Antioksidantaktivitet og ultra endringer i mage kreft cellelinjer indusert ved Northeastern Thai spiselig folk planteekstrakter

Antioksidantaktivitet og ultra endringer i mage kreft cellelinjer indusert ved Northeastern Thai spiselig folk planteekstrakter
Abstract
Bakgrunn
phytochemical produktene har en avgjørende rolle i drug discovery prosessen. Dette lovende mulighet, men nødvendiggjør behovet for å bekrefte deres vitenskapelige verifisering før bruk. Derfor skal denne studien å evaluere (1) antioksidantaktivitet, (2) cytotoksisitet potensial, og (3) effekten på ultra endring i mage kreft cellelinjer gjennom eksponering for brøkdeler av tre lokale Nordøst thailandske spiselige planter.
Metoder
Planter, syzygium gratum, Justicia gangetica Kjøpe og Limnocharis flava
ble ekstrahert med etylacetat, og hver råolje ekstrakt analysert for deres totale fenolene innhold ved Folin-Ciocalteu metode. Deres antioksidant aktivitet ble vurdert ved hjelp av ABTS system. Ekstraktene ble deretter analysert med hensyn på cytotoksisitet mot to mage cancer cellelinjer Kato-III og NUGC-4, og sammenlignet med Hs27 fibroblaster som en kontroll ved anvendelse av MTT-analysen. Den cellelevedyktighet (%), ble IC 50-verdier, samt den ultra endringer evaluert etter behandling med enveis variansanalyse (ANOVA).
Resultater
Den totale fenoliske Verdiene av Etylacetatekstraktene var godt korrelert med antioksidantkapasitet, med hentet produkt av S. gratum
viser det høyeste nivået av antioksidanter (10 ganger høyere respons) over J. gangetica Hotell og L. flava
hhv. Eksponering av S. gratum Hotell og J. gangetica
trekker til normale cellelinjer (Hs27) resulterte i marginale cytotoksiske effekter. Men gjennom en doseavhengig analyse S. gratum Hotell og J. gangetica
ekstrakter produsert cytotoxicological virkninger i overkant av 75 prosent av Kato-III og NUGC-4 cellelinjer. I tillegg ble apoptotisk karakteristikk fremkommer under TEM i begge kreftcellelinjer med de to ekstrakter, mens egenskapene av autophagy ble funnet i cellelinjer etter at innlegget eksponering til ekstrakter fra L. flava
. Konklusjoner
Fra disse tre planter, S. gratum
hadde de høyeste innholdet av fenoliske forbindelser og antioksidantkapasitet. Alle av dem funnet å inneholde forbindelse (r) med cytotoksisitet in vitro
på kreftcellene, men ikke på normale cellelinjer som er løst i vevskultur og ultra analyse. Dette er den første rapporten for å vise effekten på celle endring som apoptose av en etylacetat ekstrakt av S. gratum Hotell og J. gangetica.
Videre studier er nå fokusert på individuelle isolater og deres funksjon, prioritering på S. gratum Hotell og J. gangetica
for utvikling av nye behandlingsformer og stridende mot kreft.
nøkkelord
Magekreft kreft~~POS=HEADCOMP ultrastructure Cell cytotoksisitet TEM Bakgrunn
Magekreft kreft~~POS=HEADCOMP er den fjerde mest diagnostisert kreft og nest største årsaken til kreftrelatert død i verden [1]. Det ble anslått at det var rundt 1 million nye magekrefttilfeller registrert i 2008, men av dem, ble de fleste (713900) rapporterte i utviklingsland, med høyeste forekomst av magekreft funnet i Øst-Asia, over Sentral- og Øst-Europa, og sør-Amerika [1]. Til tross for den tilsynelatende intensivering av sykdommen, tyder bevis for at overordnede mage kreft priser er trosse en trend, med en nedgang i rapporter om magekreft som finnes i de fleste deler av den vestlige verden [2].
Dessverre mest magekreftpasienter er ofte diagnostisert på et avansert stadium når en kur er ikke mulig og behandling er palliativ med den hensikt å forbedre kvaliteten og kvantiteten på livet. Selv om det finnes retningslinjer for behandling for magekreft, er det fem-års overlevelse mindre enn 50% [3, 4]; en hastighet som er åpenbart ikke oppmuntre til enten onkologer eller kreftpasienter. I tillegg bivirkninger fra nåværende behandlinger dvs. kirurgi, cellegift og stråling er ikke tilfredsstillende. Så, er målrettet terapi for å redusere bivirkninger, og forbedre de kliniske resultatene av pasienter. Derfor er forskerne i denne nye årtusenet med å betale mye mer oppmerksomhet til utviklingen av ikke bare nye terapeutiske retningslinjer, og tidlig forebyggende strategier for magekreft [5, 6], men også på å finne nye og målrette bestemte terapeutiske midler i tillegg.
i løpet av de siste to tiårene, har phytochemical produkter spilt en dominerende rolle i oppdagelsen av nye legemidler for å målrette kreft [7], med over 60% av tiden brukes kreftlegemidler er avledet fra naturlige kilder [8]. Eksempler på verdensbasis klinisk nyttige antitumormidler avledet fra ville planter inkluderer taxol, vinblastin, vinkristin, camptothecinderivater, topotekan (en hvete gress), sjø-buckthorn, Lingzhi, irinotecan, og etoposid, som er avledet fra epipodofyllotoksin [9, 10]. Andre er avledet fra frukt og grønnsaker; ikke begrenset til å omfatte curcumin (gurkemeie), genistein (soyabønner), katekiner (grønn te) [7], men også urter som vinkaalkaloider, podophyllotoxin, berberine, sitroner gress oljer, flavonoider og camptothecin; en annen gruppe av lovende antikreftmiddel [11]. Selv om disse anti-kreft agenter har vært ansatt for målrettede mekanismebaserte trasé, er deres effektiv manipulering av ytre og indre apoptose trasé fortsatt blir utforsket [12-14]. Paclitaxel isolere fra barken av Stillehavet barlind, er stillehavsbarlind
en phytochemical som viser løftet. Det er et legemiddel er godkjent av FDA for å bli brukt til å behandle AIDS-relatert Kaposis sarkom, brystkreft, ikke-småcellet lungekreft og eggstokk-kreft. Dens primære cellulære virkning er å bevirke unormal stabilisering av den dynamiske microtubule polymeriseringen, som fører til svikt av celledeling som resulterer i apoptose [15-17]. Imidlertid er paclitaxel også studert som en alternativ behandling for andre typer kreft, inkludert magekreft. Det er for tiden i kliniske studier fase III [18, 19]. Uavhengig av om de er godkjent eller ikke, den brede nå støtte og videreføring av studier av planteekstrakter med implikasjoner i magekreft behandling er tegn på den fortsatte rolle som naturlige produkter spille i stoffet funnet prosessen.
Når du vurderer en epidemiologi studie av nydiagnostiserte mage krefttilfeller i Thailand, har mye lavere forekomst blitt observert i det nordøstlige regionen [20]. Skjønt, utbredelsen av Helicobacter pylori
infeksjoner, er ikke forskjellig på tvers av den nordlige regionen i Thailand, ingen geografisk faktor (for eksempel platå, fjellområde eller jungel terreng) var forskjellig enten [21]. Derfor må det være noe annet sentralt til befolkningen i det nordøstlige regionen som reduserer den samlede forekomst av magekreft. Å ha alt, men utelukket genetikk og miljøfaktorer, har det vært antydet at spiselige folke planter dietter som vanligvis forbrukes i denne regionen, kan holde svaret på dette avviket. Denne nye data, og dette lovende bly i stor grad utfordrer oss til å utforske det mystiske fenomenet, er at om de phytochemical forbindelser innen Nordøst thailandske spiselige folke planter har chemopreventive eller cytotoksiske potensial til å bekjempe magekreft, eller andre egenskaper. Av den grunn, denne studien ble derfor gjennomført for å evaluere cytotoksisiteten potensialet av disse lokale spiselige planter. Av spesiell interesse, planter S. gratum
, J. gangetica Hotell og L. flava
, ble valgt ut basert på epidemiologiske data som tyder på at de er de mest regelmessig spiselige folke grønnsaker i det nordøstlige regionen.
Vi postulere at disse plantene kunne holde innenfor skjulte egenskaper som kan utnyttes til å bekjempe denne kreft, og denne studien søker å vurdere deres potensial. Vi vurderer de grove fenoliske baserte ekstrakter av disse plantene, og demonstrere høy mobil apoptotiske og cytotoksiske effekter i to vanlige, og komparative mage kreft cellelinjer, Kato-III og NUGC-4.
Metoder
plantematerialer
Tre lokale spiselige folke planter; S. gratum
, ble J. gangetica Hotell og L. flava plakater (tabell 1) kjøpes fra tre ulike lokale markeder i Khon Kaen i den nordøstlige delen av Thailand i løpet av oktober til desember 2008. Disse plantene var velges i samsvar med Ethnobotanical Informasjon [22-26] og epidemiologiske data som beskrevet ovenfor. Riktig taksonomisk identifisering av plantearter som brukes til denne studien ble overvåket av botanikere fra Botanisk institutt og farmakologi, Avdeling for farmasi, Khon Kaen University, Thailand.Table 1 Navnene på tre planteekstrakter og andre forsknings referanser, terapeutisk bruk i tradisjonell thailandsk medisin skjermet i denne studien
Arter [Voucher nummer]
Familie (Fellesnavn navn~~POS=HEADCOMP engelsk /thai)
Rapporterte viktigste bestanddelene
Terapeutisk bruk i Thai tradisjonell medisin

Spiselig del
Ref.
syzygium gratum product: (Wight) SN Mitra var. Gratum product: [Ch. Laongpol 6] a, c
Myrtaceae (Eugenia /Phak Mek, Samet chun)
Foreløpig ikke klart fastsatt i kjemisk struktur, men viste seg å være sterk på antioksidanter og forebygging av oksidative og nitrosative påkjenninger
Behandling av dyspepsi og fordøyelsesbesvær
Leaves
22,23
Justicia gangetica
L. [TK-PSKKU-0066] b
akantusfamilien (kinesisk fiolett, tropisk primrose /Godkjent navn: Asystasia gangetica
)
5,11-epoxymegastigmane glukosid (asysgangoside), Salidroside, benzyl β-D-glukopyranosid, (6S
, 9R
) -roseoside, ajugol, apigenin 7-O
-β-d- glukopyranosid, apigenin 7-O
-neohesperidoside, og apigenin 7-O
-β-D-glukopyranosyl (1 → 6) -β-D-glukopyranosid
Behandling av magesmerter, mageormer, anti- astma
Later
24,25
Limnocharis flava
L. Buchenau [Patt. 173] c
limnocharitaceae (gul velvetleaf, gul Burr hode /Talabhat reusi)
bestemt
Forrett
Stem
26
aVoucher prøver deponert på Forest Herbarium (BKF), Institutt for National Park, Wildlife and Plant Conservation, Ministry of Natural Resource, bthe Herbarium ved fakultet for Pharmaceutical Sciences, Khon Kaen University og ¨ cthe Prince of Songkla Universitetet herbarium (PSU), Institutt for biologi, fakultet for naturvitenskap, Prince of Songkla University, Thailand .
Fremstilling av plante-ekstrakter
spiselige deler av hver enkelt plantesort (tabell 1) ble skylt med sterilt destillert vann for å fjerne avfallsproduktene og tørket i varm luft ovn ved 50 ° C i 7 dager. Når tørket, ble plantedeler så skåret i små stykker og males til et fint pulver ved bruk av en morter og pistill. Hver malte pulveret plantemateriale ble deretter neddykket med overskudd av etylacetat oppløsningsmiddel (Sigma-Aldrich Pte-Ltd, Singapore) i et utvinnings flaske. Etylacetatekstraktene ble så inkubert på en risteinkubator ved romtemperatur i 72 timer. Ved å følge denne fremgangsmåten, ble supernatantene deretter overført til en ny beholder, og uttrekkingsprosessen med etylacetat ble gjentatt tre ganger til, før supernatantene av disse triplikate ekstraksjonene ble kombinert. Disse ble deretter filtrert gjennom Whatman filterpapir nr 1, og inndampes ved rotasjonsfordamper. Disse prøve ekstrakter ble så anvendt i ytterligere forsøk.
Bestemmelse av fenolforbindelse
Samlede fenoliske forbindelser i planteekstrakter ble bestemt ved Folin-Ciocalteu-metoden som beskrevet av Sachindra [27]. I korte trekk, 0,2 ml hver plante ekstrakt oppløst i 50% DMSO (Santa Cruz Bioteknologi Inc., Bangkok, Thailand) ble oksidert med 1,0 ml 10-fold-utvannet Folin-Ciocalteu reagens (Sigma-Aldrich Pte-Ltd, Singapore) og nøytralisert med 0,8 ml av 6% natrium-karbonat-oppløsning (Sigma-Aldrich Pte Ltd-, Singapore). Etter 1 time inkubering ble absorbansen av oppløsningen målt ved 764 nm, og resultatene ble fremstilt som milligram gallussyre ekvivalent per gram tørrvekt (mg GAE /g). Analysen ble utført i triplikat for hver prøve konsentrasjon fra 3 adskilte tester.
Bestemmelse av antioksidantaktiviteten
antioksidantaktiviteten av de plante-ekstrakter ble bestemt spektrofotometrisk ved bruk av ABTS-system i henhold til fremgangsmåten til Re og medarbeidere [28]. I korthet ABTS radikal-kationet (ABTS • +) blanding ble dannet ved oksydasjon av 7 mM ABTS (Sigma-Aldrich Pte-Ltd, Singapore) med 140 mM kaliumpersulfat (Sigma-Aldrich Pte-Ltd, Singapore), inkubert i 16 timer ved romtemperatur i mørket. Antioksidantaktiviteten ble bestemt ved å tilsette 0,2 ml av plante-ekstrakter med 1,8 ml ABTS • + radikal-kation blanding. Etter inkubering av blandingen i 6 min, ble absorbansen ved 734 nm registrert. ABTS • + radikaler, dvs evne (%) av planteekstrakter ble beregnet på grunnlag av følgende ligning: ABTS • + radikaler, dvs evne (%) = [(Abs.control-Abs.test prøve) /Abs. kontroll] x100. Hvor Abs.control er absorbansen kontrollreaksjons (uten plante-ekstrakt) og Abs.test prøven er absorbans i nærvær av en planteekstrakt. Resultatene ble deretter sammenlignet med anti-inaktiverende aktivitet av Trolox (Sigma-Aldrich Pte Ltd-, Singapore) og representert som Trolox tilsvarende antioksidant kapasitet per gram tørrvekt (TEAC /g). Analysen ble utført i triplikat for hver prøve konsentrasjon fra 3 adskilte tester.
Cellekultur
To humane magekreft cellelinjer Kato-III (ATCC nr HTB-103) fra American Type Culture Collection (ATCC, Rockville, MD, USA) og NUGC-4 (JCRB0834) fra Helse Science Research Resources Bank (Japan helsefag Foundation) ble brukt for in vitro
cytotoksiske analyser. Den humane foreskin fibroblast-cellelinje Hs27 (ATCC No.1634) ble anvendt som en kontroll. De ble dyrket i sterilt RPMI 1640 inneholdende 10% (v /v) føtalt bovint serum (Biochrom AG, Berlin) ved 37 ° C som følger med 5% CO 2 i en inkubator. Celler ble dyrket i standard vevskulturflasker og ved å nå 80% konfluens ble passert med en oppløsning av 0,25% trypsin-EDTA (Sigma-Aldrich Pte Ltd-, Singapore) hver 3-4 dager inntil bruk.
In vitro
cytotoksisitet analyse
Plante ekstrakter ble vurdert sin cytotoksisk aktivitet mot Kato-III og NUGC-4 cellelinjer via MTT kolo analysen som først beskrevet av Mosmann [29] med modifikasjoner foreslått av Denizot og Lang [30]. Dyrkede celler (1 x 10 4 celler) i komplett medium ble overført til hver brønn av en flat plate med 96 brønner og deretter inkubert ved 37 ° C i en fuktet luftatmosfære anriket med 5% (v /v) CO 2 i 24 timer for å la cellene feste til bunnen av hver brønn. De dyrkede celler ble deretter behandlet med den testede råekstrakt (triplikate brønner pr tilstand) ved tilsetning av 2 pl av seriefortynninger av hver ekstrakt ved en konsentrasjon på 1,25, 2,5, 5, 10 og 20 ug /ml. Cellene ble deretter dyrket som ovenfor i en annen 72 t før tilsetning av 10 pl av en 5 mg /ml oppløsning av 3- (4, 5-dimetyltiazol-2-yl) -2, 5-difenyltetrazoliumbromid (MTT) ( Sigma-Aldrich Pte-Ltd, Singapore) i hver brønn. Inkubasjonen ble fortsatt i ytterligere 4 timer før mediet ble fjernet. En blanding av DMSO (150 ul) og glycin (25 ul) ble tilsatt til hver brønn og blandet for å sikre cellelyse og oppløsning av de formasan krystaller, før absorbansen ved 540 nm ble målt. Tre gjennomkjøringer av hvert forsøk ble utført, og prosentandelen av MTT omdannelse til dens formazan deriverte for hver brønn (prosent cellevekst) ble beregnet ved å dividere OD ved 540 nm av brønnene med kontroll basert på den følgende ligning: Prosent cellevekst = [A540 test - A540 null] × 100 /[A540 kontroll - A540 null]. Hvor A540 A540 = null av oppløsningen etter at cellen ble inkubert i 24 timer før tilsetning av planteekstrakter; A540 test = A540 løsning etter planteekstrakter tillegg; og A540 kontroll = A540 løsning uten planteekstrakter tillegg. I tillegg til ikke-toksiske sikringen av plante-ekstrakter mot normale celler (fibroblast cellelinje Hs27), en dobbelt dose (2 ganger IC 50 konsentrasjoner [10 ug /ml]) av ekstraktene ble anvendt og bedømmes med MTT analyse. Analysen ble utført i triplikat for hver prøve konsentrasjon fra 3 adskilte tester.
Halv maksimal hemmende konsentrasjon (IC50)
erholdt absorbansen ved 540 nm ble anvendt for å bestemme prosentdelen av celleoverlevelse forutsatt at 100% overlevelse ble oppnådd ved behandling med oppløsningsmidler bare som kontroller, og det ingen forskjeller i metabolsk aktivitet eksisterte mellom overlevende celler under forskjellige betingelser. Under disse forutsetningene, ble den prosentvise overlevelse av de behandlede kreftcellelinjer og normale dyrkede celler beregnes i henhold til følgende formel: Prosentvis overlevelse = (A540 behandlede celler /A540-kontroll) x 100. Den gjennomsnitt ± 1 standard avvik (SD) celle overlevelse (%) ble plottet mot den tilsvarende anlegg ekstrakt konsentrasjon og den best tilpassede linjen ble brukt for å utlede den beregnede IC 50 verdi fra den konsentrasjon som kunne gi 50% av celleoverlevelse.
konsentrasjonene av plante-ekstrakter gi 50% hemmende konsentrasjon (IC 50) ble bestemt ut fra tre separate eksperimenter. IC 50 av hver plante-ekstrakter ble deretter anvendt som det behandlede konsentrasjon på 0 og 3 dager mot Kato-III og NUGC-4, som ble vurdert for apoptose ved anvendelse av en transmisjons-elektronmikroskopi (TEM). Analysen ble utført i tre eksemplarer for hver prøve konsentrasjon fra 3 adskilte analyser.
Prøveopparbeidelse for transmisjonselektronmikroskopi
Kato-III celler (1x10 6 celler) og NUGC-4 celler (1x10 6 -celler) ble behandlet med hver plante-ekstrakt, så vel som den negative kontroll (ubehandlede kulturer) ble utført hver for seg. Kort sagt ble de skyllet med D-Hanks oppløsning (Life Technologies, Bangkok) to ganger, og levert til sentrifugerør med en plastskrape, etterfulgt av sentrifugering ved 2000 rpm i 15 min, med supernatanten fjernet. Bunnfallet ble løst i en oppløsning inneholdende 4% glutaraldehyd (elektronmikroskopi Sciences, Bangkok) og 2% paraformaldehyd (elektronmikroskopi Sciences, Bangkok) i 0,1 M fosfatbuffer saltvann (PBS), pH 7,4, ved 4 ° C i 1 time, deretter vasket med 0,1 M PBS for å fjerne bindemiddel. Prøver som ble postfiksert i 1% osmiumtetroksyd (elektronmikroskopi Sciences, Bangkok) i den samme buffer i 30 min, og dehydratisert i en gradert etanolserie i 10 minutter hver. De ble deretter fjernet med to forandringer av propylenoksyd og nedsenket i sekvensielle blandinger av propylenoksyd og Araldite 502-harpiks (Sigma-Aldrich Pte-Ltd, Singapore), i forhold på 3: 1, 2: 1, 1: 2, og endelig innebygd i ren Araldite. Deler av en mikrometer ble kuttet ved hjelp av en MT-2 Porter-Blum ultramicrotome. Seksjonene ble deretter montert på kobbernett, lufttørket og kontrastert sekvensielt med 2% uranyl acetat (elektronmikroskopi Sciences, Bangkok, Thailand) i 7% alkohol i mørket, og deretter behandlet med bly citrate (elektronmikroskopi Sciences, Bangkok, Thailand ). De ble undersøkt under et Philips CM 100 transmisjons-elektronmikroskop som opererer ved 80 kV.
Statistisk analyse
Resultatene ble uttrykt som middelverdier ± SD replikater fra 3 adskilte analyser. Sammenligning mellom datasettene ble utført ved anvendelse av en enveis variansanalyse (ANOVA), fulgt av Student t-test. Alle statistiske analyser ble utført ved hjelp av SPSS19. Forskjeller ble akseptert som statistisk signifikant på p. ≪ 0,05
Resultater
Totalt fenoliske innholdet i planter ekstrakter
Tre spiselige folke planter fra nordøstlige regionen av Thailand (S. gratum
, J. gangetica
og L. flava
) ble hentet ut og deres totale fenoliske innhold bestemmes med resultatene vist i tabell 2. Blant disse planteekstrakter, det høyeste nivået av total fenoliske innholdet ble påvist i S. gratum
på 149.789 ± 0,381 mg GAE /g. Det var 10 folder betydelig større i innhold enn det som ble identifisert i J. gangetica Hotell og L. flava plakater (16,513 ± 0,130 og 14,334 ± 0,463 mg GAE /g, henholdsvis p
< 0,05). Tabell 2 Gjennomsnittlig total fenoliske innhold av planteekstrakter uttrykt som GAE og anti-scavenging aktivitet av planteekstrakter representert som TEAC
Plante ekstrakter
totalt plenolics (mg GAE /g tørrvekt)

Anti-scavenging aktivitet (mM TEAC /g tørrvekt)
S. gratum product: (Wight)
149,789 ± 0,381
2,823.521 ± 27,521
J. gangetica L
.
16,513 ± 0.130a
313,141 ± 39.713a
L. flava (L.)
14,334 ± 0.463a
900,845 ± 20.346a, b
Verdier ble uttrykt som betyr ± SD replikater fra 3 adskilte analyser. ap
< 0,05 VS S. gratum
, bp
. < 0,05 VS J. gangetica
Antioksidant kapasitet på planteekstrakter
Antioksidantaktiviteten etylacetat utvunnet av S. gratum
, J. gangetica Hotell og L. flava
er vist i Tabell 2. TEAC tilsvarende verdier for disse plantene var signifikant forskjellig i synkende rekkefølge fra S. gratum
> L. flava
> J. gangetica product: (2,823.521 ± 27,521, 900,845 ± 20,346, 313,141 ± 39,713, henholdsvis p
< 0,05). Merkbart, rundt 3-9 folder høyere antioksidantaktivitet S. gratum
ble funnet sammenlignet med de to andre arter ekstrakter. Disse ble korrelert godt med totale fenoliske innhold. (Korrelasjonskoeffisient på R 2 = 0,935, Y = 16.64x + 324,5).
Cell veksthemming
magekreft cellelinjer Kato-III og NUGC-4 og den menneskelige fibroblast cellelinje (kontroll) var eksponert for hver plante-ekstrakt (seriefortynning konsentrasjon [1,25, 2,5, 5, 10 og 20 pg /ml]), for å bestemme den veksthemmende aktivitet indusert virkning fra hver plante. Etter 72 timer ble levedyktige celler målt ved hjelp av MTT-analyse. Kato-III og NUGC-4-celler eksponert til S. gratum
og J. gangetica
ekstraktene resulterte i en signifikant reduksjon i levedyktige celler på en doseavhengig måte (figur 1). Ved 20 ug /mL de alle induserte mer enn 50% celledød i både magekreftcellelinjer. Imidlertid, ved 10 ug /ml ekstraktene fremstilt fra bare S. gratum
og J. gangetica
vist stort potent cytotoksisitet (p
< 0,05) for å indusere over 70% celledød i Kato-III og NUGC-4 når sammenligne med L. flava plakater (figur 2). I tillegg er disse to planteekstrakter viste ingen effekt på normale humane forhud fibroblast cellelinje (figur 2). I kontrast, L. flava
's effekter redusert. Resulterer i omkring 25% av celledød, med ingen signifikant forskjell mellom magekreftceller og normale fibroblast celle (figur 2). Figur 1 Dose responsstudier av plante-ekstrakter på to mage cancer cellelinjer: (A) Kato-III og (B) NUGC-4. Cellene ble behandlet med forskjellige konsentrasjoner (0, 1,25, 2,5, 5, 10 og 20 ug /ml) av S. gratum
, J. gangetica
og L. flava
i 72 timer. Den antiproliferative effekt ble målt ved MTT-analyse. Resultatene ble uttrykt som gjennomsnitt ± SD fra tre uavhengige eksperimenter.
Figur 2 Cytotoksisitet test mot Kato-III, NUGC-4 og HS-27 etter inkubert med 10 ug /ml eddiksyreetylester ekstraheres fra S. gratum, J. gangetica og L. flava. Den antiproliferative effekt ble målt ved MTT-analyse. Resultatene ble uttrykt som gjennomsnitt ± SD fra tre uavhengige eksperimenter. Resultatene viste både S. gratum
og J. gangetica
sterkt hemmet opp til 70% magekreft cellevekst, mens ikke-destruktiv normale fibroblastceller Hs 27 (signifikant forskjell [* p
< 0,05]). Dette i kontrast til virkningen av L. flava
, som viste en redusert mengde av cellevekst, ikke bare i magekreftcellene, men også på normale fibroblastceller i tillegg.
IC 50 (ug /ml ) verdier er oppsummert i figur 3. J. gangetica
ekstrakt hadde den laveste IC 50 verdier på 5,45 mg /ml og 5,86 pg /ml for henholdsvis Kato-III og NUGC-4,. Tilsvarende S. gratum
ekstrakt viste høyere cytotoksisitet til kreftcellelinjer med IC 50 verdiene i 7,24 mg /ml - 11,96 mg /ml utvalg, mens den høyeste IC 50 var fra L . flava
pakke 17,20 mg /ml og 14,64 mg /ml for Kato-III og NUGC-fire kroner. Dette var signifikant forskjellige (p
< 0,05) sammenlignet med de to andre plante-ekstrakter (figur 3). Figur 3 Sammen cytotoksisitet av IC 50 av S. gratum, J. gangetica og L. flava på Kato-III, NUGC-4 og Hs27 av MTT-analyse. Resultatene ble uttrykt som gjennomsnitt ± SD fra tre uavhengige eksperimenter (* p
< 0,05) og sammenlignet med Hs27-behandlede celler. J. gangetica
viste den laveste IC50, mens det høyeste var fra L. flava
signifikante forskjeller (p < 0,05). Mellom S. gratum Hotell og L. flava
ble observert mellom begge kreftcelle linjer.
ultrastructure endringer av Kato-III og NUGC-4 cellelinjer indusert av S. gratum, J. gangetica Hotell og L. flava
for å avgjøre om veksthemming av planteekstrakter var assosiert med apoptose, vi videre undersøkt de morfologiske forandringer Kato-III og NUGC-4 mage kreft cellelinjer i henhold til transmisjonselektronmikroskop. Kontrollcellene atomstrukturer først på intakte (Figur 4A: Kato-III, E: NUGC-4), mens cellene som ble behandlet med de av planteekstrakter viste ultra endringer på flere måter (figurene 4B-4D: Kato-III, og 4 F-4H: NUGC-4, henholdsvis). I detalj, Kato-III celler behandlet med S. gratum
vises en kondensert kjerne med kromatin kondens, apoptotisk kroppen formasjon (figur 4B), og spre kornet rusk. Mens for Kato-III celler behandlet J. gangetica
, disse vises kromatin kondens, membranbundne apoptotiske legemer og mange vesikler (Figur 4C). Mens de morfologiske endringene som finnes i L. flava
behandlet Kato-III celler, vises krympet kjerne med kromatin kondens og en rekke heterogene vesikler, inkludert omfattende funksjoner av intracellulær vacuolization (figur 4D). Figur 4 elektronmikroskopibilder som sammenligner virkningene av S. gratum, J. gangetica og L. flava på Kato-III (A-D) og NUGC-4 (E-H) 3 dager etter behandling. Scale bar 2 mikrometer. A) Ubehandlet Kato-III-celle viser svært få blærer (v), en temmelig jevn avrundet form og kromatin spredt over nucleus (N). B) S. gratum
behandlet Kato-III celle viser kondensert kromatin i nucleus (N), apoptotisk kroppen formasjon (pilspiss) og mange blemmer. Cellen er dispergerende som granulært rusk (*). C) Kato-III celle behandlet med J. gangetica
. Denne cellen viser kromatin kondensering rundt omkretsen av kjernen, membranbundne organeller (pil) og mange vakuoler (v). D) Kato-III-celle etter eksponering for L. flava
viser et stort antall autophagic vakuoler (v), og en krympende kjerne (N) med kondensert kromatin. E) Ubehandlet NUGC-4 celle viser ingen kondensering av kromatin i kjernen (N) og en temmelig jevn avrundet form. F) NUGC-4 celle behandlet med S. gratum
viser kromatin kondensasjon kjerne, flere vesikler (v) og mange membranbundne organeller (pil). G) NUGC-4 celle etter eksponering til J. gangetica
viser en kjerne kondensert kromatin, membranbundet organeller (pil) og vesikler (v). H) Morfologiske forandringer observert i L. flava
behandlet NUGC-4 cellen ble omfattet med kromatin kondens i kjernen (N), og mange heterogene vesikler av varierende størrelse (v).
S. gratum
behandlet NUGC-4 cellelinjer utstilt apoptose med komprimering kjernen og produksjon av membranbundne apoptotiske legemer og mange vesikler (Figur 4F). Imidlertid i sammenligning NUGC-4-celler behandlet med J. gangetica
, produsert tidlige stadier av apoptose med kromatin kondensasjon og tallrike vesikler (figur 4G). Mens celler behandlet med L. flava
viste perifer kromatin kondens kjerne med en rekke heterogene blemmer og blebbing (figur 4H).
Diskusjon
Serendipitous observasjoner har vist at planter kan tradisjonelle urter og te bli brukt til å potensielt vinne kampen i kampen kreft; et verdensomspennende helseproblem. Men det er ikke før disse fytokjemikalier er testet in vitro Hotell og in vivo
at vi kan vite sikkert hvor langt de kan gå i å holde denne sykdommen under kontroll [31-34]. I Thailand magekreft er en svøpe, men den uvanlig lave magekreft forekomst i den nordøstlige delen av Thailand er av stor interesse. At S. gratum
, J. gangetica Hotell og L. flava
er urfolk til området og utgjør en stor del av rutinen kosttilskudd i lokalbefolkningen, vi derfor besluttet å undersøke om disse folke planter er potensielle kandidater for sikker og pålitelig styring av magekreft. Selv om det er mange rapporter å avklare deres antioksidant aktiviteter, gir denne studien den første bevis for sine potente cytotoksiske effekter og apoptotisk induksjon basert på ultrastrutural karakteristisk på magekreft.
Disse plantene ble først ekstrahert med etylacetat og deretter analysert for sine fenoliske innholdet med Folin-Ciocalteu metode.

• Xpert MTB /RIF-analysen kan brukes på arkiv gastrisk aspirat og indusert sputum prøver for sensitiv diagnostisering av pediatrisk tuberculosis
• Emergency presentasjon av magekreft; prognose og implikasjoner for tjenesten planning