Антиоксидантной активностью и ультраструктурные изменения в желудочном раковых клеточных линиях, вызванных северо-восточной части тайского съедобной народной завода extracts

антиоксидантной активностью и ультраструктурные изменения в желудочном линиях раковых клеток, индуцированные северо-восточной части тайского съедобной народной растительных экстрактов
Аннотация
Справочная информация
Фитохимическое продукты важнейшую роль в процессе обнаружения наркотиков. Это перспективная возможность, однако, требует, чтобы подтвердить необходимость их научной проверки перед использованием. Таким образом, данное исследование направлено на оценку (1) антиоксидантная активность, (2) цитотоксический потенциал, и (3) влияние на ультраструктурным изменения в желудочном линиях раковых клеток путем воздействия фракций трех местных северо-восточных тайских съедобных растений.
Методы
Растения, Syzygium gratum, Хустисья gangetica
и Limnocharis Flava
экстрагировали этилацетатом, и каждый неочищенный экстракт анализируют на общее содержание фенольных соединений методом Фолин-Ciocalteu. Их антиоксидантная активность оценивали с использованием системы ABTS. Экстракты затем анализировали на цитотоксичность на двух желудочных линиях раковых клеток Като-III и NUGC-4, и по сравнению с Hs27 фибробласты в качестве контроля с помощью анализа МТТ. Жизнеспособность клеток (%), IC <суб> 50 значений, а также ультраструктурные изменения были оценены после лечения с помощью одного дисперсионного анализа (ANOVA).
Результаты
суммарные значения фенольных экстрактов этилацетата были хорошо коррелируют с антиоксидантной способностью, с добытого продукта S. gratum
отображает высокий уровень антиоксидантной активности (в 10 раз больший отклик) над J. gangetica
и Л. Flava
соответственно. Воздействие S. gratum
и J. gangetica
экстрактов нормальных клеточных линий (Hs27) приводило к цитотоксичности предельных эффектов. Тем не менее, через дозозависимым анализа S. gratum
и J. gangetica
экстрактов, полученных cytotoxicological эффекты в чуть более 75 процентов от Като-III и NUGC-4 линии клеток. Кроме того, апоптическая характеристика была показана в рамках ТЭМ в обеих линиях раковых клеток с этими двумя экстрактами, в то время как характеристики аутофагии был найден в клеточных линиях, после того, как пост воздействия экстрактов из L. Flava
.
Выводы
Из них три завода, С. gratum
имели наивысшие содержание фенольных соединений и антиоксидантов. Все они обнаружены соединения (соединений) с цитотоксичностью в пробирке
на раковые клетки, но не на нормальных клеточных линиях, как улаженные в культуре ткани и ультраструктурным анализа. Это первый отчет, чтобы показать влияние на клеточный изменения как апоптоз этилацетата экстракта S. gratum
и J. gangetica.
Дальнейшие исследования в настоящее время сосредоточены на отдельных изолятов и их функции, определения приоритетов на S. gratum
и J. gangetica
для разработки новых терапевтических средств и комбатантов против рака.
Ключевые слова
рак желудка Ультраструктура цитотоксичности ТЕМ фон
рака желудка является четвертым наиболее часто диагностируется рак и второй самый основной причиной рака, связанных смерти в мире [1]. Было подсчитано, что там было около 1 миллиона новых случаев рака желудка, записанные в 2008 году, но из тех, что большинство (713900) были зарегистрированы в развивающихся странах, с самыми высокими числа случаев рака желудка, обнаруженных в Восточной Азии, над Центральной и Восточной Европы, а также Южная Америка [1]. Несмотря на кажущуюся обострением заболевания, данные свидетельствуют о том, что в целом уровень заболеваемости раком желудка наблюдается обратная тенденция, с уменьшением числа сообщений о раке желудка, встречающейся в большинстве частей западного мира [2].
К сожалению, большинство больных раком желудка часто диагностируется на продвинутой стадии, когда излечение невозможно и лечение паллиативное с целью повышения качества и количества жизни. Несмотря на то, есть рекомендации по лечению рака желудка, скорость пятилетняя выживаемость составляет менее 50% [3, 4]; скорость, что, очевидно, не обнадеживает либо онкологов или раковых больных. Кроме того, побочные эффекты от текущего лечения т.е. хирургии, химиотерапии и радиации не являются удовлетворительными. Таким образом, целевой терапии необходимы, чтобы уменьшить побочные эффекты и улучшить клинические результаты пациентов. Таким образом, исследователи в этом новом тысячелетии уделяют гораздо больше внимания развитию не только новых терапевтических руководств и ранних стратегий профилактики рака желудка [5, 6], но и на поиске новых и целевых конкретных терапевтических агентов, а также. <Бр> за последние два десятилетия, фитохимические продукты играют ведущую роль в открытии новых лекарственных средств целевой рака [7], с более чем 60% используемых в настоящее время противораковые агенты получают из природных источников [8]. Примеры во всем мире клинически полезных противоопухолевых средств, полученных из диких растений, включают таксол, винбластин, винкристин, производные камптотецина, топотекан (пырея), облепиха, Lingzhi, иринотекана и этопозида, который является производным от эпиподофиллотоксина [9, 10]. Другие получают из фруктов и овощей; не ограничиваясь ими, включают куркумин (куркума), генистеин (соя), катехины (зеленый чай) [7], но и травы, как алкалоиды барвинка, подофиллотоксина, берберин, лимоны травы масла, флавоноид и камптотецин; другая группа перспективных противоопухолевых агентов [11]. Хотя эти противораковые средства были использованы для целевых путей механизма на основе, их эффективное манипулирование примесной и внутренние пути апоптоза все еще изучается [12-14]. Паклитаксел выделить из коры тихоокеанского тиса, Taxus brevifolia
один фитохимических, который показывает обещание. Это препарат одобрен от FDA для использования для лечения связанных со СПИДом саркома Капоши, рак молочной железы, немелкоклеточного рака легкого и рака яичников. Его основной клеточный эффект является причиной ненормального стабилизации полимеризации динамической микротрубочек, что приводит к отказу деления клеток, что приводит к апоптозу [15-17]. Тем не менее, паклитаксел также изучается в качестве альтернативного лечения для других типов рака, включая рак желудка. В настоящее время в клинических испытаниях фазы III [18, 19]. Вне зависимости от того, были ли они одобрены или нет, широкая поддержка и достижения продолжением исследований растительных экстрактов с последствия в лечении рака желудка свидетельствуют о сохраняющейся роли, которую играют природные продукты в процессе обнаружения наркотиков.
При рассмотрении эпидемиология изучение вновь выявленных случаев рака желудка в Таиланде, значительно более низкие случаи наблюдались в северо-восточном регионе [20]. Несмотря на то, распространенность Helicobacter Pylori
инфекций, не отличаются по всей северной части Таиланда, ни один географический фактор (например, плато горного массива или джунгли местности) не отличался ни [21]. Следовательно, должно быть что-то другое центральное значение для населения в северо-восточной части региона, что снижает общую заболеваемость рака желудка. Имея все, но исключать генетика и факторы окружающей среды, было высказано предположение, что съедобные растения народные диеты, которые обычно потребляются в этом регионе, может держать ответ на это несоответствие. Эти новые данные, и эта многообещающая свинца сильно бросает нам вызов, чтобы исследовать загадочное явление, то есть ли фитохимические соединения в пределах северо-восточных тайских съедобных народных растений имеют химиопрофилактическую или цитотоксический потенциал для борьбы с раком желудка, или другие свойства. По этой причине данное исследование, поэтому было предпринято, чтобы оценить цитотоксичность потенциал этих местных съедобных растений. Особый интерес, растения S. gratum
, J. gangetica
и Л. Flava
, были отобраны на основе эпидемиологических данных, что позволяет предположить, что они являются наиболее регулярно съедобные народные овощи в северо-восточном регионе. <Бр> Мы постулировать, что эти растения могли держать в пределах скрытых свойств, которые могут быть использованы для борьбы с этим раком, и настоящее исследование ставит своей целью оценить их потенциал. Мы оцениваем сырой фенольные на основе экстрактов этих растений, и демонстрируют высокую клеточную апоптотических и цитотоксические эффекты в двух общих и сравнительных желудочных линий раковых клеток, Като-III и NUGC-4.
Методов
растительные материалы <бр> Три местных съедобные народные растения; С. gratum
, J. gangetica
и Л. Flava
(таблица 1) были закуплены у трех различных местных рынках в провинции Кхонкэн в северо-восточной части Таиланда в течение октября по декабрь 2008 г. Эти растения выбирается на основе этноботанической информации [22-26] и эпидемиологические данные, как было описано выше. Правильное таксономическое определение видов растений, используемых для данного исследования было под контролем ботаников из кафедры ботаники и фармакологии факультета фармации, Кхонкэнский университета, Thailand.Table 1 Имена трех растительных экстрактов и других научных ссылок, терапевтическое использование в тайский традиционный медицина скринингу в данном исследовании
видов [Ваучер номер]

Семья (общее название английский /тайский)

сообщают о крупных составляющих

терапевтическое использование в тайской традиционной медицине <бр>
съедобная часть

Ref.

Syzygium gratum
(Wight) С.Н. Митра вар. Gratum
[Ch. Laongpol 6] а, с
Миртовые (Eugenia /Phak Мек, Самет чунь)
еще четко не определены в химической структуре, но оказались сильными антиоксидантами и предотвращения окислительного и nitrosative напряжений
Лечение диспепсии и расстройство желудка
Листья
22,23
Хустисья gangetica
L. [TK-PSKKU-0066] б
Acanthaceae (китайский фиолетовый, тропический примулы /Принято имя: асистасия gangetica
)
5,11-epoxymegastigmane глюкозид (asysgangoside), салидрозида, бензиловые β-d-глюкопиранозид, (6S
, 9R
) -roseoside, ajugol, апигенин 7-О
-β-D- глюкопиранозид, апигенин 7-о
-neohesperidoside, и апигенин 7-о
-β-глюкопиранозильную (1 → 6) -β-d-глюкопиранозид
Лечение боли в желудке, червей желудка, анти- астма
Листья
24,25
Limnocharis Flava
Л. Бухенау [Патт. 173] с
лимнохарисовые (желтая Теофраста, желтая голова заусенцев /Talabhat reusi)

Закуска Не определено
Стволовые
26
образцов aVoucher, депонированные в лесной Гербарий (БКФ), Департамент Национальный парк, дикой природы и сохранения растений, Министерство природных ресурсов, B Неправильно Гербарий факультета фармацевтических наук университета Хон Каен и CЗапустится программа принца Songkla университета гербария (ПГУ), биологический факультет, факультет естественных наук, принца Songkla университета, Таиланд .
Приготовление экстрактов растений
съедобные части каждого отдельного сорта растений (таблица 1) были отмывают стерильной дистиллированной водой, чтобы удалить детрит и сушат в печи с горячим воздухом при 50 ° с в течение 7 дней. После высыхания, части растений были затем разрезают на мелкие кусочки и измельчают в мелкий порошок, используя ступку и пестик. Каждый измельченный материал пороховой завод был затем погружают с избытком этилацетата растворителя (Sigma-Aldrich Pte Ltd-, Сингапур) в бутылке экстракции. Этилацетатные смеси затем инкубировали на шейкере инкубаторе при комнатной температуре в течение 72 ч. После этого процесса, надосадочную жидкость затем переносили в новый контейнер, а процесс экстракции этилацетатом повтор ли еще три раза, прежде, чем были объединены супернатанты этих трех повторностей извлечений. Они были затем фильтруют через фильтровальную бумагу Ватман № 1, и выпаривают на роторном испарителе. Эти образцы экстракты затем использовали в дальнейших экспериментах.
Определение общего фенольного соединения
Всего фенольных соединений в растительных экстрактах определяли с помощью метода Фолин-Ciocalteu, как описано Sachindra [27]. Короче говоря, 0,2 мл каждого растительного экстракта, растворенного в 50% ДМСО (Santa Cruz Biotechnology Inc., Бангкок, Таиланд) окисляют 1,0 мл 10-кратного разбавленного реагента Фолин-Ciocalteu (Sigma-Aldrich PTE-Ltd, Сингапур) и нейтрализовали с 0,8 мл раствора 6% карбоната натрия (Sigma-Aldrich Pte Ltd-, Сингапур). Через 1 ч инкубации оптическую плотность раствора измеряли при 764 нм, и результаты представлены в виде миллиграмм эквивалент галловой кислоты на грамм сухого веса (мг GAE /г). Анализ проводили в трех повторностях для каждой концентрации образца из 3 отдельных анализов.
Определение антиоксидантной активности
антиоксидантной активности растительных экстрактов определяли спектрофотометрически с использованием системы ABTS в соответствии с методом Re и его коллеги [28]. Коротко говоря, ABTS катион-радикала (БЕСТ • +) смесь генерируется путем окисления 7 мМ ABTS (Sigma-Aldrich Pte-Ltd, Сингапур) с 140 мМ персульфата калия (Sigma-Aldrich Pte-Ltd, Сингапур), инкубируют в течение 16 ч при комнатной температуре в темноте. Антиоксидантная активность определяли добавлением 0,2 мл растительных экстрактов с 1,8 мл ABTS • + катион-радикала смеси. После того, как выдерживание смеси в течение 6 минут, оптическую плотность при 734 нм регистрировали. рассчитывались ЕБСТ • + радикальная способность поглощать (%) растительных экстрактов на основе следующего уравнения: ABTS • + радикальная способность поглощать (%) = [(образец Abs.control-Abs.test) /Abs. контроль] х100. Где Abs.control является абсорбция контрольной реакции (без растительного экстракта) и образца Abs.test обозначает оптическую плотность в присутствии растительного экстракта. Результаты были сопоставлены с анти-продувкой активности Trolox (Sigma-Aldrich Pte Ltd-, Сингапур) и представлен в виде Trolox эквивалентной антиоксидантной способности на грамм сухого веса (TEAC /г). Анализ проводили в трех повторностях для каждой концентрации образца из 3 отдельных анализов.
Клеточная культура
Два человека линии карциномы желудка клеточных Като-III (АТСС N HTB-103) из Американской коллекции типовых культур (АТСС, Роквилл, MD, USA) и NUGC-4 (JCRB0834) из Медицинского научного исследовательского банка ресурсов (Япония Health Sciences Foundation) были использованы для в пробирке
цитотоксических анализов. Фибробластов крайней плоти человека клеточной линии Hs27 (АТСС No.1634) использовали в качестве контроля. Они культивировали в стерильной среде RPMI 1640, содержащей 10% (об /об) фетальной бычьей сыворотки (Biochrom AG, Берлин) при 37 ° C поставляется с 5% CO <суб> 2 в инкубаторе. Клетки выращивали в стандартных флаконах для тканевых культур и по достижении 80% слияния, переносились с раствором 0,25% трипсин-ЭДТА (Sigma-Aldrich PTE-Ltd, Сингапур) каждые 3-4 дня до использования.
In Vitro
цитотоксичности
растительных экстрактов оценивали свою цитотоксическую активность против Като-III и NUGC-4 линии клеток с помощью колориметрического анализа МТТ, как впервые описано Mosmann [29] с некоторыми изменениями, предложенными Denizot и Ланга [30]. Культивированных клеток (1 × 10 4 ячейки) в полной среды переносили в каждую лунку плоской 96-луночный планшет и затем инкубировали при 37 ° C в увлажненной атмосфере воздуха, обогащенного 5% (объем /объем) СО <к югу> 2 в течение 24 часов для того, чтобы позволить клетки прикрепляются к нижней части каждой лунки. Культивируемые клетки затем обрабатывают с тестируемой неочищенного экстракта (тройные лунки на каждый вариант) путем добавления 2 мкл серийных разведений каждого экстракта при концентрации 1,25, 2,5, 5, 10 и 20 мкг /мл. Клетки затем культивировали, как описано выше в течение еще 72 ч перед добавлением 10 мкл 5 мг /мл раствора 3- (4, 5-диметилтиазол-2-ил) -2, 5-дифенилтетразолийбромид (МТТ) ( Sigma-Aldrich Pte-Ltd, Сингапур) в каждую лунку. Инкубацию продолжали еще в течение 4 ч, после чего среду удаляли. Смесь ДМСО (150 мкл) и глицина (25 мкл) добавляли в каждую лунку и перемешивали, чтобы обеспечить лизис клеток и растворение formasan кристаллов, перед тем измеряли оптическую плотность при длине волны 540 нм. Проводили три параллельных эксперимента каждого эксперимента были выполнены, и процент конверсии МТТ в его формазана производной для каждой скважины (рост клеток процентов) рассчитывают делением оптическую плотность при длине волны 540 нм из скважин с контролем на основе следующего уравнения: процента роста клеток = [A540 тест - A540 ноль] × 100 /[управление A540 - A540 ноль]. Где A540 нуль = A540 раствора после того, как клетка, инкубировали в течение 24 ч перед добавлением растительных экстрактов; Тест A540 = A540 раствора после добавления растительных экстрактов; и контроль A540 = A540 раствора без добавления растительных экстрактов. Кроме того, для нетоксичного обеспечения растительных экстрактов против нормальных клеток (фибробластов линия клеток Hs27), двойную дозу (2 раза ИК <суб> 50 концентрации [10 мкг /мл]) экстрактов были использованы и оценены МТТ анализ. Анализ проводили в трех повторностях для каждой концентрации образца из 3 отдельных анализов.
Полумаксимальной ингибирующей концентрации (IC 50)
Полученную оптическую плотность при длине волны 540 нм использовали для определения процента выживаемости клеток, предполагая, что 100% выживаемости был получен при обработке растворителями только в качестве контроля, и что никаких различий в метаболической активности не существовало между выживших клеток при различных условиях. При этих условиях, был рассчитан процент выживаемости обработанных линий раковых клеток и нормальных клеток, культивированных в соответствии со следующей формулой: Процент выживаемости = (A540 лечение клеток /контроль A540) × 100. Среднее ± 1 стандартное отклонение (SD), ячейка выживаемость (%) наносили на график против соответствующей концентрации экстракта растений и наилучшим образом подходит линия была использована для получения оцененного IC <суб> 50 значение от концентрации, которая могла бы обеспечить 50% выживаемости клеток.
концентрации растительных экстрактов дает 50% ингибирующую концентрацию (IC <суб> 50) были определены из трех отдельных экспериментов. Микросхема <суб> 50 каждого растительных экстрактов были затем использованы в качестве обработанной концентрации в 0 и 3-х дней против Като-III и NUGC-4, которые были оценены на апоптоз с помощью просвечивающей электронной микроскопии (ПЭМ). Анализ проводили в трех экземплярах для каждой концентрации образца из 3 отдельных анализов.
Подготовки проб для просвечивающей электронной микроскопии
Като-III клеток (1x10 6 клеток) и NUGC 4-клетки (1x10 6 клеток), обработанных каждым растительного экстракта, а также отрицательного контроля (необработанные культуры), были выполнены отдельно. Если коротко, то они были промыты раствором D-Хэнкса (технологии жизни, Бангкок, Таиланд) дважды, и доставлен в центрифужные пробирки с пластмассовым скребком, с последующим центрифугированием при 2000 оборотах в минуту в течение 15 мин, с супернатант удаляли. Осадок фиксировали в растворе, содержащем 4% глутаральдегида (электронная микроскопия наук, Бангкок, Таиланд) и 2% параформальдегида (электронная микроскопия наук, Бангкок, Таиланд) в 0,1 М фосфатный буфер солевой раствор (PBS), рН 7,4, при 4 ° C в течение 1 ч, а затем промывали 0,1 М PBS, чтобы удалить закрепитель. Образцы были оканчиваются в 1% осмия (электронная микроскопия наук, Бангкок, Таиланд) в том же буфере в течение 30 мин, и обезвожены в градуированных серии этаноле в течение 10 мин каждый раз. Затем они были очищены с двумя заменами окиси пропилена и погружена в последовательные смеси окиси пропилена и Araldite 502 смолы (Sigma-Aldrich PTE-Ltd, Сингапур), в соотношении 3: 1, 2: 1, 1: 2, и, наконец, встроенный в чистом Araldite. Разделы 1 мкм были вырезаны с помощью MT-2 Портер-Blum ультрамикротомом. Секции были впоследствии установлены на медные сетки, сушат на воздухе и контрастировали последовательно с 2% ацетата уранила (электронная микроскопия наук, Бангкок, Таиланд) в 7% спирте в темное время суток, а затем обрабатывают цитратом свинца (электронная микроскопия наук, Бангкок, Таиланд ). Они были исследованы под Philips CM 100 просвечивающий электронный микроскоп, работающий при 80 кВ. Выражались
Статистический анализ
Результаты в виде средних значений ± SD повторностей из 3 отдельных анализов. Сравнение между наборами данных проводили с использованием одного дисперсионного анализа (ANOVA) с последующим Т-тест Стьюдента. Все статистические анализы были проведены с использованием SPSS19. Различия были признаны статистически значимыми при р &ЛТ;. 0,05

Результаты Всего содержание фенольных растений экстрактов
Три съедобные растения народные из северо-восточного региона Таиланда (S. gratum
, J. gangetica
и Л. Flava
) были извлечены и их общее содержание фенольных определяется с результатами, представленными в таблице 2. Среди этих растительных экстрактов, самый высокий уровень общего содержания фенольных был обнаружен в S. gratum
на 149.789 ± 0,381 мг GAE /г. Это было 10 сгибы значительно больше, чем в содержание, которое было определено в J. gangetica
и Л. FLAVA
(16,513 ± 0,130 и 14,334 ± 0,463 мг GAE /г, соответственно, р
&ЛТ; 0,05). Таблица 2 Среднее общее содержание фенольных экстрактов растений выражается в GAE и анти-поглощающий активность экстрактов растений, представленных в виде TEAC
растительные экстракты, вытяжки

Всего plenolics (мг GAE /г сухого веса)

Анти-поглощающий активность (мМ TEAC /г сухого веса)

S. gratum
(Wight)
149.789 ± 0,381
2,823.521 ± 27,521
J. gangetica L
.
16,513 ± 0.130a
313.141 ± 39.713a
L. Flava (L.)

14,334 ± 0.463a
900.845 ± 20.346a, б
были выражены значения, как средние значения ± SD повторностей из 3 отдельных анализов. ап
&л; 0,05 В. С. gratum
, п.о.
&л;. 0,05 VS J. gangetica

Антиоксидант потенциал растительных экстрактов
антиоксидантная активность этилацетата экстрагированных из S. gratum
, J. gangetica
и Л. Flava
приведены в таблице 2. значения эквивалентных TEAC для этих растений значительно отличались в порядке убывания от S. gratum
> L. Flava
> J. gangetica
(2,823.521 ± 27,521, 900,845 ± 20,346, 313,141 ± 39,713, соответственно, р
&л; 0,05). Заметно, около 3-9 складки выше антиоксидантная активность S. gratum
было найдено по сравнению с двумя другими видами экстрактов. Они были хорошо коррелировали с общим содержанием фенольных. (Коэффициент корреляции R 2 = 0,935, Y = 16.64x + 324,5). Торможение роста клеток

Желудочный линий раковых клеток Като-III и NUGC-4 и линия клеток фибробластов человека (контроль) подвергаются воздействию каждого растительного экстракта (последовательного разбавления концентрации [1,25, 2,5, 5, 10 и 20 мкг /мл]), чтобы определить влияние активности ингибирующего рост, индуцированный с каждого растения. Через 72 часа жизнеспособных клеток измеряли с помощью МТТ-теста. Като-III и NUGC-4 клетки подвергаются воздействию S. gratum
и J. gangetica
экстракты привело к значительному снижению жизнеспособных клеток в зависимости от дозы (Рисунок 1). При 20 мкг /мл все они наводили более 50% гибели клеток в обоих желудочных линиях раковых клеток. Тем не менее, в концентрации 10 мкг /мл, экстракты, полученные из только С. gratum
и Дж gangetica
продемонстрировал значительную сильную цитотоксичность (р
≪ 0,05), чтобы вызвать более 70% гибели клеток в Като-III и NUGC-4 при сравнении с Л. Flava
(Рисунок 2). Кроме того, эти два растительных экстрактов не показали никакого влияния на нормальной человеческой линии клеток фибробластов крайней плоти (рисунок 2). В противоположность этому, L. Flava
эффекты 's уменьшается. В результате чего около 25% клеточной смерти, без существенных различий между клеток рака желудка и нормальной клетки фибробластов (рис 2). Рисунок 1 исследования ответа дозы растительных экстрактов на двух желудочных линиях раковых клеток: (А) Като-III и (В) NUGC-4. Клетки обрабатывали различными концентрациями (0, 1,25, 2,5, 5, 10 и 20 мкг /мл) из S. gratum
, J. gangetica
и Л. FLAVA
в течение 72 ч. Антипролиферативное действие измеряли с помощью МТТ-теста. Результаты выражали как среднее значение ± SD трех независимых экспериментов. Рисунок 2
тест на цитотоксичность против Като-III, NUGC-4 и HS-27 после того, инкубировали с 10 мкг /мл этилацетата, извлеченной из S. gratum, Дж gangetica и Л. Flava. Антипролиферативное действие измеряли с помощью МТТ-теста. Результаты выражали как среднее значение ± SD из трех независимых экспериментов. Результаты показали, как С. gratum
и J. gangetica
сильно тормозил до роста рака желудка клетки 70% в то время как не разрушая нормальные клетки фибробласты Hs 27 (существенная разница [* р
&л; 0,05]). Это контрастирует с эффектом Л. FLAVA
, который продемонстрировал уменьшенное количество клеточного роста, а не только в желудочном раковых клеток, но и на нормальные клетки фибробластов, а также.
Микросхема <суб> 50 (мкг /мл ) значения приведены на рисунке 3. gangetica
экстракт J. имел самый низкий IC <суб> 50 значения 5,45 мкг /мл и 5,86 мкг /мл для Като-III и NUGC-4, соответственно. Кроме того, С. gratum
экстракт показал высокую цитотоксичность в отношении клеточных линий рака с IC <суб> 50 значений в 7,24 мкг /мл - 11,96 мкг /мл диапазон, тогда как самый высокий IC <суб> 50 был из L . Flava
экстракт 17,20 мкг /мл и 14,64 мкг /мл для Като-III и NUGC-4 соответственно. Это существенно отличалась (р
&л; 0,05) по сравнению с двумя другими растительными экстрактами (рисунок 3). Рисунок 3 Сравнительная цитотоксичность IC 50 С. gratum, J. gangetica и Л. Flava на Като-III, NUGC-4 и Hs27 с помощью МТТ. Результаты выражали как среднее значение ± SD трех независимых экспериментов (* р
≪ 0,05) и по сравнению с Hs27-обработанных клеток. J. gangetica
показал самый низкий IC 50, в то время как самый высокий был от L. Flava
Значительные различия (р &л; 0,05). Между С. gratum
и Л. Flava
наблюдались между обоими раковой клетки линии.
ультраструктуры изменения Като-III и NUGC-4 линии клеток, вызываемую S. gratum, J. gangetica
и L. Flava

для того, чтобы определить, является ли ингибирование роста с помощью растительных экстрактов были связаны с апоптозом, мы исследовали далее морфологические изменения Като-III и NUGC-4 желудочных линий раковых клеток под просвечивающего электронного микроскопа. Контрольные клетки ядерные структуры оказались неповрежденными (фиг.4А: Kato-III, E: NUGC-4), в то время как клетки, обработанные теми из экстрактов растений продемонстрировали ультраструктурных изменений несколькими способами (фигуры 4B-4D: Като-III, и 4 F-4H: NUGC-4, соответственно). Более подробно, клетки Като-III обрабатывали S. gratum
отображается конденсированное ядро ​​с конденсацией хроматина, формирование апоптотических тела (Фиг.4В) и диспергирующие гранулированного мусора. В то время как для клеток Като-III лечение J. gangetica
, Отображаемые конденсацию хроматина, связанный с мембраной апоптотических тел и многочисленные везикулы (рис 4в). Принимая во внимание, морфологических изменений, найденных в L. Flava
обработанных клеток Като-III, отображается уменьшенный ядра с конденсацией хроматина и многочисленными разнородными везикул, в том числе обширные возможности внутриклеточного вакуолизации (рис 4D). Рисунок 4 Электронные микрофотографии, сравнивающие эффекты S. gratum, J. gangetica и Л. Flava на Като-III (A-D) и NUGC-4 (E-H) 3 дня после обработки. Шкала бар 2 мкм. A) Необработанные Като-III ячейка показывает очень мало везикулы (v), достаточно равномерное округлую форму и хроматина ядра разбросанный по (N). Б) С. gratum
лечение Като-III ячейка показывает конденсированного хроматина в ядре (N), апоптическая тело образование (Arrowhead) и многие везикулы. Ячейка диспергирование в виде гранулированного мусора (*). C) Като-III клеток обрабатывали J. gangetica
. Эта ячейка показывает конденсацию хроматина по периферии ядра, мембранные органеллы (стрелка) и многочисленные вакуоли (v). D) Като-III клеток после воздействия L. Flava
показывает большое количество аутофагии вакуолями (V), и усадка ядро ​​(N) с конденсированного хроматина. E) Необработанные NUGC-4 клеток не проявляет конденсации хроматина в ядре (N) и довольно равномерное округлую форму. F) NUGC-4 клеток обрабатывали S. gratum
показывает хроматина ядра конденсации, многочисленные везикулы (v) и многие мембранные органеллы (стрелка). G) NUGC-4 клеток после воздействия J. gangetica
показывает ядро ​​конденсированного хроматина, связанный с мембраной органеллы (стрелка) и везикулы (v). H) Морфологические изменения, наблюдаемые в L. Flava
обработанных NUGC-4 клетки состояли с конденсацией хроматина в ядре (N), и многие гетерогенные пузырьках разного размера (v).
С. gratum
лечение NUGC-4 клеточные линии выставлены апоптозу с уплотняя ядро ​​и производство мембраносвязанных апоптотических тел и многочисленные везикулы (рис 4F). Тем не менее, по сравнению, клетки NUGC-4, обработанные J. gangetica
, полученные на ранних стадиях апоптоза с конденсацию хроматина и многочисленные везикулы (рис 4G). В то время как клетки, обработанные L. Flava
показавшие периферическое ядро ​​конденсации хроматина с многочисленными разнородными везикулы и блеббинга (рис. 4H)
Обсуждение
наблюдений счастливой случайностью показали, что растения, традиционные травы и чаи могут быть использованы, чтобы выиграть потенциально борьба в борьбе с раком; общемировой проблемой здравоохранения. Тем не менее, это не так, пока эти фитохимические не испытаны в пробирке
и в естественных условиях
что мы можем знать наверняка, насколько далеко они могут пойти в держать эту болезнь под контролем [31-34]. В Таиланде рака желудка является бедствием, однако необычно низкие желудка заболеваемость раком в северо-восточной части Таиланда представляет значительный интерес. Тот факт, что С. gratum
, J. gangetica
и Л. Flava
являются представителями коренных народов области и образуют основную часть рутинной биологически активной добавки в местное население, поэтому мы решили исследовать ли эти народные растения являются потенциальными кандидатами для безопасного и надежного контроля рака желудка. Хотя есть много сообщений, чтобы уточнить их антиоксидантными деятельность, это исследование дает первое доказательство их мощных цитотоксических эффектов и индукции апоптоза, основанные на ultrastrutural характеристики на рак желудка.
Эти растения в первую очередь экстрагируют этилацетатом, а затем анализировали на их фенольные содержимое с помощью метода Фолин-Ciocalteu.

• Xpert MTB /RIF анализ может быть использован на архивизированных аспирата желудка и индуцированных образцов мокро…
• Emergency презентация рака желудка; прогноз и последствия для планирования услуг