Antioxidant aktivitet och ultra förändringar i gastric cancercellinjer som induceras av nordöstra Thai ätlig folk växt extracts

antioxidant aktivitet och ultra förändringar i gastric cancercellinjer som induceras av nordöstra Thai ätlig folk växtextrakt Bild Sammanfattning
Bakgrund
phytochemical produkter har en avgörande roll i läkemedelsutvecklingsprocessen. Denna lovande möjlighet, dock kräver behovet av att bekräfta deras vetenskapliga kontroll före användning. Därför syftar denna studie för att utvärdera (1) antioxidant aktivitet, (2) cytotoxicitet potential, och (3) effekten på ultra förändring i gastriska cancercellinjer genom exponering för fraktioner av tre lokala nord thailändska ätliga växter.
Metoder
Växter, Syzygium gratum, Justicia gangetica
och Limnocharis Flava
extraherades med etylacetat, och varje råextrakt analyserades på deras totala fenoler innehåll genom Folin-Ciocalteu-metoden. Deras antioxidant aktivitet bedömdes med användning av ABTS-systemet. Extrakten analyserades sedan med avseende på cytotoxicitet på två gastriska cancercellinjer Kato-III och NUGC-4, och jämfördes med Hs27 fibroblaster som en kontroll med hjälp av MTT-analysen. Cellviabiliteten (%) var IC 50 värden, liksom de ultrastrukturella förändringar som utvärderades efter behandling med en envägsanalys av varians (ANOVA).
Resultat
De totala fenolvärdena för de etylacetatextrakten var väl korrelerad med antioxidant kapacitet, med extraherade produkten av S. gratum
visar den högsta nivån av antioxidant aktivitet (ett 10-faldigt större respons) över J. gangetica
och L. flava
respektive. Exponering av S. gratum Mössor och J. gangetica
utdragen normala cellinjer (Hs27) resulterade i marginal cytotoxicitet effekter. Men genom en dosberoende analys S. gratum Mössor och J. gangetica
extrakt framställda cytotoxicological effekter på drygt 75 procent av Kato-III och NUGC-4 cellinjer. Dessutom var apoptotiska visade karakteristiken enligt TEM i båda cancercellinjer med dessa två extrakt, medan egenskaperna hos autophagy hittades i cellinjer efter efter exponering för extrakt från L. flava
.
Slutsatser
Från dessa tre anläggningar, S. gratum
hade högsta halterna av fenolföreningar och antioxidant kapacitet. Alla av dem befanns innehålla förening (ar) med cytotoxicitet in vitro
på cancerceller men inte på normala cellinjer som löst i vävnadskultur och ultrastrukturell analys. Detta är den första rapporten som visar effekten på cell förändring som apoptos av en Etylacetatextraktet S. gratum Mössor och J. gangetica.
Ytterligare studier är nu inriktad på enskilda isolat och deras funktion, prioritering på S. . gratum Mössor och J. gangetica Idéer för utveckling av nya läkemedel och stridande mot cancer
Nyckelord
Magcancer Ultra Cell cytotoxicitet TEM bakgrund
Gastric cancer är den fjärde vanligaste diagnosen cancer och näst vanligaste orsaken till cancerrelaterad död i världen [1]. Det uppskattades att det fanns cirka 1 miljon nya magcancer fall som registrerats under 2008, men av dessa var majoriteten (713.900) rapporterade i utvecklingsländerna, med de högsta incidensen för magcancer som finns i Östasien, över Central- och Östeuropa, och Sydamerika [1]. Trots den skenbara intensifieringen av sjukdomen, tyder allt på att de totala magsäckscancer kurserna emot trenden, med en minskning av rapporter om magcancer finns i de flesta delar av västvärlden [2].
Tyvärr har de flesta patienter med ventrikelcancer är ofta diagnosen i ett framskridet skede när ett botemedel är inte möjligt och behandling är palliativ med avsikt att förbättra kvaliteten och kvantiteten av livet. Även om det finns behandlingsriktlinjer för magcancer, är den femåriga överlevnaden mindre än 50% [3, 4]; en takt som är uppenbarligen inte uppmuntrande antingen onkologer eller cancerpatienter. Dessutom biverkningar av nuvarande behandlingar d.v.s. kirurgi, kemoterapi och strålning är inte tillfredsställande. Så behövs riktade behandlingar för att minska biverkningar och förbättra de kliniska resultaten av patienter. Därför är forskare inom detta nya millenniet betala mycket mer uppmärksamhet åt utvecklingen av inte bara nya terapeutiska riktlinjer och strategier för tidigt förebyggande för magcancer [5, 6], men också på att hitta nya och målspecifika terapeutiska medel samt.
under de senaste två decennierna har phytochemical produkter spelat en dominerande roll i upptäckten av nya läkemedel för att rikta cancer [7], med över 60% av närvarande används anticancermedel härrör från naturliga källor [8]. Exempel på globalt kliniskt användbara antitumörmedel som härrör från vilda växter innefattar taxol, vinblastin, vinkristin, kamptotecinderivat, topotekan (en vetegräs), havtorn, lingzhi, irinotekan, och etoposid, som härrör från epipodofyllotoxin [9, 10]. Andra kommer från frukt och grönsaker; inte begränsat till att omfatta Curcumin (gurkmeja), genistein (sojaböna), catechins (grönt te) [7], men också örter som vinkaalkaloider, podofyllotoxin, berberin, citroner gräs oljor, flavonoider och kamptotecin; en annan grupp av lovande anticancermedel [11]. Även om dessa anti-cancermedel har använts för riktade mekanismbaserade vägar, är deras faktiska manipulation av den yttre och inre apoptosvägar fortfarande utforskas [12-14]. Paclitaxel isolera från barken av Stilla idegran, är ett phytochemical som visar löfte Taxus brevifolia
. Det är ett läkemedel som godkänts av FDA för att användas för behandling av AIDS-relaterat Kaposis sarkom, bröstcancer, icke-småcellig lungcancer och äggstockscancer. Dess främsta cellulär effekt är att orsaka onormal stabilisering av den dynamiska mikrotubuli polymerisering, vilket leder till misslyckande celldelning resulterar i apoptos [15-17]. Dock paklitaxel också studeras som en alternativ behandling för andra typer av cancer, inklusive magcancer. Det är för närvarande i kliniska prövningar fas III [18, 19]. Oavsett om de har godkänts eller inte, extraherar breda nå stöd och fortsatta studier av växt med konsekvenser i magcancer behandling indikerar fortsatt roll som naturprodukter spelar i läkemedelsutvecklingsprocessen.
När man överväger en epidemiologi studie av nydiagnostiserade gastric cancerfall i Thailand, har mycket lägre incidens observerats i nordöstra regionen [20]. Men förekomsten av Helicobacter pylori
infektioner, inte skiljer sig över norra delen av Thailand, ingen geografisk faktor (till exempel platå, bergiga intervall eller djungel terräng) var annorlunda antingen [21]. Därför måste det finnas något annat centralt för befolkningen i nordöstra regionen som minskar den totala förekomsten av magcancer. Med alla men uteslutas genetik och miljöfaktorer, har det föreslagits att ätliga folk växter dieter som vanligtvis konsumeras i denna region, kan hålla svaret på denna skillnad. Dessa nya data, och denna lovande bly utmanar oss mycket att utforska den mystiska fenomen, är att om växtkemiska föreningar inom nordöstra thailändska ätliga folk växter har kemopreventiva eller cytotoxiska potentialen för att bekämpa magcancer, eller andra egenskaper. Av den anledningen, därför denna studie genomfördes för att utvärdera cytotoxiciteten potentialen hos dessa lokala ätliga växter. Av särskilt intresse, växter S. gratum
, J. gangetica Mössor och L. flava
, valdes baserat på epidemiologiska data som tyder på att de är de mest regelbundet ätbara folk grönsaker i nordöstra regionen.
Vi postulerar att dessa växter kunde hålla i dolda egenskaper som skulle kunna utnyttjas för att bekämpa denna cancer, och den aktuella studien syftar till att bedöma deras potential. Vi bedömer de råa fenolbaserade extrakt av dessa växter, och visar hög cellulär apoptotiska och cytotoxiska effekter i två vanliga, och jämförande gastric cancercellinjer, Kato-III och NUGC-4.
Metoder
Växtmaterial
Tre lokala ätliga folk växter; S. gratum
, J. gangetica Mössor och L. flava
(tabell 1) köptes från tre olika lokala marknader i Khon Kaen i nordöstra delen av Thailand under oktober december 2008. Dessa växter var väljas baserat på ethnobotanical uppgifter [22-26] och epidemiologiska data som beskrivits ovan. Korrekt taxonomiska identifiering av växtarter som används för denna studie övervakades av botanister från Botaniska institutionen och farmakologi, Farmaceutiska fakulteten, Khon Kaen University, Thailand.Table 1 Namnen på tre växtextrakt och andra forskningsreferenser, terapeutisk användning i traditionell thailändsk medicin screenas i denna studie
Arter [Voucher antal]
Familj (Common name engelska /thailändska)
Rapporterade huvudbeståndsdelarna
Terapeutisk användning i traditionell thailändsk medicin
vid ätliga delen
Ref.
Syzygium gratum
(Wight) SN Mitra var. Gratum
[Ch. Laongpol 6] a, c
Myrtaceae (Eugenia /Phak Mek, Samet chun) Review Ännu tydligt fastställt i kemisk struktur men visade sig vara stark i antioxidanter och förebyggande av oxidativ och nitrosative påfrestningar
Behandling av dyspepsi och matsmältningsbesvär
löv
22,23
Justicia gangetica
L. [TK-PSKKU-0066] b
Acanthaceae (kinesisk violett, tropisk primula /Godkända namn: asystasia gangetica
)
5,11-epoxymegastigmane glukosid (asysgangoside), salidroside, bensyl β-d-glukopyranosid, (6S
, 9R
) -roseoside, ajugol, apigenin 7-O
-β-d- glukopyranosid, apigenin 7-O
-neohesperidoside, och apigenin 7-O
-β-d-glukopyranosyl (1 → 6) -β-d-glukopyranosid
Behandling av magont, magen maskar, anti- astma
Lämnar
24,25
Limnocharis Flava
L. Buchenau [Patt. 173] c
Limnocharitaceae (gul velvet, gul burr huvud /Talabhat reusi) katalog Undetermined
Förrätt
Stem
26
aVoucher exemplar deponeras på Forest Herbarium (BKF), Institutionen för National Park, djur och växter bevarande, Ministry of Natural Resource, bKassettens herbarium av fakulteten Pharmaceutical Sciences, Khon Kaen University och CInformationen Prince of Songkla University herbarium (PSU), Institutionen för biologi, naturvetenskapliga fakulteten, Prince of Songkla University, Thailand Framställning av anläggningen.
extraherar
Ätbara delar av varje individuell växtsort (tabell 1) sköljdes med sterilt destillerat vatten för att avlägsna detritus och torkades i varmluftsugn vid 50 ° C under 7 dagar. När de väl torkat, ades växtdelar sedan skärs i små bitar och maldes till ett fint pulver med användning av en mortel och mortelstöt. Varje malda pulvret växtmaterial nedsänktes sedan med överskott av etylacetat lösningsmedel (Sigma-Aldrich Pte-Ltd, Singapore) i en extraktion flaska. De etylacetat-blandningar inkuberades sedan på en skakinkubator vid rumstemperatur under 72 h. Efter detta förfarande, supematantema överfördes sedan till en ny behållare, och extraktionsprocessen med etylacetat upprepades ytterligare tre gånger, innan supernatanterna från dessa trefaldiga extraktionerna kombinerades. Dessa filtrerades sedan genom Whatman filterpapper nr 1 och indunstades genom rotationsindunstning. Dessa exempel extrakten användes sedan i ytterligare experiment.
Bestämning av total fenolisk förening
Totala fenolföreningar i växtextrakten bestämdes genom Folin-Ciocalteu-metoden beskriven i Sachindra [27]. I korthet, 0,2 ml vardera växtextrakt löstes i 50% DMSO (Santa Cruz Biotechnology Inc., Bangkok, Thailand) oxiderades med 1,0 ml 10-faldigt utspädda Folin-Ciocalteureagens (Sigma-Aldrich Pte-Ltd, Singapore) och neutraliserades med 0,8 ml 6% -ig natriumkarbonatlösning (Sigma-Aldrich Pte-Ltd, Singapore). Efter 1 h inkubation mättes absorbansen hos lösningen mättes vid 764 nm och resultaten representeras som milligram gallussyra ekvivalent per gram torrvikt (mg GAE /g). Analysen utfördes i triplikat för varje provkoncentration från 3 separerade analyser.
Bestämning av antioxidant aktivitet
Antioxidant aktiviteten hos de växtextrakt bestämdes spektrofotometriskt med användning av ABTS-systemet i enlighet med metoden av Re och medarbetare [28]. I korthet ABTS radikal katjon (ABTS • +) blandning genererades genom oxidation av 7 mM ABTS (Sigma-Aldrich Pte-Ltd, Singapore) med 140 mM kaliumpersulfat (Sigma-Aldrich Pte-Ltd, Singapore), odlades under 16 h vid rumstemperatur i mörker. Antioxidant aktivitet bestämdes genom att tillsätta 0,2 ml av växtextrakt med 1,8 ml ABTS • + radikal katjon blandning. Efter inkubering av blandningen under 6 min, mättes absorbansen vid 734 nm registrerades. ABTS • + radikaler förmåga (%) av växtextrakt beräknades baserat på följande ekvation: ABTS • + radikaler förmåga (%) = [(Abs.control-Abs.test prov) /Abs. kontroll] x100. Där Abs.control är absorbansen för kontrollreaktionen (utan växtextrakt) och Abs.test prov är absorbansen i närvaro av ett växtextrakt. Resultaten jämfördes sedan med anti-eliminerande aktiviteten av Trolox (Sigma-Aldrich Pte-Ltd, Singapore) och representeras som Trolox ekvivalent antioxidant kapacitet per gram torrvikt (TEAC /g). Analysen utfördes i triplikat för varje provkoncentration från 3 separerade analyser.
Cellodling
Två humana gastriska karcinom-cellinjer Kato-III (ATCC nr HTB-103) från American Type Culture Collection (ATCC, Rockville, MD, USA) och NUGC-4 (JCRB0834) från Health Science Research Resources Bank (Japan Health Sciences Foundation) användes för in vitro
cytotoxiska analyser. Den humana förhuden fibroblastcellinje Hs27 (ATCC No.1634) användes som en kontroll. De odlades i steril RPMI 1640 innehållande 10% (volym /volym) fetalt bovint serum (Biochrom AG, Berlin) vid 37 ° C matas med 5% CO 2 i en inkubator. Celler odlades i standardiserade vävnadsodlingskolvar och vid uppnående av 80% sammanflöde fick passera med en lösning av 0,25% trypsin-EDTA (Sigma-Aldrich Pte-Ltd, Singapore) var 3-4 dagar fram till användning.
In vitro
cytotoxicitetsanalys
växt~~POS=TRUNC extrakt~~POS=HEADCOMP bedömdes dess cytotoxiska aktivitet mot Kato-III och NUGC-4 cellinjer via MTT kolorimetriska analysen som först beskrevs av Mosmann [29] med ändringar som föreslagits av Denizot och Lang [30]. Odlade celler (1 x 10 4 celler) i komplett medium överfördes till varje brunn i en platta med 96 brunnar och inkuberades därefter vid 37 ° C i en fuktad luftatmosfär berikad med 5% (volym /volym) CO 2 under 24 timmar för att låta cellerna fästa till botten av varje brunn. De odlade cellerna behandlas sedan med den testade råextraktet (triplikatbrunnar per betingelse) genom tillsats av 2 mikroliter av seriespädningar av varje extrakt i en koncentration av 1,25, 2,5, 5, 10 och 20 mikrogram /ml. Cellerna odlades sedan enligt ovan för en annan 72 h före tillsatsen av 10 | il av en 5 mg /ml lösning av 3- (4, 5-dimetyltiazol-2-yl) -2, 5-difenyltetrazoliumbromid (MTT) ( Sigma-Aldrich Pte-Ltd, Singapore) till varje brunn. Inkubationen fortsattes i ytterligare 4 h innan media avlägsnades. En blandning av DMSO (150 | il) och glycin (25 | il) tillsattes till varje brunn och blandas för att säkerställa cell-lys och upplösande av de formasan kristaller, innan absorbansen vid 540 nm mättes. Tre replikationer av varje experiment utfördes och procentandelen MTT omvandling till dess formazan-derivat för varje brunn (procent celltillväxt) beräknades genom att dividera OD vid 540 nm av brunnarna med kontroll baserad på följande ekvation: Procent celltillväxt = [A540-test - A540 noll] x 100 /[A540 kontroll - A540 noll]. Där A540 noll = A540 av lösningen efter cellen inkuberades under 24 h före tillsatsen av växtextrakt; A540 test = A540 lösning efter växtextrakt tillägg; och A540 kontroll = A540 lösning utan växtextrakt tillägg. Dessutom, för giftfri försäkran om växtextrakt mot normala celler (fibroblastcellinje Hs27), en dubbel dos (2 gånger av IC 50 koncentrationer [10 mikrogram /ml]) av extrakten anställda och bedöms av MTT analysera. Analysen utfördes i triplikat för varje provkoncentration från 3 separerade analyser.
Halv maximal inhiberande koncentration (IC50)
erhållna absorbansen vid 540 nm användes för att bestämma den procentuella andelen av cellöverlevnad under antagande att 100% överlevnad erhölls när de behandlades med lösningsmedel endast som kontroller, och att inga skillnader i metabolisk aktivitet fanns mellan överlevande celler under olika betingelser. Under dessa antaganden var den procentuella överlevnaden hos de behandlade cancercellinjer och normala odlade celler beräknades enligt följande formel: Procent av överlevnad = (A540 behandlade celler /A540 kontroll) x 100. Den medelvärde ± 1 standardavvikelse (SD) cell överlevnad (%) avsattes mot motsvarande växtextraktet koncentration och bäst anpassade linjen användes för att härleda den beräknade IC 50 värde av koncentrationen som kan ge 50% av cellöverlevnad.
halterna av växtextrakt ger 50% hämmande koncentration (IC 50) bestämdes från tre separata experiment. IC 50 av varje växtextrakt användes sedan som den behandlade koncentrationen vid 0 och 3 dagar mot Kato-III och NUGC-4, vilket bedömdes med avseende på apoptos med användning av ett transmissionselektronmikroskop (TEM). Analysen utfördes i triplikat för varje provkoncentration från 3 separerade analyser.
Provberedning för transmissionselektronmikroskopi
Kato-III-celler (1x10 6 celler) och NUGC-4-celler (1x10 6 celler) behandlade med varje växtextraktet såväl som den negativa kontrollen (obehandlade kulturer), utfördes separat. I korthet innebar detta att de sköljdes med D-Hanks lösning (Life technologies, Bangkok, Thailand) två gånger, och levereras i centrifugrör med en plastskrapa, följt av centrifugering vid 2000 rpm under 15 min, med den överstående vätskan avlägsnades. Fällningen fixerades i en lösning innehållande 4% glutaraldehyd (elektronmikroskopi Sciences, Bangkok, Thailand) och 2% paraformaldehyd (elektronmikroskopi Sciences, Bangkok, Thailand) i 0,1 M fosfatbuffert koksaltlösning (PBS), pH 7,4, vid 4 ° C under 1 h, tvättades sedan med 0,1 M PBS för att avlägsna fixativet. Prover efterfixerades i 1% osmiumtetroxid (elektronmikroskopi Sciences, Bangkok, Thailand) i samma buffert under 30 min, och dehydratiserades i en graderad etanolserie i 10 min vardera. De sedan bort med två byten av propylenoxid och nedsänkt i sekventiella blandningar av propylenoxid och Araldite 502 harts (Sigma-Aldrich Pte-Ltd, Singapore), vid förhållanden av 3: 1, 2: 1, 1: 2, och slutligen inbäddade i ren Araldite. Delar av ett pm skars med hjälp av en MT-2 Porter-Blum ultramicrotome. Sektionerna därefter monterade på koppargaller, lufttorkas och kontrasterade sekventiellt med 2% uranylacetat (elektronmikroskopi Sciences, Bangkok, Thailand) i 7% alkohol i mörkret, och behandlades sedan med blycitrat (elektronmikroskopi Sciences, Bangkok, Thailand ). De undersöktes under ett Philips CM 100 transmissionselektronmikroskop som arbetar vid 80 kV.
Statistisk analys
Resultaten uttrycktes som medelvärde ± SD replikat från 3 separerade analyser. Jämförelse mellan datauppsättningar utfördes med användning av en envägsanalys av varians (ANOVA) följt av Students t-test. Alla statistiska analyser genomfördes med användning av SPSS19. Skillnader accepterades som statistiskt signifikant vid p. ≪ 0,05
Resultat
Totalt fenol innehållet i växter extrakt
Tre ätliga folk växter från nordöstra regionen av Thailand (S. gratum
, J. gangetica
och L. flava
) extraherades och deras totala fenolhalten med de resultat som visas i tabell 2. Bland dessa växtextrakt, den högsta nivån av den totala fenolhalten upptäcktes i S. gratum-delar på 149.789 ± 0,381 mg GAE /g. Det var 10 veck betydligt större innehåll än vad som konstaterades i J. gangetica Mössor och L. flava
(16,513 ± 0,130 och 14,334 ± 0,463 mg GAE /g respektive p Hotel < 0,05). tabell 2 Genomsnittlig total fenolhalt av växtextrakt, uttryckt som GAE och anti-rensning aktiviteten hos växtextrakt företräddes TEAC
växt~~POS=TRUNC extrakt~~POS=HEADCOMP
totalt plenolics (mg GAE /g torrvikt) katalog
Anti-elimineringsaktivitet (mM TEAC /g torrvikt)
S. gratum
(Wight) Review 149,789 ± 0,381
2,823.521 ± 27,521
J. gangetica L
.
16,513 ± 0.130a
313,141 ± 39.713a
L. flava (L.)
14,334 ± 0.463a
900,845 ± 20.346a, b
Värden uttrycktes som medelvärden ± SD av replikat från 3 separerade analyser. ap Hotel < 0,05 VS S. gratum
, bp Hotel <. 0,05 VS J. gangetica
Antioxidant kapacitet växtextrakt
Antioxidant verksamhet etylacetat extraherade S. gratum
, J. gangetica Mössor och L. flava
visas i tabell 2. TEAC motsvarande värden för dessa anläggningar var signifikant annorlunda i fallande ordning från S. gratum Hotel > L. flava Hotel > J. gangetica
(2,823.521 ± 27,521, 900,845 ± 20,346, 313,141 ± 39,713, respektive, s
< 0,05). Märkbart, omkring 3-9 veck högre antioxidantaktivitet av S. gratum
befanns jämfört med de två andra arter extrakt. Dessa korrelerade väl med den totala fenolinnehållet. (Korrelationskoefficient för R 2 = 0,935, Y = 16.64x + 324,5).
Celltillväxt inhibering
Gastric cancercellinjer Kato-III och NUGC-4 och den humana fibroblast-cellinjen (kontroll) var utsätts för vart och växtextraktet (serieutspädning koncentrationen [1,25, 2,5, 5, 10 och 20 mikrogram /ml]), för att bestämma den tillväxthämmande aktiviteten effekt induceras från varje växt. Efter 72 timmar, var livsdugliga celler mättes genom MTT-analys. Kato-III och NUGC-4-celler exponerade för S. gratum
och J. gangetica
extrakt resulterade i en signifikant minskning av livsdugliga celler på ett dos-beroende sätt (fig 1). Vid 20 ng /ml alla inducerade över 50% celldöd i både gastriska cancercellinjer. Men vid 10 mikrogram /ml extrakten som framställts från enbart S. gratum
och J. gangetica
visade signifikant potent cytotoxicitet (p
< 0,05) för att inducera över 70% celldöd i Kato-III och NUGC-4 när jämför med L. flava
(Figur 2). Dessutom är dessa två växtextrakt visade ingen effekt på normala humana förhudsfibroblast-cellinjen (figur 2). I kontrast, L. flava
's effekter minskas. Resulterar i ca 25% av celldöd, med ingen signifikant skillnad mellan gastric cancerceller och normal fibroblast cell (Figur 2). Figur 1 Dos-responsstudier av växtextrakt på två gastriska cancercellinjer: (A) Kato-III och (B) NUGC-4. Cellerna behandlades med olika koncentrationer (0, 1,25, 2,5, 5, 10 och 20 mikrogram /ml) av S. gratum
, J. gangetica
och L. flava
under 72 timmar. Den antiproliferativa effekten mättes med MTT-analys. Resultaten uttrycktes som medel ± SD från tre oberoende experiment.
Figur 2 Cytotoxicitet test mot Kato-III, NUGC-4 och Hs-27 efter inkuberas med 10 mikrogram /ml etylacetat extraherades från S. gratum, J. gangetica och L. flava. Den antiproliferativa effekten mättes med MTT-analys. Resultaten uttrycktes som medel ± SD från tre oberoende experiment. Resultaten visade både S. gratum Mössor och J. gangetica
starkt hämmade upp till 70% magsäckscancer celltillväxt utan att förstöra normala fibroblastceller Hs 27 (signifikant skillnad [* p Hotel < 0,05]). Detta kontrasteras av effekten av L. flava
, som visade en minskad mängd av celltillväxt, inte bara i gastric cancerceller utan även på normala fibroblastceller också.
IC 50 (ig /ml ) värden är sammanfattade i figur 3. den J. gangetica
extrakt hade den lägsta IC 50 värden av 5,45 mikrogram /ml och 5,86 ug /ml för Kato-III och NUGC-4, respektive. På samma sätt S. gratum
extrakt visade högre cytotoxicitet till cancercellinjer med IC 50 värden i 7,24 mikrogram /ml - 11,96 mikrogram /ml intervall, medan den högsta IC 50 var från L . flava
extrahera 17,20 | ig /ml och 14,64 pg /ml för Kato-III och NUGC-4 respektive. Detta var signifikant olika (p
< 0,05) jämfört med de två andra växtextrakt (Figur 3). Figur 3 Jämförande cytotoxicitet av IC 50 S. gratum, J. gangetica och L. flava på Kato-III, NUGC-4 och Hs27 med MTT-analys. Resultaten uttrycktes som medel ± SD från tre oberoende försök (* p
< 0,05) och jämfördes med Hs27-behandlade celler. J. gangetica
visade lägsta IC50, medan den högsta var från L. flava
Signifikanta skillnader (p < 0,05). Mellan
observerades mellan de båda cancercell S. gratum Mössor och L. flava linjer.
ultra förändringar av Kato-III och NUGC-4 cellinjer som induceras av S. gratum, J. gangetica Mössor och L. flava
för att avgöra om tillväxthämning av växtextrakt var förknippade med apoptos, undersökte vi vidare morfologiska förändringar i Kato-III och NUGC-4 gastric cancercellinjer enligt transmissionselektronmikroskop. Kontrollcellerna nukleära strukturer föreföll intakta (Figur 4A: Kato-III, E: NUGC-4), medan de celler som behandlats med de hos de växtextrakt visade ultrastrukturella förändringar i flera sätt (Figurerna 4B-4D: Kato-III, och 4 F-4H: NUGC-4, respektive). I detalj de Kato-III-celler behandlades med S. gratum
visas en kondenserad kärna med kromatinkondensation, apoptotisk kropp bildning (Figur 4B), och dispergering granulär skräp. Även för Kato-III-celler behandlade J. gangetica
dessa visas kromatinkondensation, membranbundna apoptotiska kroppar och många vesiklar (Figur 4C). De morfologiska förändringar som finns i L. flava
behandlade Kato-III-celler, visade krympta kärna med kromatinkondensation och många heterogena blåsor, inklusive omfattande funktioner i intracellulär vakuolisering (Figur 4D). Figur 4 Elektronmikrofotografier som jämför effekterna av S. gratum, J. gangetica och L. flava på Kato-III (A-D) och NUGC-4 (E-H) 3 dagar efter behandling. Skalstreck 2 | j, m. A) Obehandlad Kato-III cell visar mycket få vesiklar (v), en ganska jämn rundad form och kromatin utspridda kärna (N). B) S. gratum
behandlade Kato-III cell visar kondenserat kromatin i kärnan (N), apoptotisk kropp bildning (pilspets) och många vesiklar. Cellen dispergering såsom granulär skräp (*). C) Kato-III cell behandlad med J. gangetica
. Denna cell visar kromatinkondensation runt periferin av kärnan, membranbundna organeller (pil) och många vakuoler (v). D) Kato-III cellen efter exponering för L. flava
visar ett stort antal autophagic vakuoler (v), och en krympande kärna (N) med kondenserat kromatin. E) Obehandlad NUGC-4 cell visar ingen kondens av kromatin i kärnan (N) och en ganska jämn rundad form. F) NUGC-4-cell som behandlats med S. gratum
visar kromatinkondensation kärnan, ett flertal vesiklar (v) och många membranbundna organeller (pil). G) NUGC-4 cell efter exponering för J. gangetica
visar en kärna kondenserad kromatin, membranbundna organellen (pil) och vesiklar (v). H) morfologiska förändringar som observerats i L. flava
behandlade NUGC-4 cell utgjordes med kromatinkondensation i kärnan (N), och många heterogena vesiklar av varierande storlek (v).
S. gratum
behandlas NUGC-4 cellinjer uppvisade apoptos med komprimering kärna och produktion av membranbundna apoptotiska kroppar och många vesiklar (Figur 4F). Men i jämförelse, NUGC-4-celler som behandlats med J. gangetica
, producerade tidiga stadier av apoptos med kromatinkondensation och många vesiklar (Figur 4G). Medan celler som behandlats med L. flava
visade perifera kromatinkondensation kärna med många heterogena blåsor och blåsbildning (figur 4H) Diskussion
serendipitous observationer.
Har visat att växter kan traditionella örter och teer utnyttjas för att eventuellt vinna kampen i slåss cancer; ett världsomfattande hälsoproblem. Det är dock inte förrän dessa fytokemikalier testas i och in vivo
att vi kan veta säkert hur långt de kan gå att hålla sjukdomen under kontroll [31-34] vitro
. I Thailand magcancer är ett gissel, men de ovanligt lägre magcancer incidenter i nordöstra delen av Thailand är av stort intresse. Det faktum att S. gratum
, J. gangetica Mössor och L. flava
är infödda till området och utgör en stor del av rutinen kosttillskott i lokalbefolkningen, därför bestämde vi oss för att undersöka om dessa folk växter är potentiella kandidater för säker och tillförlitlig kontroll av magcancer. Även om det finns många rapporter att klargöra deras antioxidant aktiviteter, ger denna studie det första beviset på deras potenta cytotoxiska effekter och apoptotiska induktion baserat på ultrastrutural egenskap på magcancer.
Dessa växter först extraheras med etylacetat och därefter analyseras för deras fenolinnehållet med Folin-Ciocalteu metoden.

• Xpert MTB /RIF analys kan användas på arkiverad gastric aspirera och inducerad sputumprov för känslig diagnos av pediatrisk tuberkulos
• Emergency presentation av magcancer; prognos och konsekvenser för tjänsteplanering