Antioksidativno aktivnost in ultrastrukturni spremembe v želodcu raka celičnih linijah s severovzhodne tajske užitnih folk obrat induciranih extracts

antioksidantom aktivnost in ultrastrukturni spremembe v želodcu raka celičnih linijah s severovzhodne tajske užitnih ljudske rastlinskih izvlečkov
Abstract
Ozadje
imajo fitokemijskega izdelki inducirane kritično vlogo v procesu odkrivanja drog. Ta obetavna možnost, vendar pa zahteva, da je treba potrditi svojo znanstveno preverjanje pred uporabo. Zato je namen tega študija za oceno (1) antioksidant dejavnosti, (2) citotoksičnost potencial, in (3) vpliv na ultrastrukturni spremembe v želodcu linij rakavih celic skozi izpostavljenost frakcij treh lokalnih severovzhodni tajski užitnih rastlin.
Metode
Rastline, Syzygium gratum, Justicia gangetica
in Limnocharis flava
ekstrahiramo z etil acetatom in vsak surovi ekstrakt analizirali njihovo skupno vsebnost fenolov po metodi Folin-Ciocalteu. Njihovo antioksidativno aktivnost je bila ocenjena z uporabo sistema ABTS. Ekstrakte smo nato testirali na citotoksičnosti na dveh želodčnega raka celičnih linij Kato-III in NUGC-4, in v primerjavi z Hs27 fibroblastov kot kontrolo z uporabo MTT testom. viabilnost celice (%) smo ovrednotili po zdravljenju z enosmerno analizo variance (ANOVA), IC 50 vrednosti, kot tudi ultrastrukturni spremembe.
Rezultati
skupne vrednosti fenolnih etilacetata ekstraktih so dobro povezana z antioksidativno kapaciteto, s izpisanih izdelka S. gratum
prikazuje najvišjo stopnjo antioksidativno delovanje (10-krat večji odziv) nad J. gangetica
in L. flava
oz. Izpostavljenost S. gratum
in J. gangetica
izvlečkov običajnih celičnih linij (Hs27) za posledico mejnih učinkov citotoksičnosti. Vendar pa je po odvisnosti od odmerka testa S. gratum
in J. gangetica
ekstraktov, proizvedenih cytotoxicological učinke na nekaj več kot 75 odstotkov Kato-III in NUGC-4 celičnih linijah. Poleg tega je bila apoptotske značilnost prikazane pod TEM v obeh raka celičnih linijah s tema dvema ekstraktov, medtem ko je bila lastnosti avtofagija najdemo v celičnih linijah po nadaljnji izpostavljenosti izvlečke iz L. flava
.
Sklepe
Od teh tri rastline, je imel S. gratum
najvišje vsebino fenolnih spojin in antioksidativno kapaciteto. Vsi od njih je ugotovljeno, da vsebuje spojino (e) s citotoksičnosti in vitro
na rakave celice, vendar ne na običajne celične linije, kot je rešena v tkivni kulturi in ultrastrukturni analizo. To je prvo poročilo prikazati vpliv na celične spremembe kot apoptoze ekstrakta etil acetat S. gratum
in J. gangetica.
Nadaljnje študije so zdaj osredotočena na posameznih izolatov in njihovega delovanja, pri čemer prednostno na S. gratum
in J. gangetica
za razvoj novih terapij ter borcev proti raku.
Ključne besede
rak želodca ultrastruktura Cell citotoksičnost TEM Ozadje
raka želodca je četrti najpogosteje diagnosticiran rak in druga najbolj vodilni vzrok raka povezanih smrti v svetu [1]. Ocenjeno je bilo, da je bilo približno 1 milijon novih želodca primerov raka, posnete leta 2008, ampak tistih, ki so poročali večina (713.900) v državah v razvoju, z najvišjo incidenco raka želodca najdemo v vzhodni Aziji, nad srednjo in vzhodno Evropo, in Južna Amerika [1]. Kljub navidezni stopnjevanja bolezni, kažejo, da je na splošno v želodcu stopnje raka poskakuje trend, z zmanjšanjem poročil raka želodca najdemo v večini delov zahodnega sveta [2].
Bolniki z rakom žalost večina želodca so pogosto diagnosticirali v poznejši fazi, ko je zdravilo ni mogoča in je zdravljenje paliativno z namenom izboljšanja kakovosti in količine življenja. Čeprav obstajajo smernice za zdravljenje raka želodca, petletno preživetje je manj kot 50% [3, 4]; tečaj, ki se očitno ne spodbuja bodisi onkologe ali rakom obolelih. Poleg tega so stranski učinki sedanje tretmaji tj operacijo, kemoterapije in obsevanja niso zadovoljivi. Torej, so potrebne usmerjene terapije za zmanjšanje stranskih učinkov in izboljšanje klinične rezultate bolnikov. Zato raziskovalci v tem novem tisočletju posvečajo veliko več pozornosti razvoju ne le novih terapevtskih smernic in strategij za zgodnje preprečevanje raka želodca [5, 6], ampak tudi na iskanju novih in ciljajo na določene terapevtskih sredstev, kot tudi.
v zadnjih dveh desetletjih so fitokemićne izdelki igrala vodilno vlogo pri odkrivanju novih zdravil za ciljne raka [7], pri čemer je več kot 60% se trenutno uporabljajo za boj proti raku naravnega izvora [8]. Primeri svetu klinično uporabnih antitumorska sredstva, ki izhajajo iz divjih rastlin vključujejo taksol, vinblastin, vinkristin, kamptotecina derivati, topotekana (a pšenica trava), rakitovca, Lingzhi, irinotekan in etoposida, ki je pridobljen iz epipodofilotoksinskih [9, 10]. Drugi so pridobljeni iz sadja in zelenjave; ni omejena vključiti kurkumin (kurkuma), genistein (sojino), katehine (zeleni čaj) [7], ampak tudi zelišča, kot so vinca alkaloidi, podofilotoksina, berberin, limone trave olja, flavonoide in kamptotecina; drugo skupino obetavnih zdravili proti raku [11]. Čeprav so bila ta sredstva proti raku zaposleni za ciljne poti, ki temeljijo na mehanizem, njihovo učinkovito manipulacija ekstrinzične in intrinzične apoptosis poti še vedno preučuje [12-14]. Paklitaksel izolirali iz lubja Tihega tisa, Taxus brevifolia
je eden fitokemikalija, ki obeta. Je zdravilo odobrila FDA, ki se uporabljajo za zdravljenje, povezano z aidsom, Kaposijevega sarkoma, raka na prsih, ne-drobnoceličnega pljučnega raka in raka na jajčnikih. Njegov primarni celični učinek je, da povzroči nenormalna stabilizacije dinamičnega mikrotubularne polimerizacijo, kar vodi do okvare celične delitve posledico apoptozo [15-17]. Vendar paclitaxel tudi raziskujejo kot alternativno zdravljenje drugih vrst raka, vključno z rakom želodca. Trenutno je v kliničnih preskušanjih faze III [18, 19]. Ne glede na to, ali so bili odobreni ali ne, široka dosegla podporo in nadaljevanje študij rastlinskih izvlečkov, pa so posledice pri zdravljenju raka želodca kaže nadaljnje vloge, ki jo imajo naravni proizvodi v procesu odkrivanja drog.
Pri odločanju za epidemiologijo študija na novo diagnosticiranih želodca primerov raka na Tajskem, so opazili precej nižjih pojavnost v severovzhodni regiji [20]. Čeprav je razširjenost Helicobacter pylori
okužb, se ne razlikujejo po vsej severni regiji Tajske, ni geografski dejavnik (na primer planote, goratem območju ali jungle terena) razlikuje bodisi [21]. Zato mora biti nekaj drugega pomena za prebivalstvo v severovzhodni regiji, ki zmanjšuje splošne incidenco raka želodca. Ob vse, vendar izključiti genetike in okoljski dejavniki, je bilo predlagano, da lahko užitne folk rastline diete, ki so običajno porabijo v tej regiji, imajo odgovor na to neskladje. Ta novi podatki, in to obetavno vodijo nas močno nasprotuje raziskati skrivnostni pojav, ki je, ali imajo fitokemične spojine v severovzhodni tajskih užitnih ljudskih rastlin kemopreventivno ali citotoksično potencial za boj proti raku želodca ali druge lastnosti. Iz tega razloga, je ta študija, zato je bila opravljena za oceno citotoksičnosti potencial teh lokalnih užitnih rastlin. Posebnega pomena, rastline S. gratum
, J. gangetica
in L. flava
, so bile izbrane na podlagi epidemioloških podatkov, ki kaže, da so najbolj redno užitne folk zelenjava v severovzhodni regiji.
Mi domnevajo, da bi lahko te rastline imajo v skritih lastnosti, ki jih je bilo mogoče izrabiti za boj proti tej raka, in ta študija naj bi ocenili njihov potencial. Ocenjujemo, surove, ki temelji na fenolnih izvlečke teh rastlin, in izkazati visoko celično Apoptotsko in citotoksične učinke na dveh skupnih in primerjalnih želodcu raka celičnih linij, Kato-III in NUGC-4.
Metod
Rastlinski materiali
Tri lokalne užitne folk rastline; S. gratum
, so J. gangetica
in L. flava
(tabela 1), kupljena od treh različnih lokalnih trgov v provinci Khon Kaen v severovzhodnem delu Tajske je oktobra do decembra 2008. Te rastline so bile izbran na podlagi ethnobotanical informacij [22-26] in epidemioloških podatkov, kot je opisano zgoraj. Pravilna taksonomsko identifikacijo rastlinskih vrst, ki se uporabljajo za te študije je potekala pod okriljem botaniki iz Oddelka za botaniko in farmakologijo, Fakulteta za farmacijo, Khon Kaen University, Thailand.Table 1 Imena treh rastlinskih izvlečkov in drugih raziskovalnih referenc, terapevtsko uporabo v tradicionalno tajsko medicine pregledani v tej študiji
vrst [bon številka]
Družina (Splošno ime angleščina /Thai)
Prijavljene glavne sestavine
Terapevtska uporaba v tajskem tradicionalne medicine

Užitni del
Ref.
Syzygium gratum
(Wight) SN Mitra var. Gratum
[Ch. Laongpol 6], c
Myrtaceae (Eugenia /Phak Mek, Samet chun)
Ni še jasno določen v kemijski strukturi vendar se je izkazalo, da so močni antioksidanti in preprečevanje oksidativno in nitrosative poudarja
zdravljenje dispepsije in prebavne motnje
Listi
22,23
Justicia gangetica
L. [TK-PSKKU-0066] b
Acanthaceae (kitajski vijolična, tropski jeglič /Sprejeto ime: Asystasia gangetica
)
5,11-epoxymegastigmane glukozid (asysgangoside), salidroside, benzil β-d-glukopiranozid, (6S
, 9R
) -roseoside, ajugol, apigenin 7-O
-β-d- glukopiranozid, apigenin 7-o
-neohesperidoside in apigenin 7-o
-β-d-glukopiranosil (1 → 6) -β-d-glukopiranozid
zdravljenje bolečine v trebuhu, želodcu črvi, anti- astma
Listi
24,25
Limnocharis flava
L. Buchenau [Patt. 173] c
Limnocharitaceae (rumena osleza, rumena igle glava /Talabhat reusi)
Ni določeno
pripravite nanje
Stem
26
aVoucher primerkov oddane gozdov herbarij (BKF), Oddelek za National Park, prosto živeče živali in ohranjanje rastlin, Ministrstvo za naravni vir, bthe herbarija fakultete za Pharmaceutical Sciences, Khon Kaen University in cthe princ Songkla University herbarij (PSU), Oddelek za biologijo, Fakulteta za znanost, princa Songkla University, Tajska .
Priprava rastlinskih izvlečkov
Užitne dele posameznega rastlinske sorte (tabela 1) smo splaknili s sterilno destilirano vodo, da odstranimo detritus in sušimo v pečici na vroč zrak pri 50 ° C 7 dni. Ko je posušen, so deli rastlin, nato narežemo na majhne koščke in zmeljemo v fin prah z uporabo malte in pestilo. Vsak razlog prah rastlinski material smo nato potopili z presega etil acetat topila (Sigma-Aldrich Pte-Ltd, Singapore) v steklenici za ekstrakcijo. zmesi etil acetata smo nato inkubirali na stresalniku inkubatorju pri sobni temperaturi 72 ur. Po tem postopku smo supernatante nato prenesli v novo posodo in postopek ekstrakcije z etil acetatom smo ponovili še trikrat, preden združimo supernatante teh trojnih ekstrakciji. Te so bile nato filtriramo skozi Whatman filter papirja št.1 in uparili s rotacijskem uparjalniku. Te ekstraktov vzorca smo nato zaposleni v nadaljnjih poskusih.
Določanje celotnih fenolne spojine
Skupaj fenolnih spojin v rastlinskih ekstraktov smo določili z metodo Folin-Ciocalteu kot ga Sachindra [27] opisano. Na kratko, 0,2 ml vsaka rastlina Ekstrakt raztopimo v 50% DMSO (Santa Cruz biotehnologije Inc., Bangkok, Tajska) je oksidirajo z 1,0 ml 10-krat razredčenega Folin-Ciocalteu reagenta (Sigma-Aldrich Pte-Ltd, Singapur) in nevtralizirali z 0,8 ml raztopine 6% natrijevega karbonata (Sigma-Aldrich Pte-Ltd, Singapur). Po 1 h inkubaciji smo absorbanco raztopine izmeri pri 764 nm in rezultati so bili predstavljeni kot miligrami galna ekvivalenta kisline na gram suhe teže (mg GAE /g). Preizkus je bil izveden v trojniku za vsako koncentracijo vzorca iz 3 ločenih testov.
Določanje antioksidativno delovanje
je Antioksidant aktivnost rastlinskih ekstraktov določili spektrofotometrično z uporabo sistema ABTS po metodi Re in sodelavci [28]. Na kratko, ABTS radikalno kation (ABTS • +) zmes, ki jih povzroča oksidacijo 7 mM ABTS (Sigma-Aldrich Pte-Ltd, Singapur) s 140 mM kalijev persulfat (Sigma-Aldrich Pte-Ltd, Singapur), inkubirana 16 h pri sobni temperaturi v temi. Antioksidant aktivnost določimo z dodajanjem 0,2 ml rastlinskih izvlečkov z 1,8 ml ABTS • + radikalno kationov zmesi. Po inkubiranje zmesi 6 min smo zabeležili absorbanco pri 734 nm. ABTS • + lovljenja prostih radikalov v klanec (%) rastlinski izvlečki so bili izračunani na podlagi naslednjo enačbo: ABTS • + lovljenja prostih radikalov v klanec (%) = [(Abs.control-Abs.test vzorec) /Abs. nadzor] X100. Kjer je Abs.control absorbanco kontrolnega reakcije (brez rastlinski izvleček) in Abs.test vzorec je absorbanca v prisotnosti ekstrakta rastlin. Rezultati so bili nato primerjani z dejavnostjo anti-odstranjevalci Trolox (Sigma-Aldrich Pte-Ltd, Singapur) in zastopali Trolox enakovredno antioksidativno kapaciteto na gram suhe teže (TEAC /g). Preizkus je bil izveden v trojniku za vsako koncentracijo vzorca od 3 ločenih testov.
Celična kultura
dve človeški želodčnega karcinoma celične linije Kato-III (ATCC št HTB-103) iz American Type Culture Collection (ATCC, Rockville, MD, USA) in NUGC-4 (JCRB0834) od Health Science Research virov banke (Japonska Zdravstvene vede Foundation), so bili uporabljeni in vitro
citotoksična testih. Človeški kožico fibroblastni celične linije Hs27 (ATCC No.1634) smo uporabili kot kontrolo. So bili kultivirani v sterilnem RPMI 1640, ki vsebuje 10% (v /v) govejega seruma fetusa (Biochrom AG, Berlin) pri 37 ° C napaja s 5% CO 2 v inkubatorju. Celice smo gojili v standardnih bučk tkivne kulture ter po doseže 80% konfluence smo pasaže z raztopino 0,25% tripsina, EDTA (Sigma-Aldrich Pte-Ltd., Singapur) vsake 3-4 dni do uporabe.
Vitro
citotoksičnost testu
rastlinski izvlečki so ocenili svojo citotoksično proti Kato-III in NUGC-4 celičnih linijah s pomočjo kolorimetričnim testom MTT, ki jih Mosmann [29] prvi je opisan s spremembami, ki jih Denizot in Lang [30] predlagala. Kultivirane celice (1 x 10 4 celic) v popolnih medijih smo v navlaženi zračni atmosferi, obogateni s 5% (v /v) CO 2 za 24 ur tako, da bi celice pritrdite na dno vsakega dobro. So kultivirani Celice smo nato obdelali z testirane surovega ekstrakta (trojne vrtine na stanju) z dodatkom 2 p.L serijskih razredčitev vsakega ekstrakta pri koncentraciji 1,25, 2,5, 5, 10 in 20 ug /ml. Celice so bile nato gojimo kot zgoraj, pred dodatkom 10 ml za 5 mg /ml raztopine 3- (4, 5-dimetiltiazol-2-il) -2, 5-difeniltetrazolijevega bromida (MTT), drugi 72 ur ( Sigma-Aldrich Pte-Ltd, Singapore) v vsako dobro. Inkubacijo nadaljujemo še 4 ure preden smo odstranili medije. Zmes DMSO (150 xl) in glicin (25 xl) dodamo v vsako vdolbino in zmešamo, da se zagotovi celično lizo in raztapljanje formasan kristalov, preden smo izmerili absorbanco pri 540 nm. Tri podvojitve vsakem poskusu smo izvedli in odstotek pretvorbe MTT njegove formazana derivata za vsako dobro (rast odstotka celic) smo izračunali z deljenjem OD pri 540 nm vrtine s kontrolo, ki temelji na naslednji enačbi: rastnega Odstotek celica = [A540 test - A540 nič] x 100 /[nadzora A540 - A540 nič]. Kjer A540 ničelna = A540 raztopine, potem ko je celica inkubirana 24 ur pred dodatkom rastlinskih ekstraktov; Test A540 = A540 raztopine po rastlinskih izvlečkov dodatek; in nadzor A540 = A540 raztopine brez rastlinskih izvlečkov dodatek. Poleg tega je za nestrupeno zagotavljanje rastlinskih izvlečkov proti normalnih celic (fibroblastov celična linija Hs27), dvojnega odmerka (2-krat za IC 50 koncentracije [10 mg /ml]) ekstraktov so bili zaposleni in ocenijo MTT esej. Preizkus je bil izveden v trojniku za vsako koncentracijo vzorca iz 3 ločenih testov.
Polovica maksimalne inhibitorna koncentracija (IC50)
Dobljeni absorbanco pri 540 nm je bila uporabljena za določitev odstotka preživetja celic ob predpostavki, da je 100% preživetje pridobljeni pri zdravljenju s topili samo kontrole, in da ni razlike v aktivnosti metabolizma med preživetja celic pod različnimi pogoji obstajala. Na podlagi teh predpostavk je odstotek preživetja obdelanih celičnih linij raka in normalnih gojenih celic izračuna po naslednji formuli: Odstotek preživetja = (A540 obdelan celic /kontrola A540) x 100. povprečje ± 1 standardni odklon (SD) celic preživetje (%) je bila v odvisnosti od ustrezne koncentracije ekstrakta rastlin in najustreznejša linija je bila uporabljena za izpeljavo ocenjene IC 50 vrednost od koncentracije, ki lahko zagotovijo 50% preživetje celic.
koncentracij rastlinski izvlečki daje 50% inhibitorna koncentracija (IC 50) so bile določene iz treh ločenih eksperimentih. IC 50 vsake rastlinskih ekstraktov smo nato uporabili kot tretirani koncentracijo na 0 in 3 dni pred Kato-III in NUGC-4, ki so bile ocenjene na apoptozo uporabo prenosnega elektronsko mikroskopijo (TEM). Test smo izvedli v treh izvodih za vsako koncentracijo vzorca iz 3 ločenih testov.
Pripravo vzorca za prenos elektronske mikroskopije
Kato-III celic (1x10 6 celic) in NUGC 4 celice (1x10 6 celice), zdravljenih z vsakim ekstrakta rastlin kot tudi negativno kontrolo (neobdelane kultur), smo izvedli ločeno. Na kratko, so splaknemo z raztopino D-Hankovo ​​(Life Technologies, Bangkok, Tajska) dvakrat, in podano v epruvete s plastično strgalo, ki mu sledi s centrifugiranjem pri 2000 obratih na minuto za 15 minut, s supernatant odstranili. Oborino določena v raztopini, ki vsebuje 4% glutaraldehid (elektronska mikroskopija Sciences, Bangkok, Tajska) in 2% paraformaldehida (elektronska mikroskopija Sciences, Bangkok, Tajska) v 0,1 M fosfatni pufer s soljo (PBS), pH 7,4, pri 4 ° C 1 h, nato izperemo z 0,1 M PBS odstraniti fiksir. Osebki so postfixed v 1% osmijevim tetroksidom (elektronska mikroskopija znanosti, Bangkok, Tajska) v istem pufru za 30 minut, in dehidrirani stopenjsko etanola serije za vsakih 10 minut. So bili nato očisti z dvema spremembami propilenoksida in potopljen v zaporednih mešanice propilenoksida in ARALDITE 502 smolo (Sigma-Aldrich Pte-Ltd, Singapur), pri razmerju od 3: 1, 2: 1, 1: 2, in končno vgrajeni v čisti ARALDITE. Področja 1 um so se zmanjšale z uporabo MT-2 Porter-Blum ultramicrotome. Oddelki so se nato pritrdi na bakrenih omrežij, posušimo na zraku in zaporedno v nasprotju z 2% uranil acetat (elektronska mikroskopija znanosti, Bangkok, Tajska), pri 7% alkohola v temi, in nato obdelamo s svincem citrat (elektronska mikroskopija vede, Bangkok, Tajska ). Oni so bili pregledani v okviru Philips CM 100 prenosnim elektronskim mikroskopom, ki deluje na 80 kV.
Statistične analize
Rezultati so izraženi kot sredstvo ± SD ponovitev iz 3 ločenih testih. Primerjava med naborov podatkov je bila izvedena z enosmerno analizo variance (ANOVA), ki ji sledi t-test. Vse statistične analize smo izvedli s pomočjo SPSS19. Razlike so bile sprejete kot statistično značilne pri p <. 0,05
Rezultati
Skupaj vsebina fenolne rastlin izvlečki
tri užitne folk rastline iz severovzhodne regije Tajske (S. gratum
, J. gangetica
in L. flava
) so bili pridobljeni in njihova skupna vsebnost fenolnih določena z rezultati, prikazanimi v tabeli 2. Med temi rastlinskih izvlečkov, je bila najvišja stopnja skupne vsebnosti fenolnih odkritih v S. gratum
na 149.789 ± 0,381 mg GAE /g. Bilo je 10 gube značilno večje v vsebini, kot je bila opredeljena v J. gangetica
in L. flava
(16,513 ± 0,130 in 14,334 ± 0,463 mg GAE /g, p
< 0,05). Tabela 2 Povprečna vsebnost skupnih fenolnih rastlinskih izvlečkov, izražena kot GAE in anti-odstranjevalno delovanje rastlinskih ekstraktov predstavljal kot TEAC
rastlinskih izvlečkov
skupaj plenolics (mg GAE /g suhe teže)

Anti-lovilci dejavnost (mM TEAC /g suhe teže)
S. gratum
(Wight)
149.789 ± 0,381
2,823.521 ± 27,521
J. gangetica L
.
16,513 ± 0.130a
313.141 ± 39.713a
L. flava (L.)
14,334 ± 0.463a
900.845 ± 20.346a, b
Vrednosti so izražene kot sredstvo ± SD ponovitev iz 3 ločenih testih. ap
< 0,05 VS S. gratum
, bp
. < 0,05 VS J. gangetica
Antioksidant zmogljivosti rastlinskih izvlečkov
antioksidanti dejavnosti etilacetat ekstrahiranih S. gratum
, so J. gangetica
in L. flava
so prikazani v tabeli 2. enakovredne vrednosti TEAC za te rastline bistveno razlikuje v padajočem zaporedju od S. gratum
> L. flava
> J. gangetica
(2,823.521 ± 27,521, 900,845 ± 20,346, 313,141 ± 39,713, p
< 0,05). Opazno, okoli 3-9 zloži višjo antioksidativno aktivnost S. gratum
je bilo v primerjavi z drugima dvema izvlečkov vrst. Ti so bili tudi v korelaciji s skupno vsebnostjo fenolov. (Korelacijski koeficient R 2 = 0,935, = 16.64x + 324.5 Y). Inhibicijo rasti
Cell
bili želodcu rakave celične linije Kato-III in NUGC-4 in fibroblastov humana celična linija (nadzor) izpostavljen vsak rastlinski ekstrakt (serijska koncentracija redčenja [1,25, 2,5, 5, 10 in 20 ug /ml]), da se ugotovi učinek aktivnosti rast inhibitorni inducirano iz vsake rastline. Po 72 urah je bilo živih celic merimo s MTT testu. Kato-III in NUGC-4 celice, ki so izpostavljeni S. gratum
in J. gangetica
izvlečki povzročilo znatno zmanjšanje živih celic na način, ki je odvisen od odmerka (slika 1). Pri 20 ug /ml so vsi inducirane preko 50% celične smrti v obeh želodčnih raka celičnih linij. Vendar pa je pri 10 ug /ml izvlečki, proizvedeni iz le S. gratum
in J. gangetica
dokazali pomembno močan citotoksičnost (p
< 0,05), da povzroči več kot 70% smrti celic v Kato-III in NUGC-4, ko ga primerjate z L. flava
(slika 2). Poleg tega ti dve rastlinski izvlečki ni vplivala na normalno kožico fibroblastov humani celični liniji (slika 2). V nasprotju s tem, L. flava
ih učinki zmanjšala. Kar je povzročilo približno 25% celične smrti, brez znatne razlike med želodčne rakavih celic in normalno fibroblastnega celice (slika 2). Slika 1 študije odziva na dozo za rastlinski izvlečki dveh želodčnega raka celičnih linij: (A) Kato-III in (B) NUGC-4. Celice smo obdelali z različnimi koncentracijami (0, 1,25, 2,5, 5, 10 in 20 ug /ml) S. gratum
, J. gangetica
in L. flava
za 72 ur. Antiproliferativnega učinka smo merili z MTT testom. Rezultate smo izrazili kot sredstvo ± SD iz treh neodvisnih eksperimentov.
Slika 2 testom citotoksičnosti proti Kato-III, NUGC-4 in HS-27, potem inkubirali pri 10 ug /ml etilacetata ekstrahiramo S. gratum, J. gangetica in L. flava. Antiproliferativnega učinka smo merili z MTT testom. Rezultate smo izrazili kot sredstvo ± SD iz treh neodvisnih eksperimentov. Rezultati so pokazali tako S. gratum
in J. gangetica
močno zaviral do 70% rast raka želodca celic, medtem ko ne uničuje normalnih fibroblastov celice Hs 27 (pomembna razlika [* p
< 0,05]). Ta v nasprotju z učinkom L. flava
, ki je pokazala na zmanjšano količino celične rasti, ne samo v želodcu rakavih celic, ampak tudi na normalnih fibroblastne celice, kot tudi.
IC 50 (g /ml ) so povzete v sliki 3. gangetica
ekstrakt J. imela najnižjo IC 50 vrednosti od 5,45 g /ml in 5,86 g /ml za Kato-III in NUGC-4 oz. Podobno je S. gratum
ekstrakt pokazala višjo citotoksičnost prog za rakavih celic z IC 50 vrednosti na 7.24 ug /ml - 11,96 mg /ml območje, medtem ko je najvišja IC 50 je iz L . flava
ekstrakt 17.20 ug /ml in 14.64 ug /ml za Kato-III in NUGC-4 oz. To je precej drugačna (p
< 0,05), v primerjavi z drugima dvema rastlinskih izvlečkov (slika 3). Slika 3 Primerjalna citotoksičnost IC 50 S. gratum, J. gangetica in L. flava na Kato-III, NUGC-4 in Hs27 s MTT testom. Rezultate smo izrazili kot sredstvo ± SD iz treh neodvisnih poskusov (* p
< 0,05) in v primerjavi s Hs27-obdelanih celic. J. gangetica
pokazala najnižjo IC50, medtem ko je najvišja je bila od L. flava
pomembne razlike (p < 0,05). Med S. gratum
in L. flava
so bile med obema raka celice opazili linije.
ultrastruktura spremembe Kato-III in NUGC-4 celične linije, ki jih S. gratum, J. gangetica
in L. flava
inducirane da bi ugotovili, ali zaviranje rasti, ki ga rastlinskih izvlečkov so bile povezane z apoptozo, smo podrobneje proučiti morfoloških sprememb Kato-III in NUGC-4 želodčnega raka celičnih linijah iz prenosnega elektronskim mikroskopom. Kontrolne celice jedrski objekti pojavil nepoškodovano (slika 4A: Kato-III, E: NUGC-4), medtem ko so celice, zdravljenih s tistimi iz rastlinskih izvlečkov dokazali ultrastrukturni spremembe na več načinov (sliki 4B-4D: Kato-III, in 4 F-4H: NUGC-4 oz). Natančneje, celice Kato-III obdelan z S. gratum
vidna strnjeno jedro z kromatina kondenzacije, apoptoze oblikovanja telesa (slika 4B), in razpršitvijo zrnat naplavin. Medtem ko je za celice Kato-III obdelan J. gangetica
, te prikazano kromatin kondenzacijo, membransko vezanih apoptotične telesa in številne mehurčkov (slika 4c). Ker so morfološke spremembe najdemo v L. flava
obdelanih celic Kato-III, prikaže skrčen jedro z kromatina kondenzacijo in številnih heterogenih mešičkov, vključno z obširnimi značilnosti znotrajcelične vacuolization (slika 4D). Slika 4 elektroni posnetki primerjali učinke S. gratum, J. gangetica in L. flava na Kato-III (A-D) in NUGC-4 (E-H), 3 dni po zdravljenju. Lestvica bar 2 um. A) Neobdelana Kato-III celica kaže zelo malo mehurčkov (v), precej enakomerno zaobljene oblike in kromatin razpršene po vsej jedra (N). B) S. gratum
zdraviti Kato-III celico prikazuje zgoščen kromatin v jedra (N), apoptotske telo tvorba (glave puščice) in veliko mehurčkov. Celica je disperzijska kot zrnat naplavin (*). C) Kato-III celica obdelamo z J. gangetica
. Ta celica prikazuje kromatin kondenzacije okoli obodu jedra, membranski vezan organele (puščice) in številne votlinic (v). D) Kato-III celica po izpostavitvi L. flava
prikazuje številne autophagic votlinic (v) in krčenje jedro (N) z kondenziranega kromatina. E) Neobdelana NUGC-4 celic ne kaže kondenzacija kromatina v jedra (N) in precej enotna zaobljene oblike. F) NUGC-4 celic zdravijo z S. gratum
kaže kromatin kondenzacijsko jedro, številne mehurčke (v) in veliko membrano vezan organele (puščica). G) NUGC-4 celica po izpostavitvi J. gangetica
kaže jedra kondenzirali kromatin, membransko vezan organelle (puščica) in mehurčki (v). H) Morfološke spremembe opazili v L. flava
obdelane NUGC-4 celice so bili sestavljeni z kromatina kondenzacije v jedru (N), in številnih heterogenih mešičkov različnih velikosti (v).
S. gratum
obdelan NUGC-4 celične linije razstavljal apoptozo s stiskanjem jedro in proizvodnjo membranskih vezan apoptotskih organov in številnih mehurčkov (slika 4f). Vendar pa je v primerjavi celice NUGC-4, zdravljenih z J. gangetica
, pridelana na začetku apoptoze z kromatina kondenzacijo in številnih mehurčkov (slika 4G). Medtem ko so celice, ki se zdravijo z L. flava
dokazale periferno kromatin kondenzacijsko jedro s številnimi heterogenih mehurčki in blebbing (Slika 4 ure).
Pogovor
naključne pripomb pokazale, da rastline lahko tradicionalna zelišča in čaji treba izkoristiti za morebitno zmago boja v boj proti raku; svetovni zdravstveni problem. Vendar pa ni, dokler se ti fitokemikalije testirali in vitro
in vivo
, da smo lahko prepričani, kako daleč lahko gredo v skladu s to boleznijo pod nadzorom [31-34]. Pri raku Tajskem želodca je nadloga, vendar pa so nenavadno nižje želodčni rak pojavnost v severovzhodnem delu Tajske je precejšnje zanimanje. Dejstvo, da je S. gratum
, J. gangetica
in L. flava
so avtohtone na območju in so pomemben del vsakdanjega prehransko dopolnilo v lokalni skupnosti, zato smo se odločili, da razišče, ali ti folk rastline so potencialni kandidati za varen in zanesljiv nadzor nad rakom želodca. Čeprav obstaja veliko poročil, naj pojasni svoje antioksidantov dejavnosti, ta študija zagotavlja prvi dokaz o svojih močnih citotoksičnih učinkov in apoptoze indukcijo, ki temeljijo na ultrastrutural značilno za rakom želodca.
Te rastline so se najprej ekstrahirali z etil acetatom in nato analizirajo za njihovih fenolnih vsebina, ki uporabljajo metodo Folin-Ciocalteu.

• Xpert MTB /RIF test se lahko uporablja na arhiviranih želodca aspiracija in povzroča vzorce izpljunka za občutljivo diagnozo pediatrične tuberkuloze
• predstavitev v sili z rakom želodca; prognoza in posledice za načrtovanje storitev