. Alikvoter (50 pl /brønd) af cellesuspensionen blev fyldt i de øvre kamre, og 1% FBS blev fyldt i det nedre kammer. Efter 24-h inkubation blev ikke-migrerende celler fjernet fra det øverste kammer med en vatpind; celler til stede på den nedre overflade af indsatsen blev farvet med Hoechst33342 (Sigma-Aldrich). Invasive celler blev talt under et fluorescensmikroskop ved × 10 forstørrelse.
På Matrigel invasion assay 3 x 104 celler /brønd blev podet i det øvre kammer, som blev overtrukket med Matrigel (5 mg /ml i koldt medium, BD Transduction Laboratories, Franklin Lakes, NJ, USA), og serum-frit medium indeholdende 1% FBS eller vehikelkontrol blev tilsat til det nederste kammer. Efter 24 timers inkubation blev ikke-migrerende celler fjernet fra det øverste kammer med en vatpind, og celler til stede på den nedre overflade af indsatsen blev farvet med Hoechst33342 (Sigma-Aldrich). Invasive celler blev derefter talt under et fluorescensmikroskop ved × 10 forstørrelse.
Tissue microarrays, immunhistokemi og fortolkning af resultater
En semi-automatiske væv arrayer (Beecher Instruments, WI, USA) blev anvendt til at konstruere de væv microarrays . Vi opnåede 3 vævskerner, hver 0,6 mm i diameter, fra tumorblokke taget fra GC patienter. Kerner blev ikke indsamlet fra mere invasive frontale eller centrale områder af tumorer. Objektglas blev bagt ved 60 ° C i 30 minutter, afparaffiniseret med xylen, og derefter rehydreret. Snittene blev derefter nedsænket i citrat antigen-genvinding buffer, microwaved for antigen hentning, behandlet med 3% hydrogenperoxid i methanol for at standse endogen peroxidaseaktivitet, og derefter inkuberet med 1% bovint serumalbumin for at blokere ikke-specifik binding. Derefter blev snittene inkuberet med kanin-anti-snail (Abcam, UK) natten over ved 4 ° C. Normalt kaninserum blev anvendt som en negativ kontrol. Efter vask blev vævssnit behandlet med sekundært antistof, modfarvet med hematoxylin, dehydreret, og monteret. Mindst 500 tumorceller blev talt. Procentdelen af ​​celler med Snail + kerner blev udtrykt i forhold til det totale antal af tumorceller talt. Nuklear udtryk for Snail blev gradueret ved at klassificere omfanget af positive kernefarvning som ≤50%, 50-75%, eller ≥75%.
Klinisk-patologisk og overlevelse analyse af mavekræft patienter
Vi studerede en kohorte af 314 GC patienter, der hver undergik en gastrostomi med lymfeknude dissektion på Pusan ​​National University Hospital (PNUH) mellem 2005 og 2007. gruppen bestod 218 mænd og 96 kvinder med en gennemsnitsalder på 58,3 år (interval, 25-83 år). Standard formalin-fikseret og paraffin-embedded sektioner blev opnået fra Institut for Patologi, PNUH, og National Biobank Korea, PNUH. Undersøgelsen blev godkendt af Institutional Review Board. Ingen af ​​patienterne modtog præoperativ strålebehandling og /eller kemoterapi. Adjuverende kemoterapi baseret på 5-FU blev administreret på patienter med trin II, III og IV efter helbredende resektion. Vi vurderede flere klinisk-patologiske faktorer i henhold til den koreanske Standardiseret Pathology Rapport for mavekræft, den japanske Klassificering af gastrisk karcinom (3 rd engelsk udgave), og amerikanske Blandede Cancer Staging Manual (7 th udgave), herunder tumor site, grov udseende og størrelse, dybde af invasion, histologisk klassifikation (dvs. tarm eller diffuse), og lymphovascular invasion [17-19]. Klinisk resultat for hver patient blev fulgt fra datoen for kirurgi til datoen for død eller 1. marts 2012. Opfølgende perioder varierede fra ca. 1 til 81,5 måneder (i gennemsnit, 51,4 måneder). Sager tabte til opfølgning eller død uanset årsag andet end mavekræft blev censureret fra overlevelsesraten analyse. Klinisk-patologiske træk blev analyseret under anvendelse af Students t-test
, den χ 2 test, eller Fishers eksakte test for at teste for forskelle i Snail ekspression. Kumulative overlevelse plots blev opnået ved anvendelse af Kaplan-Meier-metoden, og signifikans blev sammenlignet under anvendelse af log-rank test. Prognostiske faktorer blev identificeret ved hjælp af Cox regression trinvis metode (proportional hazard model), justeret for patienternes alder, køn, tumor site, morfologisk type (tarm versus diffuse). Statistisk signifikans blev sat til P
< 0,05. Statistiske beregninger blev udført med SPSS version 10.0 til Windows (SPSS Inc., Chicago, IL, USA).
CDNA microarray analyse af GC væv baseret på Snail overekspression
alt 45 friske GC væv blev opnået fra National biobank Korea, PNUH, og CNUH; godkendelsen er opnået fra deres institutionelle anmeldelse bestyrelser. Totalt RNA blev ekstraheret fra frisk frosset væv under anvendelse af en Mirvana RNA Isolation Kit (Ambion Inc., Austin, TX). Fem hundrede nanogram af total RNA blev anvendt til cDNA-syntese efterfulgt af en amplifikation /mærkning trin (in vitro
transkription) under anvendelse af Illumina TotalPrep RNA Amplification kit (Ambion) at syntetisere biotin-mærket cRNA. cRNA koncentrationer blev målt ved RiboGreen metoden (Quant-iT RiboGreen RNA assay kit; Invitrogen-Molecular Probes, ON, Canada) med en Victor3 spektrofotometer (PerkinElmer, CT), og cRNA kvalitet blev bestemt på en 1% agarose gel. Mærket amplificeret materiale (1500 ng pr array) blev hybridiseret til Illumina HumanHT-12 BeadChips v4.0, ifølge producentens instruktioner (Illumina, San Diego, CA). Array signaler blev udviklet af streptavidin-Cy3. Arrays blev scannet med et Illumina iScan system. Mikroarrayet data blev normaliseret ved hjælp af den fraktil normaliseringsmetode i Illumina BeadStudio software. Udtrykket niveau hvert gen blev omdannet til en log 2 basen før yderligere analyse. Excel blev primært brugt til statistiske analyser. Genekspression forskelle blev betragtet som statistisk signifikante, hvis P
< 0,05; alle tests var to-tailed. Cluster analyser blev udført ved hjælp af Cluster og Treeview [20]. Genet ontologi (GO) program (http:... //David abcc ncifcrf gov /) blev anvendt til at kategorisere gener i undergrupper baseret på biologisk funktion. Fishers eksakte test blev anvendt til at bestemme, om andelene af gener i hver kategori afveg gruppe. GC væv blev yderligere opdelt i dem med højere (≥75%) og lavere (< 75%) niveauer af Snail udtryk; differentiel genekspression mellem grupperne blev identificeret. er tilgængelige Primære microarray data i NCBI s GEO (Gene Expression Omnibus) database (http:.....? //www NCBI NLM NIH gov /geo /query /acc cgi acc = GSE38024).
Resultater
forordning af migration og invasion af gastriske kræftceller ved Snail
Lentiviral-baserede RNA knockdown og overekspression tilgange blev brugt til at bestemme Snail rolle i invasionen og migration af gastrisk kræft cellelinjer. SNU216 og SNU484 celler anvendt i denne undersøgelse er etableret gastrisk adenocarcinom cellelinier fra koreanske patienter. Disse celler blev inficeret med en lentivirus udtrykker enten ikke-mål eller Snail
-targeted shRNAs til lyddæmpning. En PLKO lentiviral vektor, målrettet Snail
og en tom PLKO vektor blev brugt til at fremkalde Snail overekspression i SNU216 og SNU484 celler. Polyklonale stabile cellelinier blev udvalgt ved hjælp af puromycin. Snegl
ekspression blev bestemt ved RT-PCR og western blotting; stabil snail
knockdown (sh-sneglen) og sneglen overekspression cellelinier (OE-Snail) blev opnået (figur 1). Figur 1 rolle Snail i invasion og migration af gastrisk kræft cellelinjer. A. SNU216 (øverste panel) og SNU484 (nederste panel) celler blev inficeret med lentivirus udtrykker enten ikke-mål shRNA (shNT
) eller Snail
shRNA på dag 0, og derefter høstet på dag 7 efter infektion. Snegl
knockdown blev bestemt ved RT-PCR og western blotting; stabile cellelinier blev frembragt for hver af cellelinierne (sh-Snail). Silencing af Snail
i SNU216 og SNU484 celler induceret nedsat migration og invasion. B. SNU216 (øverste felt) og SNU484 (nederste panel) celler blev inficeret med lentivirus udtrykker enten en lentiviral PLKO vektor målretning Snail
eller en tom PLKO vektor (EV) på dag 0, og derefter høstet på dag 7 efter infektion . Overekspressionen af ​​Snail blev bestemt ved RT-PCR og western blotting; stabil cellelinje blev genereret for hver af cellelinierne (O /E-snegl). Snail overekspression i SNU216 og SNU484 celler induceret øget migration og invasion. C. Snail overekspression induceret øget mRNA-ekspression af VEGF
og MMP11
i SNU216 og SNU484 celler i real-time RT-PCR-analyse. Lavere panel viser repræsentative RT-PCR tal for VEGF
, MMP11
, Snail
, og GAPDH
. Data viser middelværdien ± SE af mindst 3 uafhængige forsøg. * Angiver P
< 0,05 ved Students t
-test.
At bestemme Snail roller i gastrisk kræft celle invasion, vi målte kemotaktisk invasion af cellerne ved hjælp af Transwell systemet med filtre pre-belagt med Matrigel. For at måle migrering af gastriske cancerceller, vi analyseret cellemigrering ved anvendelse af et Boyden kammer apparat. Silencing af Snail
efter shRNA induceret nedsat migration og invasion af SNU216 og SNU484 celler, som vist i figur 1A. I modsætning til sneglen
lyddæmpende resultater, induceret overekspression af Snail øget migration og invasion af SNU216 og SNU484 celler, som vist i figur 1B. Overekspression af Snail var også forbundet med forøget VEGF og MMP11 (figur 1C).
Virkning af Snail overekspression på tumor aggressivitet og GC patientoverlevelse
Positiv nuklear farvning for sneglen ved niveauer på ≤50%, 50-75%, og ≥75% blev observeret i 13,4% (42/314), 52,2% (164/314), og 34,4% (108/314) af henholdsvis de 314 GC patienter i immunhistokemisk analyse. Snegl ekspression blev bemærket i tarm og diffus type GCS (figur 2A, B). Snegl overekspression (≥75% positivitet) signifikant korreleret med tumorstørrelse, brutto type, dybde af invasion, lymphovascular invasion, perineural invasion, og lymfeknudemetastaser (tabel 1). Snail overekspression var også forbundet med øget tumorstørrelse (P
= 0,028) og udgravet brutto type (P
< 0,001); og øget tumorindtrængen, dvs. højere T fase (P
< 0,001) og tilstedeværelsen af ​​perineurale invasion (P
< 0,001) og lymphovascular tumor emboli (P
= 0,002). Øget lymfeknude metastaser blev også relateret til Snail overekspression (P
= 0,002) .I overensstemmelse med ovenstående data, der viser positive forhold mellem Snail overekspression og GC aggressivitet, Snail overekspression signifikant korreleret med total overlevelse blandt GC patienter (P
= 0,023) (Figur 2C). En lineær sammenhæng blev observeret mellem øget nuklear udtryk for Snail og forkortet overlevelse (≤50%: 76,6 ± 2,7 måneder, 50-75%: 68,5 ± 2,0 måneder ≥75%: 63,3 ± 2,8 måneder). Snail overekspression (≥75% positivitet) blev identificeret som en selvstændig indikator for dårlig prognose med 314 patienter med GC, korrigeret for alder, køn, histologiske klassifikation, og tumor placering ved hjælp af en Cox regression proportional hazard model (P
= 0,033; tabel 2). Figur 2 Snail udtryk i gastrisk adenocarcinom (GC) vævsprøver og Kaplan-Meir plots af samlet overlevelse på 314 GC patienter. Snail var for det meste udtrykt i kerner af GC-celler (intestinal type (A), og diffus type (signetring) celler (B)), som indgår i væv array-prøver. Nogle reaktive fibroblaster viste også snail nuklear ekspression (forstørrelse: x 400). C. Kaplan-Meier analyse af den samlede overlevelse GC patienter baseret på Snail udtryk. En lineær sammenhæng mellem øget Snail nukleare udtryk og kortere overlevelse blev set blandt GC patienter (P
= 0,023). Log-rank test blev anvendt til at beregne P
værdier.
Tabel 1 Forbindelser mellem Snail udtryk og klinisk-patologiske kendetegn i 314 patienter med mavekræft
Antal patienter (N = 314)

Snail Positivitet
p-værdi Vejviser < 75%
≥75%
Alder (år)
58,5 ± 10,6
59,1 ± 11,9
0,695
Sex
Mand
218
143
75
0,996
Female
96
63
33
Tumor størrelse
≤4.0 cm
192
135
57
0,028
> 4,0 cm
122
71
51
Placering
Øvre /Middle
167
112
55
0,561
Lavere
147
94
53
invasion dybde
T1
160
127
33
< 0,001
T2
41
26
15
T3
68
33
35
T4
43
19
24
Gross typen
Forhøjet
77
51
26
< 0,001
Flat /deprimeret
131
105
26
Udgravet
106
50
56
Histologisk type,
Intestinal
182
123
59
0,609
Diffus
122
76
46
Blandet
10
7
3
perineurale invasion
Negativ
202
150
52
< 0.001
Positiv
111
55
56
Lymphovascular emboli
Negativ
193
139
54
0,002
Positiv
120
66
54
lymfeknudemetastase
n0, N1
270
186
84
0,002
N2, N3
44
20
24
tabel 2 multivariat overlevelsesanalyse med Cox regressionsmodel 314 gastriske kræftformer
Variabler
B
SE
HR (95% CI)
P
Alder (≤59 versus > 59)
-0,438
0,264
0,645 (0,385-1,082)
0,097
Køn (mand versus kvinder)
-0,037
0,267
0,963 (0,571-1,626)
0,889
site (øvre og midterste versus lavere)
0,635
0,264
1,887 (1,126 -3,164)
0,016
Lauren (tarm vs diffus)
-0,537
0,263
0,585 (0,349-0,978)
0,041
Snail (≥75% versus < 75 %)
-0,528
0,248
0.590 (0,363-0,958)
0,033
Note: B, koefficient; HR, hazard ratio; CI, konfidensinterval.
Identifikation af genekspressionsmønstre baseret på sneglen overekspression anvendelse af cDNA microarrays
cDNA microarrays blev brugt til at sammenligne genekspressionsprofiler af 45 GC-prøver. Vi identificerede 213 gener, der blev udtrykkes forskelligt på signifikante niveauer (P
< 0,05) mellem GC prøver med højere (≥75%) og lavere niveauer (< 75%) af Snail udtryk (tabel 3). Af disse 213 gener, blev 82 opreguleret og 131 blev nedreguleret i GC prøver med højere niveauer (≥75%) af Snail udtryk. Vi brugte hierarkiske clustering analyse for at vurdere de 213 gener og 45 GC prøver; overvåget clustering analyse gav mønstre for prøver med højere og lavere niveauer af Snail ekspression samlet i 2 forskellige grupper, med undtagelse af en prøve med højere niveauer af Snail ekspression (figur 3). For at undersøge de biologiske funktioner er involveret i diskriminerende gener, vi udførte en GO kategori analyse. Elleve gener var forbundet med regulering kræftcelle-ECM vedhæftning (P
< 0,021) og ECM protein regulering (P
< 0,028, tabel 4). De fleste har været impliceret i cancer. ONECUT1
, ADAMTS
, IFNAR2
, MSR1
, og SORL1
påvirke migration eller metastase, en proces, der involverer fastgørelse af tumorceller til basalmembranen, nedbrydning af lokal bindevæv, og penetration og migration af tumorceller gennem stroma [21-25] .table 3 Gener udtrykkes forskelligt i GC prøver med højere niveauer af Snail udtryk
PROBE_ID
SYMBOL
NAME

Gener opreguleret i prøver med højere niveauer (≥75%) af Snail udtryk (P
< 0,05)
ILMN_2374449
SPP1
Udskilt phosphoprotein 1
ILMN_2337923
TPD52L1
Tumor protein D52-like 1
ILMN_1679838
WBP5
WW domænenavn bindende protein 5
ILMN_2078592
C6orf105
androgenafhængige TFPI -regulating protein
ILMN_1714383
TPD52L1
Tumor protein D52-like 1
ILMN_1674817
C1orf115
kromosom 1 åben læseramme 115
ILMN_1813561
Scin
Scinderin
ILMN_1759818
SORL1
Sortilin-relaterede receptor, L (DLR klasse) A gentagelser indeholder
ILMN_1745686
MFHAS1
Malign fiberholdigt histiocytom forstærket sekvens 1
ILMN_2060115
SORL1
Sortilin-relateret receptor, L (DLR klasse) A gentagelser indeholder
ILMN_2337263
PKIB
Protein kinase (cAMP -afhængige, katalytisk) hæmmer beta
ILMN_2173835
FTHL3
Ferritin, tung polypeptid 1 pseudogen 3
ILMN_1791057
IFNAR2
Interferon (alfa, beta og omega) receptor 2
ILMN_1807114
LOC255620
Svarende til unc-93 homolog B1 (C. elegans), afskrift variant 1 (LOC255620), mRNA
ILMN_1669393
GGT1
Gamma-glutamyltransferase 1
ILMN_1685798
MAGEA6
melanom antigen familie A, 6
ILMN_3269395
GGT2
Gamma-glutamyltransferase 2
ILMN_1669833
SH2B2
SH2B adapter protein 2
ILMN_3238534
LOC100133817
Hypotetisk protein LOC100133817
ILMN_2099315
TRPM8
Forbigående receptor potentiel kation kanal, underfamilie M, medlem 8
ILMN_3298065
LOC729195
Ligner apikale tidlig endosomal glycoprotein
ILMN_1717726
FLJ43752
lang intergeniske ikke-protein-kodende RNA 336
ILMN_1670452
ANKRD20A1
ankyrin gentage domæne 20 familie, medlem A1
ILMN_3201060
LOC100132655

Hypotetisk protein LOC100132655
ILMN_3282829
LOC727913
Svarende til iduronat 2-sulfatase (Hunter syndrom)
ILMN_2339691
SYVN1
Synovial apoptose inhibitor 1 , synoviolin
ILMN_1785549
SLC30A2
opløst stof luftfartsselskab familie 30 (zink transporter), medlem 2
ILMN_3191898
LOC100129630
Hypotetisk LOC100129630
ILMN_1704204
LOC642204
ankyrin repeat domæne-holdige protein 26-lignende
ILMN_1682280
LOC647753
Hypotetisk protein LOC647753
ILMN_3201944
LOC646438
Hypotetisk LOC646438
ILMN_2233314
SPANXA1
Sperm protein associeret med kernen, X-bundet, et familiemedlem A1
ILMN_3305980
NS3BP
NS3BP
ILMN_1747850
CRIM2
Kielin /Chordin-lignende protein
ILMN_1700590
LOC645590
Svarende til cAMP-afhængig protein kinase type i-beta regulatorisk subunit
ILMN_1766316
FLJ32679

Golgin-lignende hypotetisk protein LOC440321
ILMN_1890741
Hs
0,552561
pancreas ø cDNA klon hbt09690 3, mRNA sekvens
ILMN_3308255
MIR33A

MicroRNA 33a
ILMN_1815716
LMLN
Leishmanolysin-lignende (metallopeptidase M8 familie)
ILMN_1654945
DNMT3A
DNA (cytosin-5 -) - methyltransferase 3 alpha
ILMN_2256050
SERPINA1
serpin peptidase hæmmer, clade A (alfa-1 antiproteinase, antitrypsin), medlem 1
ILMN_1759487
EGFLAM
EGF-lignende, fibronektin type III og laminin G-domæner
ILMN_1760410
LOC653086
Svarende til RAN-bindende protein 2-lignende en isoform 2
ILMN_1668969
MIXL1
Bland parret-lignende homeobox
ILMN_3279757
LOC100132532
Hypotetisk protein LOC100132532
ILMN_1715372
CAMKK1
Calcium /calmodulin-afhængig protein kinase kinase 1, alpha
ILMN_1731370
Alle forfattere læst og godkendt den endelige manuskript.

• Airway cellularitet, lipid lastet makrofager og mikrobiologi af mavesaft og luftveje hos børn med refluksøsofagitis
• Prognostisk betydning af neutrofil lymfocyt ratio og blodplader lymfocyt-forholdet i avancerede mavecancerpatienter behandlet med FOLFOX kemoterapi