Antioxidáns hatás és elektronmikroszkópos változások a gyomor rákos sejtvonalak által kiváltott Northeastern Thai ehető népi növényi kivonatok

Antioxidáns hatás és elektronmikroszkópos változások a gyomor rákos sejtvonalak által kiváltott Northeastern Thai ehető népi növényi kivonatok katalógusa Abstract Background katalógusa katalógusa fitokémiai termékek döntő szerepük van a gyógyszerkutatási folyamatot. Ez az ígéretes lehetőség azonban szükségessé annak szükségességét, hogy erősítse meg a tudományos ellenőrzés előtt. Ezért, ez a tanulmány célja, hogy értékelje (1) az antioxidáns aktivitás, (2) a citotoxicitás potenciál, és (3) a hatás ultrastrukturális módosulása gyomor rákos sejtvonalakban való kitettség révén frakciókat három helyi Northeastern Thai ehető növények.
Módszerek
növények, Syzygium gratum, Justicia gangetica
és Limnocharis flava
extraháljuk etil-acetáttal, és az egyes nyers extraktumot analizáltuk teljes fenolos tartalmat Folin-Ciocalteu módszerrel. Antioxidáns aktivitás alkalmazásával vizsgáltuk a ABTS rendszer. Az extraktumokat ezután megvizsgáltuk citotoxicitás két gyomor rákos sejtvonalak Kato-III és NUGC-4, és összehasonlították a HS27 fibroblasztok, mint a kontroll az MTT assay. A sejt életképességét (%), az IC 50-értékeket, valamint az ultrastrukturális elváltozásokat értékeltük a kezelés után egy variancia analízis (ANOVA).
Eredmények
az összes fenolos értékei Az etil-acetátos kivonatokat jól korrelált az antioxidáns kapacitás, extrahált termék S. gratum
megjelenítésére a legmagasabb szintű antioxidáns aktivitás (egy 10-szer nagyobb válasz) felett J. gangetica
és L. flava katalógusa volt. Expozíció S. gratum katalógusa és J. gangetica katalógusa kivonatok normál sejtvonal (HS27) eredményezett marginális citotoxicitás hatásokat. Azonban egy dózis-függő vizsgálat S. gratum
és J. gangetica
kivonatokat cytotoxicological hatást alig több mint 75 százaléka a Kato-III és NUGC-4 sejtvonalakban. Ezen túlmenően, az apoptotikus jellemző mutatták ki TEM mindkét rákos sejtvonalak két kivonatokat, mivel jellemzői autofágia találtak sejtvonalak után postai úton kitett kivonatok L. flava katalógusa.
Következtetések katalógusa Ezekből három növény, S. gratum katalógusa volt a legmagasabb tartalmát fenolos vegyületek és antioxidáns kapacitását. Mindegyikük találtak tartalmaz vegyület (ek) a citotoxicitást in vitro
a rákos sejtekre, de nem normál sejtvonalakon megoldottként szövettenyészetben és ultrastrukturális elemzés. Ez az első jelentés, hogy milyen hatással celluláris megváltoztatását apoptózis egy extraktumot S. gratum katalógusa és J. gangetica.
További vizsgálatok most azokra egyedi izolátumokat és funkciójuk, elsőbbséget S. gratum katalógusa és J. gangetica katalógusa fejlesztésére irányuló új terápiás és harcosok rák ellen. katalógusa Kulcsszavak katalógusa gyomorrák ultrastruktúrát sejtcitotoxicitásra TEM Háttér katalógusa gyomorrák a negyedik leggyakrabban diagnosztizált rák és a második legtöbb vezető oka a rákos megbetegedésekkel kapcsolatos halál a világon. [1] Úgy becsülték, hogy mintegy 1 millió új gyomorrákos esetek 2008-ban regisztrált, de azok többsége (713900) számoltak be a fejlődő országokban, a legmagasabb előfordulási gyomorrák találtak Kelet-Ázsiában, több mint Közép- és Kelet-Európában, és Dél-Amerikában [1]. Annak ellenére, hogy a látszólagos intenzívebbé a betegség, bizonyítékok arra utalnak, hogy az általános gyomorrák aránya megfordította a folyamatot, a csökkenés jelentések gyomorrák megtalálható a legtöbb részén a nyugati világban. [2]
Sajnos a legtöbb gyomorrákos betegek gyakran diagnosztizáltak előrehaladott stádiumban, amikor a gyógyulás nem lehetséges, és a kezelés tüneti azzal a szándékkal, hogy javítsák a minőség és a mennyiség az élet. Bár vannak olyan kezelési irányelvek gyomorrák, az ötéves túlélési arány kevesebb, mint 50% [3, 4]; olyan mértékben, ami nyilvánvalóan nem ösztönzi sem onkológusok vagy rákbetegek. Ezen túlmenően, mellékhatásai jelenlegi kezelések azaz műtét, kemoterápia és sugárzás nem kielégítő. Tehát, célzott terápiák van szükség, hogy csökkentse a mellékhatások, és javítja a klinikai eredmények a betegek. Ezért a kutatók az új évezred fizetnek sokkal nagyobb figyelmet fordítanak a fejlődés nemcsak új terápiás irányelvek, és a korai megelőzési stratégiák gyomorrák [5, 6], hanem hogy megtalálja az új és a cél specifikus terápiás szereket is.
az elmúlt két évtizedben, fitokémiai termékeket meghatározó szerepe a felfedezés új gyógyszerek célba rák [7], több mint 60% -a jelenleg használt rákellenes szerek természetes forrásból származó [8]. Példák a világszerte klinikailag hasznos daganatellenes szerek származó vadon termő növények közé tartozik a taxol, vinblasztin, vinkrisztin, kamptotecin-származékok, a topotekán (a búza fű), homoktövis, Lingzhi, irinotecan, és etopozid, amely származik epipodofillotoxin [9, 10]. Mások származnak gyümölcsök és zöldségek; nem korlátozva, hogy tartalmazza a kurkumin (kurkuma), genistein (szójabab), katekin (zöld tea) [7], hanem a gyógynövények, mint a vinka-alkaloidok, podofillotoxin, berberin, citrom fű olajok, flavonoid és a kamptotecin; egy másik csoport ígéretes rákellenes szerek [11]. Bár ezek a rákellenes szerek már alkalmazott célzott mechanizmus-alapú utak, azok eredményes manipuláció a extrinsic és intrinsic apoptózis útvonal még mindig vizsgálnak [12-14]. A paclitaxel izolálása a kéreg a csendes-óceáni tiszafa, Taxus brevifolia katalógusa egyik fitokémiai hogy ígéretes. Ez egy gyógyszer jóváhagyott az FDA a kezelésére alkalmasak, AIDS-szel összefüggő Kaposi-szarkóma, mellrák, nem kissejtes tüdőrák és petefészekrák. Elsődleges celluláris hatás okoz rendellenes stabilizációs a dinamikus mikrotubulus polimerizációt, ami a hiba a sejtosztódás eredményez apoptózist [15-17]. Azonban a paklitaxel is tanulmányozzák, mint alternatív kezelés más típusú rák, beleértve a gyomorrák. Ez jelenleg a klinikai vizsgálatok fázis III [18, 19]. Függetlenül attól, hogy azokat jóváhagyták-e vagy sem, a széles körű elérése támogatást és iskolai tanulmányaik folytatása növényi kivonatok, amelyek hatással vannak a gyomorrák kezelésére jelzik a folyamatos szerepet, amelyet a természetes termékek játszanak a gyógyszerkutatási folyamatot.
Ha figyelembe vesszük járványtan tanulmány szerint az újonnan diagnosztizált gyomorrák esetek Thaiföldön, sokkal kisebb előfordulása észleltek az északkeleti régióban [20]. Bár a prevalenciája Helicobacter pylori katalógusa fertőzések, nem különbözik az egész északi régió Thaiföld, nincs földrajzi tényező (például plató, hegyvidéki tartomány vagy dzsungelben terep) más volt a [21]. Ezért ott kell lennie valami más központi szerepet játszik a népesség az északkeleti régió, amely csökkenti az általános előfordulása a gyomorrák. Miután minden, de kizárta a genetika és a környezeti tényezők, azt javasolták, hogy ehető növényeket népi táplálkozás, amelyek általában fogyasztott ebben a régióban, tarthat a válasz ez az ellentmondás. Ez az új adatokat, és az ígéretes vezető nagyban ösztönöz bennünket, hogy vizsgálja meg a titokzatos jelenség, hogy az, hogy a fitokémiai vegyületek belül Northeastern Thai ehető népi növények chemopreventive vagy citotoxikus hatás leküzdésére gyomorrák, vagy egyéb tulajdonságait. Ezért, ez a tanulmány tehát végeztek, hogy értékelje a citotoxicitás potenciális e helyi ehető növények. Különösen érdekes, növények S. gratum katalógusa J. gangetica katalógusa és L. flava katalógusa választottak epidemiológiai adatok arra utalnak, hogy ezek a leggyakrabban ehető népi zöldségek az északkeleti régióban.
Feltételezzük, hogy ezek a növények tudta tartani a rejtett tulajdonságokat, amelyek kihasználva ellen a rák, és a jelen tanulmány célja, hogy értékelje a lehetséges. Mi értékeli a nyers fenolos alapú kivonatok ezek a növények, és igazolja, magas celluláris apoptotikus és citotoxikus hatásokat két közös, és összehasonlító gyomor rákos sejtvonalban, a Kato-III és NUGC-4.
Módszerek
Növényi anyagok
Három helyi ehető népi növények; S. gratum katalógusa J. gangetica katalógusa és L. flava katalógusa (1. táblázat) vásároltunk a három különböző helyi piacokon Khon Kaen tartomány északkeleti részén Thaiföld során október-december 2008. Ezek a növények voltak alapján kiválasztott etnobotanikai adatok [22-26], és epidemiológiai adatok a fent leírt módon. Helyes rendszertani azonosítása növényfajok vizsgálat során alkalmazott felügyelte botanikusok a Növénytani Tanszék és Gyógyszerészeti Kar, Gyógyszerésztudományi, Khon Kaen University, Thailand.Table 1 a nevét a három növényi kivonatok és egyéb kutatási referenciák, terápiás alkalmazása a hagyományos thai gyógyszer árnyékolt ebben a vizsgálatban katalógusa Faj [utalvány szám] Matton Család (közös név English /thai) Matton Számolt fő összetevői Matton Terápiás felhasználás thai hagyományos orvoslás
katalógusa ehető része Matton Ref. Matton Syzygium gratum katalógusa (Wight) SN Mitra var. Gratum katalógusa [Ch. Laongpol 6], c katalógusa Mirtuszfélék (Eugenia /Phak Mek, Samet chun) hotelben Még nem tisztázott kémiai szerkezete, de bebizonyosodott, hogy erős antioxidáns és segít megelőzni az oxidatív és nitrozatív stressz katalógusa kezelése dyspepsia és emésztési katalógusa levelek katalógusa 22,23 katalógusa Justicia gangetica katalógusa L. [TK-PSKKU-0066] b katalógusa Acanthaceae (kínai lila, trópusi kankalin /elfogadott neve: Asystasia gangetica katalógusa)
5,11-epoxymegastigmane glükozidot (asysgangoside), salidroside, benzil-β-d-glükopiranozid, (6S
, 9R
) -roseoside, ajugol, apigenin-7-O
-β-D- glükopiranozid, apigenin-7-O
-neohesperidoside, és apigenin-7-O
-β-d-glükopiranozil (1 → 6) -β-d-glükopiranozid
kezelés a gyomor fájdalom, gyomor férgek, anti- asztma katalógusa levelek katalógusa 24,25 katalógusa Limnocharis flava katalógusa L. Buchenau [Patt. 173] c katalógusa Limnocharitaceae (sárga selyemmályva, sárga sorja fej /Talabhat reusi) hotelben meghatározható katalógusa Appetizer
Stem katalógusa 26 katalógusa aVoucher példányok letétbe a Forest Herbárium (BKF), Department of nemzeti Park, Természet és Plant Conservation, Minisztérium Természeti Erőforrás, bA Herbárium Kar Pharmaceutical Sciences, Khon Kaen Egyetem és cA Prince of Songkla Egyetem herbáriumi (PSU), Department of Biology, Természettudományi Kar, Prince of Songkla University, Thaiföld .
előállítása növényi kivonatok katalógusa ehető egyes növényfajta (1. táblázat) öblítjük steril desztillált vízzel, hogy eltávolítsuk törmelék és szárítjuk forró levegős kemencében 50 ° C hőmérsékleten 7 napon át. Miután megszáradt, növényi részeket, majd apró darabokra vágjuk, és a föld és a finom por egy mozsárban. Minden őrölt por növényi anyagot ezután merítettük a feleslegben lévő etil-acetát oldószer (Sigma-Aldrich Pte-Ltd, Singapore) egy extrakciós palackban. Az etil-acetátos elegyeket ezután inkubáltuk egy rázó inkubátorba, szobahőmérsékleten 72 órán át. Ezt az eljárást követően, a felülúszókat ezután átvittük egy új konténer, és az extrakciós eljárást etil-acetáttal megismételjük még három alkalommal, mielőtt a felülúszókat ezen három párhuzamos extrakció egyesítjük. Ezeket azután Whatman szűrőpapíron No.1, és bepároljuk rotációs bepárlóban. Ezek a minta extraktumokat ezután alkalmazzuk a további kísérletekben.
Meghatározása összes fenol vegyület
Az összes fenolos vegyületek a növényi extraktumokat határoztuk Folin-Ciocalteu módszer által leírt Sachindra [27]. Röviden, 0,2 ml mindegyik növényi kivonat feloldjuk 50% DMSO-ban (Santa Cruz Biotechnology Inc., Bangkok, Thaiföld) oxidáljuk 1,0 ml 10-szeres arányban hígított Folin-Ciocalteu reagenst (Sigma-Aldrich Pte-Ltd, Singapore) és semlegesített 0,8 ml 6% -os nátrium-karbonát-oldattal (Sigma-Aldrich Pte-Ltd, Singapore). 1 óra elteltével inkubálás abszorbanciáját az oldat mértük 764 nm-en, és az eredményeket képviseletében a milligramm galluszsav ekvivalens per gramm száraz tömege (mg GAE /g). A vizsgálati eljárást három párhuzamosban minden egyes minta koncentrációját a 3 elválasztott vizsgálati eljárásokban.
Antioxidáns aktivitás meghatározására katalógusa antioxidáns aktivitása a növényi kivonatok spektrofotometriásán határoztuk meg a ABTS rendszer szerint a módszer Re és mtsai [28]. Röviden, ABTS gyök kation (ABTS • +) elegyet által generált oxidáció 7 mm ABTS (Sigma-Aldrich Pte-Ltd, Singapore) 140 mM kálium-perszulfát (Sigma-Aldrich Pte-Ltd, Singapore), inkubáljuk 16 órán át szobahőmérsékleten sötétben. Antioxidáns hatás hozzáadásával határozzuk meg, 0,2 ml növényi kivonatok 1,8 ml ABTS • + radikális kation keverék. Inkubálás után a keveréket 6 percen keresztül, az abszorbanciát 734 nm-en rögzítettük. ABTS • + gyökfogó képesség (%) növényi kivonatok alapján számítottuk a következő egyenlettel: ABTS • + gyökfogó képesség (%) = [(Abs.control-Abs.test minta) /Abs. control] x100. Ahol Abs.control az abszorbancia a kontroll reakció (növényi kivonat nélküli), és Abs.test minta abszorbanciáját jelenlétében egy növényi kivonat. Az eredményeket ezután összehasonlítjuk az anti-gyökfogó aktivitásának Trolox (Sigma-Aldrich Pte-Ltd, Singapore), és képviseletében a Trolox ekvivalens antioxidáns kapacitása per gramm száraz tömege (TEAC /g). A vizsgálati eljárást három párhuzamosban minden egyes minta koncentrációját a 3 elválasztott vizsgálati eljárásokban.
Sejttenyészet
Két humán gyomorkarcinóma sejtvonalak Kato-III (ATCC No. HTB-103) az American Type Culture Collection (ATCC, Rockville, MD, USA) és NUGC-4 (JCRB0834) az egészségügyi Tudományos Kutató Resources Bank (Japán Health Sciences Foundation) alkalmaztunk in vitro citotoxikus katalógusa vizsgálatokban. Az emberi fityma fibroblaszt sejtvonal HS27 (ATCC No.1634) használtunk kontrollként. Ezek tenyésztettünk steril RPMI 1640, amely 10% (v /v) magzati borjúszérumot (Biochrom AG, Berlin) 37 ° C hőmérsékleten együtt szállított 5% CO 2 inkubátorban. A sejteket standard szövettenyésztési lombikok és elérve a 80% összefolyás passzáltuk oldattal 0,25% -os tripszin-EDTA-t (Sigma-Aldrich Pte-Ltd, Singapore) 3-4 naponként, amíg a felhasználásra.
In vitro
citotoxicitási vizsgálati katalógusa Növényi kivonatok értékelték citotoxikus aktivitást Kato-III és NUGC-4 sejtvonalak keresztül MTT kolorimetriás elsőként leírt Methods [29] a javasolt módosításokat a Denizot és Lang [30]. A tenyésztett sejteket (1 × 10 4 sejt) komplett táptalajt visszük át minden lyukba egy lapos 96 lyukú lemez, majd inkubáljuk 37 ° C hőmérsékleten, nedvesített levegő atmoszférában dúsított 5% -os (v /v) CO 2 24 órán annak érdekében, hogy hagyja, hogy a sejtek tulajdonítanak az alján minden is. A tenyésztett sejteket ezután kezeltük a vizsgált nyers kivonat (három párhuzamos lyukból per feltétel) hozzáadásával 2 ul hígítási minden egyes extraktum koncentrációban 1,25, 2,5, 5, 10 és 20 ng /ml. A sejteket ezután tenyésztjük a fentiek szerint további 72 órán hozzáadása előtt a 10 ul 5 mg /ml 3- (4, 5-dimetil-tiazol-2-il) -2, 5-difenil-bromid (MTT) ( Sigma-Aldrich Pte Ltd-, Szingapúr) minden lyukba. Az inkubálást további 4 órán át, majd a táptalajt eltávolítjuk. Előállítása DMSO-t (150 ni) és glicin (25 ul) adtunk mindegyik mérőhelyhez, és keverjük, hogy biztosítsuk a sejtlízis és feloldódását a formasan kristályok, mielőtt az abszorbancia 540 nm-en mértük. Három mérést végzünk minden egyes kísérletben végeztük és a százalékos MTT konverzióval a megfelelő formazán-származék egyes lyukba (százalékos sejtnövekedés) úgy számítottuk ki, elosztjuk az OD 540 nm-en, a kutak a kontroll alapján a következő egyenletet: Százalékos sejtnövekedés = [A540 teszt - A540 nulla] × 100 /[A540 ellenőrzés - A540 nulla]. Ahol A540 nulla = A540 oldat után a sejt-on inkubáljuk 24 órán hozzáadása előtt növényi kivonatok; A540 teszt = A540 oldat után növényi kivonatok mellett; és A540 kontroll = A540 a megoldást anélkül növényi kivonatok mellett. Ezen túlmenően, a nem-toxikus bizonyosságot növényi kivonatok ellen normál sejtek (fibroblaszt sejtvonal HS27), egy dupla adag (2-szer IC 50 koncentrációt [10 ng /ml]), az extraktumokat alkalmazott és értékelni MTT próba. A vizsgálati eljárást három párhuzamosban minden egyes minta koncentrációját a 3 elválasztott vizsgálati eljárásokban.
Fél-maximális gátló koncentráció (IC50) hotelben A kapott abszorbancia 540 nm hullámhosszon használták, hogy meghatározzák a százalékos sejt túlélését, feltételezve, hogy a 100% -os túlélési kapunk kezelve oldószerekkel csak kontrollként, és hogy nincs különbség a metabolikus aktivitás között létezett a túlélő sejtek különböző körülmények között. Ezen feltételek mellett, a százalékos túlélés a kezelt rákos sejtvonal és a normális tenyésztett sejtek alapján számoltuk a következő képlettel: A százalékos túlélés = (A540 kezelt sejt /A540 kontroll) × 100. A átlag ± 1 értékű standard deviációt (SD) cella túlélés (%) függvényében ábrázoltuk a megfelelő növényi kivonat koncentráció és a legjobban illeszkedő vonal levezetéséhez használt becsült IC 50 értéket a koncentráció, amely 50% -kal a sejt túlélését.
a koncentrációk növényi kivonatok, amely 50% -os gátló koncentrációt (IC 50) határoztuk meg három külön kísérletben. Az IC 50 az egyes növényvédő extraktumokat ezután használjuk a kezelt koncentráció 0 és 3 nap ellen Kato-III és NUGC-4, amely értékelték apoptózis egy transzmissziós elektronmikroszkópos (TEM). A vizsgálati eljárást három párhuzamosban minden egyes minta koncentrációját a 3 elválasztott vizsgálati eljárásokban.
Minta előkészítés transzmissziós elektronmikroszkópiával
Kato-III sejtek (1x10 6 sejt) és NUGC-4 sejteket (1x10 6 sejtek) kezelt minden egyes növényi kivonat, valamint a negatív kontroll (kezeletlen tenyészetekben), külön-külön elvégeztük. Röviden, azokat öblítjük D-Hank-oldat (Life Technologies, Bangkok, Thaiföld) kétszer, és a szállított be centrifugacsövekbe egy műanyag kaparó, majd centrifugáljuk 2000 rpm-en 15 percig, a felülúszót eltávolítjuk. A csapadékot rögzített tartalmazó oldatban 4% -os glutáraldehidet (Electron Microscopy Sciences, Bangkok, Thaiföld) és 2% paraformaldehidet (Electron Microscopy Sciences, Bangkok, Thaiföld) 0,1 M foszfát-puffer sóoldattal (PBS), pH = 7,4, 4 ° C-on 1 órán át, majd mossuk 0,1 M PBS, hogy eltávolítsuk a fixáló. A mintákat utófixáltuk 1% -os ozmium-tetroxidot (Electron Microscopy Sciences, Bangkok, Thaiföld) ugyanabban a pufferben 30 percen keresztül, és a dehidratált egy fokozatos etanol sorozat 10 percig minden egyes. Ezeket azután kitisztult két változás propilén-oxid és elmerül a szekvenciális keverékei propilén-oxid és Araldite 502 gyantát (Sigma-Aldrich Pte-Ltd, Singapore) arány mellett 3: 1, 2: 1, 1: 2, és végül beágyazott tiszta Araldite. Szakaszai 1 um alkalmazásával vágtuk MT-2 Porter-Blum ultramikrotómmal. A metszeteket ezután szerelt rézrácsokra, levegőn szárítjuk és szembe egymás után 2% uranil acetát (Electron Microscopy Sciences, Bangkok, Thaiföld) 7% -os alkohol a sötétben, és ezután ólom-citrát (Electron Microscopy Sciences, Bangkok, Thaiföld ). Ezek alatt vizsgáltuk Philips CM 100 transzmissziós elektronmikroszkóp működő 80 kV.
Statisztikai analízis
eredményeket átlag ± SD párhuzamossal 3 elválasztott vizsgálatokban. Adatok összehasonlítása készletek alkalmazásával végeztük egyirányú varianciaanalízissel (ANOVA), majd Student-féle t-próba. Minden statisztikai analízist végeztük SPSS19. Különbségek fogadták el statisztikailag szignifikáns p < 0,05. Katalógusa Eredmények katalógusa összes fenol tartalma növényi kivonatok katalógusa Három ehető népi növények északkeleti régióban Thaiföld (S. gratum katalógusa J. gangetica katalógusa és L. flava
) kivontuk, és azok összes fenol tartalma határozza meg az eredményeket a 2. táblázat mutatja ezek között növényi kivonatok, a legmagasabb szintű összes fenol tartalom volt kimutatható S. gratum
149,789 ± 0,381 mg GAE /g. Ez volt 10 redők szignifikánsan nagyobb tartalom, mint hogy azonosítottuk a J. gangetica
és L. flava katalógusa (16,513 ± 0,130 és 14,334 ± 0,463 mg GAE /g, p
< 0,05). 2. táblázat átlagos összes fenol tartalma növényi kivonatok kifejezve GAE és anti-befogó aktivitását növényi kivonatok képviseletében a TEAC katalógusa növényi kivonatok
Összesen plenolics (mg GAE /g szárazanyag) hotelben
Anti-gyökfogó (mM TEAC /g száraz súly) Matton S. gratum katalógusa (Wight) hotelben 149,789 ± 0,381 katalógusa 2,823.521 ± 27,521 katalógusa J. gangetica L katalógusa.
16,513 ± 0.130a
313,141 ± 39.713a katalógusa L. flava (L.) Matton 14,334 ± 0.463a katalógusa 900,845 ± 20.346a, b
az értékeket átlag ± SD párhuzamossal 3 elválasztott vizsgálatokban. ap katalógusa < 0,05 VS S. gratum katalógusa, bp katalógusa < 0,05 VS J. gangetica. Matton antioxidáns kapacitásának növényi kivonatok katalógusa antioxidáns tevékenysége etilacetát kivont S. gratum katalógusa J. gangetica katalógusa és L. flava katalógusa táblázat 2. TEAC egyenértékű értékek ezek a növények jelentősen eltérő csökkenő sorrendben S. gratum katalógusa > L. flava katalógusa > J. gangetica
(2,823.521 ± 27,521, 900,845 ± 20,346, 313,141 ± 39,713, p
< 0,05). Figyelemreméltó, körülbelül 3-9 redők magasabb antioxidáns aktivitása S. gratum katalógusa találtuk, mint a másik két faj kivonatok. Ezeket jól korrelál összes fenol tartalmát. (Korrelációs koefficiens r 2 = 0,935, Y = 16.64x + 324,5).
Sejtszaporodás gátlását
Gyomorrák sejtvonalak Kato-III és NUGC-4, és a humán fibroblaszt sejtvonal (kontroll) kitett minden egyes növényi kivonat (hígítási koncentráció [1,25, 2,5, 5, 10 és 20 ng /ml]), hogy meghatározzuk a növekedést gátló aktivitás kiváltott minden növény. 72 óra elteltével, az életképes sejtek mértük MTT vizsgálattal. Kato-III és NUGC-4 sejteket kitett S. gratum
és J. gangetica
kivonatokat eredményezett jelentős csökkenést életképes sejtek dózisfüggő módon (1. ábra). 20 ng /ml mindegyik indukált több mint 50% sejtpusztulás mindkét gyomor rákos sejtvonalak. Azonban, a 10 ng /ml a kivonatokat előállított csak S. gratum
és J. gangetica
bizonyították jelentős potens citotoxicitást (p
< 0,05) indukálására több mint 70% sejtpusztulás Kato-III és NUGC-4, ha összehasonlítani L. flava katalógusa (2. ábra). Ezen túlmenően, ez a két növényi kivonatok nem mutattak hatást a normális emberi fityma fibroblaszt sejtvonalat (2. ábra). Ezzel szemben, a L. flava
's hatások csökkent. Az eredmény körülbelül 25% a sejthalál, és nincs szignifikáns különbség a gyomor rákos sejtek és a normális fibroblaszt sejt (2. ábra). 1. ábra dózis-válasz tanulmányok a növényi kivonatok két gyomorrák sejtvonalakon: (A) Kato-III és (B) NUGC-4. A sejteket különböző koncentrációjú (0, 1,25, 2,5, 5, 10 és 20 ng /ml) az S. gratum katalógusa, J. gangetica
és L. flava
72 órán át. Az antiproliferatív hatás mértük MTT vizsgálattal. Eredmények fejeztük eszközöket ± SD három független kísérlet.
2. ábra citotoxicitást teszt ellen Kato-III NUGC-4 és HS-27 után inkubáltuk 10 ng /ml etil-acetáttal extraháljuk, az S. gratum J. gangetica és L. flava. Az antiproliferatív hatás mértük MTT vizsgálattal. Eredmények fejeztük ki átlag ± SD három független kísérlet során. Az eredmények azt mutatták mindkét S. gratum
és J. gangetica
erősen gátolta, akár 70% gyomorrák sejtek növekedését, miközben nem elpusztítja normális fibroblaszt sejtek Hs 27 (szignifikáns különbség [* p
< 0,05]). Ez ellentétben a hatás L. flava katalógusa, amely kimutatta, csökkentett mennyiségű sejt növekedést, nem csak a gyomor rákos sejteket, hanem a normális fibroblaszt sejtek, valamint.
A IC 50 (ng /ml ) értékeket foglalja össze 3. ábra J. gangetica
kivonat volt a legalacsonyabb IC 50-értéke 5,45 ng /ml és 5,86 ug /ml Kato-III és NUGC-4, ill. Hasonlóképpen, a S. gratum
kivonat kimutatta magasabb citotoxicitást a rákos sejtvonalak IC 50 értékek a 7,24 ng /ml - 11.96 ng /ml tartományban, míg a legmagasabb IC 50 volt az L . flava
kivonat 17.20 ng /ml és 14,64 mikrogramm /ml Kato-III és NUGC-4 volt. Ez szignifikánsan különbözött (p
< 0,05), összehasonlítva a másik két növényi kivonatok (3. ábra). 3. ábra összehasonlító citotoxicitását IC 50 S. gratum J. gangetica és L. flava Kato-III NUGC-4 és HS27 MTT assay. Eredmények fejeztük ki átlag ± SD három független kísérletből származó (* p
< 0,05), és összehasonlítottuk a HS27-kezelt sejtekben. J. gangetica
mutatta a legalacsonyabb IC50, míg a legmagasabb volt a L. flava.
Szignifikáns különbség (p < 0,05) között S. gratum
és L. flava
figyeltek között egyaránt rákos sejt vonalak.
ultrastruktúrája elváltozások Kato-III és NUGC-4 sejtvonal által indukált S. gratum J. gangetica
és L. flava
Annak meghatározása érdekében, hogy a növekedés gátlása által növényi kivonatok jártak az apoptózis, mi tovább vizsgálták a morfológiai változásokat Kato-III és NUGC-4 gyomor rákos sejtvonal alatt transzmissziós elektronmikroszkóp. A kontroll sejtek nukleáris struktúrák megjelent intakt (4a ábra: Kato-III, E: NUGC-4), míg a kezelt sejtek azok a növényi kivonatok bizonyította ultrastrukturális változások számos módon (4B-4D: Kato-III, és a 4 F-4H: NUGC-4, sorrendben). Részletesebben, a Kato-III-kezelt sejtekben S. gratum
megjelenik egy kondenzált mag kromatin kondenzáció, apoptotikus test kialakulása (4b ábra), és diszpergáló szemcsés törmeléket. Míg Kato-III kezelt sejtek J. gangetica katalógusa, ezek jelennek meg a kromatin kondenzáció, membránhoz kötött apoptotikus testek és számos hólyagocskák (4C). Mivel a morfológiai változások találhatók L. flava katalógusa kezelt Kato-III sejtek jelennek összezsugorodott mag kromatin kondenzáció és számos heterogén hólyagok, így a széles körű funkciók intracelluláris vacuolisatio (ábra 4D). 4. ábra Electron felvételek összehasonlításával hatását S. gratum J. gangetica és L. flava Kato-III (A-D) és NUGC-4 (E-h) 3 nappal a kezelés után. Skála 2 um. A) A kezeletlen Kato-III sejt mutat nagyon kevés vezikulák (V), egy meglehetősen egységes lekerekített alakú, és a kromatin szétszórva nucleus (N). B) S. gratum
kezelt Kato-III-sejt mutatja kondenzált kromatin nucleus (N), apoptotikus test kialakulása (nyílhegy), és sok vezikulumok. A cellát diszpergáló szemcsés törmeléket (*). C) Kato-III-sejt kezelt J. gangetica katalógusa. Ez a cella mutatja a kromatin kondenzáció kerülete körül a sejtmag, membránkötött organellumok (nyíl) és számos vacuolumok (V). D) Kato-III sejt expozíció után L. flava
mutatja, egy nagy számú autofág vacuolumok (V), és a zsugorodó mag (N), kondenzált kromatin. E) Kezeletlen NUGC-4 sejt nem mutatja kondenzáció a kromatin nucleus (N) és egy meglehetősen egységes lekerekített alakú. F) NUGC-4 sejt kezelt S. gratum
mutatja kromatin kondenzáció sejtmag, számos vezikulumok (V) és sok membránkötött organellumok (nyíl). G) NUGC-4 sejt expozíció után a J. gangetica
mutat sejtmag kondenzált kromatin, membránhoz kötött organellum (nyíl) és vezikulumok (V). H) A morfológiai elváltozásokat figyeltek meg L. flava katalógusa kezelt NUGC-4 cellás arra áll a kromatin kondenzáció a sejtmagban (N), és számos heterogén hólyagocskák változó méretű (v).
S. gratum katalógusa kezelt NUGC-4 sejtvonalban apoptózis tömörítő nucleus és a termelés a membránhoz kötött apoptotikus testek és számos hólyagocskák (4F). Azonban összehasonlítva, NUGC-4 sejteket kezeltünk J. gangetica katalógusa, előállított korai szakaszában apoptózis kromatin kondenzáció és számos vezikulák (ábra 4G). Míg kezelt sejtek L. flava katalógusa megmutatta perifériás kromatin kondenzáció mag számos heterogén hólyagocskák és blebbing (ábra 4H). Katalógusa Vita katalógusa serendipitous megfigyelések azt mutatták, hogy a növények, a hagyományos gyógynövények és teák lehet hasznosítani a potenciálisan nyerni a harcot küzd a rák; világméretű egészségügyi problémát. Azonban ez nem egészen ilyen phytochemicals tesztelik in vitro és in vivo katalógusa katalógusa, hogy mi is tudjuk biztosan, hogy meddig mehet tartása a betegség ellenőrzés alatt [31-34]. Thaiföldön a gyomorrák egy csapás, azonban a szokatlanul alacsony gyomorrák előfordulása az északkeleti része Thaiföldön jelentős érdeklődésre tart számot. Az a tény, hogy a S. gratum katalógusa J. gangetica katalógusa és L. flava katalógusa őshonos a területen, és egyik fő része a rutin étrend-kiegészítő a helyi lakosság, ezért azt úgy döntött, hogy vizsgálja meg, hogy ezek a népi növények potenciális jelöltek a biztonságos és megbízható ellenőrzés a gyomorrák. Bár sok jelentések tisztázása antioxidáns tevékenység, ez a tanulmány, az első bizonyíték arra, hogy potens citotoxikus hatások és apoptotikus indukció alapuló ultrastrutural jellemző a gyomor rák.
Ezeket a növényeket először etil-acetáttal extraháltuk, és ezután analizáltuk a fenolos tartalmukat Folin-Ciocalteu módszert.

• Xpert MTB /RIF assay lehet használni archivált gyomor Pipettázzunk és indukált köpet mintákat érzékeny diagnosztizálására gyermekgyógyászati ​​tuberkulózis
• Sürgősségi bemutatása gyomorrák; prognózis és következmények szolgáltatás planning