Antioksidacijska aktivnost i ultrastrukturne promjene u želučanom staničnim linijama karcinoma potaknute Northeastern Tajlandski jestivog narodne biljnih ekstrakata

Antioksidativna aktivnost i ultrastrukturne promjene u želučanom staničnim linijama karcinoma izazvanih Northeastern Tajlandski jestivog narodne biljnim ekstraktima
Sažetak
Pozadina pregled phytochemical proizvodi imaju ključnu ulogu u procesu otkrivanja lijekova. Ova obećavajuća mogućnost, međutim, zahtijeva potrebu da potvrde svoju znanstvenu potvrdu prije upotrebe. Dakle, ova studija ima za cilj procijeniti (1) antioksidativno djelovanje, (2) citotoksičnosti potencijal, te (3) učinak na ultrastrukturnoj promjene u želučanom staničnim linijama karcinoma kroz izlaganja frakcijama tri lokalne sjeveroistočnom Tajlandski jestivih biljaka.
Metode
Biljke, Syzygium gratum, Justicia gangetica
i Limnocharis flava pregled se ekstrahira s etil acetatom, a svaki sirovi ekstrakt analiziran na njihovu ukupnu fenola sadržaja na Folin-Ciocalteu metoda. Njihova antioksidativna aktivnost procijenjena je pomoću ABTS sustava. Ekstrakti se potom testirana citotoksičnost na dvije stanične linije karcinoma želuca Kato-III i NUGC-4, te u usporedbi s fibroblastima Hs27 Kao kontrola pomoću MTT. Vijabilnost stanica (%), IC 50 vrijednosti, kao i ultrastrukturnoj pregradnji procijenjeni nakon tretmana s jednosmjernom analizom varijance (ANOVA). Pregled Rezultati
ukupnih vrijednosti fenolnih od ekstrakti etil acetata su dobro koreliraju s antioksidativni kapacitet, uz izvađen proizvod S. gratum
prikazuje najvišu razinu antioksidativno djelovanje (10-puta veći odgovora) preko J. gangetica Netlogu i L. flava Netlogu respektivno. Izloženost S. gratum Netlogu i J. gangetica pregled izvlači na normalne stanične linije (Hs27) rezultirao granične citotoksičnosti učinaka. Međutim, kroz analizu S. gratum Netlogu ovisi o dozi i J. gangetica
ekstrakta proizvedena cytotoxicological učinke u tek nešto više od 75 posto Kato-III i NUGC-4 staničnim linijama. Osim toga, apoptoze karakteristična je prikazan ispod TEM u obje stanične linije karcinoma s ove dvije ekstrakata, dok karakteristike autophagy pronađen je u staničnim linijama, nakon nakon izlaganja izvadaka iz L. flava Netlogu. Pregled Zaključci pregled Od njih tri biljke, S. gratum pregled imala najviše sadržaj fenolnih spojeva i antioksidativnog kapaciteta. Sve su da sadrži spoj (eve) s citotoksičnost in vitro pregled na stanice raka, ali ne i na normalne stanične linije kao što je riješen u kulturi tkiva i ultrastrukturnoj analize. Ovo je prvo izvješće pokazati učinak na staničnu promjene kao apoptoze ekstrakta etil acetata S. gratum Netlogu i J. gangetica.
Daljnje studije su sada usmjerena na pojedinačne izolatima i njihovoj funkciji, prioritete na S. gratum pregled i J. gangetica pregled za razvoj novih lijekova i boraca protiv raka. pregled Ključne riječi pregled rak želuca ultrastruktura stanične citotoksičnosti TEM Pozadina pregled, raka želuca je četvrti najčešće dijagnosticiran rak i Drugi najveći vodeći uzrok raka se odnose na smrt u svijetu [1]. Procijenjeno je da je bilo oko milijun novih slučajeva raka želuca snimljene 2008. godine, ali od onih, većina (713.900) su prijavili u zemljama u razvoju, s najvišim učestalosti za rak želuca se nalaze u istočnoj Aziji, preko srednje i istočne Europe, a Južna Amerika [1]. Unatoč prividnom intenziviranje bolesti, dokazi upućuju na to da je ukupni želučani stopa raka je suprot trend, s padom izvješća raka želuca naći u većini dijelova zapadnog svijeta [2].
Pacijenata oboljelih od raka Na žalost, većina želučanih su često dijagnosticira u poodmakloj fazi kada je izlječenje nije moguće i tretman je palijativna s namjerom poboljšanja kvalitete i kvantitete života. Iako, postoje smjernice za liječenje karcinoma želuca, stopa preživljavanja od pet godina iznosi manje od 50% [3, 4]; stopa koja očito nije ohrabrujuće bilo onkologa ili oboljelih od raka. Osim toga, nuspojave od trenutne tretmana tj operacije, kemoterapije i zračenja nisu zadovoljavajući. Dakle, ciljane terapije potrebno je smanjiti nuspojave i poboljšati klinički ishod pacijenata. Dakle, istraživači u ovom novom tisućljeću su plaćati puno više pozornosti na razvoj ne samo novih terapijskih smjernica i ranih strategija prevencije za rakom želuca [5, 6], ali i na pronalaženje novih i ciljati određene terapijske tvari, kao dobro.
tijekom posljednja dva desetljeća, phytochemical proizvodi su igrali dominantnu ulogu u otkrivanju novih lijekova za cilj raka [7], s više od 60% trenutno koristi sredstva protiv raka su izvedeni iz prirodnih izvora [8]. Primjeri svijetu klinički korisnih sredstava protiv tumora koji su izvedeni iz divljih biljaka su taksol, vinblastin, vinkristin, derivati ​​kamptotecina, topotekan (a pšenične trave), more-krkavine, Lingzhi, irinotekan, i etopozida, koji je izveden iz epipodofilotoksina [9, 10]. Drugi su izvedeni iz voća i povrća; ne ograničavajući se uključiti kurkumin (kurkuma), genistein (soja), katehine (zeleni čaj) [7], ali i bilja kao što su vinca alkaloidi, podofilotoksina berberin, limun trava ulja, flavonoida i kamptotecin; druga skupina obećavajućih sredstava protiv raka [11]. Iako ta sredstva protiv raka su zaposleni za ciljane mehanizmom puteva, njihova učinkovita manipulacija ekstrinzična i intrinzična apoptoza putevi još se uvijek istražuje [12-14]. Paklitaksela izolirati iz kore pacifičke tise, Taxus brevifolia pregled je jedna fitokemikalija koja pokazuje obećanje. To je lijek odobren od FDA za se koristiti u liječenju AIDS-vezane Kaposijevog sarkoma, karcinoma dojke, rak ne-malih stanica pluća i karcinoma jajnika. Njegova je primarna stanična učinak je da uzrokuje nenormalan stabilizaciju dinamičkog polimerizaciju mikrotubula, što dovodi do neuspjeha diobe stanica što dovodi do apoptoze [15-17]. Međutim, paklitaksel također se proučava kao alternativni tretman za druge vrste raka, uključujući rak želuca. Ona je trenutno u kliničkim ispitivanjima faze III [18, 19]. Bez obzira na to da li su odobreni ili ne, široko dostizanje podrška i nastavak studija biljnih ekstrakata s implikacije u želučanom liječenju raka ukazuju na nastavak uloge koju prirodni proizvodi igrati u procesu otkrivanja lijekova.
Prilikom razmatranja epidemiologiju studija novo dijagnosticiranih slučajeva raka želuca u Tajlandu, puno niže incidencija nisu primijećeni u sjeveroistočnom dijelu regije [20]. Iako, prevalencija Helicobacter pylori pregled, infekcije, ne razlikuju se diljem sjeverne regije Tajlandu, ne geografski faktor (npr visoravni, brdovitog raspona ili džungli terenu) je bio drugačiji, bilo [21]. Dakle, mora postojati nešto drugo središnje stanovništva u sjeveroistočnom dijelu regije koja smanjuje ukupni broj slučajeva raka želuca. Imajući sve ali je odbacio mogućnost genetika i okolišni čimbenici, to je sugerirao da jestive narodni biljke dijeta koje se obično konzumiraju na ovim prostorima, mogu zadržati odgovor na tu nedosljednost. Ovaj novi podaci, a to obećava dovesti nas u velikoj mjeri izaziva istražiti misteriozni fenomen, odnosno da li su phytochemical spojevi u sjeveroistočnom Tajlandski jestivih narodnih biljke imaju kemoprevencijsku ili citotoksični potencijal za borbu protiv raka želuca, ili druge osobine. Iz tog razloga, ova studija je stoga poduzeti kako bi se procijenila citotoksičnost potencijal tih lokalnih jestivih biljaka. Od posebnog interesa, biljke S. gratum
, J. gangetica
i L. flava
, izabrani su na temelju epidemioloških podataka koji upućuju na to da su većina redovito jestive pučke povrće u sjeveroistočnom dijelu regije.
Mi pretpostaviti da su ove biljke može držati unutar skrivenih svojstava mogu se iskoristiti za borbu protiv ovog raka, a ova studija nastoji procijeniti njihov potencijal. Procjenjujemo sirove fenolnih na bazi ekstrakta ove biljke, a pokazuju visok stanični apoptotičnih i citotoksični učinak u dvije zajedničke i komparativnih želučanih staničnim linijama karcinoma, Kato-III i NUGC-4.
Metode
biljnog materijala
Tri domaće jestivo folk biljke; S. gratum pregled, J. gangetica pregled i L. flava pregled (Tablica 1) kupljeni su od tri različita lokalnih tržišta u pokrajini Khon Kaen u sjeveroistočnom dijelu Tajlanda tijekom listopada do prosinca 2008. Ove biljke su odabrani na temelju ethnobotanical informacija [22-26] i epidemioloških podataka kao što je gore opisano. Ispravno taksonomska identifikacija biljnih vrsta koje se koriste u ovom istraživanju bio je pod nadzorom botaničari iz Odjela za botaniku i farmakologiju, Farmaceutskog fakulteta, Khon Kaen University, Thailand.Table 1 Imena triju biljnih ekstrakata i drugih istraživačkih referencama, terapiju u tajlandski tradicionalnim medicina prikazan u ovom istraživanju
vrsta [bon broj]
Obitelj (Common name engleski /Thai)
prijavljenih velikih sastojci
u terapijske svrhe u tajlandski tradicionalne medicine

Jestivi dio
Ref.
Syzygium gratum pregled (Wight) SN Mitra var. Gratum pregled [Ch. Laongpol 6] a, c pregled Myrtaceae (Eugenia /Phak Mek, Samet chun)
Još nije jasno određeni u kemijskoj strukturi, ali se pokazala jaka antioksidansima i sprječavanje oksidacije i nitrosative naglašava
liječenju dispepsije i probavne smetnje pregled Lišće
22,23 pregled Justicia gangetica pregled L. [TK-PSKKU-0066] b pregled primogovke (kineski ljubičasta, tropska jaglac /prihvaćen naziv: Asystasia gangetica pregled) pregled 5,11 epoxymegastigmane glukozid (asysgangoside) salidroside, benzil β-d-glukopiranozid (6S
, 9R pregled) -roseoside, ajugol, apigenin 7-O pregled -β-d glukopiranozid, apigenin 7-o pregled -neohesperidoside i apigenin 7-o pregled -β-d-glukopiranozil (1 → 6) -β-d-glukopiranozid pregled liječenje bolova u trbuhu, želuca crva, anti- astma pregled Ostavlja pregled 24,25
Limnocharis flava
L. Buchenau [Patt. 173] c pregled Limnocharitaceae (žuta lipica, žuta Burr glave /Talabhat reusi) pregled neodređenog
predjelo
Matične
26 pregled aVoucher primjeraka deponiran u šumi Herbarium (BKF), Odjel za Nacionalni park, divljih životinja i očuvanja biljaka, Ministarstvo prirodnih resursa, bthe Herbarium fakulteta Pharmaceutical Sciences, Khon Kaen Sveučilišta i cthe Prince of University Songkla herbarij (PSU), Odsjek za biologiju, Prirodoslovno-matematičkog fakulteta, Kneza Sveučilišta Songkla, Tajland . pregled Priprava biljnim ekstraktima
jestivi dijelovi svakog pojedinog biljnu (Tablica 1) su isprane sterilnom destiliranom vodom da se ukloni detritus i isušeni u pećnici s vrelim zrakom na 50 ° C tijekom 7 dana. Nakon sušenja dijelovi biljke su zatim izrezati u male komadiće i zemlju u fini prah pomoću morta i tučak. Svaki tlo biljka prah materijal je zatim uronjena sa suviškom etil-acetatu kao otapalu (Sigma-Aldrich Pte Ltd-Singapur) u bočici za ekstrakciju. Smjese etil-acetat se zatim inkubiraju na pokretnoj inkubator na sobnoj temperaturi 72 h. Nakon ovog postupka, supernatanti se zatim prenese u novu posudu, a postupak ekstrakcije s etil acetatom se ponovi još tri puta, prije supernatanti ovih trostrukih ekstrakcije se spoje. Ovi se filtriraju kroz Whatman filter papira br.1, te otpari u rotacijskom isparivaču. Ovi primjeri ekstrakti su potom upotrijebiti u daljnjim pokusima. Pregled, Određivanje ukupnog fenolni spoj pregled Ukupno fenolnih spojeva u biljnim ekstraktima određena su Folin-Ciocalteu metode kao što je opisano od strane Sachindra [27]. Ukratko, 0,2 ml svaki biljni ekstrakt otopi se u 50% DMSO (Santa Cruz Biotechnology Inc., Bangkok, Tajland) oksidira se s 1,0 ml 10 puta razrijeđeni Folin-Ciocalteu reagensa (Sigma-Aldrich Pte-Ltd., Singapur) i neutralizira sa 0,8 ml otopine 6% natrijev karbonat (Sigma-Aldrich Pte Ltd-Singapur). Nakon inkubacije od 1 sat, apsorbancija otopine je izmjerena na 764 nm, a rezultati su prikazani kao miligramu ekvivalent galne kiseline po gramu suhe težine (mg GAE /g). Ispitivanje je provedeno u triplikatu za svaku koncentraciju uzorka od 3 odvojena pokusa.
Određivanje antioksidativno djelovanje pregled Antioksidativno djelovanje biljnih ekstrakata je određena spektrofotometrijski primjenom ABTS sustav u skladu s postupkom iz Re i kolege [28]. Ukratko, ABTS radikala kation (ABTS • +) smjesa se generiraju oksidacijom 7 mm ABTS (Sigma-Aldrich Pte-doo, Singapur) sa 140 mM kalij persulfatom (Sigma-Aldrich Pte-doo, Singapur), inkubiraju 16 sati pri sobnoj temperaturi u mraku. Antioksidativna aktivnost utvrđena je dodatkom 0,2 ml biljnim ekstraktima s 1,8 mL ABTS • + radikal kationa smjesu. Nakon inkubacije smjese tijekom 6 minuta, apsorbancija na 734 nm bilježi. ABTS • + radikala vezivanje (%) od biljnih ekstrakata izračunate su na osnovu slijedeće jednadžbe: ABTS • + radikala vezivanje (%) = [(uzorak Abs.control-Abs.test) /Abs. kontrola] x100. Gdje Abs.control je apsorbancija kontrolnom reakcijom (bez biljnog ekstrakta) i Abs.test uzorka apsorbancija u prisutnosti biljnog ekstrakta. Rezultati su uspoređeni s anti-vezivanje aktivnosti Troloxa (Sigma-Aldrich Pte-doo, Singapur), a predstavljen je kao troloksa ekvivalentnom antioksidativnog kapaciteta po gramu suhe težine (TEAC /g). Ispitivanje je provedeno u triplikatu za svaku koncentraciju uzorka od 3 odvojena pokusa. Pregled na kulturi stanica pregled dvije ljudske stanične linije karcinoma želuca Kato-III (ATCC br HTB-103) od American Type Culture Collection (ATCC, Rockville, MD, USA) i NUGC-4 (JCRB0834) iz Health Science Research potencijala banke (Japan zdravstva Foundation) korišteni su za in vitro
citotoksičnih testovima. Ljudski fibroblasti prepucija stanične linije Hs27 (ATCC No.1634) je korišten kao kontrola. Oni su kultivirane u sterilnoj RPMI 1640 koji sadrži 10% (v /v) fetalnog goveđeg seruma (Biochrom AG, Berlin) na 37 ° C dovodi s 5% -tnim CO 2 u inkubatoru. Stanice su uzgajane u standardnim bocama za kulture tkiva, a kada se postigne 80% -tne konfluencije passaged s otopinom od 0,25% tripsin-EDTA (Sigma-Aldrich Pte Ltd-, Singapur) svakih 3-4 dana do upotrebe. Pregled In vitro
citotoksičnosti pregled biljnih ekstrakata ispitana svoj citotoksično djelovanje protiv Kato-III i NUGC-4 staničnim linijama preko MTT kolorimetrijski kao prvi opisao Mosmann [29] s izmjenama koje predlaže Denizot i Lang [30]. Uzgojene stanice (1 × 10 4 stanice) u kompletnom mediju se prenese u svaku jažicu na ravne ploče s 96 bunarića i inkubira na 37 ° C u vlažnoj atmosferi zraka obogaćenog s 5% (v /v) CO 2 24 h kako bi se neka stanica pričvrstiti na dnu svake dobro. Uzgojenih stanica se zatim obrađuje s testiranom sirovog ekstrakta (po tri puta u jamice stanju) dodatkom 2 ul serijskih razrjeđenja svakog ekstrakta u koncentraciji od 1,25, 2,5, 5, 10 i 20 ug /ml. Stanice su zatim uzgajane kao gore za još 72 sata prije dodavanja 10 ul 5 mg /ml otopine 3- (4, 5-dimetiltiazol-2-il) -2, 5-difeniltetrazolijevog bromida (MTT) ( sigma-Aldrich Pte Ltd-, Singapur) u svaku jažicu. Inkubacija se nastavlja još 4 sata prije nego se medij je uklonjen. Smjesa DMSO (150 ul) i glicin (25 ul) se doda u svaku jažicu i miješano da osigura liže stanica i otapanje u formasan kristala, prije nego li je izmjerena apsorbancija pri 540 nm. Tri ponavljanja svakog eksperimenta su provedena, a postotak MTT pretvorbe na svom formazana derivata za svaki i (posto rasta stanica) je izračunata dijeljenjem OD na 540 nm iz bunara sa kontrolom temelji na slijedećoj jednadžbi: posto rasta stanica = [A540 Test - A540 nula] × 100 /[kontrolom A540 - A540 nula]. Gdje je A540 nula = A540 u otopini poslije stanica je inkubirana kroz 24 sata prije dodavanja biljnih ekstrakata; A540 test = A540 otopine nakon biljnim ekstraktima dodatak; i kontrola A540 = A540 otopine bez biljnim ekstraktima dodatak. Osim toga, za netoksičnim osiguranje biljnim ekstraktima protiv normalnih stanica (stanična linija fibroblasta Hs27), dvostruku dozu (2 puta u IC 50 Koncentracija [10 ug /ml]) ekstrakata su zaposleni i ocjenjuje MTT test. Ispitivanje je provedeno u triplikatu za svaku koncentraciju uzorka od 3 odvojena pokusa. Pregled polumaksimalno inhibitorne koncentracije (IC50)
dobiven apsorbancije pri 540 nm je korišten za određivanje postotka opstanak stanica uz pretpostavku da se dobije 100% preživljavanja kada se tretira s otapalima samo kao kontrola, te da ne postoje razlike u metaboličkom aktivnošću postoji između preživjelih stanica u različitim uvjetima. Pod ove pretpostavke, postotak preživljavanja tretiranih stanične linije karcinoma i normalnih stanica u kulturi je izračunat prema sljedećoj formuli: Postotak preživljavanja = (A540 tretiranih stanica /A540 kontrola) × 100. srednja vrijednost ± 1 standardna devijacija (SD) stanična preživljavanja (%) je prikazana kao funkcija koncentracije odgovarajućeg biljnih ekstrakta i najbolje odgovara linija je korištena za dobivanje procijenjene IC 50 vrijednost od koncentracije koja bi mogla osigurati 50% preživljavanja stanica.
koncentracije biljnih ekstrakata davanja 50% inhibitorne koncentracije (IC 50) određuje se iz tri odvojena pokusa. IC 50 svake biljnih ekstrakata se zatim upotrijebe kao tretiranog koncentraciji na 0 i 3 dana protiv Kato III-NUGC-4, koje su procijenjeni za apoptozu pomoću transmisijskim elektronskim mikroskopom (TEM). Ispitivanje je provedeno u tri primjerka za svaku koncentraciju uzorka od 3 odvojena pokusa.
Priprema uzorka za transmisijskim elektronskim mikroskopom pregled Kato-III stanice (1x10 6 stanica) i NUGC-4 stanice (1x10 6 stanice) tretirane svaki biljnog ekstrakta, kao i negativnu kontrolu (netretirane kultura), izvedeni su odvojeno. Ukratko, su isprane s D-Hank otopinom (Life Technologies, Bangkok, Thailand) dva puta, a isporučuje se u epruvete za centrifugu s plastičnim strugača, nakon čega slijedi centrifugiranje na 2000 rpm 15 min, uz uklanjanje supernatanta. Talog je fiksirana u otopinu koja je sadržavala 4% glutaraldehid (elektronska mikroskopija Sciences, Bangkok, Thailand) i 2% paraformaldehida (elektronska mikroskopija Sciences, Bangkok, Thailand) u 0.1 M fosfatnog pufera (PBS), pH 7,4, na 4 ° C, tijekom 1 sata, zatim se ispere s 0,1 M PBS do uklanjanja fiksator. Uzorci su postfiksirana s 1% osmij tetraoksidom (elektronskim mikroskopom Sciences, Bangkok, Thailand) u istom puferu tijekom 30 minuta, a dehidrirana u serijama gradiranog etanola tijekom 10 minuta svaki. Oni su zatim nastavi s dvije promjene propilen oksida i uronjene u sekvencijalne smjese propilen oksida i Araldite 502 smolom (Sigma-Aldrich Pte-Ltd., Singapur) u omjerima 3: 1, 2: 1, 1: 2 i konačno ugrađen u čistom Araldite. Sekcije 1p.M su rez pomoću MT-2 Porter-Blum ultramikrotom. Sekcije su naknadno montirati na bakrenim mrežama, osuše na zraku i kontrast redom s 2% uranyl acetata (elektronska mikroskopija znanosti, Bangkok, Tajland), u 7% alkohola u mraku, a zatim obrađuje s olovom citrata (elektronska mikroskopija Sciences, Bangkok, Tajland ). Oni su ispitani pod Philips CM 100 transmisijskim elektronskim mikroskopom koji radi na 80 kV. Pregled, statistička analiza pregled Rezultati su izraženi kao prosjek ± SD od ponavljanja od 3 odvojena pokusa. Usporedba između skupova podataka izvedena je pomoću jednostruke analize varijance (ANOVA), a zatim t-test. Sve statističke analize provedene su pomoću SPSS19. Razlike su kao statistički značajne uz p. ≪ 0,05

• Xpert MTB /RIF test može se koristiti na arhiviranim želučane aspirata i inducirani uzorke iskašljaja za osjetljivu dijagnozu pedijatrijske tuberculosis
• Hitna predstavljanje raka želuca; prognoza i implikacije za usluge planning